骨髓细胞染色体制片的意义
骨髓染色体制片原理
骨髓染色体制片原理一、前言骨髓染色体制片是一种重要的诊断手段，它可以通过染色体的形态和数量来判断患者是否存在染色体异常。
本文将详细介绍骨髓染色体制片的原理。
二、概述骨髓染色体制片是指用特定方法将人类骨髓中的细胞进行固定、染色和显微镜观察，以便于分析其核型及其异常情况。
该技术主要应用于血液系统疾病的诊断，如白血病、淋巴瘤等。
三、样本采集1.样本来源：骨髓液或外周血。
2.采集方法：骨髓液采集需经过无菌操作，通常在臀部或胸骨处穿刺取得。
外周血则可通过静脉采血得到。
四、样本处理1.固定：用乙醇-冰乙酸（3:1）混合液进行固定。
2.制片：将固定后的细胞在玻片上均匀涂布，晾干后进行染色。
五、染色方法1.Giemsa染色：常用于骨髓染色体制片中，可使染色体呈现出特定的条纹和带状结构，有助于分析其核型。
2.其他染色方法：还有一些其他的染色方法，如Wright-Giemsa染色、Leishman染色等，但在骨髓染色体制片中较少使用。
六、显微镜观察1.显微镜：通常使用100倍至400倍的光学显微镜进行观察。
2.分析：观察样本中的细胞核型及其异常情况，如是否存在多余或缺失的染色体、是否存在易位等。
同时还需对细胞形态进行分析。
七、结果解读1.正常核型：指细胞核型正常且没有任何异常情况。
2.异常核型：指细胞核型存在多余或缺失的染色体、易位等异常情况。
3.诊断意义：根据结果判断患者是否存在血液系统疾病，并进一步确定具体疾病类型和治疗方案。
八、注意事项1.操作要求严格无菌操作；2.样本处理要及时；3.显微镜观察要仔细，避免漏检；4.结果解读应结合患者的临床症状和其他检查结果进行综合分析。
九、总结骨髓染色体制片是一种重要的诊断手段，它可以通过染色体的形态和数量来判断患者是否存在染色体异常。
该技术主要应用于血液系统疾病的诊断，如白血病、淋巴瘤等。
在操作过程中需注意无菌操作、样本处理及显微镜观察等方面，以确保结果准确可靠。
基于骨髓细胞染色体核型分析在恶性血液病中的应用研究
基于骨髓细胞染色体核型分析在恶性血液病中的应用研究目的：研究分析骨髓细胞染色体核型分析应用于恶性血液疾病的临床诊断、治疗以及预后情况。
方法：选取2013年10月-2014年10月在笔者所在医院接受诊治的62例恶性血液病患者，均应用骨髓细胞直接法、24 h短期培养法进行染色体标本的制备，通过R显带技术进行骨髓染色体核型分析。
结果：本组62例恶性血液病患者中，染色体异常者30例，阳性率约为48.39%。
结论：染色体畸形病变与恶性血液病之间具有紧密相关性，骨髓细胞染色体核型分析应用于恶性血液病的临床诊断、治疗以及预后具有非常重要的意义。
标签：骨髓细胞；染色体核型；恶性血液病以往研究已经发现，慢性粒细胞白血病具有特异性染色体畸形病变，即为Ph染色体[1]。
染色体分析已经被广泛应用于血液病、恶性肿瘤疾病的临床中，细胞遗传学对临床诊断、治疗血液系统疾病具有十分重要的意义，能够有效补充骨髓图片形态学及传统血液检查的不足，分子生物学、免疫学的进步发展进一步完善了血液病的研究技术，并且提高了检测的准确率及灵敏度。
现选取2013年10月-2014年10月在笔者所在医院接受诊治的62例恶性血液病患者，针对其骨髓细胞染色体核型分析的具体情况进行深入探析，现报告如下。
1 资料与方法1.1 一般资料选取2013年10月-2014年10月在笔者所在医院接受诊治的62例恶性血液病患者，其中男40例，女22例，年龄8～71岁，平均（44.21±6.48）岁。
全部患者均符合《血液病诊断、疗效标准》并确诊。
1.2 方法染色体标本来自患者骨髓，通过RPMI-1640培养基，根据（1～2）×103/μl，与有核细胞相接种。
24 h短期培养法或应用直接法（对于临床疑似慢性淋巴细胞白血病的患者，抽取骨髓或外周血液，1.0～2.0 ml，加入美洲商陆，在RPMI-1640培养基内进行培养，时间为72 h），加入秋水酰胺，注意收集有丝分裂中期细胞，然后常规低渗、固定再进行制片。
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备一、实验目的1. 学会小鼠骨髓细胞的采集和处理方法。
