碱性蛋白酶活力分析方法研究_张剑
碱性蛋白酶的分离纯化与性质初探
碱性蛋白酶的分离纯化与性质初探碱性蛋白酶的分离纯化与性质初探一、综述本课题国内外研究动态，说明选题的依据和意义:1.国内外研究现状碱性蛋白酶(Alkaline protease)广泛存在于微生物中,最早发现在猪的胰脏中，1913年Rhom首先将胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用。
1945年瑞士的Dr.Jagg 等发现了微生物碱性蛋白酶,使其成为洗涤剂的主要添加剂之一。
碱性蛋白酶在丝绸、制革工业、饲料工业、动物食品加工中也有广泛用途。
由于市场的需求，高产、高效、耐高温、耐高碱的四高型碱性蛋白酶成为国内外当前研究的热点之一[1]。
研究结果发现，海洋酶具有作用pH 范围宽，最适pH 和反应温度适中，随反应温度的降低酶活性下降缓慢等特点。
海洋酶所具有的独特性质，引起学术界高度重视，日、美等国就此展开了深入的研究。
迄今为止，由海洋微生物生产海洋酶的专利已达20 余项。
海洋微生物酶的研究正逐渐成为发达国家开发新型酶制剂的重要途径[2,3]。
相比之下，国内在海洋碱性蛋白酶研究方面差距较大。
综合多篇文献分析，目前针对海洋细菌产生的碱性蛋白酶，分离提纯的方法大致多采用饱和硫酸铵分级盐析和层级技术。
首先是从发酵液取上清制备粗酶液（此酶为一种外分泌蛋白，无需通过溶菌酶溶解或超声波破碎细胞来制备粗酶液），通过超速离心沉淀，饱和硫酸铵分级盐析，透析，凝胶层析或离子交换层析来分离提纯该菌所产生的碱性蛋白酶。
其中一些已经对酶的性质、序列等进行了研究[4-7]。
2.选题依据及意义此毕业设计的课题为《碱性蛋白酶的分离纯化及性质初探》，主要是对海洋细菌进行培养及分离提纯方案的改进，并对其性质进行初步探究。
大致是将各种相关参数和实验数据建立正交关系得到最佳培养条件，并对其产生的碱性蛋白酶进行分离提纯，同时得出最佳分离提纯方案。
最后对碱性蛋白酶的性质进行初步研究。
本设计针对目前研究较少的产碱性蛋白酶的海洋微生物新菌株，研发新型高效的碱性蛋白酶，这对满足人类生活、生产与技术开发的需求至关重要。
Folin法测定碱性蛋白酶活性
混匀，水浴40℃ 20min，冷却后680nm波长处比色 空白对照操作：
在加酪蛋白前加入2.0ml三氯乙酸使酶失活，同时不需加热，其余操作相同。
四、实验操作-- 3、计算
• 1、以吸光度值A为纵坐标，酪氨酸量（ μg ）为横
坐标作标准曲线图，线性回归，求直线方程和R2，
• 加入三氯乙酸2.0ml终止反应，混匀，置于40℃恒温水浴中沉淀15min。 • 用加入滤纸的漏斗过滤，收集滤液。 • （2）、测定酶活： • 各取1.0ml滤液到另一试管中，加入0.4mol/L Na2CO3 5.0ml，再加入 Folin试剂1.0ml，混匀，置于40℃恒温水浴中20min，冷却后于680nm 波长处比色。 • 具体见下表：
并求斜率的倒数K。
• 2、碱性蛋白酶活力计算 • 酶活力(μg/ml) = K· A· N· 4/10
• K-标准曲线斜率的倒数 A-吸光度值 N - 酶的稀释倍数10000倍
• 4-反应总体积为4mL
10 - 反应时间为10min
• 将两个样品测定结果取平均值后代入公式，计算酶活
五、实验注意事项
二、实验原理
• （3）在一定pH和温度（40 ℃ ）下，蛋白酶液和底物酪蛋 白反应，经过一段时间后，加入三氯乙酸终止酶反应，并使 多余的酪蛋白发生沉淀而与水解产物分开。 • 过滤后，取滤液（含蛋白水解液和三氯乙酸）用碳酸钠碱化，
再加入folin试剂使之显色，蓝色强度与蛋白水解产物的量成
正比，在一定浓度范围内符合比尔定律，因此可以推断出蛋 白酶的活性。 • （4）碱性蛋白酶酶活定义为：上述实验条件下，每分钟水 解酪蛋白产生1微克酪氨酸为一个酶活单位。
碱性蛋白酶(Alkaline protease, AKP)活性测定试剂盒说明书
货号：MS2302 规格：100管/48样碱性蛋白酶（Alkaline protease, AKP）活性测定试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类，属于丝氨酸蛋白酶。
此外，该酶还能够水解酯键、酰胺键，具有转酯及转肽的功能。
该酶是主要工业用酶之一，广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。
测定原理：在碱性条件下，AKP水解酪蛋白生成酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝；钨蓝在680nm有特征吸收峰，测定680nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
