小麦染色体制片
小麦胚芽鞘体细胞染色体制片技术初探
关 键 词 小 麦 ； 胚 芽 鞘 ； 染 色 体 制 片
ｐ ｏ ｅ ｕ ｅ ｔ ｅｔｃ ｌｏ ｔ ｅｃ ｌ ｓｓｍｐｉｇ ｏ ｊｃｓｗｅ ｅｐ ｅｉ ｎ ｒｌ ｓａ ｌ ｈ ｄ ｒ ｃ ｄ ｒｓｗｉ ｗｈ ａ ｏｅ ｐ ｉ ｅｌ ａ ａ ｌ ｂｅ ｔ ｒ ｒｌ ｈ ｌ ｓ ｎ ｍｉａ ｉ ｅ ｔｂｉ ｅ ． ｙ ｓ
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以小麦根尖分生组织细胞核及染色体制备高分子量DNA
Vol 132,N o 112pp 11920-1923 Dec 1,2006作 物 学 报ACT A AG RONOMIC A SI NIC A第32卷第12期2006年12月 1920～1923页研究简报以小麦根尖分生组织细胞核及染色体制备高分子量DNA 郭东伟1,2 佘茂云2,3 李连城2 陈耀峰1 陈 明2 徐兆师2 马有志2,3Ξ(1西北农林科技大学农学院,陕西杨凌712100;2中国农业科学院作物科学研究所Π农业部遗传育种重点开放实验室,北京100081;3新疆农业大学农学院,新疆乌鲁木齐830052)摘 要:为了克服以叶片为材提取H MW DN A 的局限性,优化了一套简便、实用的提取方法。
该法以细胞周期同步化处理的根尖分生组织为材料,利用机械匀浆释放细胞核或中期染色体制备悬浮液,再以蔗糖密度梯度离心和流式分选技术分别分离细胞核和染色体,经去蛋白、酶切、透析,获得H MW DN A 。
经检测,来自200条根尖(10个胶块)的H M W D N A 的浓度约为4～20ng ΠμL ,而连接、转化后的BAC 克隆平均插入片段超过100kb 。
证明该法适用于提取H M W D N A 以构建BAC 文库。
关键词:高分子量DN A ;蔗糖密度梯度离心;细胞周期同步化;染色体流式分选;BAC 中图分类号:S 512;Q781High Molecular Weight DN A Pr epar ation fr om N uclei or Chr omosomes o f Root Mer istem o f WheatG UO Dong 2Wei 1,2,SHE M ao 2Yun 2,3,L I Lian 2Cheng 2,CHEN Y a o 2F eng 1,CHEN M ing 2,XU Zhao 2S hi 2and MA Y ou 2Zhi 2,3(1A gronom y C ollege ,N orthw es t S ci 2T ech Univers ity of Agriculture and F orestry ,Y angling 712100,Shaanx i ;2K ey Laboratory of C rop G enetics and Breeding ,M ini s try ofAgriculture ΠI ns titute of C rop S ciences ,C hines e A cadem y of Agricult ural S ciences ,B eijing 100081;3A gron om y C ollege ,X injiang A gricultural Univers ity ,Urum qi 810012,X i njiang ,C hina)Abstract :A s imple and practical meth od was o ptimized t o overcome the lim itati ons o f current meth od by wh ich H M W D NA w as preparedfrom leaf powd er.Ro ot tips o f synchron ized meris tem were h om ogen ized to mak e preparing suspensi on containing intact metaph ase chromos omes and nu clei ,wh ich w ere f u rther is olated b y sucros e grad ien t cen trifug ation an d flow s ortin g ,res pectively.Finally ,H MW DN A was prepared w ith deprotein ization ,digestion and dialys is o f nu clei and chrom os omes.T he results sh ow ed th at concentrati on of th e H M WDN A from 200ro ot tips (10plugs )w as ab out 4-20ng ΠμL (4ng ΠμL in chrom os omes DN A and 20ng ΠμL in nu clei D NA ).Th e av erage insert frag ment size was more th an 100kb after linage ,trans form ation and insert frag men t examination by pu lse field gel electroph oresis for H MW DN A from nuclei.Th e similar results w ere obtained b y H M W DN A prepared from chr om os omes.It is con firm ed that the meth od isapplicable t o prepare H MW DN A for cons truction of BAC library.K ey w or ds :H igh molecular weight D NA;Sucros e gradient centri f u gati on;Synchron ization o f cell cycle ;Chrom os ome flow s orting;BA C 大片段DN A 插入文库(如BAC 文库)对于基因组物理作图、大规模基因组测序和基因发掘具有重要意义。
小麦族染色体组命名
小麦族染色体组命名的报告，600字
本报告主要介绍了小麦族染色体组的命名规则和原理。
小麦（Triticum）是一种广泛分布于全球的禾本科植物，是大
型农作物种中最重要的组成部分之一。
小麦族染色体组由7个染色体构成，包括3对携带34号染色体和1对携带14号染色体。
因此，小麦族染色体组称为“AABB-CCDD”型染色体组织。
小麦族染色体的命名主要遵循一般的国际公认的命名系统，即“A”、“B”、“C”和“D”开头的染色体称为“homoeologous”染色体；而其他染色体统称为“paleotetraploids”染色体，用“Pt”加数字表示。
染色体组的染色体数量以及各个染色体以及所携带的DNA段
的大小和排列，是小麦族细胞的特征性的基础。
小麦族染色体的命名主要根据这些特征及其种间差异来命名，比如采用字母和数字对其染色体的大小、个数以及染色体的形态进行描述。
具体而言，小麦族染色体的命名包括因子名称、主要物种、染色体号、染色体长度和染色体组织图框架等。
比如，小麦中常见的34号染色体“A”型染色体可以称为Triticum aestivum A-chromosome。
此外，还有14号染色体“D”型染色体，可以称
为T. aestivum D-chromosome。
总之，小麦族染色体组由7个染色体构成，采用国际公认的命名系统来命名不同的染色体，例如以字母和数字的形式表述染色体的大小、个数以及染色体的形态等。
这些类型的染色体提
供了小麦家族生物质的信息，从而为小麦的种质改良提供了可能性。
小麦染色体制片
小麦品种个非常重要的小麦地方品种， 它被广泛应用于小麦遗传学研究
根尖
胚芽鞘
茎尖
优点： 根尖分生细胞区多为等直径的分裂细 胞，其细胞质浓，细胞核大、细胞核 体积约占整个细胞体积的3/4，是染色 体制片的好材料
缺点： 破坏小麦生长
三、悬浮液法J： 将材料用镊子夹碎、搅拌使其形成细胞悬液，然 后将材料固定20min，视细胞沉淀后，用吸管轻轻 吸去上清液，留1mL左右细胞悬液制备染色体标本。 用吸管滴2~3滴细胞悬液在结晶载玻片上，将在不 骗一端抬起，并轻轻吹气，使细胞迅速分散，然 后在究竟灯火焰上微微加热烤干或自然干燥（候 典云等，2006）