2. 掌握细胞较好的贴壁与生长条件，以保证细胞的好。
3. 学会最常用的Gimsa染色方法，使出现的幻觉具有明朗的色调，以便细胞的编号与统计。
二、实验原理骨髓细胞是一种多能性细胞，可分化为血液成分或骨骼系统的成分。
骨髓细胞被用于检测细胞遗传学异常，在染色体物质遗传及细胞迁移等方面具有潜在用处，并可为结构遗传学提供信息。
作为染色体标本制备的来源，一般选用小鼠骨髓细胞是最为经常采用的试验模型之一，常常作为各类染色体研究、映射和诊断的标本；其区别如来源易得、繁殖成本低、染色体数量较少，易于研究、成熟度高等因素显得优越。
三、实验步骤1. 实验前准备工作（1）保存干燥灭菌的小鼠骨髓细胞培养基，避免接触灰尘。
（2）检查各种器械的完整性，保证手段的杀菌处理。
（3）使用有缩小五倍功能的显微镜，以确保细胞图片清晰度与细胞形态的准确。
（4）打开红外线灯，以增强视觉效果并避免光损伤。
（5）按实验方案准备各种试剂和设备。
（6）实验室内准备50 mL恒温水浴和常规离心机。
2. 骨髓细胞的采集（1）设备：小鼠解剖刀片、50mL离心试管、海绵、抽管等。
（2）用70%酒精清洗瓶子的注射器，使用注射器收集小鼠间隔内的骨髓，放入存储试管中。
（3）轻轻摇动骨髓，使其中的细胞与上清液充分混合均匀。
3. 细胞的处理（1）细胞浓度的调整：从建立骨髓细胞培养物开始，骨髓细胞培养物可以在50mL培养基中存在。
使用试管取出足量细胞，可用比值0.2 mL的浓度悬液被移入12孔文化板中，吸入的细胞细胞数为2×106个左右。
（2）添加培养基到细胞培养物中，以充分覆盖细胞。
（3）将板加入约为35℃，5%二氧化碳环境下的恒温培养箱中，进行配队。
（4）半小时后使用显微镜检查细胞的附着，然后循环补充适量接种。
在24小时之前，每隔2小时更换于第一个。
4. Gimsa染色法（1）准备细胞标本：从培养基中取出涂片架，然后“组织培养板”模式的检测做法，将液体在上面包括涂片架移至吸满液体。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
实验一 小白鼠骨髓细胞染色体制片
一、原理
• 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分 裂的组织和细胞悬液中得到。最常用的途径是 从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中 制备染色体。在骨髓细胞中，有丝分裂的指数 是相当高的，因此可以直接得到中期细胞而不 必象血淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培 养，主要的中期相来自于细胞系统，也来自于 各种骨髓细胞。以骨髓为材料进行染色体研究 的优点是不需要培养，细胞数目越多，分裂数 目高，并能真实反映体内真实情况。
四、实验步骤与方法
四、实验步骤与方法
5.固定：沿管壁加５毫升新鲜卡尔诺固定液，马 上散细胞团，使其在固定液中悬浊均匀。 1000rmp离心５分，去上清液，即第一次固定。 同样方法固定三次，留沉淀。 6.滴片： • (1)在离心管底细胞团中再加少量（0.5ml）新 鲜固定液，搅匀制成细胞悬浊液。 • (2)将预先泡在75%酒精的广口瓶里的载玻片取 出，火焰烤干后，置于4℃冰箱中冷藏备用。 取出时轻甩玻片上的水，立即滴悬浊液2~3滴， 空气干燥。
四、实验步骤与方法
7.姬姆萨染色 • (1)配制染液：用缓冲液PBS（1升蒸馏水 加磷酸二氢钾9.08克、磷酸氢二钠 9.50 克 PH=6.8）配成2%姬姆萨染色液。 • (2)待玻片干燥后，迅速移到盛有染液的 染色缸中放置10分，然后水洗。
四、实验步骤与方法
8.镜检：先用低倍镜（×200-×400）找出比较 清晰而分裂相较好的染色体，然后用高倍油 浸镜下详细观察染色体的数目、形态等。拍 照，洗相。 9.核型分析：按同源染色体的相对长度、着丝 点位置等特征依次排常染色体，最后排是直接从骨髓中取出细胞，经压 片法或空气干燥法制片。为了提高有丝分裂的 指数，在动物实验时，可在取材前经腹胚注射 有丝分裂的抑制剂，一般常用秋水仙素。