自备仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、0.5mL EP管和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加 5mL 蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。
临用前加入 5mL 试剂一，沸水浴中磁力搅拌溶解。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加 20mL 蒸馏水溶解。
试剂五：液体×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体×1 支，0.25μmol/mL 标准酪氨酸溶液，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。
2. 血清或培养液：直接测定。
3. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定操作：1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到680nm，蒸馏水调零。
碱性蛋白酶活力的测定
实验四碱性蛋白酶活力的测定一、实验原理以酪蛋白为底物测定碱性蛋白酶的活力。
酪蛋白经蛋白酶作用后，会降解成相对分子质量较小的肽和氨基酸，在反应混合物中加入三氯醋酸溶液，相对分子质量较大的蛋白质和肽就沉淀下来，相对分子质量较小的肽和氨基酸仍留在溶液中。
溶解于三氯醋酸溶液中的肽的数量正比于酶的数量和反应时间。
因而采用Folin法测定上清液中肽的含量就可以计算酶的活力。
二、试剂和仪器试剂：0.1mol/L碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（pH10）、5%三氯醋酸、1%酪蛋白溶液（称取5g酪蛋白置于500mL 0.1mol/L碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（pH10）中，加热使其溶解）、0.4mol/L碳酸钠溶液、100μg/mL酪氨酸溶液、Folin试剂，稀释3倍使用仪器：水浴锅、721分光光度计（含比色皿）、秒表、常规玻璃仪器三、实验步骤1、酶液的萃取称取1g粗酶制剂置于研钵中，加少量缓冲液一起研磨，然后定容至100mL，从容量瓶中取出5mL酶液（视酶活而定）再定容至100mL，稀释后的酶液经滤纸过滤后得到澄清的酶液。
2、酶活力的测定样品管：取不同量的酶液（0.1~1.0mL：0.2mL、0.4mL、0.6mL），用0.1mol/L 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（pH10）（对应为0.8mL、0.6mL、0.4mL）补足体积到1.0mL，然后在每个样品管中再加入1mL预先在40℃保温的1%酪蛋白溶液，混匀，在40℃准确保温10min，加入2mL 5%三氯醋酸溶液，迅速摇匀，于室温静置半小时。
空白管：先在每支试管中各加入1.0mL 1%酪蛋白溶液和2.0mL 5%三氯醋酸溶液，摇匀后，再加入1.0mL的酶液，酶液浓度分别与对应的样品管相同，在40℃下准确保温10min，以下操作同样品管。
将酶反应混合物过滤后收集滤液，在1mL滤液中加5mL 0.4mol/L碳酸钠溶液和1mL Folin试剂，摇匀后在40℃恒温水浴中显色20 min，以相应的空白管中的反应液为对照，在680nm下测定样品管中反应液的吸光度。
碱性蛋白酶活力的测定
碱性蛋白酶活力的测定1、实验原理蛋白酶在一定的温度与pH值条件下，水解酪素底物，产生含有酚基的氨基酸（如酪氨酸、色氨酸等），在碱性条件下，将福林试剂（Folin）还原，生成钼蓝与钨蓝，用分光光度法测定，计算其酶活力。
2、实验试剂2.1 福林试剂的制备于2000mL磨口回流装置中加入钨酸钠（Na2WO4·2H2O）100g、钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）25g、水700mL、85%磷酸50mL、浓盐酸100mL，小火沸腾回流10h，取下回流冷却器，在通风橱中加入硫酸锂（Li2SO4）50g、水50mL和数滴浓溴水（99%），再微沸15min，以除去多余的溴（冷后仍有绿色需再加溴水，再煮沸除去过量的溴），冷却，加水定容至1 000mL。
混匀，过滤。
制得的试剂应呈金黄色，贮存于棕色瓶内。