一、常规压片法： 将材料分生区组织铺展于载玻片，然后用不锈钢 刀片、镊子和解剖针钝头等工具轻轻敲打覆盖其 上的盖玻片，使细胞和染色体分散开来。 二、涂片法： 将材料放在预先洁净冷冻的载玻片上，加一滴固 定液，然后用镊子取根尖分生区组织，迅速将材 料敲碎涂抹，并去掉大块组织残渣。然后从载玻 片一侧向材料轻轻吹气，使组织分散成一薄层， 涂抹的载玻片可自然或加热干燥（黄珊珊，2011）
涂片法
悬浮液法J
将材料用镊子夹碎、搅拌使其形成细 胞悬液，然后将材料固定20min，视细 胞沉淀后，用吸管轻轻吸去上清液， 留1mL左右细胞悬液制备染色体标本。 用吸管滴2~3滴细胞悬液在结晶载玻片 上，将在不骗一端抬起，并轻轻吹气， 使细胞迅速分散，然后在究竟灯火焰 上微微加热烤干或自然干燥（候典云 等，2006）
优点： （1）对小麦个体植株伤害小 （2）体积大、分裂相多，便于取材 （3）易于制片。木质化程度相对于根较低，酸 解或者水解时处理时间相对缩短。 （4）染色体较大，杂质少，背景清晰 （植物染色体制片中疑难问题的解析_张羽） 缺点： 胚芽鞘见光即停止生长，实验处理需要遮光
枝条染色实验报告
实验目的：1. 学习植物枝条染色技术的原理和方法。
2. 掌握植物染色体观察的基本步骤。
3. 了解染色体在植物细胞分裂过程中的变化。
实验原理：植物细胞染色体是遗传信息的主要载体，通过染色技术可以将染色体染成深色，便于在显微镜下观察。
染色体的着色原理是利用染料与染色体中的DNA或蛋白质结合，使染色体在显微镜下呈现明显的深色。
实验材料：1. 植物枝条（如小麦、洋葱等）2. 醋酸洋红染液3. 70%酒精4. 1%盐酸5. 生理盐水6. 显微镜7. 盘子、镊子、刀片、纱布等实验步骤：1. 制备材料：- 选取新鲜植物枝条，用刀片切取一小段。
- 将枝条放入70%酒精中浸泡5-10分钟，以消毒。
- 取出枝条，用纱布轻轻擦干。
2. 染色：- 将消毒后的枝条放入装有醋酸洋红染液的容器中。
- 在室温下染色10-15分钟，期间轻轻摇动容器，使染液均匀接触枝条。
3. 解离：- 将染色的枝条取出，放入装有1%盐酸的容器中。
- 在室温下解离10-15分钟，期间轻轻摇动容器，使盐酸均匀接触枝条。
4. 漂洗：- 将解离后的枝条取出，放入生理盐水中漂洗3-5分钟，去除多余的盐酸。
5. 制片：- 将漂洗后的枝条取出，用镊子轻轻压扁。
- 将压扁的枝条放在载玻片上，用盖玻片覆盖。
- 在盖玻片边缘滴加少量生理盐水，用吸水纸吸去多余的水分。
6. 观察：- 将制片放在显微镜下观察，调节焦距，观察染色体的形态、大小和数量。
实验结果：在显微镜下观察到，植物枝条细胞中的染色体被染成红色，呈现明显的深色。
染色体呈棒状，具有明显的着丝粒和染色单体。
根据染色体的形态、大小和数量，可以判断出植物细胞的染色体数目和染色体类型。
实验分析：1. 染色技术是观察植物染色体的重要方法，通过染色可以使染色体在显微镜下呈现明显的深色，便于观察。
2. 盐酸解离是染色过程中的关键步骤，可以软化细胞壁，使染色体易于观察。
3. 植物枝条细胞中的染色体数目和类型与植物种类有关，可以通过染色技术进行观察和比较。
小麦族染色体组命名
小麦族染色体组命名本文旨在详细探讨小麦族染色体组的命名方式。
小麦族一共包含7个染色体，他们的命名方式是由来自不同物种的A、B、D三组染色体组成的。
A组染色体由23条染色体组成，其中21条染色体来自物种Triticum monococcum（小麦），2条染色体分别来自Aegilops speltoides（斯芬塔尔小麦）和Aegilops tauschii（穗小麦）。
B组染色体由14条染色体组成，它们都来自于物种Triticum dicoccoides（双花小麦）. D组染色体由6条染色体组成，它们来自物种Aegilops tauschii（穗小麦）。
此外，还有一个特殊的染色体，称为U要素，它来自3种物种：Triticum aestivum（小麦）、Triticum durum（小麦）和Triticum turgidum（杂粮小麦）。
小麦族染色体组命名采用国际上普遍采用的“染色体-原物种-编号”格式，A，B和D组染色体分别用“A，B，D”表示，然后是一个括号内的原物种简写名称和编号，例如A1和B2。
U要素中的染色体用“U”表示，然后是一个括号内的3个物种简写名称，按字典序排列，代表这个特殊染色体来自3种物种，例如U(tse tsita)。
