植物染色体制片与观察实验报告审批稿
植物细胞染色体标本的制作与观察-教案
植物细胞染色体标本的制作与观察-教案第一篇：植物细胞染色体标本的制作与观察-教案植物细胞染色体标本的制作与观察1.实验背景与原理染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中都有十分重要的作用。
因此，染色体标本的制备技术是遗传学、细胞生物学、染色体工程、分类学等众多学科的基本实验技术。
物种细胞内染色体数目、形态、长度等信息的总和根据实验的观察和测量绘制成的模式图称为核型（karyotype）。
核型分析在物种亲缘鉴定，染色体变异分析，杂种分析，细胞分裂过程分析，孤雌生殖等研究中均有重要的作用。
染色体标本的常规制片方法有切片法、涂片法、压片法、滴片法（空气干燥法）等。
压片法操作简单，是常用的植物染色体标本制备的方法。
不过，该法在制备中要注意避免压片所造成的染色体的扭曲、变形和丢失的现象。
染色体制备的重要环节如下：（1）取材：应取分生旺盛的组织或细胞。
在植物中通常取根尖，在分裂高峰时取材，可得到大量分裂相细胞。
而在动物细胞中通常选取骨髓等分裂活跃的细胞，或是植物血球凝集素等刺激下的淋巴细胞，也可选取分裂旺盛的体外培养的癌细胞或转化细胞等。
（2）预处理：使用秋水仙胺等药品破坏纺锤体形成，不但可得到大量分裂相细胞，而且可使染色体缩短变粗，有利于观察。
（3）固定：渗透力强的固定液将细胞迅速杀死，蛋白质沉淀，并可尽量保持细胞原有状态。
（4）解离或低渗：植物细胞要除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，从而使细胞得以膨胀，为染色体的分散提供了空间。
常用解离方法有酸解法和酶解法。
动物细胞无细胞壁，通常不需解离，而是用低渗液使细胞膨胀。
（5）染色体分散：通过压片、滴片等机械力量使染色体分散, 有利于观察。
2.实验目的（1）掌握常规压片技术制作植物染色体标本的一般方法。
（2）了解显微镜下常规显色的植物细胞染色体的形态特点,熟练掌握显微镜的使用。
（3）理解染色体与生命遗传的意义及染色体核型检查的应用。
3.实验材料与试剂（1）材料：市售大蒜、洋葱。
实验二植物染色体制片及有丝分裂观察
• 观察植物细胞有丝分裂过程及 各个时期的染色体行为
实验原理
植物的生长旺盛的分生组织（如根尖、茎尖、 幼叶等）都在进行着有丝分裂。取这些组织为材料， 经过固定后迅速杀死细胞，并使细胞内的物质和生 活状态得以保持，再经过解离、染色、压片等过程， 在显微镜下就可以看到大量处于有丝分裂各个时期 的细胞，并进行染色体行为的观察。 有丝分裂中期的染色体具有典型的形态特征， 并容易计数。为了获得更多的中期染色体装片，可 以采用常用的药物处理方法，阻止纺锤体的形成， 使细胞分裂停止在中期，便于进行观察。
取材时间？
• 2 预处理：将剪取的新鲜材料于0.02%秋水仙素溶 液中室温下处理3-4h。
预处理的目的？ 还有其他方法吗？
实验步骤：
3 固定：将经过预处理和未经预处理的材料冲 洗后转移至卡诺氏固定液中，室温下处理24h。水 洗放入70%乙醇中保存。
固定的作用？固定剂的组 成？对固定剂配制的要求？
4 解离：将冲洗后的根尖放入0.1mol/L的HCl 中， 60℃下处理8-10min（可视具体情况而定）。
解离的目的？如何判断解 离的效果？其他的解离方 法？
5 软化：将解离好的根尖冲洗后，放入45%醋酸 中软化10min左右。
请问解离与软化 的目的是什么？
6 染色：切取1-2mm的分生区，用改良苯酚品 红染液染色10-20min。
为保证染色的 充分要注意哪 些问题？
7 压片：盖上盖玻片，在酒精灯上烤片。然后 固定盖玻片，用铅笔垂直、用力敲击盖片几下，将 材料压成一层细胞。