骨髓细胞病理学检查及诊断
骨髓细胞病理学检查及诊断全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：骨髓细胞病理学检查及诊断是一种重要的临床检查方法，用于帮助医生诊断和治疗各种血液疾病。
骨髓细胞病理学检查主要是通过对骨髓细胞的形态、数量、组织形态学等方面进行分析和判断，从而明确病变的性质和病情的严重程度。
接下来，我们将详细介绍骨髓细胞病理学检查及诊断的方法和意义。
一、骨髓细胞病理学检查的方法1. 骨髓穿刺：骨髓穿刺是获取骨髓细胞最直接、最常用的方法。
医生在骨骼中穿刺抽取骨髓液和组织，然后通过显微镜观察细胞形态学变化。
2. 骨髓涂片染色：骨髓涂片染色是将骨髓细胞涂在载玻片上，然后用不同染色剂染色，如Wright染色、Giemsa染色等。
通过观察染色后的细胞形态，可以分析出异常细胞的数量和性质。
3. 流式细胞术（FCM）：流式细胞术是一种通过激光散射和荧光标记技术，对细胞表面抗原进行定量和定性分析的方法。
通过流式细胞仪，可以准确地检测骨髓细胞中的各种蛋白质及其表达水平。
4. 分子生物学检测：利用PCR技术、融合基因检测等技术，对骨髓细胞的基因突变、融合基因进行检测，帮助医生对骨髓疾病进行诊断和治疗。
1. 辅助疾病诊断：通过骨髓细胞病理学检查，可以辅助医生对各种血液疾病进行诊断，如白血病、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血等。
2. 判断疾病严重程度：通过对骨髓细胞病理学检查结果的分析，可以判断疾病的进展程度和严重程度，为医生制定治疗方案提供重要依据。
3. 指导治疗策略：根据骨髓细胞病理学检查结果，医生可以选择合适的治疗方法，如化疗、干细胞移植等，提高治疗效果。
4. 监测疾病疗效：在治疗过程中，通过不断监测骨髓细胞的病理学变化，可以及时评估治疗效果，调整治疗方案，提高治疗成功率。
5. 预测疾病预后：一些骨髓疾病具有较高的复发率和预后不良的特点，通过骨髓细胞病理学检查，可以帮助医生预测患者的预后，并采取相应的治疗措施。
1. 白血病：白血病是一种由于造血干细胞发生异常增生，导致血液恶性肿瘤的疾病。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
通过制备动物骨髓细胞染色体标本，进一步了解细胞染色体的形态和结构，以及染色体在遗传学研究中的应用。
实验原理
动物骨髓细胞是一种快速分裂细胞，其中染色体数目和结构较为清晰，因此通常用于染色体分析和遗传学研究。
为了制备动物骨髓细胞染色体标本，需要经过细胞取样、细胞处理与固定、染色和镜检等几个步骤。
实验步骤
1. 取样：在实验动物体内取出一小段骨髓组织，置于离心管中，加入10ml生理盐水，轻轻摇晃，使细胞均匀分散。
2. 细胞处理和固定：取出适量的细胞液，加入等体积的去离子水后进行处理。
将细胞液滴于预先贴有载玻片上的正常细胞培养液中，使其渐渐均匀分散。
将玻片放置在室温下，使细胞贴附在玻片上并进行细胞固定。
细胞固定可用10%甲醛或70%乙醇，也可用50%醋酸处理。
3. 染色：将固定的细胞标本先置于1%琼脂糖中5～10分钟，用注射器吸取琼
脂糖，并把细胞标本冲洗干净，然后用生理盐水洗净。
若要染色，则滴上适量的霉素酚-吡啶溶液或可以染细胞核者，如吉姆萨红溶液或乙酰苯胺-三甲胺水溶液等，等颜色形成后即可洗净。
4. 镜检：放入顶匣，用显微镜观察染色后细胞形态和染色体。
如果需要拍照，则可利用显微摄影技术，对样本进行记录。
实验结果
通过实验可以观察到动物骨髓细胞染色体的形态、数量和结构，进一步了解染色体在遗传学研究中的应用。
同时，该实验对熟悉细胞培养和染色技术也有一定帮助。
实验结论
通过本次实验，我们可以获得动物骨髓细胞染色体标本，并学习了细胞处理、固定、染色和镜检等关键步骤。
实验结果可以为生物学研究提供相关实验基础。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告实验目的：本次实验的目的是通过制备动物骨髓细胞染色体标本，加深对细胞遗传学和染色体结构的理解，同时掌握常规细胞检测技术。