因此，为了简洁有效地命名小麦族染色体组，我们采用“染色体-原物种-编号”格式，详细地记录小麦族染色体来自哪些物种，以及哪些物种组成U要素，使得小麦族染色体组的命名变得清晰明了。
除了物种名称，染色体组还有其他常见命名方式。
在一些研究中，小麦族染色体组也可以简单地用字母“T”，“P”和“R”表示。
其中“T”代表Triticum sp.染色体，“P”代表Aegilops speltoides 染色体，“R”代表Aegilops tauschii 染色体。
此外，还有一种常见的拼写法“7A-7B-7D”，以表示小麦族染色体组的完整性和复杂性，其中“7A-7B-7D”分别表示A组、B组和D组染色体的数量。
不同因素对小麦根尖染色体制片的影响
不同因素对小麦根尖染色体制片的影响邹景伟;郭振清;张志雯;任学军;林小虎【摘要】以小麦根尖为材料,探讨了低温、秋水仙素、8-羟基喹啉和对二氯苯4种预处理对小麦根尖细胞有丝分裂积累中期分裂相的效果.结果表明,这4种预处理方法积累有丝分裂中期分裂相效果的明显程度由大到小依次为秋水仙素、低温、对二氯苯和8-羟基喹啉,前2种方法效果明显且差异不大,后2种方法效果略差.在此基础上,对低温预处理后的根尖在制片过程中的一些因素进行了摸索,发现影响制片效果的主要因素是低温预处理时间和HCl解离时间.最终得到以小麦根尖为取样对象的体细胞染色体制片的最适方法.为小麦族物种的染色体加倍、异染色体系的鉴定、细胞遗传学研究等领域提供方法依据.【期刊名称】《种子》【年(卷),期】2016(035)012【总页数】4页(P8-11)【关键词】小麦;根尖体细胞;染色体制片;影响因素【作者】邹景伟;郭振清;张志雯;任学军;林小虎【作者单位】河北科技师范学院生命科技学院,河北秦皇岛066004;河北科技师范学院生命科技学院,河北秦皇岛066004;河北科技师范学院生命科技学院,河北秦皇岛066004;河北科技师范学院生命科技学院,河北秦皇岛066004;河北科技师范学院生命科技学院,河北秦皇岛066004【正文语种】中文【中图分类】S512.1小麦(Triticum aestivum L.)是我国重要的粮食作物。
随着时间的推移和气候条件的变化，对小麦的种质资源创新与品种的改良提出了越来越多的要求[1-3]。
利用小麦近缘属种的优良基因是改良普通小麦性状的重要手段，其主要方法有染色体倍性化、异染色体系和远缘杂交等。
其中，倍性鉴定和异染色体系鉴定是染色体工程育种及其应用的重要鉴定手段[4]。
准确、有效地鉴定出倍性水平及异染色体数目的方法，对控制育种工作的盲目性、显著降低工作量、降低成本、加速育种进程具有重要意义[5]。
在众多鉴定方法中，细胞学鉴定是检验外源染色体的基本手段，染色体制片则是细胞学鉴定的基本技术手段[6-7]。
小麦染色体标本制备方法的优化
１ 材料 与方法
１ ． １ 实验 材料
小 麦成 熟 种子 ． １ ． ２ 实验 仪器 和设 备
Ｐ Ｙ Ｘ － ２ ５ ０ Ｑ — Ｃ人工气候箱 ， 广东韶关科力实验仪器有 限公司 ； Ｈ Ｗ一 ８ Ｂ型微量恒温器 ， 绍兴市卫星医疗 设备制造有限公司 ； Ｆ Ａ １ １ ０ ４ Ｎ电子天平 ； Ｂ Ｃ Ｄ － ２ ０ ８ Ｋ ／ Ａ Ｃ Ｊ Ｎ海尔 电冰箱 ； 显微镜 ； Ｍ ｏ ｔ ｉ ｃ ａ ｍ ３ ０ ０ ０数码成像系
验课关注 的重点和难点 ． 本文在去壁低渗火焰 干燥 法 的基 础上 ， 改 良了小麦染 色体制 片方法 ， 分析 了影 响染色体标本制备效果 的主要 因素．
关键词 ： ห้องสมุดไป่ตู้胞遗 传学 ； 染色体标本 ； 方法优化 ； 小麦
中图分类号 ：Ｑ ７ ８ 文献标识码 ： Ａ
染色体是生物细胞核 中最重要而稳定 的成分 ， 它具有特定的形态结构和・定的数 目， 具有 自我复制能 力， 并积极参与细胞的代谢活动 ， 能出现连续而有规律 的变化 ， 是决定物种繁衍的遗传物质 的载体 Ｊ ． 植
Ｖｏ １ ． ２ ７ Ｎ ｏ ． ２
Ｊ ｕ ｎ ｅ ２ ０１ ３
文 章编 号 ： １ ０ ０ ９ － ４ ４ ９ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ － ０ ０ ４ ７ ０４ －
小 麦 染 色体 标 本 制 备 方 法 的优 化
张小 娟 ， 覃建兵