使用溶液：1份福林试剂与2份水混合，摇匀。
2.2. 碳酸钠溶液（Na 2CO3）=0.4mol／l 称取无水碳酸钠42.4g，用水溶解并定容至1 000mL。
2.3. 三氯乙酸c（CCl 3·COOH）＝0.4mol／l 称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1 000mL。
2.4. 氢氧化钠溶液（NaOH）＝0.5mol／l2.5. 盐酸溶液（HCl）＝lmol／l及0.lmol／l2.6. 硼酸缓冲溶液（pH10.5）甲液称取硼酸钠（硼砂）19.08g，加水溶解并定容至1 000mL。
乙液称取氢氧化钠4.0g，加水溶解并定容至1 000mL。
使用溶液：取甲液500mL、乙液400mL混匀，用水稀释至1 000mL。
上述各种缓冲溶液，均需用pH计校正。
2.7. 10g／L酪素溶液称取酪素1.000g，精确至0.001g，用少量0.5mol／L氢氧化钠溶液湿润后，加入适量的各种适宜pH值的缓冲溶液约80mL，在沸水浴中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，转入100mL容量瓶中，用适宜的pH值缓冲溶液稀释至刻度。
碱性蛋白酶的分离纯化及其酶学特性的研究
碱性蛋白酶的分离纯化及其酶学特性的研究碱性蛋白酶(alkaline protease)是一类最适pH为碱性的蛋白酶,是一种非常重要的水解酶类,在医药、饲料、食品等领域中都有广泛应用。
本论文以Cellulomonas bogoriensis sp.nov为出发菌株,对其产酶条件、碱性蛋白酶的分离纯化及酶学性质等方面进行了研究,并得到以下结论:利用单因素法和响应面Box-Behnken组合设计方法对菌株产碱性蛋白酶的发酵条件进行了优化,得出菌株最佳产酶条件为:培养温度30℃,培养基初始pH 10.5,装液量75/250 mL,1.5%(w/v)蔗糖为碳源、1.5%(w/v)的牛肉膏酵母浸粉(1:1)为混合氮源、NaCl 含量为2.67%(w/v),培养时间120 h。
经硫酸铵分级沉淀和CM Sepharose Fast Flow柱层析纯化得到一个相对分子质量约为18.3 kDa的碱性蛋白酶,纯化倍数为10.83,回收率为25.79%。
酶的最适反应温度70℃,最适pH为11.0。
在4-60℃、pH3.0-12.0范围内酶活力稳定;1 mM的Mg2+、Fe2+会增加蛋白酶活力;而1 mM的Ba2+、Mn2+、Ca2+对蛋白酶活力几乎没有影响,但在10mM时会明显抑制蛋白酶的活力。
EDTA浓度为10m M时,碱性蛋白酶的酶活力仍能达到77%。
抑制剂PMSF,TPCK对酶有强烈的抑制作用,表明该酶属于丝氨酸蛋白酶家族中的胰凝乳蛋白酶。
酶对甲醇、乙醇、甘油等有机溶剂具有较强的耐受能力,Triton X-100强烈抑制酶活力。
该蛋白酶最佳作用底物为酪蛋白,可以水解血红蛋白和牛血清白蛋白,不能水解明胶和胶原蛋白,米氏常数Km为19.2μg/mL,Vmax为2000μg/min。
该蛋白酶与市售的洗涤剂均有良好的相容性,具有良好的脱毛效果、处理血污的能力和耐盐性。
测定了该酶的N端序列,为FDVIGGNAYT。
本论文纯化的碱性蛋白酶具有耐碱性、耐高温、耐盐及耐有机溶剂等优良的特性,在皮革、洗涤等工业生产中具有应用前景。
蛋白酶比活力实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白酶比活力的概念及测定方法。
2. 掌握利用比色法测定蛋白酶比活力的原理和操作步骤。
3. 通过实验，了解蛋白酶在不同条件下的活性变化，为实际应用提供参考。
二、实验原理蛋白酶比活力是指单位质量的蛋白质所具有的酶活性。
在实验中，通过测定蛋白酶在一定条件下对底物（如酪蛋白）的水解程度，可以计算出蛋白酶的比活力。
本实验采用比色法，通过测定底物水解产生的产物（如酪氨酸）的吸光度变化，间接反映蛋白酶的活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 蛋白酶样品- 酪蛋白- 0.02mol/L pH7.5磷酸盐缓冲液- 0.1mol/L Folin-酚试剂- 0.4mol/L三氯乙酸- 0.05mol/L氢氧化钠溶液- 2.5mol/L硼砂缓冲溶液（pH10.5）- 680nm比色计2. 实验仪器：- 磁力搅拌器- 移液器- 电子天平- 恒温水浴锅- 10mL具塞试管- 50mL容量瓶- 试管架四、实验步骤1. 准备实验试剂：- 配制0.1mol/L Folin-酚试剂：将钨酸钠、钼酸钠、磷酸、盐酸、硫酸锂、液溴等试剂按比例混合，微火回流加热10小时，加入碳酸钠和蒸馏水，定容至1000mL。
