生物化学简明教程 第二章蛋白质
生物化学02第二章 多肽与蛋白质
Glu-Cys-Gly SH
Glu-Cys-Gly S S
Glu-Cys-Gly
谷胱甘肽的生理功用：
• 解毒作用：与毒物或药物结合，消除其 毒性作用；生物转化。
• 参与氧化还原反应：作为重要的还原剂， 参与体内多种氧化还原反应；
• 保护巯基酶的活性：使巯基酶的活性基 团-SH维持还原状态；
• 维持红细胞膜结构的稳定：消除氧化剂 对红细胞膜结构的破坏作用。
锌指结构是一个常见的模体。
由一个α-螺旋和两个反向平行的β-折迭组 成，形似手指。
Ｎ－端两个半胱氨酸，Ｃ－端两个组氨酸， 此四个氨基酸残基在空间上构成一个洞穴， 容纳一个锌，具结合锌离子功能。
含锌指结构的蛋白质都可与ＤＮＡ或ＲＮＡ 结合。
锌指结构 (折迭-折迭模序)
亮氨酸拉链结构：
• 见于真核生物DNA结合蛋白质的C端，与 癌基因表达调控有关。
第二章
多肽与蛋白质
Peptides and Proteins
1833年，Payen和Persoz分离出淀粉酶。 1864年，Hoppe-Seyler从血液分离出血红蛋白，
并将其制成结晶。 19世纪末，Fischer证明蛋白质是由氨基酸组成的，
并将氨基酸合成了多种短肽 。 1938年，德国化学家Gerardus J. Mulder引用
2. 蛋白质具有重要的生物学功能
1）作为生物催化剂（酶） 2）代谢调节作用 3）免疫保护作用 4）物质的转运和存储 5）运动与支持作用 6）参与细胞间信息传递
3. 氧化供能
第一节
肽和蛋白质的一级结构
Primary Structure of Peptides and Proteins
一、肽和蛋白质是由氨基酸组成的多聚体
生物化学简明教程ppt 第二章蛋白质
3、蛋白质的变性
（1）、变性的概念
在变性因素作用下，天然蛋白质一级结构保
持不变，高级结构发生了异常的变化，由天然态
的折迭态变成了变性的伸展态，引起生物功能的
丧失，理化性质的改变的现象。
氨基酸的甲醛滴定
* 反应特点 A.为α - NH2的反应 B.在常温，中性条件，甲醛与α - NH2很快反应，生成羟甲基衍生物，释放氢离子。 * 应用：氨基酸定量分析—甲醛滴定法（间接滴定） A.直接滴定，终点pH过高（12），没有适当指示剂。 B.与甲醛反应，滴定终点在9左右，可用酚酞作指示剂。 C.释放一个氢离子，相当于一个氨基（摩尔比1：1） D.简单快速，一般用于测定蛋白质的水解速度。
第四节
定义
蛋白质的结构
举例：胰岛素的一级结构
（一）、蛋白质的一级结构
（二）、空间结构包含的内容
1、蛋白质的二级结构 （1）、定义
α-螺旋结构 （2）、包含内容 β-折叠结构 β-转角结构 （3）、超二级结构： αα、 βαβ、βββ、 β曲折 （4）、结构域
2、蛋白质的三级结构 举例：鲸肌红蛋白的三级结构
脂肪族氨基酸
含酰基的氨基酸： 含一氨基二羧基的 酸性氨基酸： 含二氨基一羧基的 碱性氨基酸： Phe、Tyr
杂环族氨基酸： Trp、His、Pro
三、氨基酸的理化性质
1、一般物理性质 2、化学性质
与亚硝酸的反应 （1） 氨基参加的反应 与甲醛的反应 与2，4-二硝基氟苯的反应 与异硫氰酸苯酯的反应
与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应
• Edman （苯异硫氰酸酯法）：由Edman于1950年首先 提出，为α- NH2的反应，用于N末端分析，又称 Edman降解法。此法的特点是能够不断重复循环，将 肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。
生物化学第二章蛋白质的结构与功能随堂练习与参考答案