实验原理：细胞核持有着生物体的遗传信息，而染色质可以分为染色体和非染色体两种，其中染色体是由DNA及其辅助蛋白组成的。
通过细胞分裂过程中，染色体会缩短、厚度增加、染色带可清晰分辨等特点来进行分类和编号。
利用这些特点可以制备出动物骨髓细胞染色体标本。
实验步骤：1. 首先准备动物骨髓细胞样品，可通过小鼠骨髓涂片或静脉血（受试者需要同意），将样品转移到已经预处理好的无菌平板上。
2. 在离心管中加入10ug/ml的柱前荧光素-ethidium bromide(PI)，再将细胞样品加入离心管中，轻轻摇晃片刻，稍微放置几分钟。
3. 用宽口的滴管取少许制片液，滴在已经处理好的载玻片上，尽量保证滴管斜着滴落制片液，避免气泡出现，将载玻片浸泡于制片液中。
4. 轻轻捞取离心管中的细胞样品，均匀地滴在制片液的中心处，然后放置在湿度大于80%，温度为37°C的恒温箱内1-2h。
5. 制片完成后，对载玻片进行显微镜检查，选择细胞密度适当、染色较清晰的染色体标本进行下一步操作。
6. 将载玻片放置在冷却的媒体溶液（0.075mol/L KCl及0.9%NaCl）中，冷冻10-20min。
7. 取出载玻片，使用正差相干显微镜观察着染色体的分布和形态，并进行拍照记录。
8. 得到的染色体标本可用于常规染色体学诊断。
实验结果：通过本次实验制备得到的动物骨髓细胞染色体标本，可以进行常规染色体学分析，观察细胞核中的染色体数目、形态和结构等特征，并可以用于细胞遗传学研究和临床诊断。
实验结论：本次实验通过制备动物骨髓细胞染色体标本，加深了对细胞遗传学和染色体结构的理解，同时掌握了常规细胞检测技术。
通过观察和分析染色体标本的形态和结构，可以进行细胞遗传学的研究与临床诊断。
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6 染色
❖ 染色液：石碳酸品红（卡宝品红），染色质特异 染料
❖ 步骤： 1 滴加染色液覆盖全部细胞 2 染色5min
中期分裂相特点 *
❖ 染色体浓缩成棒状，着丝点在染色体末端 ❖ 可见三种形状的中期染色体
镜检结果
凝集素（PHA）处理。
骨髓细胞染色体制片的意义
❖ 动物骨髓中的造血干细胞是各种血细胞的来源， 具有很强的分裂能力。且便于获取，是动物染色 体核型分析的理想材料。
❖ 与血淋巴细胞相比，造血干细胞具有分裂旺盛的 优势，无需PHA处理即可用于核型分析。
实验目的
❖ 掌握动物骨髓细胞染色体制片技术 ❖ 观察小鼠中期染色体的形态特征并对染色体计数
JLU
小鼠骨髓染色体的制片与观察
王飞 fei@
核型分析*
❖ 核型（karyotype）是指染色体组在有丝分裂中期 的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和。
❖ 核型具有明显的种属特异性。
❖ 血淋巴细胞是动物和人的核型分析最常用的素材。 ❖ 三个关键技术：低渗处理，秋水仙素处理，植物
2 收集骨髓细胞 *
❖ 收集股骨和胫骨内 的骨髓细胞
Hale Waihona Puke 2 收集骨髓细胞 *❖用生理盐水（0.85% NaCl溶液）收集骨髓细胞 ❖ 目的：维持等渗环境，保持细胞自然形态。
3 低渗处理 *
❖ 目的：营造低渗环境，使细胞内张力增大，细胞 更容易破裂，染色体更分散。
❖低渗液配方：0.075M KCl溶液（0.56%）
实验材料及流程 *
❖小鼠 2n=40
❖ 秋水仙素处理-收集骨髓细胞-低渗处理-固定-滴片 -染色-水洗-镜检
1 秋水仙素处理 *
❖ 原理：秋水仙素能够抑制纺锤丝形成，使中期 姐妹染色单体无法分离，大量的有丝分裂细胞 被阻断在中期。增加了中期分裂相细胞的比例。
❖方法：腹腔注射0.01%秋水仙素溶液 0.5ml 等 待2-4h，秋水仙素通过肠系膜吸收进入血液循 环。
盐浓度与渗透压 *
4 固定
❖ 目的：终止细胞生长过程及一切生理生化反应， 维持细胞结构不变。
❖固定液配方： 甲醇：乙酸=3:1
5 滴片 *
❖ 目的：使细胞膜破裂，细 胞核或核内染色体分散在 载玻片上。
❖ 原理：滴片时产生的剪切 力破坏细胞膜。预冷的玻 片使得液体的表面张力增 加，液层更薄，有利于细 胞的破裂和染色体的分散。