实验材料
• 洋葱、大蒜的鳞茎，玉米、蚕豆的种子等。本实 验选用大蒜。
实验用品
• 用具：显微镜、剪刀、镊子、解剖针、载玻片、 盖玻片、水浴锅、酒精灯、铅笔、吸水纸等。 • 药品：蒸馏水、卡诺氏固定液、45%醋酸、秋水 仙素、改良苯酚品红染清水的培养皿（烧 杯）中，让根部接触水，在20-25℃光照下培养， 待根尖长到1-2cm时，剪下备用。剪取根尖的时间 以上午9时左右为好。 为什么要限制
实验一植物根尖染色体标本的制备与观察
酶解法：常用于染色体显带技术或姊妹染色单体交换研究。 通过解离和压片，分生细胞的原生质体能够从细胞壁里压出，使 染色体周围不带有细胞质或仅有少量细胞质，让后续制片处理直 接作用于染色体。
五、注意事项
• 1、取材要取分生区，尽量要小，避免细胞紧贴在 一起，致使细胞和染色体没有伸展的余地；
• 2、秋水仙素有剧毒，使用要小心； • 2、解离后水洗要彻底，否则不易着色； • 3、压片前先敲击，用力要均匀，可使细胞分散； • 4、酸解的温度和时间要控制好。温度过低或时间
过短，酸解不够，染色会过浅；温度过高或时间过 长，造成酸解过度，流离的核酸分子扩散到细胞质 中，造成染色不均一。
进行正常种植，利于后续研究进行。
洋葱根的结构
1.根冠 2.分生区 3.伸长区 4.根毛区 5.表皮 6.中柱 7.皮层
2、细胞分裂的类型
• 无丝分裂：又称直接分裂，由Remark（1841）发现 于鸡胚血细胞，不涉及纺锤体形成及染色体变化 。
• 有丝分裂：又称为间接分裂，由Fleming (1882)和 Strasburger(1880)发现。
细胞周期
Cell cycle
分裂间期
interphase
DNA合成前期（ Gap1,G1 ） DNA合成期（DNA synthesis, S）
DNA合成后期（Gap2,G2）
前期 (prophase)
核分裂
Nuclear division
前中期 (prometaphase) 中期 (metaphase) 后期 (anaphase)
实验报告染色体的观察
实验报告染色体的观察实验报告：染色体的观察引言：染色体是生物体内的遗传物质DNA（脱氧核糖核酸）在细胞分裂时可见的结构。
通过观察染色体的形态和数量，我们可以了解到生物的遗传特征和进化过程。
本实验旨在通过显微镜观察染色体的结构和变化，从而加深对遗传学的理解。
实验材料和方法：1. 显微镜：用于放大染色体的细节。
2. 染色体样本：可从动植物细胞中提取，如血液、植物叶片等。
3. 染色剂：如吉姆萨染液，可使染色体更清晰可见。
4. 盖玻片和载玻片：用于制作染色体样本的载体。
5. 显微镜玻璃片：用于制作染色体样本的压片。
步骤一：制备染色体样本1. 从动物或植物细胞中提取染色体样本。
2. 将提取的样本放在载玻片上，加入适量的染色剂。
3. 用盖玻片轻轻覆盖样本，使其均匀分布在载玻片上。
4. 用显微镜玻璃片轻轻压平样本，使其更加透明。
步骤二：观察染色体1. 将制备好的染色体样本放置在显微镜下。
2. 调节显微镜的放大倍数，逐渐增加放大倍数，观察染色体的形态和结构。
3. 注意观察染色体的数量、大小、形状以及有无异常。
结果与讨论：通过实验观察，我们可以发现染色体在显微镜下呈现出一定的特征。
正常情况下，人类细胞中的染色体通常呈现出46条，即23对。
其中，前22对为常染色体，最后一对为性染色体（男性为XY，女性为XX）。
不同物种的染色体数量和形态也存在差异，这是由于物种间的遗传差异和进化过程的结果。
染色体的形态也是观察的重点之一。
正常染色体通常呈现出X形或I形，两臂长度基本相等。
然而，在某些情况下，染色体可能发生异常，如染色体缺失、染色体重复、染色体交换等。
这些异常情况可能导致遗传疾病的发生，因此对染色体的观察和分析对于遗传学的研究具有重要意义。
