结核病防治实验室痰检工作——第一讲痰涂片镜检.
结核杆菌痰涂片镜检的意义及其应注意的问题需知
结核杆菌痰涂片镜检的意义及其应注意的问题需知结核杆菌，是人类结核病的病原菌。
结核杆菌是专性需氧菌，无鞭毛，有荚膜，没有运动能力，典型的结核杆菌的形态为细长稍弯曲或直的、两端圆钝的杆菌，长1μm～4μm，宽0.3μm～0.6μm。
痰涂片经过抗酸染色阳性的标本，在100倍的生物显微镜下可在蓝色背景下看到紫红色的杆状菌，呈单个散在，有时也呈X、Y形或条索状、聚集成簇等。
痰涂片经金胺“O”染液染色后，在含有紫外光源的荧光显微镜下发出橘黄颜色，高倍镜（物镜40倍目镜10倍）下，可见结核杆菌产生黄绿色荧光，呈杆状或分枝状。
目前基层实验室多采用抗酸染色镜检。
（一）结核杆菌痰涂片镜检的意义1.诊断传染性肺结核结核病的控制是以发现和控制传染源为主，而痰涂片镜检阳性的肺结核患者是社会上最主要的传染源，故痰涂片镜检结果对诊断传染性肺结核具有重要意义。
2.评价化疗效果结核病是由结核杆菌引起的，针对结核病的治疗，现行化疗方案的制定也主要是以结核杆菌的生物学特性为依据，所以痰涂片镜检结果可以作为化疗效果的评估依据。
1.为流行病学疫情评价服务由于传染性肺结核在流行病学中有着特殊的意义，因此，涂阳患病率、涂阳发现率是反映某一国家或地区结核病疫情的严重程度的重要指标。
根据世界卫生组织（WHO)和国际防痨及肺部疾病联合会（UNION）针对低收入且结核病疫情严重的发展中国家所制定的技术指南，痰涂片镜检是相应国家开展结核病控制项目时非常符合成本效益原则的细菌学试验技术。
相对于临床和实验室经常采用的其他诊断和检查项目，高质量的痰涂片镜检有其自身特殊的优势：作为诊断手段，对传染性肺结核的诊断比X线的准确性高；技术相对简单，操作容易标准化；建立结核杆菌检查室设备投入少；检查成本低，易于接受；从收到标本到报告结果的时间短，能够满足临床诊断的需要；对涂阳患者的治疗效果，能够作出及时和准确的评价。
（二）结核杆菌痰涂片镜检应注意的问题1.实验室布局原则结核杆菌检查需要有独立的实验室，不能和其他实验室混用；染液配置、镜检等相对洁净的操作与标本存储、涂片、染色等污染操作要有独立分开的场所，最好分别在专用的房间进行，中间通过传递窗连接；基层实验室若只从事涂片镜检的，在只拥有一间独立房舍的情况下，相对洁净区与污染区也要有明显区分。
对肺结核痰涂片镜检中若干问题的探讨
对肺结核痰涂片镜检中若干问题的探讨摘要：随着卫十项目的全面启动，dots策略在全国范围内的实施，痰涂镜检成了发现肺结核传染源、实施化疗方案、评价化疗效果以及其流行病学与防治措施上的重中之重。
为进一步规范痰检工作，提高痰检质量，国家卫生部疾病控制司发布了一系列与肺结核防治规划有关的痰检方法，还专门出台了《中国结核病防治规划痰涂片镜检质量保证手册》（以下简称《手册》）。
笔者作为痰检人员，在执行和使用该书的同时，查阅了一些与肺结核痰检有关的书籍，其操作方法大致相同。
经过多年来的工作实践，笔者发现传统方法及《手册》存在几点商榷之处。
关键词：肺结核痰涂片镜检若干问题探讨【中图分类号】r9 【文献标识码】b 【文章编号】1671-8801（2013）06-0403-01随着卫十项目的全面启动，dots策略在全国范围内的实施，痰涂镜检成了发现肺结核传染源、实施化疗方案、评价化疗效果以及其流行病学与防治措施上的重中之重。
为进一步规范痰检工作，提高痰检质量，国家卫生部疾病控制司发布了一系列与肺结核防治规划有关的痰检方法，还专门出台了《中国结核病防治规划痰涂片镜检质量保证手册》（以下简称《手册》）。