生物化学（本科）第二章蛋白质的结构与功能随堂练习与参考答案第一节蛋白质的分子组成第二节蛋白质的结构第三节蛋白质的结构与理化性质之间的关系第四节蛋白质的结构与功能的关系第五节蛋白质的分类第六节血浆蛋白质1. (单选题)测得某一蛋白质溶液N元素的含量为4 g/L，则该溶液中蛋白质含量约为A．16 g/LB．20 g/LC．25 g/LD．30 g/LE．40 g/L参考答案：C2. (单选题)组成蛋白质的氨基酸基本上属于A．L-β-氨基酸B．D-β-氨基酸C．L-α-氨基酸D．D-α-氨基酸E．L、D-α-氨基酸参考答案：C3. (单选题)属于碱性氨基酸的是A．精氨酸B．赖氨酸C．组氨酸D．A+BE．A+B+C参考答案：E4. (单选题)下列有关肽的叙述，错误的是A．肽是两个以上氨基酸借肽键连接而成的化合物 B．组成肽的氨基酸分子都不完整C．多肽与蛋白质分子之间无明确的分界线D．氨基酸一旦生成肽，完全失去其原有的理化性质 E．根据N末端数目，可得知蛋白质的亚基数参考答案：E5. (单选题)维系蛋白质二级结构稳定的化学键是 A．盐键B．二硫键C．肽键D．疏水键E．氢键参考答案：E6. (单选题)蛋白质α-螺旋的特点有A．多为左手螺旋B．螺旋方向与长轴垂直C．氨基酸侧链伸向螺旋外侧D．肽键平面充分伸展E．靠盐键维系稳定性参考答案：C7. (单选题)有关蛋白质三级结构的描述，错误的是 A．具有三级结构的多肽链都有生物学活性B．亲水基团多位于三级结构的表面C．三级结构的稳定性由次级键维系D．三级结构是单体蛋白质或亚基的空间结构E．三级结构是各个单键旋转自由度受到各种限制的结果参考答案：A8. (单选题)关于蛋白质亚基的描述，正确的是A．一条多肽链卷曲成螺旋结构B．两条以上多肽链卷曲成二级结构C．两条以上多肽链与辅基结合成蛋白质D．每个亚基都有各自的三级结构E．以上都不正确参考答案：D9. (单选题)蛋白质的空间构象主要取决于A．肽链氨基酸的序列B．α-螺旋和β-折叠C．肽链中的氨基酸侧链D．肽链中的肽键E．肽链中的二硫键位置参考答案：A10. (单选题)蛋白质溶液的稳定因素是A．蛋白质溶液有分子扩散现象B．蛋白质在溶液中有布朗运动C．蛋白质分子在溶液中带有水化膜和同种电荷 D．蛋白质溶液的粘度大E．蛋白质分子在溶液中带电荷参考答案：C11. (单选题)蛋白质变性时伴随的结构变化是 A．肽链的断裂B．氨基酸残基的化学修饰C．一些侧链基团的暴露D．二硫键的打开E．以上选项均不是参考答案：C12. (单选题)绝大多数血浆蛋白质的合成场所是 A．骨髓B．肾脏C．肝脏D．脾脏E．肌肉参考答案：C13. (多选题)谷胱甘肽A．是体内的还原型物质 B．含有两个特殊的肽键 C．其功能基团是疏基D．为三肽E．是体内的氧化型物质参考答案：ACD14. (多选题)空间构象包括 A．β-折叠B．结构域C．亚基D．模体E．氨基酸残基的排列顺序参考答案：ABCD15. (多选题)蛋白质结构域 A．都有特定的功能B．为折叠得较为紧密的区域 C．属于三级结构D．存在于每一种蛋白质中 E．属于四级结构参考答案：ABC16. (多选题)蛋白质变性A．由肽键断裂而引起B．都是不可逆的C．可使其生物活性丧失D．可增加其溶解度E．构象被破坏参考答案：CE17. (多选题)蛋白质三级结构A．存在于每个天然蛋白质分子中B．是指局部肽段空间构象C．包括模体结构D．属于高级结构E．包括结构域参考答案：CDE18. (多选题)血浆白蛋白的功能有A．维持胶体渗透压B．维持血浆的正常pH值C．运输某些物质，尤其是脂溶性物质 D．营养作用E．抵抗外来入侵参考答案：ABCD。
生物化学 第2章 蛋白质化学
第二章蛋白质化学一、填空题：1、不同蛋白质的含量颇为相近，平均含量为____%。
2、蛋白质中存在种氨基酸，除了氨基酸外，其余氨基酸的α-碳原子上都有一个自由的基及一个自由的基。
3、能形成二硫键的氨基酸是，分子量最小的氨基酸是。
4、蛋白质具有两性电离性质，大多数在酸性溶液中带电荷，在碱性溶液中带负电荷。
当蛋白质处在某一pH值溶液中时，它所带的正负电荷数相等，此时的蛋白质成为，该溶液的pH值称为蛋白质的________。
5、蛋白质的一级结构是指在蛋白质多肽链中的。
6、在蛋白质分子中，一个氨基酸的α碳原子上的与另一个氨基酸α碳原子上的_______脱去一分子水形成的键叫，它是蛋白质分子中的基本结构键。