实验中使用的染色剂吉姆萨染液，可以使染色体更清晰可见。
这是因为染色剂能够与染色体上的DNA结合，从而增加其对光的吸收能力。
通过染色剂的使用，我们可以更清楚地观察染色体的结构和细节，进一步了解其遗传特征。
试验一植物分生区细胞染色体制片与有丝分裂过程的观察
药用植物遗传育种学实验指导书（试用本）浙江林学院遗传学科2009．02学生实验守则1、实验前认真预习，领会实验原理，明确本次实验的目的和要求，了解实验步骤和注意事项。
2、实验时要严格按照规范操作进行，仔细观察实验现象，认真记录有关数据。
3、要认真写好实验报告，实验报告要清楚、简练、整洁。
4、学生进入实验室必须严格遵守实验室规则，服从带教老师的指导。
5、爱护实验室的仪器设备，不准将实验室的仪器设备私自带出室外。
6、严格遵守操作规程及实验时应注意的事项，在使用不熟悉其性能的仪器和药品之前，应查阅有关资料或请教指导教师，不要随意进行实验，以免损坏仪器，浪费试剂，使实验失败，更重要的是预防发生意外事故。
7、实验过程中应注意防火灾、防爆炸、防腐蚀、防污染工作，牢固树立“安全第一”意识。
8、实验结束后，一切仪器试剂应放回原处，玻璃仪器要清洗干净，一些有毒、有腐蚀性的废液应倒入废液缸内。
9、实验台面要擦试干净，由值日生负责安全卫生工作，包括清理实验室，检查水、电的开关，清除垃圾和污物，关好门窗后方可离开实验室。
目录实验一植物细胞染色体制片与有丝分裂过程观察 (1)实验二植物细胞的核型分析 (7)实验三植物花粉生命力测定 (10)实验四药用植物的杂交技术 (13)实验五药用植物的优株（树）选择 (16)实验六药用植物组织培养技术 (20)附录 (26)附录Ⅰ常用试剂的配制 (26)附录Ⅱ常用染色液的配制 (29)实验一植物细胞染色体制片与有丝分裂过程观察[实验目的]1. 学习并掌握根尖或叶片材料处理、染色、压片及制片观察的方法。
2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程。
[实验原理]熟悉有丝分裂过程、掌握有丝分裂染色体制片方法与技术是研究染色体形态结构、检查染色体数目、进行核型分析与带型分析的基础。
高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎尖生长点及幼叶等器官的分生组织(分生区)，这些分生组织均可以用作制片材料；另外愈伤组织、悬浮培养物等分生组织也可用作制片材料。
实验一 植物染色体制备和观察
实验一植物染色体制备和观察
一、实验目的
1．学习植物染色体制片技术；
2．通过观察染色体在有丝分裂过程中，了解染色体的动态变化；
二、实验准备
（按每实验小组2人准备）
1．仪器
显微镜1台、水浴锅（大组合用一）、冰箱1、培养箱1、干燥箱1
2．器械（均放在小磁盘内）
镊子2、解剖针2、剪子2、50ml烧杯1、吸管1、玻片架1
3．药品（4人一套）
醋酸洋红、1mol HCl、二甲苯（通用）[均分装在60ml滴瓶]、蒸馏水10L（通用）4．耗材
载玻片4、盖玻片6、滤纸2、擦镜纸1本（通用）、
5．材料
洋葱或大蒜根尖（预先生根、固定、低温保存）
三、实验原理
温盐酸处理根尖的作用：
1．可破坏植物细胞间的连接物质，使细胞分散；
2．可破坏细胞壁，使根尖细胞软化，有利于压片；
3．使DNA潜在的醛基得以暴露，能被碱性染料染色，使整条染色体能均匀着色。
四、实验步骤
大蒜生根1cm→9:00固定→第二天9:00保存于75%酒精4℃→取根尖→水洗→1mol HCl 60℃处理8min→水洗→取一根尖置于干净载玻片上→取分生区→夹碎→滴染液1d染色→8min（搅拌至碎）→盖盖玻片→轻敲分散→覆盖滤纸→带液速压→吸去多余染液→观察→高倍镜下绘图
