微生物菌种保藏原理与方法
微生物菌种保藏的原理和方法
微生物菌种保藏的原理和方法一、原理：1.休眠状态：微生物菌种在低温下可进入休眠状态，减缓代谢活动，延长存活时间。
2.冷冻保存：通过降低温度到零下或较低的温度，减慢微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
3.干燥保存：通过去除菌种周围的水分，降低微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
4.冻干保存：先冷冻再干燥保存，通过冷冻降低微生物体内的水分活性，再通过干燥去除冻结水，使菌种能在实验室条件下保存较长时间。
二、方法：1.冷冻保存：（1）使用离心管或培养管制备菌种的蛋白质保护液，可以是细胞培养基、缓冲液等。
（2）将培养物转移到保护液中，使其悬浮均匀。
（3）加入保护剂，如甘油或DMSO（二甲亚砜），提高菌种的冷冻抵抗力。
（4）将混合物分装到小容器或冻存管中。
（5）使用特定的冷冻方案，将菌种快速冷冻，并存储在低温下，通常为零下80℃或更低的温度。
2.干燥保存：（1）用无菌技术转移到无菌条件下的试管中。
（2）将菌种培养在无菌的固体培养基上。
（3）收集培养物，将其平均分布在无菌试管或培养皿中。
（4）将试管或培养皿放在无菌的通风柜中，使培养物在无菌环境下干燥。
（5）将干燥的培养物贮存在干燥无菌容器中。
3.冻干保存：（1）将培养物转移到无菌离心管或培养皿中。
（2）使用细菌培养基将菌种制备为细菌悬浮液。
（3）在细菌悬浮液中加入保护剂，如蔗糖或甘露醇。
（4）将混合物分装到冻干瓶中。
（5）使用低温冷冻机将菌种冷冻为固体，再将其放入冻结干燥机中进行冻干。
（6）将冻干的菌种贮存在密封的冻干瓶中。
4.长期保存：通常，冷冻保存和冻干保存可以实现长期保存，但仍需定期检测和维护保存条件。
在微生物菌种保藏过程中，还需注意以下几点：1.选择合适的保存条件：根据菌种的特性和要求，选择适宜的保存方法和温度。
2.制备合适的保存液：保存液的配方和pH值应与菌种相适应，以保证菌种的存活和精确性。
3.保持无菌操作：在菌种保藏过程中，需保持无菌操作，以防止细菌污染。
5菌种保藏的原理和方法
适用菌种：产孢子的真菌 该法麸皮、大米、小米或麦粒等天然农产品为 产孢子培养基，使菌体产生大量的休眠体（孢 子）后加以保存。 注意：控制适当的水分。 保存期：1-3年
（四）沙土管干燥保藏法
原理：低温、寡营养 保藏期：4-5
℃冰箱 保存期1-2年。 适用菌种：产孢子的丝状真菌和放线菌以及产 芽孢的细菌。 过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质， 可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载 体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。
（二）穿刺保藏法
原理：低温、缺氧 保藏期：
4-5℃冰箱 保存期6-12个月 适用菌种：各种好气性细菌 液体石蜡作用：防止培养基失水并隔绝氧气 液体石蜡保藏法 （在斜面菌种上加入灭菌后 的液体石蜡） 适用于不能以石蜡为碳源的菌种，如：固 氮菌、分枝杆菌、沙门氏菌、毛霉、根霉等。
（三）固体曲保藏法
三、菌种保藏的注意事项
1 菌种在保藏前所处状态 休ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ体如孢子或芽胞 培养时间（过短，容易死亡；过长，生产性能 衰退） 培养温度 一般采用生长最适温度培养至孢子成熟的菌种 进行保藏效果好
三、菌种保藏的注意事项
2 菌种保藏所用基质 斜面保藏所用的培养基，碳源比例应少些，营 养成分贫乏些较好； 沙土管保藏需将沙和土充分洗净，以防其中过 多的有机物，影响菌的代谢或经灭菌后产生一 些有毒物质； 冷冻干燥所用的保护剂，有不少经加热分解或 变性的物质，如还原糖和脱脂乳，过度加热易 形成有毒物质。
（五）真空冷冻干燥保藏法
原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整， 然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。 步骤： ①安瓿瓶的处理：灭菌 ②保护剂:其作用是保持菌种细胞的生命状态，尽量减少冷 冻干燥对微生物引起的冻结损伤。 常采用脱脂牛奶或血清。 ③菌悬液制备：与保护剂混合，放在安瓿瓶内； ④冷冻干燥（用低温酒精或干冰（-15 ℃以下）使之速冻， 在低温下用真空泵抽干） 保藏期：将安瓿瓶熔封，低温4-5 ℃，保藏5-10年。
微生物菌种的保存
通过选种育种获得的优良菌种，在生产和保藏过程中，还会不断地产生变异，甚至衰退。
菌种保藏的任务就是在广泛收集具有优良特性的生产和科研菌种基础上，将它们妥善保管，使之不死，不杂，菌种优良性状不误退丧失。
1.菌种保藏的原理菌种保藏主要是根据微生物的生理、生化特点，人为地创造一个微环境条件，设法使微生物菌种的代谢活动处于不活泼和生长繁殖受抑制的休眠状态。
这种微环境主要是使菌种长期处于低温、干燥、无氧、避光、缺乏营养以及添加保护剂或中和剂等状态中。
微生物菌种在这种极端条件下，很少会发生变异，从而达到保持其纯而不死、壮而不衰的良好性状。
生产实践中常利用微生物的孢子、芽孢及营养体，给以不适合其萌发、生长、繁殖的条件，可进行较长时期的保藏。
一个较好的保藏菌种方法，首先应能长期保持菌种原有优良性能不变，同时也应考虑到方法本身的经济、简便。