7、一个四肽Lys-Val-His-Arg在pH=7溶液中进行电泳，它将向极方向移动。
8、蛋白质在280nm处有最大吸收峰，这是由于蛋白质分子中存在、和残基的缘故。
9、α—螺旋和β—折叠结构属于蛋白质的级结构，稳定其结构的作用力是。
10、丝氨酸、苏氨酸及酪氨酸的极性是由侧链基团的基提供的；天冬酰胺和谷氨酰胺的极性是由其引起的，而半胱氨酸的极性则是因为含的缘故。
11、蛋白质颗粒表面的和是蛋白质亲水胶体稳定的两个因素。
12、蛋白质变性主要是因为破坏了维持和稳定其空间构象的各种键，使天然蛋白质原有的与性质改变。
13、.蛋白质分子二级结构常见的两种类型是和。
14、天然蛋白质分子中的α—螺旋都属于手螺旋。
15、已知下列肽段：(1)-Ala-Phe-Tyr-Ala-Arg-Ser-Glu—(2)-Lys-Glu-Arg-Gln-His-Ala-Ala—(3)-Gln-Cys-Leu-Ala-Ser-Cys-Ala—(4)-Gly-Leu-Ser-Pro-Ala-Phe-Val—其中在pH=7条件下向负极移动快的多肽是；在280nm有最大光吸收的是；可能形成二硫键桥的是；α—螺旋中断的是。
二、选择题(只有一个最佳答案)：1、在寡聚蛋白质中，亚基间的立体排布、相互作用以及接触部位间的空间结构称之谓( )A、三级结构B、缔合现象C、四级结构D、变构现象2、形成稳定的肽链空间结构，非常重要的一点是肽键中的四个原子以及和它相邻的两个α-碳原子处于( )A、不断绕动状态B、可以相对自由旋转C、同一平面D、随不同外界环境而变化的状态3、甘氨酸的解离常数是pK1=2.34, pK2=9.60，它的等电点（pI）是( )A、7.26B、5.97C、7.14D、10.774、肽链中的肽键是：( )A、顺式结构B、顺式和反式共存C、反式结构5、维持蛋白质二级结构稳定的主要因素是：( )A、静电作用力B、氢键C、疏水键D、范德华作用力6、蛋白质变性是由于（）A、一级结构改变B、空间构象破坏C、辅基脱落D、蛋白质水解7、必需氨基酸是对（）而言的。
生物化学简明教程第四版03蛋白质化学
C
S + H2N
C R
COOH
在弱碱中
N S C N H
C
O H C R
Edman 用来鉴定 多肽、蛋白质的N 末端氨基酸
PTC-氨基酸
PTH-氨基酸 56
⑤与HNO2的反应
NH2 R CH COOH + HNO2
OH R CH COOH + H2O + N2
↑
范氏(VanSlyke ) 定氮法的原理基础； 可测定氨基酸量及蛋白质水解程度。
5- 羟 基 赖 氨 酸 I CH3NHCH2CHCH2CH2CHCOOH HO CH2CHCOOH NH2 NH2 I 6-N- 甲 基 赖 氨 酸 3,5- 二 碘 酪 氨 酸
4- 羟 基 脯 氨 酸
从各种生物分离到的氨基酸已达250种以上
31
非蛋白质氨基酸
32
2.2.3 氨基酸的理化性质
（1）一般物理性质 氨基酸呈无色结晶，熔点高（＞200℃），融熔时 即分解。
H3C N H2N H C R O S Cl
DNS-Cl
5
CH3
H3C N
CH3
COOH
+
+ HCl
1
O
O
S HN
O H C R
COOH
DNS-氨基酸
二甲氨萘磺酰（DNS）基团有荧光， 微量的氨基酸也可用此测定
55
④与异硫氰酸苯酯的反应
N C S
H N
PITC
H N S C N H HO C O H C R H
可计算出在任一pH条件下一种氨基酸的各种离 子的比例。
43
谷氨酸（A）和赖氨酸（B）滴定曲线 A
动物生物化学 第二章 蛋白质
蛋白质分子为右手-螺旋。
（1）-螺旋
-螺旋
表 几种螺旋结构参数
结构类型 残基/圈 1个氢键环的原子数 每个残基高度（nm） Φ Ψ
310螺旋 3.0
位 置
及顺序分析，
的 然后同其它方法分析的肽段进行比较，
确 确定二硫键的位置。
定
2.4 蛋白质的高级结构
2.4.1 肽单位平面结构和二面角
O
O
O
H
H
H
H2N