五、作业
1．温盐酸处理根尖的作用是什么？
2．绘图：间期、前期、中期、后期、末期实景图。
植物有丝分裂实验报告
遗传学实验报告——植物专题专题一植物染色体专题实验摘要：植物染色体的研究，因为有了细胞壁的存在，所以要比动物的复杂一些，在本专题中，着重观察植物细胞的有丝分裂、减数分裂和多倍体组型。
在有丝分裂中，分为有丝分裂间期和有丝分裂期，其中有丝分裂期又可分为，前、中、后、末四个时期。
减数分裂中，除了有第一次减数分裂与第二次减数分裂的区分外，其特点为第一次减数分裂的前期特别长。
在观察多倍体时，诱导而得到的同源多倍体比一般的个体染色体有成倍增加的现象。
关键词：有丝分裂减数分裂多倍体正文：实验（一）植物细胞有丝分裂的制片与观察前言：实验原理：在植物生长旺盛的部位，有进行细胞分裂的分生组织，主要分布在植物的根尖、节间、茎的生长点、芽及其它生长活跃的部位。
其分裂的方式是有丝分裂，从这些地方取材，经过固定、解离、染色、压片，则可以在一个实验材料的不同部位观察到有丝分裂的全过程，因为有丝分裂的分裂间期要比分裂期长很多，所以在观察材料时多数细胞并没有处于细胞分裂期。
固定是指用化学药剂（常用Carnoy固定液95%乙醇：冰醋酸=3:1，其中的乙醇是脱水剂，冰醋酸是一种膨胀剂）既将细胞迅速杀死又可以保持细胞真实生活状态的过程。
解离的目的是将分生组织细胞间的果胶质和纤维素破坏掉，在制片过程中细胞容易分散开，常用的解离方法是酸解。
在进行染色体计数的实验时，则要对实验材料进行前处理，阻止细胞分裂过程中纺锤体的形成，使细胞停止在分裂的中期，这时细胞的染色体散落在细胞核中，便于观察。
通常所用的试剂为0.05-0.1mol/L的秋水仙素溶液，起到打断纺锤丝的目的。
经实验观察有丝分裂的过程是：前期：核膜核仁消失，染色体浓缩，复制已完成，着丝点未分开。
中期：染色体的着丝点与纺锤丝相连，且排列在赤道板上，是数染色体数的最佳时期。
后期：染色体的着丝点分开，姐妹染色单体分向两极。
末期：染色体到达两极，开始解螺旋，核膜核仁重新出现。
实验试剂、器材：1、材料大蒜（Allium sativum 2n=16）2、试剂95%乙醇、冰醋酸、石炭酸品红、1mol/L HCl、0.05%-0.1%的秋水仙素。
植物染色体制片与观察实验报告(洋葱组).参考分享
植物染色体制片与观察实验报告（洋葱组）.参考分享植物染色体制片与观察实验报告（洋葱组）同组成员：曹鉴云陈锦容刘艳马彦霞一、中文摘要：染色体（ Chromosome ），是细胞内具有遗传性质的物体，易被碱性染料染成深色，又叫染色质。
其本质是脱氧核甘酸，是细胞核内由核蛋白组成、能用碱性染料染色、有结构的线状体，是遗传物质基因的载体。
这里我们用洋葱染色体作为代表使用压片法制片并且进行观察。
二、关键词：染色体洋葱压片法三、引言：洋葱（ onion ）是百合科（ Liliaceae ）葱属中以肉质鳞片和鳞芽构成鳞芽的 2 年生草本植物，其学名为Allium cepa L ，染色体数为2n=2x=16 。
由表 1 和图 1 可见 ,洋葱的 8 对染色体中 ,有 7 对 (第 1~7 对 )染色体 ,臂比在1·01~1 ·70 之间 ,为中部着丝点染色体 ,1 对 (第 8 对 ),臂比为 4 ·74, 为近端部着丝点且带随体的染色体 ; 依据 STEB-BINS[4] 的核型分类标准 ,洋葱的染色体核型在遗传进化上属较古老的 2A 型。
100多年来有关染色体与染色体组结构功能的研究一直是生命科学最活跃的研究领域之一，现今人们完成基因组测序后回到对染色体上进行基因定位和作图，因此有关染色体的研究在基因组合功能基因组时代都有重要意义，陈瑞阳教授历时 25 年的研究完成的《中国主要植物染色体研究》对我国 2834 种植物染色体数目进行了报道，完成了 1045 种植物的核型分析，积累了宝贵的染色体基础数据创建了我国植物染色体研究信息平台。