- 配制0.4mol/L三氯乙酸溶液：称取三氯乙酸16.34g，用水溶解并定容至500mL。
- 配制0.05mol/L氢氧化钠溶液：按GB601配制。
- 配制2.5mol/L硼砂缓冲溶液（pH10.5）：称取硼酸钠19.08g，加水溶解并定容至1000mL，称取氢氧化钠4.0g，加水溶解并定容至1000mL，取甲液500mL乙液400mL混合，用水稀释至1000mL。
2. 实验操作：- 将酪蛋白溶解于0.02mol/L pH7.5磷酸盐缓冲液中，配制成2%酪蛋白溶液。
- 将蛋白酶样品用0.02mol/L pH7.5磷酸盐缓冲液稀释至适宜浓度。
- 取10mL具塞试管，加入2%酪蛋白溶液1mL，然后加入蛋白酶溶液1mL，置于37℃恒温水浴锅中反应30分钟。
碱性蛋白酶活力分析方法研究
碱性蛋白酶活力分析方法研究张剑;赵雷敏;康林霞【摘要】通过福林法对液体碱性蛋白酶的活力进行了测定.研究比较了不同温度及pH下的酶促反应对酶活力测定方法的影响,结果显示:酶活力随反应温度的升高表现为先上升后下降,40～50℃时相对较稳定;pH降低对碱性蛋白酶活力有着负面影响.在确定出较优的适合碱性蛋白酶的活力测定方法后,进一步测试了该方法在液体洗涤剂酶活力测定中的应用,发现在洗涤剂中简单地加入酶制剂后,测定酶活力时会出现较大偏差,酶活力值不稳定.因此,在配制加酶液体洗涤剂时,应该对各种因素,例如温度、pH以及洗涤剂中各种成分与酶的相互影响等进行综合考虑.%Activity of liquid alkaline protease was measured by using Folin method. Effects of enzymatic reaction under different temperature and different pH on the enzyme activity assay were investigated and compared. Results showed that as the reaction temperature raises,the enzyme activity increases firstly and then declines j while lowering of the pH of the reaction shows negative impact of the alkaline protease activity. After the optimum conditions for alkaline protease activity assay were identified, the application of the assay method in the determination of enzyme activity of enzymed liquid detergent was further tested. It was discovered that if the enzyme was simply added and mixed with the liquid detergent, the measured enzyme activity of the detergent will appear big deviation and an unstable value. This phenomenon indicated that during the formulation of enzymed liquid detergent, many factors such as the temperature, pH,and the mutual influence of components in the detergent should be comprehensively considered.【期刊名称】《日用化学工业》【年(卷),期】2012(042)003【总页数】4页(P192-195)【关键词】蛋白酶;活力分析;福林法;液体洗涤剂【作者】张剑;赵雷敏;康林霞【作者单位】山西大学化学化工学院,山西太原 030006;山西大学化学化工学院,山西太原 030006;山西大学化学化工学院,山西太原 030006【正文语种】中文【中图分类】TQ925+.2酶由生物体中的活细胞经过各种生理活动产生，是一种具有催化作用的物质。
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1 实验部分
1. 1 仪器与试剂