笔者作为痰检人员，在执行和使用该书的同时，查阅了一些与肺结核痰检有关的书籍，其操作方法大致相同。
经过多年来的工作实践，笔者发现传统方法及《手册》存在几点商榷之处。
1 痰标本性状的确定标准的a、b痰按《手册》描述易确定，但对c痰、d痰就难了。
工作中经常会遇到黏液痰中夹黄色痰；灰黑色的“橡皮”样硬痰；粘度较大的透明痰；粉末样痰等。
感官描述与镜检上描述大不一样。
既然痰检质控要求每视野大于10个痰细胞为合格痰，那么对于感官难以确定的痰也可以根据这个标注来判断其性状。
2 痰标本涂片方法传统方法与《手册》一样，涂片时只需用竹签茬端粘痰直接在玻片上涂抹。
对于脓性干酪样a痰及口水d痰，直接涂抹相对容易，但对于粘度较大的痰、质地较硬的“橡皮”痰或血块、气泡较多的痰等，直接涂抹比较费时，按《手册》取0.05-0.1ml痰这个量难以掌握，而且厚薄不均。
痰涂片镜检操作规范
玻片的保存
使用显微镜附带的镜油，或者是购 买的镜油（immersion oil）,而不 是香柏油（cedar oil）,则不需使 用二甲苯，直接使用镜头纸擦拭即 可 干燥后的玻片，按实验室序号及涂 片编号放置在玻片盒中，存放在阴 凉干燥环境中。处于潮湿炎热的环 境中抗酸菌易于褪色。
痰细菌学检查工作经常被忽视
标本性状的控制加强于医生沟通3份痰标本1即时痰2夜间痰3晨间痰痰标本保存不能当日检查的保存于冰箱防液化染液控制用之前过滤一下一周一次如何进行痰涂片质量控制室内质控抽查复检当日10的涂片自查或互查选取结果可疑的涂片复查尤其是只看到一条的或只在一处视野看到细菌选择痰阳病人有阴性结果的涂片记录结果18条涂片玻片的保存使用显微镜附带的镜油或者是购买的镜油immersionoil而不是香柏油cedaroil则不需使用二甲苯直接使用镜头纸擦拭即干燥后的玻片按实验室序号及涂片编号放置在玻片盒中存放在阴阴凉干燥凉干燥环境中
痰涂片镜检操作规范
宁波市疾病预防控制中心 平国华
一、标本的来源与收集
初诊时留取标本数量 以三份标本的阳性检出例数作为 100％，留取一份标本的阳性检出 例数占全部阳性例数的80％，留取 两份标本的阳性检出例数占全部阳 性检出例数的95％。
不同痰液涂片阳性率表 （仅供示例）
性质 干酪样痰 血性痰 粘液性痰 水样痰 例数 55 46 529 92 阳性数 36 16 56 7 阳性率 65.5% 34.8% 10.6% 7.6%
附件（仅 供参考）
六、评价痰涂片 位置 大小（10mm×20mm） 厚薄（刚好透过报纸的5号字体，镜下每个视 野20个左右细胞） 染色（肉眼看天蓝色,无红/紫色斑块） 脱落（＜10%痰膜面积）
单一的抗酸菌
“V”- 字形
肺结核病人痰涂片镜检不同质控方式效果评价
结 果
1.不同督导方式、不同地理条件下四次质控结果的各项指标差异无显著意义(P>0.05)，见表1。
2.针对痰涂片及其质控的有关问题，对痰检人员进行了培训，并在质控前、后进行了两次问卷考核，22名地(市)及县级痰检人员质控后的答对率(90%)明显高于质控前(53%)。
表1 不同地理条件及督导方式痰片复检符合率
4 100.0 100.0 96.3 94.4 90.7 95.3 96.3 98.0 99.5 95.3 89.6 91.8 95.0 96.9
3.费用：表2显示2个省16个县4次督导总的经费消耗，直接督导(包括督导员差旅费、食宿费等)明显高于间接督导(包括包装邮寄费、复印费等)(P<0.05)；山区督导费高于平原(P<0.05)。