2.菌种保藏的方法菌种保藏的具体方法很多，其保藏原理、应用范围及优劣也各有千秋。
各种方法所适用的微生物种类和效果也有差异。
一个菌种用哪种方法保藏较好，需要根据设备和菌种的具体情况决定。
斜面低温保藏法这是一种最基本的方法，适用范围广。
具体方法是将各类微生物的菌种接种在不同成分的适宜斜面培养基上，待菌种生长丰满（也有建议稍以生长即可）后，置4.c左右的冰箱中保藏。
每隔。
每隔一定时间，一般3-6个月，需进行重新移植新鲜培养后继续保藏，如此连续不断。
引法保藏简单，存菌率高，具有一定的保藏效果。
3.半固体琼脂柱保藏法及石蜡油封保藏法此法与斜面保藏法不同小异，仅将斜面改为直立柱，培养基中琼脂量减少，接种方法由斜面划线改为接种针穿刺，待菌在穿刺线上长成后置4.c左右的冰箱中保藏。
也可加无菌石蜡油（150－170。
C烘箱灭菌1小时）覆盖，即配合使用石蜡油封保藏法，抑制生物代谢，推迟细胞老化，防止培养基水分蒸发，因而能延长菌种的保藏时间。
如果用无菌橡皮塞，则保存效果更好。
砂土管保藏法土壤是自然界各类菌种的栖居志所，这与土壤粒对微生物起保护作用和提高它们的存活率有关。
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2.沙土管干燥保藏法（略）
3.真空冷冻干燥保藏法
是目前常用的较理想的一种方法。其基本原理是在较低温度 下，（-18℃），快速地将细胞冻结，并且保持细胞完整，然后 在真空中使水分升华。在这样的环境中，微生物的生长和代谢 都暂时停止，不易发生变异。一般可保存5~10年左右。
4.液氮保藏法
是适用范围最广的微生物保藏法，其保存期最长。因为液氮的温度 可达-196℃，远远低于菌种新陈代谢作用停止的温度（-130℃）， 故此时代谢活动已停止。保藏期一般为2~3年，长的可达9年之久。
种时，先将原种制成若干管液氮菌种作为长期保藏用菌种，然后 再制一批冷冻保藏菌种作为用户分发用。约经5年后，假定第一 代（原种）的冷冻干燥保藏菌种已分发完毕，就再打开一支液氮 保藏原种制备大量冷冻保藏菌种，这样下去，至少在20年内，凡 获得该菌种的用户，至多只是原种的第二代，从而保证了保藏菌 种与分发菌种的高质量标准。
保藏斜面活化斜面来自2、复壮：使微生物活性恢复的同时，恢复其优良的生产性能。
保藏斜面 平板分离（自然分离，剔除退化菌种） 活化斜面
六、菌种保藏机构
菌种保藏机构的任务是：在广泛收集生产和科研菌种、菌株的基 础上，把它们妥善保藏，使之达到不死、不衰、不乱和便于交换使 用的目的。国际上很多国家都设立了菌种保藏机构。
▲ I FO（发酵研究所，日本大阪. Institute for Fermentation, Osaka, Japan ） ▲ NCTC（国家典型菌种保藏中心,英国伦敦. National Collection of Type Culture. London, United Kingdom） ▲ NRRL（Northern Utilization Research and Development Division, U.S Department of Agriculture. Peoria, U.S.A. 美国农业 部、北方开发利用研究部，美国皮奥里亚市）
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法菌种是一种重要的生物资源，菌种保藏是重要的微生物基础工作。
菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变，以便于研究与应用。
(一)常规保藏方法1 目的1.1 了解菌种保藏的基本原理1.2 掌握几种常用的菌种保藏方法。
2 原理菌种保藏的方法很多。
其原理却大同小异，不外乎为优良菌株创造一个适合长期休眠的环境,即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。
使微生物的代谢活动处于最低的状态，但又不至于死亡，从而达到保藏的目的。
依据不同的菌种或不同的需求，应该选用不同的保藏方法。
一般情况下，斜面保藏、半固体穿刺,石蜡油封存和砂土管保藏法较为常用，也比较容易制作。
3 材料3.1菌株待保藏的适龄菌株斜面3.2培养基肉汤蛋白胨斜面，半固体及液体培养基。
3.3 试剂10%HCl无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。
3.4 器具用于菌种保藏的小试管(10*100毫米)数支、5毫升无菌吸管、l 毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子(40目、120目)、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。
4 流程斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏5 步骤5.1斜面保藏5.1.1流程标记试管→接种→培养→保藏5.1.2步骤5.1.2.1贴标签取无菌的肉汤蛋白胨斜面数支。
在斜面的正上方距离试管口2-3厘米处贴上标签。
在标签纸上写明接种的细菌菌名、培养基名称和接种日期。
5.1.2.2斜面接种将待保藏的细菌用接种环以无菌操作在斜面上作划线接种。
5.1.2.3培养置37恒温箱中培养48小时。
5.1.2.4保藏斜面长好后，直接放入4℃的冰箱中保藏。
这种方法一船可保藏三个月至半年。
5.2半固体穿刺保藏5.2.1流程标记试管→穿刺接种→培养→保藏5.2.2 步骤5.2.2.1贴标签取无菌的半固体肉汤蛋白等直立柱数支，贴上标签，注明细菌菌名、培养基名称和接种日期。
