动物细胞融合与单克隆抗体.ppt

B．将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内
C．将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤
不能
6、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？
2、动物细胞融合的概念
动物细胞融合也称细胞杂交， 是指两个或多个动物细胞形成一 个细胞的过程。
思考题
7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？ 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞
8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？ 生产单克隆抗体
细胞融合与融合诱导细胞融合物质：
风杆菌的实验方案
A
1、该实验方案的目的是_制__备__单__克__隆_ 抗体
骨髓瘤细胞 B
杂交瘤细胞
2、A是从小鼠的脾脏中取得
C
__B_细__胞__,该细胞能够产生_抗__体___
3、图中B为_细__胞__融__合_过程，常用 足够数量的细胞群 _灭__活__病__毒__作为诱导剂，该细胞继
承__双__亲__细__胞___的遗传特性，既能 _分__泌__抗__体___,又能__无__限__增__殖___。
杂种细胞
浆细？胞
抗？原
二、单克隆抗体
2.制备过程：
诱导其融合的 方法有哪些？
细胞融合后培养液中有几种细胞？ B BB B瘤 瘤瘤 瘤 筛选（特定的 选择性培养基）
杂种细胞
整个制备过程要经过几次筛选?
（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），
第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤 细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性 抗体的细胞群。
3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？ 离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法
思考题
4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法？ 能 还可以利用灭活的病毒进行诱导
5、植物体细胞杂交过程应先进行原生质体融合再进行 组织培养形成完整的个体，动物细胞融合后能形成杂种 动物个体吗？
比较项目
植物体细胞杂交 动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 细胞膜的流动性
去除细胞壁后诱 使细胞分散后诱 细胞融合的方法 导原生质体融合 导细胞融合
诱导方法
物理（离心、振动、物理、化学方法
电刺激）
（同左）
化学（聚乙二醇） 灭活的病毒
用途
获得杂种植株
主要用于制备 单克隆抗体
下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤
再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易
成功“复生”野驴的方法是
C
A．将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分 化、再分化，培育成新个体 B．将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新 个体 C．取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中， 经孕育培养成新个体 D．将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体
细胞A
细胞B
物理法 化学法
仙台病毒 灭活的病毒 疱疹病毒
杂交细胞
新城鸡瘟病毒
1、动物细胞融合过程
不同DNA的两个细 胞 灭活病毒诱导细胞融合
融合后的细胞 进行有丝分裂
思考题
1、植物体细胞杂交前做何处理？怎么处理？
去壁
酶解法，如纤维素酶或果胶酶
2、动物细胞wenku.baidu.com合时需要进行去壁处理吗？为什么？
无需，因为动物细胞无细胞壁
由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所 以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单 克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义， 只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。）
3.单克隆抗体的应用：
①作为诊断试剂 特异性高、灵敏度高等优越性。
②用于治疗疾病和运载药物 生物导弹
植物、动物细胞融合的比较
体外培养
注射到
4、C过程指细胞培养，该过程包括
小鼠腹腔
_原__代__培养和_传__代__培养两个阶段。
下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别的是 A.培养基成分不同
B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 A
C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株
诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇 诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活。
思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的 病毒需要灭活？不灭活行吗？
因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。
细胞融合技术应用于哪些方面？ 细胞学、遗传学、免疫学及制备单克隆抗体。
胞
促进融合 壁
的方法？
杂
种
再植
分 化
株
成果和未解决的问题
成果：克服不同生物远缘杂交的障碍，出 现自然界没有的新品种。
未解决的问题：未能让杂种植物按照人们 的需要表现出亲代的优良。
如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶 牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶啦！
动物细胞也能融合吗？
一、动物细胞融合
下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是 C
A．培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素 和动物血清 B．原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞 C．动物细胞培养一般能够传到40～50代，但其遗传物质 发生了改变 D．动物细胞培养可用于检测有毒物质和获得大量自身 健康细胞
生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不
通过长期的实验，科 学家们采用体细胞杂交 技术获得了“番茄—马 铃薯”植株。
“番茄—马铃薯”理想图
植物体细胞杂交技术过程
植物细胞的融合
植物组织培养
植物细胞A 方法？
融合 完成
去壁
的 标志
原生质体A 原生质体B
去壁
融合的 杂种
愈
原生质
人 工
体AB
诱
导
再 生 出 细
细胞
AB
脱 分
化
伤 组 织
植物细胞B
一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这 个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发 育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途， 但是不能
D A．有选择地繁殖某一性别的家畜 B．繁殖家畜中的优秀个体 C．用于保存物种 D．改变动物的基因型
下列哪—项属于克隆
D
A．将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中
二、单克隆抗体
提 问
1.抗体是由何种细胞产生的？
2. 如何得到抗体？
？
二、单克隆抗体
1、抗原
刺激
浆细胞 动物体内
抗体
2、特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏
抗原 刺激
浆细胞
动物体内
抗体
抗原不纯
抗体不纯
筛选单一浆细胞
不能增殖产生大量抗体
二、单克隆抗体
如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