4 100.0 99.2 97.8 96.3 94.0 98.1 94.5 99.4 99.6 95.9 92.5 90.2 94.6 97.7
1 100.0 97.2 88.6 91.9 86.3 90.5 91.9 96.8 98.9 91.1 84.8 85.1 89.6 96.3
2.复检痰片数 直接督导组：每次每个实验室抽取阳性涂片20张，阴性涂片30张。间接督导组：每次每个实验室抽取阳性涂片20张，阴性涂片60张。
3.复检的痰涂片分别按“镜下观察”和“肉眼观察”进行评价并按统一表格记录。镜下观察：包括阳性、阴性符合情况及镜下每视野痰细胞数是否≥10个。肉眼观察：包括痰膜面积、厚薄、染色情况、痰膜脱落情况等，合格标准以“结核病诊断细菌学检验规程”［3］为准。
地理
条件 质控
次数 直 接 督 导 间接督导
镜下观察 肉眼观察 镜下观察 肉眼观察
结核病实验室涂片镜检技术
理治疗带来新的希望。
结核病细菌学诊断
结核病细菌实验室布局原则
• 1、结核病细菌学检查要有独立的实验室，不得 与其他实验室混用，最好为P3级实验室；
• 2、培养基制备、洗刷等相对洁净的操作与涂片 镜检、培养前处理、药敏试验等污染操作要有独 立分开的场所，最好分别在专用的房间进行；
盐类
• 钙、钾、镁、铁、磷等，约占菌体成 分的 6％。
营养与发育
• 结核菌是需氧菌，但在含有比较低氧的环 境下也能生存，比如骨结核，淋巴结核。
• 在少量二氧化碳的环境中生长的也很好。 • 结核菌生长的适宜温度和人体相近为370C • 结核菌生长所必需的元素有氧、碳、氮、
氢、磷、钾、镁等。
结核分枝杆菌形态
抗酸性
抗酸性是分枝杆菌的重要特征。其化学 基础是分枝菌属的细胞壁脂质含量较高， 并含有大量分枝菌酸。
抗酸性与细菌细胞壁的完整性关系密切， 若菌体自溶（如标本保存时间过长、温度 过高）、结核菌的异型相（如：L-型菌、 干酪或脓液中的结核菌）可能失去抗酸性。
生长特性
生长适宜温度37C，PH6.8-7.2。营养要求较高。 在常用的罗氏（Lowenstein-Jensen）培养基上 生长的菌落粗糙、凸起、致密，有表面皱折， 呈颗粒、结节或菜花样，乳白色或米色，不透 明。
是国家结核病控制规划（NTP）的重要组成部分 是发现传染源的最主要途径和手段 是考核疗效、评价防治效果的可靠指标
分枝杆菌 生物学基础
概述
结核分枝杆菌是1882年郭霍（Robert Koch） 从肺结核病人痰标本中发现。是人类结核 病的主要病原菌。
分类
痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册
痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册一、操作流程1. 准备工作在进行痰涂片镜检之前，首先要做好准备工作。
包括整理工作台、准备所需试剂和材料、带好个人防护用具等。
确保环境整洁，避免外界污染。
2. 采集标本需要采集患者的痰液标本。
在采集时，要注意不要污染标本，并且采集的标本应该足够用于镜检。
3. 制作涂片将采集的痰液标本滴于载玻片上，用另一块载玻片将其涂开，制作成薄膜。
这一步需要技术娴熟，避免产生气泡或过厚的制片。
4. 干燥固定将制作好的涂片进行干燥固定，以保证镜检时的清晰度和稳定性。
通常可以用自然风干或特殊设备进行干燥。
5. 着色染色将干燥固定的涂片进行染色处理，使细胞和微生物更易于观察和分辨。
6. 镜检操作进行镜检操作。