研究染色体进化与生物进化的有不可分割的关系, 国际对染色体的化学成分,DNA 含量 ,碱基组成和以染色体数目、形态、结构、大小等为特征的核型进化与物种形成和演化关系的研究,为揭示生物进化趋势提供染色体方面的科学资料，总的来说对染色体的研究在各类学科领域内都有着重要的意义。
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植物染色体制片与观察
实验报告
YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】
植物染色体制片与观察实验报告（洋葱组）
同组成员：曹鉴云陈锦容刘艳马彦霞
一、中文摘要：染色体（Chromosome），是细胞内具有遗传性质的物体，易被碱性染料染成深色，又叫染色质。
其本质是脱氧核甘酸，是细胞核内由核蛋白组成、能用碱性染料染色、有结构的线状体，是遗传物质基因的载体。
这里我们用洋葱染色体作为代表使用压片法制片并且进行观察。
二、关键词：染色体洋葱压片法
三、引言：洋葱（onion）是百合科（Liliaceae）葱属中以肉质鳞片和鳞芽构成鳞芽的2年生草本植物，其学名为Allium cepa L，染色体数为2n=2x=16。
由表1和图1可见,洋葱的8对染色体中,有7对(第1~7对)染色体,臂比在1·01~1·70之间,为中部着丝点染色体,1对(第8对),臂比为4·74,为近端部着丝点且带随体的染色体;依据STEB-BINS[4]的核型分类标准,洋葱的染色体核型在遗传进化上属较古老的2A型。
100多年来有关染色体与染色体组结构功能的研究一直是生命科学最活跃的研究领域之一，现今人们完成基因组测序后回到对染色体上进行基因定位和作图，因此有关染色体的研究在基因组合功能基因组时代都有重要意义，陈瑞阳教授历时25年的研究完成的《中国主要植物染色体研究》对我国2834种植物染色体数目进行了报道，完成了1045种植物的核型分析，积累了宝贵的染色体基础数据创建了我国植物染色体研究信息平台。
研究染色体进化与生物进化的有不可分割的关系,国际对染色体的化学成分,DNA含量,碱基组成和以染色体数目、形态、结构、大小等为特征的核型进化与物种形成和演化关系的研究,为揭示生物进化趋势提供染色体方面的科学资料，总的来说对染色体的研究在各类学科领域内都有着重要的意义。
国内外对洋葱的研究主要在其成分和药用方面，在细胞遗传上张自力和陈瑞阳等对洋葱的C带显示法进行过研究，田秋元等对洋葱的核型分析
及有关制片方法进行了探讨。
植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞核染色体。
我们设计了不同的实验方案探究如何制作优良的植物染色体玻片，掌握染色体技术。
四、材料与方法：
1.取材
洋葱（Aillum cepa）的鳞茎
2.实验器具和药品
2.1器具
a.载玻片
b.盖玻片
c.烧杯
d.量筒
e.培养皿
f.滤纸
g.玻璃棒
h.镊子
i.手术刀
2.2药品
2.3试剂配制
卡诺固定液：用3份无水酒精，加入1份冰醋酸（现配现用）。
酸解液：一份无水乙醇与一份1mol/L?盐酸1:1进行配制。
酶解液：用0.4g的纤维素酶和0.15g的果胶酶溶解在20ml蒸馏水里。
配制成20ml酶解液。
3.实验步骤
3.1取材
于11月13日中午，将洋葱的鳞茎，置于盛水的小塑料杯上培养。
注意选取的洋葱要充实而饱满，表面要油光发亮，底部鳞片薄的老洋葱，去掉老根但不要伤害根芽，用刀片适当削去根部的木栓组织，置于清水中培养，最好使用宿舍放温了的开水，（水的高度要求与洋葱底部正好接触）并且需要注意勤换水，防止根腐烂。
