最新第四篇-动物细胞微囊化培养课件PPT
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动物细胞培养(共20张PPT)
一、动物细胞培养
1.概念：动物细胞培养就是从动物
机体内取出相关的组织，将它分散 成单个细胞，然后，放在适宜的培 养基中，让这些细胞生长和增殖。
原理：细胞增殖
目的：获得细胞或细胞产品。
2.过程：
动物胚胎或幼 龄动物的组织、
器官
剪碎组织
胰蛋白酶或 胶原蛋白酶
分散成单 个细胞
成块组织不利于培养，分散了并制成细胞悬浊液，利于细胞与培养液充分接触，利于培养。
二、动物细胞培养条件
1、无菌、施：培养液中加一定量的抗生素。
2、营养
葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因子（维生素、 激素等）和 动物血清
3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）
专题2.2动物细胞工程
动物细胞工程
动物细胞培养
动物细胞工程 动物细胞核移植 常用的技术手段 动物细胞融合
生产单克隆抗体
其中，动物细胞培养技术是其他动物细胞 工程技术的基础。
动物细胞培养和核移植技术
教学目标
新课标要求 • 简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
• 简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程 和应用前景。
3.用于检测有毒物质。 4.培养正常或病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面
的研究。可用于健康细胞的培养，如获得大量自身的 皮肤细胞，用于植皮；用于筛选抗癌药物等，为治疗
和预防疾病提供理论依据
植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目 原理
培养基性质 培养基特有成分
植物组织培养
细胞的全能性 固体培养基 蔗糖、植物激素
资料：烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治 疗该病人？ 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 简述动物细胞培养的过程、条件及应用。
动物细胞培养 ppt课件
不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多。
动物细胞培养的目的是获pp得t课件细胞或细胞产品。
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一、动物细胞培养
1.概念：动物细胞培养就是从动
物机体内取出相关的组织，将它 分散成单个细胞，然后，放在适 宜的培养基中，让这些细胞生长 和增殖。
原理：细胞增殖
目的：获得细胞或细胞产品。
2.过程：
ppt课件
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动物胚胎或 幼龄动物的 组织、器官
剪碎组织
胰蛋白酶或 胶原蛋白酶
分散成单 个细胞
培养液
10~50 代细胞
继 续 传 代 培 养
不死性 细胞
传代培养 到第10代细胞）
发生癌变
无限p传pt课代件
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细胞的生长特性
●细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附 在瓶壁上，称为细胞贴壁。
要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易 于贴附。
ppt课件
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植物细胞和动物细胞培养的比较
比较项目 原理
培养基性质
植物组织培养 细胞的全能性 固体培养基
培养基特有成分 蔗糖、植物激素
动物细胞培养 细胞增殖
液体培养基 葡萄糖、动物血清
培养结果 培养目的
植物体或组织
快速繁殖、培育 无病毒ppt课植件株等
细胞株、细胞系
获得细胞 或细胞产物
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学后巩固
细胞膜成分：磷脂和蛋白质 长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用。 因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
3.目前使用的或冷冻保存的正常细胞为几代以内的？
10代以内，以保持细胞正常ppt课的件二倍体核型。
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思考
4、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动 物细胞培养材料？
guan3动物细胞培养PPT103页课件
悬浮培养类似微生物的深层培养。由于 是悬浮生长，细胞密度一般都较高，培 养的效率也高、操作也容易。
这种方法有多方面的优越性，易于大规 模生产，便于过程的控制。
可惜能在悬浮状态下生长的细胞种类有 限，且不太方便观察。
3.2 动物细胞培养 的基本技术
3.2.1 体外培养的条件
3.2.1.1 与微生物细胞培养相比动物 细胞培养的特殊性
Secondary culture－Cells taken from a primary culture and passed or divided in vitro. These cells have a limited number of divisions or passages.
tissue culture - the maintenance of a tissue or fragment in a way that may allow differentiation and preservation of the architecture and/or function
细胞贴壁延展过程
Contact inhibition When cells contact each other, they cease their growth. Cells arrest in G0 phase of the cell cycle. Transformed cells will continue to proliferate and pile up each other.