在显微镜下观察涂片，分析痰液中的细胞、细菌和真菌等微生物结构和形态，及时记录观察结果。
二、质量保证手册1. 质量控制制定痰涂片镜检的质量控制标准，包括操作流程、质量评价标准、设备维护等方面，确保每一项操作都符合标准要求。
2. 培训与考核对进行痰涂片镜检的人员进行专业培训，包括操作技巧、细胞和微生物识别能力提升培训等，并定期进行考核，确保技能和认识的稳定性。
3. 质量评价建立定期的内部质量评价机制，对镜检结果进行复核、比对等，在发现问题时及时采取纠正措施。
4. 设备维护对显微镜等设备进行定期的维护保养，确保设备的正常使用和观察质量。
三、个人观点痰涂片镜检在临床诊断和疾病监测中扮演着重要的角色，标准化操作和质量保证手册则是保证检测结果准确性和稳定性的基础。
通过规范的操作流程和严格的质量控制，可以减少操作误差和结果偏差，提高痰涂片镜检的准确度和可靠性。
培训检验人员和定期的质量评价不仅可以提升检验人员的技术水平，还可以及时发现和解决问题，保证实验室检测的质量和可靠性。
总结回顾通过本文对痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册的介绍，我们了解到了其重要性和必要性。
良好的操作流程和质量保证手册是保证痰涂片镜检准确性和可靠性的关键步骤，对于临床诊断和疾病监测具有重要的意义。
痰涂片镜检实验室质量保证手册
现场评价（On-site evaluation） 国家或地区结核病规划下的地区督导员的常规对下 级实验室的督导检查和高水平实验室督导员的年度督导检查。
图 2 标本容器 （二）标本的性状：
合格的痰标本应是患者深呼吸后，由肺部深处咳出的分泌物。 1、干酪痰：标本外观以黄色（或奶酪色）脓样、团块状的肺部分泌物为主，粘度较粘液 痰低，制片时较易涂抹；涂片染色后镜检，可见大量脓性炎症细胞、肺上皮脱落细胞。由于 此类标本是由肺部深处咳出，对肺结核的诊断最有价值，故 AFB 的检出率较高。 2、血痰：此类标本是因粘液痰或干酪痰标本中混有血液而形成，颜色为褐色或深褐色、 鲜红色或伴有血丝；涂片染色后镜检除能够观察到粘液痰或干酪痰的细胞特征外，含新鲜血 液的标本中还可见到被染色的红细胞。由于含血标本易干扰 AFB 镜检的结果，故在制片时 应尽量避免挑取含血标本。 3、粘液痰：标本外观以白色、粘稠度较高的肺部和支气管分泌物为主，制片时需仔细涂 抹；涂片染色后镜检时，镜下可见支气管内膜纤毛柱状上皮细胞（细胞较长且形态不规则、 细胞核和细胞质着色均较深，细胞一端可见着色较浅的纤毛），伴有少量肺上皮脱落细胞（多 数为圆形，细胞核较小，且着色较细胞质深，核质比＞1:3）、脓性炎症细胞（卵圆形、细 胞核占细胞比例较大且着色较深，核质比＜1:1）、口腔脱落细胞及口腔寄生菌。此类标本 的 AFB 检出率较唾液高。 4、唾液：目视观察标本外观，以透明或半透明水样、粘度较低的口腔分泌物为主，标本 中有时伴有气泡；涂片染色镜检时，镜下可见少量口腔上皮脱落细胞（形态不规则、细胞核
痰涂片检查在肺结核病诊疗工作中的重要作用
国际 通 用 的螺 旋 盖 痰 瓶 ，或可 密 封 塑 料 盒 、蜡 纸 盒 。痰 标 本性 状 属 于 干 酪痰 、褐 色 血 痰 、黏 液 痰 为 合 格 标 本 。 干 酪 痰 的 标 本 外 观 以 黄 色 （ 酪 奶 色） 、脓 样 、团 块 状 的肺 部 分 泌 物 为 主 ， 黏 度 较 低 。染 色镜 检 后 可 见 大 量脓 性 炎 症 细 胞 ，肺 上 皮 脱 落 细胞 ，此 类 标 本 是 由肺 部 深 部 咳 出 ，对 肺 结 核 的 诊 断价 值 最 高 ；血痰 标 本 是 黏 液 痰 或 干 酪 痰