C
C
N H
C
C
N H
C
C
R
R
R
N端
肽单位
肽单位
O
H
H
NH C C N C COOH
H
R
R
C端
肽单位： 主肽链中的重复单位
肽键平面—由于肽键的双键性质，使得形成肽键的N、C原子以及它们相 连的四个原子形成一个平面，这个平面就叫肽键平面。
蛋白质构件分子是氨基酸。 氨基酸是蛋白质的基本单位。 自然界存在的氨基酸有300多 种，但合成蛋白质的氨基酸只 有20种，都属于α-氨基酸，其 中除甘氨酸外，其余都是L-α氨基酸。
蛋白质分子中的20种 氨基酸在DNA分子中有它 们特异的遗传密码相对应，
因而也称编码氨基酸 （Coding amino acid）。 新近发现的硒代半胱氨酸 （SeCys）也是一种编码 氨基酸。
由 两 个 氨 基 酸 组 成 的 肽 称 为 二 肽 ， 由 多 个 氨 基酸组成的肽则称为多肽。因为多肽呈链状， 所以又称为多肽链。组成多肽的氨基酸单元称 为氨基酸残基。
生物化学简明教程第四版课后习题
生物化学简明教程（第四版)课后习题————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期:２蛋白质化学１.用于测定蛋白质多肽链N端、C端的常用方法有哪些？基本原理是什么？解答:（1) N-末端测定法:常采用2,4―二硝基氟苯法、Edman降解法、丹磺酰氯法。
①2,4―二硝基氟苯(DNＦＢ或FＤNB)法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与2,4―二硝基氟苯(2,4―DNFB）反应(Sａngeｒ反应)，生成ＤNP―多肽或DNＰ―蛋白质。
由于ＤNＦB与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此DNP―多肽经酸水解后,只有N―末端氨基酸为黄色DNＰ―氨基酸衍生物,其余的都是游离氨基酸。
②丹磺酰氯(DNS)法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯（DNS―Ｃl)反应生成DＮＳ―多肽或DNS―蛋白质。
由于DＮS与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定,因此DNS―多肽经酸水解后,只有N―末端氨基酸为强烈的荧光物质ＤNＳ―氨基酸，其余的都是游离氨基酸。
③苯异硫氰酸脂(ＰITＣ或Edman降解)法:多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰酸苯酯(PITＣ）反应(Eｄman反应),生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。
在酸性有机溶剂中加热时，N―末端的PTC―氨基酸发生环化，生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来,除去N―末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。
④氨肽酶法：氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶，能从多肽链的N端逐个地向里切。
根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量，按反应时间和残基释放量作动力学曲线，就能知道该蛋白质的N端残基序列。
（2)Ｃ―末端测定法：常采用肼解法、还原法、羧肽酶法。
肼解法：蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解，反应中除C端氨基酸以游离形式存在外,其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。
②还原法:肽链C端氨基酸可用硼氢化锂还原成相应的α―氨基醇。
生物化学简明教程第四版课后答案.