（ 新疆 师范大学分子生物学 与生物信息研究 室 ， 新疆 乌鲁木 齐 ８ ３ ０ ０ ５ ４ ） 摘 要： 制备出分裂相多 、 杂质 少 、 背景清 晰 、 染色体分散且形态好 的染色体标本 ， 一 直是细胞遗 传学实
多、 杂质少 、 中期染色体分散且形态好 的染色体标本带来了困难 Ｊ ． 本文以小麦为实验材料 ， 在去壁低渗火焰干燥制片方法的基础上 ， 做 出了一些改进 ， 建立 了一套高效 制备小麦染色体分裂相的方法． 该优化的方法具有实用性强 、 污染少 、 成本低且简单易行等特点 ， 为细胞遗 传学实验教学提供一定的参考．
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一、常规压片法：
将材料分生区组织铺展于载玻片，然后用不锈钢 刀片、镊子和解剖针钝头等工具轻轻敲打覆盖其 上的盖玻片，使细胞和染色体分散开来。 二、涂片法：
将材料放在预先洁净冷冻的载玻片上，加一滴固 定液，然后用镊子取根尖分生区组织，迅速将材 料敲碎涂抹，并去掉大块组织残渣。然后从载玻 片一侧向材料轻轻吹气，使组织分散成一薄层， 涂抹的载玻片可自然或加热干燥（黄珊珊，2011）
谢谢老师
优点： （1）对小麦个体植株伤害小 （2）体积大、分裂相多，便于取材 （3）易于制片。木质化程度相对于根较低，酸 解或者水解时处理时间相对缩短。 （4）染色体较大，杂质少，背景清晰 （植物染色体制片中疑难问题的解析_张羽）
缺点： 胚芽鞘见光即停止生长，实验处理需要遮光
优点：
与传统的根尖材料相比，利用茎尖生长点及幼 叶等分生组织进行染色体制片，具有取材方便、 来源充足等优点，这方面成功的例子很多。
小麦染色体制备方案
小麦品种 小麦取材部位 制备方案
中国春： （简称为CS）是一个非常重要的小麦地方品种， 它被广泛应用于小麦遗传学研究
根尖
胚芽鞘
茎尖
优点： 根尖分生细胞区多为等直径的分裂细 胞，其细胞质浓，细胞核大、细胞核 体积约占整个细胞体积的3/4，是染色 体制片的好材料
缺点： 破坏小麦生长
二、物理方法 用冰水混合物（及低温）对材料进行预处理 12~36h（时丽冉等，2009）
一、常用方法： 卡诺氏固定液固定（10倍于材料的新鲜卡诺氏液 固定24h） 二、其他方法： 冰甲固定液固定20~24h（杨晓伶和程舟，2005） 有毒，可侵害视觉神经网膜）
一、酶解法：
纤维素酶（1%~5%）和果胶酶（1%~2%）混合液， 酶解前需要先将材料置于0.075mol/L的KCl溶液中 低渗0.5~1.0h，然后加入酶液在25℃保温2~3h （候典云等，2011） 二、酸解法：
悬浮液法J
将材料用镊子夹碎、搅拌使其形成细 胞悬液，然后将材料固定20min，视细 胞沉淀后，用吸管轻轻吸去上清液， 留1mL左右细胞悬液制备染色体标本。 用吸管滴2~3滴细胞悬液在结晶载玻片 上，将在不骗一端抬起，并轻轻吹气， 使细胞迅速分散，然后在究竟灯火焰 上微微加热烤干或自然干燥（候典云 等，2006）
（利用小麦茎尖分生组织进行染色体制片的探 讨_李小军） 缺点：
需要较长时间等待长出幼叶，然后采用伸展 3~5mm长的幼叶作为材料
1、材料预处理 2、材料固定 3、材料解离 4、制片
一、化学方法： 1、0.002mol/L的8-羟基喹啉在室温处理3~5h（董 晓明等，2011；蔡文燕和周桃凤，2012） 2、饱和对二氯苯4℃处理1~2h（王胜等，2010） 3、0.1%~0.2%秋水仙素溶液温室处理2~3h（任琛 等，2012）
三、悬浮液法J： 将材料用镊子夹碎、搅拌使其形成细胞悬液，然 后将材料固定20min，视细胞沉淀后，用吸管轻轻 吸去上清液，留1mL左右细胞悬液制备染色体标本。 用吸管滴2~3滴细胞悬液在结晶载玻片上，将在不 骗一端抬起，并轻轻吹气，使细胞迅速分散，然 后在究竟灯火焰上微微加热烤干或自然干燥（候 典云等，2006）
将材料分生区组织铺展于载玻片，然
常规压片法
后用不锈钢刀片、镊子和解剖针钝头 等工具轻轻敲打覆盖其上的盖玻片，
使细胞和染色体分散开来。
涂片法
将材料放在预先洁净冷冻的载玻片上 ，加一滴固定液，然后用镊子取根尖 分生区组织，迅速将材料敲碎涂抹， 并去掉大块组织残渣。然后从载玻片 一侧向材料轻轻吹气，使组织分散成 一薄层，涂抹的载玻片可自然或加热 干燥（黄珊珊，2011）