正确 的 留痰 方 法 是 ，在 留 痰 之前 先 用 清 水 漱
受 ，但 对在 治疗 前 及 治 疗过 程 中要 定 期 查 痰 还 不 能理 解 甚 至不 能 接 受 。 其 实痰 涂 片 检 查 对 治 疗 和 控制肺结 核病是 极为 重要 和必不可 少 的。 首 先 ，痰 涂 片检 查 是诊 断肺 结 核 病 以及 判 断 肺 结 核 病传 染 性 强 弱 的最 直 接 、最 主要 的依 据 。 疑 有肺 结 核 病 除进 行 Ｘ线 胸 透 、摄 片检 查 外 ，必
标 本 中 混有 血 液 而 成 ，颜 色 为 褐 色 或 深 褐 色 ；黏
液痰 的标 本 外 观 以 白色 、黏 度 较 高 的肺 部 和 支气 管分 泌物 为 主 。唾 液标 本 整 体 外 观 以透 明 或半 透 明水 样 、黏度 较 低 的 口腔 分 泌 物 为 主 ，标 本 中有 时伴 有 气 泡 ，此 类标 本 检 出率 很 低 ，属 于 不 合 格 标 本 。痰 标 本 不 合 格者 ，应 予 以进 一 步 指 导并 要 求 其 重新 送 检 。 初次 就 诊 需 查 痰 者 ，要 求 送 检 三 个 痰 标 本 ：① 即 时痰 ：就 诊 当 时 咳 出 的痰 ；② 夜 间 痰 ：前 一 天 晚 间 咳 出 的痰 ；⑧ 清 晨 痰 ：起 床 后 深 咳 吐 出 的痰 ，其 中 以清 晨 第 一 次 咳 出的 痰 效 果
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于试管中加20%的枸橼酸钠3—5滴，或10%的草酸钾
5—6滴，可防止15—20ml 胸腹水凝固。无菌采取胸腹
水以后应立即送检。可采取离心集菌或漂浮集菌法检查
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
【纤维支气管镜刷检物】 可将毛刷直接进行抗酸染色,也可将刷检标本洗脱于装有 无菌生理盐水的试管中,再涂片检查
痰涂片操作程序
直接涂片的步骤
【清洁无划痕的新玻片脱脂、干燥】 编号
无磨砂面的玻片，需用玻璃刻刀或用标签纸
有磨砂面的玻片，可用铅笔编号
痰涂片操作程序
直接涂片的步骤
【清洁无划痕的新玻片脱脂、干燥】 使用折断的竹签茬端，取痰标本中干酪样或脓样 0.05~0.1毫升，涂于玻片右2/3处，均匀涂抹 10x20毫米大小的椭圆形痰膜
痰标本的运送
难以获得合格标本时，也应进行细菌学检查，但 应注明标本性状，以供分析结果时参考 需送上一级实验室检查的痰标本应置4℃冰箱保存， 外送前认真核对检验单与痰瓶上标注，放专用的冰
盒内运送，或用纸袋、塑料袋封装扎牢后顺序放入
包装盒，盒外注明请勿倒置标志
痰涂片操作程序
标本的性状
外层是 口 腔黏液
复治涂阳患者在疗程满2、5、8月时
结核菌的形态和结构
光学显微镜下为细长 稍弯曲，两端钝圆的 杆菌 ，菌体长度多为 1.5~3.5um
结核分枝杆菌
宽度为0.3～0.6um， 生 长发育期间形成分枝 经萋尔-尼尔逊染色后 在显微镜内蓝色背景 下呈红色杆状
结核菌的形态和结构
电子显微镜下的结核分枝杆菌
细胞壁 细胞膜
常见标本的收集及处理 痰标本的采集－容器 痰标本的采集 留取标本 痰标本的运送 标本的性状 直接涂片的步骤 染色的步骤
痰检工作的目的和意义
1
在结核病控制工作中痰结核菌涂片镜检对 于发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核