3.2预处理
将洋葱根尖浸泡到0.25%的秋水仙素溶液中2小时。
3.3固定
将预处理过的根部切下，浸泡在配好的卡诺固定液中2.5小时。
3.4解离
1）酸解：从固定液中取出洋葱根尖，用蒸馏水漂洗，再放到解离液，在60℃水浴中解离。
（时间为6—10min）
2）酶解：从固定液中取出洋葱根尖，放在0.1mol/L 醋酸钠中漂洗。
然后放入配好的溶液中，在28℃温箱中解离1小时。
3.5压片
取出根尖，酸解后的根尖用蒸馏水漂洗，
酶解后的根尖用0.1mol/L 醋酸钠漂洗，将根
尖滴加卡宝品红染液，等待5~15分钟。
盖上
盖玻片，用吸水纸吸去多余染液。
用镊尖轻
轻敲打盖玻片，使细胞铺成薄薄一层。
然后
用显微镜观察。
五、实验结果
方案1：
酸解：10min
分析：解离时间较短，使解离不完全，细胞不能很好的分散开来。
并且细胞壁未被破坏，导致染色液无法进入细胞，染色体无法被染色。
解决方案：延长酸解时间。
方案2：
酸解、酶：10min
分析：细胞分裂全处于间期。
1：根尖细胞处于
间期，而间期细胞没有纺锤丝和纺锤体，不能使细
胞停留在中期。
2.洋葱根尖秋水仙素处理，卡若固定
时间太短或浓度太小，在两个小时内不能达到预期的结果。
3.剪下洋葱根尖的最好时间是正午时分，因为此时洋葱根尖分生区有丝分裂最为活跃，此时固定，可以观察到最多的分裂相，而我们组因为实验材料培养问题，所以固定的时间是10:40，且只固定了2h，如果固定液浓度不够，就会影响后面的实验结果。
实验方案结果展示如下：
固定2.5h 酸解6min 染色10min + / — /++/ —/ ++
8min 染色10min ++++ /— /++ +/ — /+++
酶解45min 染色10min + /— /+++ /— /++
60min 染色10min +++ /— /++++ / —/ +++
固定24h 酸解8min 染色8min +++++ /+++++/ ++++/ +++++/
++++
10min 染色10min ++++/ ++++ / +++++/ ++++ /
+++
10min 染色12min ++++ / +++ / +++ / +++ /++
酶解45min 染色10min ++ / ++ / +++ / / ++
60min 染色10min +++/ +++ /++++/ +++/ +++
附：本实验共做了9种实验方案，结论：对洋葱根尖进行24小时，酸解8 min，染色10min的压片效果最好。
制片效果依次为：细胞松散程度 /中期分
裂相多寡/ 染色效果/ 染色体形态及分散程度
/ 背景清晰度
六、讨论
由实验结果就可以看出，本组此次实验并不十分成功。
主要原因是材料也就是洋葱没有在合适的时间培养出根尖。
我们总结出的原因主要有两个：1）种植的洋葱为新采收的洋葱，因它尚在处于休眠期不易生根。
2）该洋葱根部的木栓组织较厚，不易生根。
正确的洋葱根尖培养方法已经在前面的实验步骤中提到了。
由于材料没有及时培养出，导致没有按照计划进行预处理，而是在实验当天提前用秋水仙素预处理2h。
导致最后使用的实验材料不十分理想。
但根据最后的实验结果也能明显比较出酸解与酶解一起进行的效果比只酸解的效果要好很多。
（不同的实验效果图在实验结果中进行了展示，在这里就不重复了。
）
七、参考文献
1.《洋葱核型分析及有关制片方法》田秋元，杨约田，安徽农业大学生命科学学院，2009
2.《遗传学实验》第二版——刘祖洞、江绍慧编高等教育出版社
3.蚕豆洋葱染色体C显带法——张自力、陈瑞阳等 1978
4.洋葱核型分析及有关制片方法的探讨——田秋元、杨约田、2009
5.洋葱染色体G带和R带的研究——朱燕祥、
张洪达等1993
6.洋葱根尖和马蛔虫卵的细胞分裂制片法——
史新柏1962。