5.2.2.2穿刺接种用接种针以无菌方式从待保藏的细菌斜面上挑取菌种，朝直立柱中央直刺至试管底部，然后又沿原线拉出。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种保藏方法1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。
传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。
传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。
培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。
若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。
一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。
传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。
2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。
其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。
3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。
常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。
方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。
保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。
使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤（5克）置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基（以含水量为土壤最大持水量的60%为宜），然后高压灭菌。
常见微生物的菌种保藏及原理
常见微生物的菌种保藏及原理微生物指的是在显微镜下可见的微小生物（如细菌、真菌等）。
由于微生物在各种环境中具有重要的应用价值，如食品加工、制药、环境修复等，因此对微生物菌种的保藏具有重要意义。
目前常见的微生物菌种保藏方法主要包括冷冻保存、干燥保存、冷冻干燥保存和液氮保存等。
下面将介绍这些保存方法的原理及其在微生物保藏中的应用。
一、冷冻保存冷冻保存是最常见且简单的微生物保藏方法之一、其原理是通过降低菌种的生长和代谢速度来延缓细胞死亡，从而使菌种长时间保存。
常见的冷冻保存方式有两种：低温保存和液氮保存。
1.低温保存低温保存常用的温度为-80℃。
将微生物菌种培养物加入附加剂（如甘油、蔗糖）后，迅速冷冻至-80℃，然后保存在低温冰箱中。
这种方法简单易行，并且不需要特殊仪器设备，适用于大多数微生物菌种的保存。
2.液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方法，常用温度为-196℃。
液氮保存可以在较长时间内保持微生物菌种的细胞完整性和代谢活性。
液氮保存通常需要配备专门的液氮保存设备，如液氮罐和液氮冷冻器。
虽然保存设备和条件较为复杂，但是液氮保存方法适用于保存需求较严格的微生物菌种。
二、干燥保存干燥保存是通过去除菌种的水分来实现菌种长时间保存的一种方法。
常见的干燥保存方法主要有两种：常温干燥保存和真空冷冻干燥保存。
1.常温干燥保存常温干燥保存是将微生物菌种培养物均匀涂布于无菌玻璃片或滤纸上，然后在室温下进行干燥。
干燥后的微生物菌种可以直接保存，也可以以泡脱水的方式进行保存。
常温干燥保存适用于耐受干旱的微生物菌种。
2.真空冷冻干燥保存真空冷冻干燥保存是将微生物菌种培养物在真空条件下进行冷冻干燥。
首先，将菌种培养物在低温下冷冻，然后在低压下去除水分。
真空冷冻干燥保存可以保持菌种的细胞完整性和代谢活性。
这种方法适用于保存需求较严格的微生物菌种。
三、液氮保存液氮保存是将微生物菌种培养物冷冻在液氮温度下进行保存的方法。
如前所述，液氮保存要求采用极低温的液氮温度（-196℃）进行保存。
菌种保藏原理
菌种保藏原理
在菌种保藏中，主要通过冷冻和冻干技术来延长菌种的保存时间和保持其活力。
冷冻保藏是将菌株培养物中的微生物细胞在低温下迅速冷冻保存，而冻干保藏则是将菌株培养物中的水分逐渐去除，使其变成干燥的状态。
冷冻保藏的原理是通过将菌株培养物中的水分迅速冷冻，使细胞内的代谢反应减缓，防止代谢产物的积累和细胞损伤。
同时，低温下的冷冻可以防止细胞内的酶活性和酸碱平衡的改变，从而减少冻存过程中的细胞死亡率。
冻干保藏的原理则是通过将菌株培养物中的水分逐渐去除，使其转变成干燥的状态。
这种保藏方式主要通过冷冻干燥设备，将培养物缓慢冷冻至低温，然后将水分在低温下逐渐去除，最终形成干燥的菌株。
冻干保藏可以有效地减少冷冻过程中的细胞损伤，同时还能极大地减少微生物的营养需求和代谢活动，从而延长菌株的保存时间。
综上所述，菌种保藏的原理主要是通过冷冻和冻干技术来延长菌种的保存时间和保持其活力。
这些方法可以有效地减少菌株的代谢活动和细胞损伤，从而保持菌株的活力和遗传特性。
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