疗效、评价防治效果具有重要意义
2
是国家结核病控制规划(NTP) 的重要组成
核心是肺 部坏死组 织
中间层是支 气管分泌物
合格的痰标本应是患者深呼吸后，由肺部深处咳 出的分泌物
痰涂片操作程序
标本的性状
【干酪痰】 标本外观以黄色(或奶酪色)、脓样、团块状的肺部 分泌物为主，粘度较粘液痰低，制片时较易涂抹
涂片染色后镜检，可发现大量脓性炎症细胞、肺上
皮脱落细胞 由于此类标本是由肺部深处咳出，对肺结核的诊断 最有价值，故抗酸杆菌(以下简称AFB)的检出率较高
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
脓液直接涂片染色镜检 病灶组织或干酪样组织需充分研碎后再涂片检查
痰涂片操作程序
痰标本的采集－容器
当前,贵州省疾病预防控制机构结核病实验室进行痰检 工作的耗材由项目统一提供： 螺旋盖痰瓶 可密封的塑料盒 可密封的蜡纸盒
痰涂片操作程序
痰标本的采集－容器
痰涂片操作程序
结核分枝 杆菌 细胞质 核物质
结核菌的形态和结构
电子显微镜下的结核分枝杆菌
Gram-positive S. aureus Gram-negative E. coli Acid fast M. tuberculosis
结核菌的形态和结构
染色特性
1
结核杆菌用革兰氏染色，着色较差但呈兰色， 列为G＋菌
不均匀、脱落、脱色不佳
痰涂片操作程序
染色后外观
本节小结
本讲课内容主要从痰涂片镜检的角度讲述了结核
病防治实验室痰检工作中新的进展
本讲中的重点内容是痰涂片的操作程序，辅以开篇
的背景知识帮助理解
痰涂片操作程序
标本的性状
不同痰液涂片阳性率表 （仅供示例）
性质 例数 阳性数 阳性率
干酪痰
血痰 粘液痰 唾液
55
46 529 92
36
16 56 7
65.5%
34.8% 10.6% 7.6%
痰涂片操作程序
标本的性状
细胞核质比，白细胞，说明痰的质量较好
痰涂片操作程序
标本的性状
上皮细胞多，说明标本质量差
部分，在现代结核病控制工作中起着不可缺
少的重要作用
国家结核病规划（NTP）与 结核病细菌学实验室网络
结核病细菌学实验室通过日常、有效的细
菌学（病原学）诊断，发现传染源、决定化疗方
案和评价治疗效果为实现NTP的重要目标服务
2
1
痰涂片镜检服务必需在健全的细菌学实验
室网络中才能实现
国家结核病规划（NTP）与 结核病细菌学实验室网络
火焰加热至出现蒸汽，勿使沸腾
脱离火焰，保持5分钟
痰涂片操作程序
染色步骤
【脱色】 流水自玻片一端清 缓冲洗染色液，沥 去玻片上的水，滴 加脱色液，保持1 分钟
痰涂片操作程序
染色步骤
【复染】 滴加亚甲蓝复染 液，保持30秒钟 流水冲洗，沥去
玻片上的水 玻片干燥后镜检
痰涂片操作程序
染色步骤
3
结核病高负担国家NTP主要通过实施现代结
核病控制策略（DOTS）来实现
4
痰涂片镜检是结核病细菌学实验室服务中 最重要的内容之一。痰涂片镜检发现传染源是 DOTS策略的重要组成部分
检查对象
确定诊断
凡因结核病症状求诊及转诊的可疑肺结核患 者，均应进行痰直接涂片检查
结核病症状体征 持续咳嗽 咳痰超过 3周
痰膜朝上，待自然干燥(一般20分钟)
痰涂片操作程序
涂片面积
10×20mm
10mm
20mm
痰涂片操作程序
染色步骤
初染 (碱性复红)
染色过程
脱色 (盐酸酒精)
复染 (亚甲兰)
痰涂片操作程序
染色步骤