死亡。
3.1.2 体外培养
原代培养（亦称初代培养） 传代培养（亦称继代培养）。
Primary Culture
outgrowth and migration of cells
动物细胞培养(三佰)PPT
细胞分裂
细胞分裂是指活细胞增殖及其数 量由一个复制最初的DNA分子， 使遗传信息传递给下一代，是保 证物种稳定的基础。
细胞培养的环境因素
01
02
03
温度
维持一定的温度是细胞培 养的基本要求，因为温度 变化会影响细胞的生长和 代谢。
湿度
培养箱内的湿度应维持在 95%左右，以保证细胞的 正常代谢。
气体环境
细胞系建立与保存
筛选与鉴定
01
从原代细胞或传代细胞中筛选具有特定生物学特性的细胞系，
并进行鉴定。
细胞系建立
02
将筛选出的具有特定特性的细胞系进行培养，建立稳定的细胞
系。
细胞系保存
03
将建立的细胞系进行低温冷冻保存，确保细胞的遗传稳定性和
生物学特性。
细胞克隆技术
细胞克隆
在培养过程中，将单个细胞从群体中分离出来，并在培养瓶中形 成单克隆细胞群。
详细描述
异常的形态和功能可能是由于培养条件不适、基因突变等因 素引起的。为解决这一问题，需要密切观察细胞形态和功能 变化，调整培养条件，并采用适当的检测方法。
细胞传代过程中的变异问题
总结词
在动物细胞培养过程中，传代过程中可能会出现细胞变异问题，影响实验结果。
详细描述
变异可能是由于基因突变、染色体畸变等因素引起的。为解决这一问题，需要采用适当的检测方法，如基因突变 检测、染色体分析等，以确保细胞的稳定性和可靠性。同时，也需要优化传代方法，减少对细胞的损伤和变异的 可能性。
动物细胞培养(三佰)
• 引言 • 动物细胞培养的基本原理 • 动物细胞培养的过程 • 动物细胞培养的挑战与解决方案 • 动物细胞培养培养的定义
动物细胞培养是指在体外人工模拟体 内环境，将动物细胞种植在适宜的培 养基中，使其保持生长和繁殖的技术。
细胞分裂是指活细胞增殖及其数 量由一个复制最初的DNA分子， 使遗传信息传递给下一代，是保 证物种稳定的基础。
细胞培养的环境因素
01
02
03
温度
维持一定的温度是细胞培 养的基本要求，因为温度 变化会影响细胞的生长和 代谢。
湿度
培养箱内的湿度应维持在 95%左右，以保证细胞的 正常代谢。
气体环境
细胞系建立与保存
筛选与鉴定
01
从原代细胞或传代细胞中筛选具有特定生物学特性的细胞系，
并进行鉴定。
细胞系建立
02
将筛选出的具有特定特性的细胞系进行培养，建立稳定的细胞
系。
细胞系保存
03
将建立的细胞系进行低温冷冻保存，确保细胞的遗传稳定性和
生物学特性。
细胞克隆技术
细胞克隆
在培养过程中，将单个细胞从群体中分离出来，并在培养瓶中形 成单克隆细胞群。
详细描述
异常的形态和功能可能是由于培养条件不适、基因突变等因 素引起的。为解决这一问题，需要密切观察细胞形态和功能 变化，调整培养条件，并采用适当的检测方法。
细胞传代过程中的变异问题
总结词
在动物细胞培养过程中，传代过程中可能会出现细胞变异问题，影响实验结果。
详细描述
变异可能是由于基因突变、染色体畸变等因素引起的。为解决这一问题，需要采用适当的检测方法，如基因突变 检测、染色体分析等，以确保细胞的稳定性和可靠性。同时，也需要优化传代方法，减少对细胞的损伤和变异的 可能性。
动物细胞培养(三佰)
• 引言 • 动物细胞培养的基本原理 • 动物细胞培养的过程 • 动物细胞培养的挑战与解决方案 • 动物细胞培养培养的定义