UV － 2602 型 紫 外 可 见 分 光 光 度 计，尤 尼 柯 （ 上 海） 仪器有限公司； Z － 561 型电热恒温水浴锅，上海胜 启仪器仪表有限公司； AL204 分析天平，梅特勒 － 托利 多仪器（ 上海） 有限公司。碱性蛋白酶，市售； 福林酚 试剂，上海荔达生物科技有限公司； 洗衣液 1 和洗衣液 2，均为市售； 无水碳酸钠（ AR） 、三氯乙酸（ AR） 、四硼 酸钠（ AR） 、氢氧化钠（ AR） 、磷酸二氢钠（ AR） 、磷酸氢 二钠 （ AR ） 、盐 酸 （ AR ） 、干 酪 素 （ BR ） 、L － 酪 氨 酸 （ BR） ，均为市售。
pH
Va / mL
Vb / mL
6. 0
12. 3
87. 7
6. 5
31. 5
68. 5
7. 0
61. 0
39. 0
7. 5
84. 0
16. 0
8. 0
5. 3
94. 7
pH = 10. 5 的缓冲溶液： c 液为称取硼酸钠（ 硼砂） 1. 908 g，加水溶解并定容至 100 mL； d 液为称取氢氧 化钠 0. 4 g，加水溶解并定容至 100 mL。使用液： 取 c 液 50 mL，d 液 40 mL，混匀，用水稀释至 100 mL。
Abstract： Activity of liquid alkaline protease was measured by using Folin method． Effects of enzymatic reaction under different temperature and different pH on the enzyme activity assay were investigated and compared． Results showed that as the reaction temperature raises，the enzyme activity increases firstly and then declines； while lowering of the pH of the reaction shows negative impact of the alkaline protease activity． After the optimum conditions for alkaline protease activity assay were identified，the application of the assay method in the determination of enzyme activity of enzymed liquid detergent was further tested． It was discovered that if the enzyme was simply added and mixed with the liquid detergent，the measured enzyme activity of the detergent will appear big deviation and an unstable value． This phenomenon indicated that during the formulation of enzymed liquid detergent，many factors such as the temperature，pH，and the mutual influence of components in the detergent should be comprehensively considered． Key words： protease； protease activity assay； Folin method； liquid detergent
开发与应用
耗的底物或生成的产物的化学计量来实现。因此，迄 今为止国际上碱性蛋白酶活力的测定，尚无一个统一 的评价方法和单位，这也间接地影响到了碱性蛋白酶 在工业界的进一步推广和使用。
作者通过福林法测定酶活力，具体步骤是在测定 酶活力之前，先用福林酚试剂与已知的不同浓度的酪 氨酸反应，以 吸 光 度 为 横 坐 标，以 酪 氨 酸 浓 度 为 纵 坐 标，得到标准曲线，然后将酶和底物反应的产物与福林 酚试剂作用，测其吸光度，再在标准曲线上推算出相当 于多大浓度的酪氨酸，计算出酶活力单位。在测定酶 活力实验完成后，探究反应条件对酶活力的影响： 将酶 促反应的温度分别设置到等间距温度，采用相同方法 测定酶活力的相对大小，从而测出蛋白酶最适反应温 度； 接着将酶促反应的 pH 分别设置在等间隔数值，亦 采用相同方法测定不同 pH 下酶活力的大小，即可求 得蛋白酶最适 pH［5］。并进一步探索了该方法在液体 洗涤剂酶活力测试中的具体应用。以期今后在对碱性 蛋白酶进行活力测定时能快速择出最佳测试手段，从 而可提升以后测定过程的准确性并为碱性蛋白酶在工 业中的使用提供有效依据。