【初染】 将玻片放置染色架上，玻片间距保持10毫米以上距离 火焰固定（5秒钟将玻片过火4次） 滴加石炭酸复红染液，盖满玻片
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
【脑脊液的采取】 无菌手术取得脑脊液以后，3000转离心30分钟，取沉
淀物涂片染色检查
结核性的脑脊液放在冰箱中4℃过夜以后，会在液面形
成一个倒漏斗状的薄膜，取此薄膜涂片染色镜检
痰涂片操作程序
常见标本的收集及处理
【尿标本的采取】 通常留取清晨第一次全尿或中后段夜尿,也可留取24小时 的尿液，放冰箱或阴凉处，静置，去上清，留沉淀部分 50—60ml送检，取此沉淀液，经3000转，离心30分钟， 取沉淀部分2ml直接涂片，染色检查
留取标本
留痰时应嘱咐病人尽量深咳，留取痰量3~5毫升 干酪痰、血痰、黏液痰为合格的标本唾液属不合 格痰标本
痰瓶上标明病人姓名，初诊门 诊序号（或随访病人登记号） 痰标本留取后，痰盒切勿倒置、 严防痰液外溢，应立即送检
留取标本
进行细菌学检查时，应在登记 本和检验报告单上注明标本性 状
痰涂片操作程序
痰涂片操作程序
标本的性状
【血痰】 此类标本是因粘液痰或干酪痰标本中混有血液而形成
颜色为褐色或深褐色、鲜红色或伴有血丝
涂片染色后镜检除能够观察到粘液痰或干酪痰的细胞 特征外，含新鲜血液的标本中可见到被染色的血细胞 由于含血标本易干扰AFB镜检的结果，故在制片时应尽 量避免挑取含血标本
痰涂片操作程序
痰涂片操作程序
标本的性状
【唾液】 目视观察标本整体外观，以透明或半透明水样、粘度 较低的口腔分泌物为主，标本中有时伴有气泡 涂片染色镜检时，镜下可见少量口腔上皮脱落细胞(形 态不规则、细胞核着色较细胞质深，核质比接近或大
于 1:2)和口腔内寄生菌，有时可见食物残渣
由于此类标本进行AFB检查时的检出率很低，用于对患 者确定诊断时是不合格的标本
2
结核杆菌用普通的染色方法不易着色，在染液
中加入石炭酸后才可着色
结核菌的形态和结构
染色特性
3
抗酸染色时，因结核杆菌菌体含有大量脂质，其脂质 的含量占分枝杆菌之首，占菌体干重的40%，因脂质的 含量大，所以不易着色，但经过加热或者提高石炭酸的 浓度、延长染色时间等处理以后才能着色
结核菌的形态和结构
第三章 结核病管理及最新进展
第一节 结核病防治实验室痰检工作
第一讲
痰涂片镜检
本节内容导航
痰检工作的目的和意义 国家结核病规划（NTP） 与结核病细菌学实验室网络 检查对象 结核菌的形态和结构
电子显微镜下的结核分枝杆菌 染色特性 萋尼氏染色镜下形态
本节内容导航
痰涂片操作程序
将涂片排放在染色架上，注意间隔
痰涂片操作程序
染色步骤
滴加碱性复红
痰涂片操作程序
染色步骤
加热
痰涂片操作程序
染色步骤
流水冲洗
痰涂片操作程序
染色步骤
脱色
痰涂片操作程序
染色步骤
流水轻缓冲洗
痰涂片操作程序
染色步骤
复染
痰涂片操作程序
染色步骤
流水洗去复染液
痰涂片操作程序
染色步骤
在玻片架上自然干燥
痰涂片操作程序
咳血或伴 有血痰
发热或胸 痛超过2周
胸部X线异常
检查对象
确定诊断的涂片检查应采集3个合格的痰标本
就诊当时在门诊留一份“即时痰”标本，同时给
患者 2 个痰盒，嘱患者留取“夜间痰”和“晨
痰”，于次日交验
பைடு நூலகம்
检查对象
疗效评价
治疗中或复诊随访病人按期每次送检两份痰(当 日即时痰、当日或次日晨痰） 初治涂阳患者在疗程满2、5、6月时
染色特性
4
一旦着色，不易被盐酸酒精脱色，而其他细菌均被
脱色，把不被盐酸酒精脱色的细菌称为抗酸菌，这种方