动物细胞培养是指在体外人工模拟体 内环境，将动物细胞种植在适宜的培 养基中，使其保持生长和繁殖的技术。
动物细胞培养PPT医学课件
是糖原合成中的关键酶，受G-6-P等多种因素调控。葡萄
糖合成糖原是耗能的过程，合成1分子糖原需要消耗2个ATP。
肝脏存在葡萄糖-6-磷
酸酶，可使肝糖原分解成葡萄糖补充血糖。
肌肉组织无葡萄糖-6-磷酸酶，不能直接
分解成葡萄糖，肌糖原分解产能可供肌肉收缩需要。
动物细胞培养
1.动物细胞培养的发展史 2.动物细胞的特征 3.培养基 4.动物细胞的获得与保存 5.动物细胞培养方法 6.动物细胞培养生物反应器 7.动物细胞培养过程参数的控制与检测
编辑版ppt
1
动物细胞培养的发展史
1、动物细胞培养技术的建立 1907年，Harrison首先培养了蛙胚神经管区细胞，
并观察到从中长出的轴突细胞（神经纤维），他 的工作被认为是动物细胞培养开始的标志；
1911年，Carrel发现了鸡胚浸出液对于培养细胞 的生长促进作用，并首次把无菌技术引入组织培 养技术中。
1914年，Thomson建立了器官培养技术。 1940年，1951年，Earle和Gay分别建立了c3H小 鼠结缔组织细胞系的L系和人体细胞系－人体宫颈 癌Hela细胞系。
编辑版ppt
5
动物细胞的特征
• 1.结构特征
与微生物相比，动物细胞体积较大，对环境因素敏感，营养需求高，倍 增时间长，没有细胞壁但对损伤更敏感。
编辑版ppt
6
动物细胞的特征
• 细胞膜
编辑版ppt
7
动物细胞的特征
• 2.动物细胞的代谢特征
• 在葡萄其糖培的代养谢过途径程中，葡萄糖和谷氨酸为主要
营在比人如养体有物内氧，氧质葡化，萄、糖磷乳代 酸酸谢 戊除 糖和了 途无 径氨、氧是糖酵原解主的途要合径成以的与外分还代解有谢途很径多副、其产糖他异方物生式、，
糖合成糖原是耗能的过程，合成1分子糖原需要消耗2个ATP。
肝脏存在葡萄糖-6-磷
酸酶，可使肝糖原分解成葡萄糖补充血糖。
肌肉组织无葡萄糖-6-磷酸酶，不能直接
分解成葡萄糖，肌糖原分解产能可供肌肉收缩需要。
动物细胞培养
1.动物细胞培养的发展史 2.动物细胞的特征 3.培养基 4.动物细胞的获得与保存 5.动物细胞培养方法 6.动物细胞培养生物反应器 7.动物细胞培养过程参数的控制与检测
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动物细胞培养的发展史
1、动物细胞培养技术的建立 1907年，Harrison首先培养了蛙胚神经管区细胞，
并观察到从中长出的轴突细胞（神经纤维），他 的工作被认为是动物细胞培养开始的标志；
1911年，Carrel发现了鸡胚浸出液对于培养细胞 的生长促进作用，并首次把无菌技术引入组织培 养技术中。
1914年，Thomson建立了器官培养技术。 1940年，1951年，Earle和Gay分别建立了c3H小 鼠结缔组织细胞系的L系和人体细胞系－人体宫颈 癌Hela细胞系。
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动物细胞的特征
• 1.结构特征
与微生物相比，动物细胞体积较大，对环境因素敏感，营养需求高，倍 增时间长，没有细胞壁但对损伤更敏感。
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6
动物细胞的特征
• 细胞膜
编辑版ppt