收稿日期： 2012 － 03 － 09； 修回日期： 2012 － 05 － 19 作者简介： 张 剑（ 1967 － ） ，女，教授，博士，电话： 13834110276，E － mail： zhangjian0923@ vip． sina． com。
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第3 期
张 剑，等： 碱性蛋白酶活力分析方法研究
蛋白溶液： 称取 0. 5 g 酪蛋白，在研钵中碾碎，磁 力加热搅拌直到完全溶解，定容至 100 mL。储存于 4 ℃ 冰箱内（ 有效期通常为 3 d，最好是现配现用） 。
碳酸钠溶液： 称取无水碳酸钠 4. 24 g，用水溶解并 定容至 100 mL，即为 0. 4 mol·L － 1 的碳酸钠溶液。
表 2 酪氨酸质量浓度梯度系列标准液 Tab. 2 Series of standard solution of tyrosine mass concentration
gradient
编号 1 2 3 4 5 6
V（ 酪氨酸） / mL 0 0. 5 1. 0 1. 5 2. 0 2. 5
V（ 水） / mL 5 4. 5 4. 0 3. 5 3. 0 2. 5
1. 2 溶液的配制
Na2 HPO4 － NaH2 PO4 缓冲溶液： 按表 1 所示配方 配 制，a 为 0. 2 mol·L － 1 的 Na2 HPO4 溶 液，b 为 0. 2 mol·L － 1 的 NaH2 PO4 溶液。
表 1 缓冲溶液配方
Tab. 1 Buffer solution formulation
蛋白酶制剂作为一种生物催化剂，测定其酶活力
值是研究酶的特性及其应用的先决条件。早期文献 中，酶的活 性 以 任 意 各 种 形 式 来 表 示，如 吸 光 度 的 变 化、还原基团的增加，以 mg 或 μg 表示的被转化底物 的质量。这些参数和各种时间单位（ 如 1 min，30 min） 相关联。1961 年世界生物化学协会酶学委员会用国 际单位 U 来定义酶的活性，定义为在一定的标准条件 下，1 U 即每分钟催化 1 mol 底物的酶量［4］。有关酶基 本的国际单位（ SI） ，世界临床化学家协会数量和单位 委员会定义了一个基本单位，katal，定义为在测定体系 中，每秒钟催化 1 mol 底物的催化转化反应速率所需 要的酶的数量，但这个单位并不常用。由于许多实际 的原因，对于许多酶反应的监控并不能够完全通过消
酶由生物体中的活细胞经过各种生理活动产生， 是一种具有催化作用的物质。蛋白酶类制剂是最早也 是得到最广泛使用的洗涤剂酶品种［1］，主要应用于衣 物洗涤剂和洗碗机专用洗涤剂中。蛋白酶能够促进去 除衣领和袜子附着的皮肤角质层污渍、血渍、人体分泌 物和含蛋白质的食物渍，而且衣物上蛋白质黏附的其 他污垢，在蛋白污垢被分解的同时也随之脱落［2］。现 在洗涤剂中使用的蛋白酶，主要为碱性蛋白酶。碱性 蛋白酶是指在 pH 为碱性的条件下水解蛋白质肽键的 酶类，其最适 pH 一般在 9 ～ 11 这一区间，属内肽酶中 的丝氨酸蛋白水解酶类［3］。
DOI:10.13218/ki.csdc.2012.03.017
第 42 卷第 3 期 2012 年 6 月
日用化学工业
China Surfactant Detergent ＆ Cosmetics
Vol． 42 No． 3 June 2012
碱性蛋白酶活力分析方法研究
张 剑，赵雷敏，康林霞
（ 山西大学 化学化工学院，山西 太原 030006）
的应用，发现在洗涤剂中简单地加入酶制剂后，测定酶活力时会出现较大偏差，酶活力值不稳定。因此，在配制加酶液体
洗涤剂时，应该对各种因素，例如温度、pH 以及洗涤剂中各种成分与酶的相互影响等进行综合考虑。
关键词： 蛋白酶； 活力分析； 福林法； 液体洗涤剂
中图分类号： TQ925 + . 2
文献标识码： A
摘要： 通过福林法对液体碱性蛋白酶的活力进行了测定。研究比较了不同温度及 pH 下的酶促反应对酶活力测定方法
的影响，结果显示： 酶活力随反应温度的升高表现为先上升后下降，40 ～ 50 ℃ 时相对较稳定； pH 降低对碱性蛋白酶活力
有着负面影响。在确定出较优的适合碱性蛋白酶的活力测定方法后，进一步测试了该方法在液体洗涤剂酶活力测定中
向另外 3 支试管内分别加入 0. 4 mol·L － 1 的三氯 乙酸溶液 2 mL，充分摇匀，使反应停止，过滤，除去沉