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动物细胞的特征
• 2.动物细胞的代谢特征
• 在葡萄其糖培的代养谢过途径程中，葡萄糖和谷氨酸为主要
营在比人如养体有物内氧，氧质葡化，萄、糖磷乳代 酸酸谢 戊除 糖和了 途无 径氨、氧是糖酵原解主的途要合径成以的与外分还代解有谢途很径多副、其产糖他异方物生式、，
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2、在生化药物控制释放中的应用研究
微胶囊膜能最大程度地保持囊内生化物质（生长激
素、胰岛素、肝素、干扰素、促甲状腺素、人类免疫缺
损疫苗）活性, 不同程度地提高了药物的生物利 用度。通过调节制备条件可以控制微胶囊膜的厚度和
孔尺寸，从而实现囊内生化药物的控释或缓释 。
临床应用的主要技术问题：
如何更好地保持囊内蛋白质的生物活性； 作为控制释放载体的微胶囊材料的生物相容性； 开发条件温和且易于规模化生产的微胶囊制备技术。
发热的病因病机
❖ 外感导致发热，其途径多是经皮毛、口鼻而入。 一般来说，六淫之邪，由皮毛肌腠而入，先滞络 脉，由表入里，传至脏腑，发为热病。疫毒之邪， 多有口鼻而入，充斥人体，循卫气营血而分属上、 中、下三焦之脏腑。
发热的病因病机
❖ 外感发热的病机是外邪入侵，人体正气与之相搏， 正邪交争于内，或热、毒充斥于人体，即所谓“阳 盛则热”。邪热疫毒其性猛烈，起病急，传遍快， 故出现热势高等实热之证。发热病变，以阳热为主， 其病机最易化火。火热充斥体内，进而伤津耗液。 热度之邪过盛，邪毒内传，耗伤营血，易于发生神 昏、出血的变证，临床易于发生神昏、出血的变证， 即所谓逆传，来势凶险，预后较差。
1、在临床医学中的应用研究
• 采用一定材料、方法制成的微胶囊本身并不具备 治疗疾病的作用, 但能保证囊内包埋的细胞存活 且正常代谢、应答式分泌有效物质, 如胰岛素、 多巴胺和甲状腺激素等, 从而治疗疾病 。
• 微胶囊膜的选择透过作用可以保证细胞分泌的有 效物质扩散进入生物体内发挥生理功能, 而将免 疫球蛋白等抗体阻隔在囊外, 避免了异种移植中 最棘手的免疫排斥问题。
图2 制备方法使用率比较 1－－乳化法，2－－静电法，3－－聚合法，4－－沉积法，
5－－相分离法，6－－喷雾干燥法，7－－溶剂蒸发法
四、 微囊化培养技术要点:
在无菌条件下将拟培养的细 营
胞、生物活性物质及生长介质共
养 物
同包裹在薄的半透膜中形成微囊, 质
微 胶 囊 膜
再将微囊放入培养系统内进行培 细 胞
（微囊发生器）
海藻酸/细胞悬浮液
微珠
聚氨基酸
针头
CaCl2液
柠檬酸
磁力搅拌器
聚赖氨酸/海藻酸微囊化步骤：
1.悬浮细胞胶状液；2.成滴器；3.胶化小珠；4.包被溶液；5. 显微镜下微囊；6.多孔微囊膜；7.完成操作后的微囊。
制备注意事项：
●温和、快速、不损伤细胞，尽量在液 体和生理条件下操作； ●所用试剂和膜材料对细胞无毒害； ●膜的孔径可控制，必须使营养物和代 谢物自由通过； ●膜应有足够机械强度抵抗培养中搅拌。
六、微囊化培养的优、缺点:
①可防止细胞在培养过程中受到物理损伤; ②活性蛋白不能从囊中自由出入半透膜, 从而提
高细胞密度和产物含量, 并方便分离纯化处理。
①微囊制作复杂, 成功率不高; ②微囊内死亡的细胞会污染正常产物; ③收集产物必须破壁, 不能实现生产连续化。
七、微胶囊在生物医学领域应用研究
可降解型
乳酸/乙醇酸共聚物、聚正酯、聚内酯、聚 酐、聚烷基氰基丙烯酸酯、聚氨基酸
非降解型 聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酰胺、聚酰胺、
聚苯乙烯、乙烯醋酸乙酯共聚物、聚氯乙 烯等
制备方法
化学法
界面聚合法、乳化法、辐射化学法
物理化学法 相分离法、溶剂蒸发法、界面沉积法、喷雾干燥法
物理法
静电沉积法、气相沉积法、流化床喷雾包衣法
发热的病因病机
❖ 外感六淫 风、寒、暑、湿、燥、火，异常的六气，均可导 致发热，尤以火热、外湿、暑邪为主要病邪，又 风、寒燥入里皆可化火。六淫可以单独致病，也 可以两种以上的邪气兼夹致病，如风寒、风热、 湿热、风湿热等。
发热的病因病机
❖ 感受疫毒 疫毒亦是外来的致病因素之一，属于一种传染性 较强的致病邪气、疫的特点具有一定的季节性和 传染性，疫疠之毒，其性猛烈，一旦感受疫毒， 则起病急骤，传变迅速，卫表症状短暂，较快出 现高热。
不同放大倍数的海藻酸钙微胶囊的SEM 照片 不同放大倍数的壳聚糖/海藻酸钠微胶囊的SEM 照片
三、性质：
曾是酶固定化技术中的一种（半透膜将酶包 裹在球状的微囊里，酶及大分子不能从微囊里透 出，而小分子物质可自由通过膜）。
动物细胞微囊化后，与游离细胞相比，降低 了培养时对细胞的剪切力，同时也能提供很高的 细胞密度，使得产物浓度增加，纯度提高。
养。生长介质为1.4%海藻酸钠溶
液, 半透膜由多聚赖氨酸形成。
生
培养系统可采用搅拌式或气升式
代 谢
物 大
反应器系统，微囊直径控制在
产 物
分 子
200-400μm为宜。
五、动物细胞微囊化的制备
• 主要是应用海藻酸—聚氨基酸的方法
简单过程：动物细胞与海藻酸溶液混合搅拌，
经过微囊发生器将微球滴入氯化钙(cacl2)溶液 中，形成凝胶，然后再用聚氨基酸处理，使微 球表面成膜，最后用柠檬酸处理去除微球内的 钙离子，以便球内的海藻酸成液态，动物细胞 得以悬浮在其中。动物细胞的微囊化中海藻酸 和聚氨基酸是关键材料。
作业：
• 试述动物细胞培养的常用方法。 • 最常用的微囊化培养的方法是什么?
其原理及操作过程? • 为什么要进行微载体培养?动物细胞
微载体培养的主要优点? • 优良的微载体应该具备什么特性?试
述主要的微载体种类?
发热的针灸治疗
广州中医药大学第一附属医院针灸科
发热的概念
❖ 发热是内科疾病中常见症状之一，是机体 对病邪的一种全身性反应，是机体正气与 病邪相争，阴阳失调的必然现象。发热可 以由多种因素引起，根据祖国传统医学理 论，不外乎外感发热和内伤发热两大类。 这里主要是讲述外感引起的发热。
第四篇-动物细胞微囊化培 养
营养物质 细胞
微胶囊膜
代谢产物
生物大分子
图4－1 微胶囊示意图
二、研究发展历程
1、首次报道生物活性物质的微囊化研究（1957）： 将酶、蛋白质和激素等生物活性物质包封
在选择性透过膜中，形成球状微胶囊, 称之为 “生物微胶囊”。通过微胶囊膜的选择透过作 用, 使囊外大于某一分子量的物质不能扩散进 入, 而生物环境中的营养成分和囊内生物活性 物质或细胞分泌的小分子产物可以自由出入微 胶囊, 从而达到免疫隔离目的。
动物细胞微囊化培养的成功为干扰素、乙肝 表面抗原(HBsAg)、单克隆抗体(MAb)等)的产生 提供了广泛应用前景。
表4－1 微胶囊制备材料
来源 类型
材料
脂质 卵磷脂、神经鞘髓磷脂等
天然 多糖 海藻酸盐、壳聚糖、琼脂、淀粉等
半合成 合成
蛋白质 明胶、白蛋白、纤维蛋白
纤维素类 羧甲基纤维素钠、已基纤维素、醋 衍生物 酸纤维素及其酯等