2 蛋白质化学 1．用于测定蛋白质多肽链N端、C端的常用方法有哪些？基本原理是什么？解答：（1） N-末端测定法：常采用―二硝基氟苯法、Edman降解法、丹磺酰氯法。
① ―二硝基氟苯(DNFB或FDNB法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与―二硝基氟苯（―DNFB）反应（Sanger反应），生成DNP―多肽或DNP―蛋白质。
由于DNFB与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此DNP―多肽经酸水解后，只有N―末端氨基酸为黄色DNP―氨基酸衍生物，其余的都是游离氨基酸。
②丹磺酰氯(DNS法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与与丹磺酰氯（DNS―Cl）反应生成DNS―多肽或DNS―蛋白质。
由于DNS与氨基形成的键对酸水解远比肽键稳定，因此DNS―多肽经酸水解后，只有N―末端氨基酸为强烈的荧光物质DNS―氨基酸，其余的都是游离氨基酸。
③苯异硫氰酸脂（PITC或Edman降解）法：多肽或蛋白质的游离末端氨基与异硫氰酸苯酯（PITC）反应（Edman反应），生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白质。
在酸性有机溶剂中加热时，N―末端的PTC―氨基酸发生环化，生成苯乙内酰硫脲的衍生物并从肽链上掉下来，除去N―末端氨基酸后剩下的肽链仍然是完整的。
④氨肽酶法：氨肽酶是一类肽链外切酶或叫外肽酶，能从多肽链的N端逐个地向里切。
根据不同的反应时间测出酶水解释放的氨基酸种类和数量，按反应时间和残基释放量作动力学曲线，就能知道该蛋白质的N端残基序列。
（2）C―末端测定法：常采用肼解法、还原法、羧肽酶法。
肼解法：蛋白质或多肽与无水肼加热发生肼解，反应中除C端氨基酸以游离形式存在外，其他氨基酸都转变为相应的氨基酸酰肼化物。
②还原法：肽链C端氨基酸可用硼氢化锂还原成相应的α―氨基醇。
肽链完全水解后，代表原来C―末端氨基酸的α―氨基醇，可用层析法加以鉴别。
③羧肽酶法：是一类肽链外切酶，专一的从肽链的C―末端开始逐个降解，释放出游离的氨基酸。
被释放的氨基酸数目与种类随反应时间的而变化。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
类、数目
Corey & Pauling
第三节 肽
一、肽的结构
几个重要的概念：肽、肽键、氨基酸 残基、N端C端、多肽、二硫键、
酰氨平面
第四节 蛋白质的结构
（一）、蛋白质的一级结构 定义 举例：胰岛素的一级结构
（二）、空间结构包含的内容 1、蛋白质的二级结构
（1）、定义
（2）、包含内容
α-螺旋结构 β-折叠结构 β-转角结构
（3）、超二级结构： αα、 βαβ、βββ、 β曲折
• 层析法鉴定
• Edman降解法的改进方法--- DNS-Edman降解法 – 用DNS(二甲基萘磺酰氯)测定N端氨基酸 • 原理DNFB法相同 • 但水解后的DNS-氨基酸不需分离，可直接用电泳或层析法 鉴定
• 由于DNS有强烈荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，比 Edman法高几到十几倍
• 可用于微量氨基酸的定量
与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应
* 反应特点 A.为α- NH2的反应 B.氨基酸α- NH2的一个H原子可被烃基取代(卤代烃) C.在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基
苯氨基酸
* 应用：鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸
首先由Sanger应用，确定了胰岛素的一级结构 A.肽分子与DNFB反应，得DNP-肽 B.水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游离氨
*别构现象
第六节 蛋白质的性质与分离、分析技术
一、蛋白质的性质
1、蛋白质的相对分子质量 沉降系数S
2 、蛋白质的两性解离和等电点
等电点isoelectric point：蛋白质分子所带的 正电荷和负电荷相等时溶液的pH值。
pI在有中性盐时有明显变化，因分子中某些 解离基团可与盐的离子如Ca2+、Mg2+、Cl-、 HPO42-结合，观察到的pI在一定程度上决定于介 质中离子的组成。 pI是蛋白质的一个特征常数。
三、根据功能分类
催化蛋白 调节蛋白 结构蛋白 运输蛋白 贮藏蛋白 运动蛋白 防御蛋白 电子传递蛋白
第二节 蛋白质的组成单位-氨基酸
一、氨基酸的结构 1、结构通式
COOH
H C NH2 R
2、构型：L型、D型
二、氨基酸的分类 1、按R基的极性不同来分类
含脂肪烃R基：Gly、Val、Ala
非极性R基氨基酸
（4）、结构域
2、蛋白质的三级结构
举例：鲸肌红蛋白的三级结构
3、蛋白质的四级结构 举例：血红蛋白的四级结构（亚基） 三、维持蛋白质构象的化学键
1、共价键：肽键、二硫键 2、非共价键：氢键、范德华力、
盐键（离子键）、疏水键
第五节 蛋白质结构与功能的关系
一、蛋白质一级结构和功能的关系 1、种属差异 2、分子病 二、蛋白质的空间结构与功能的关系
不同的蛋白质有不同的等电点
等电点是蛋白质的一个特征常数，其等电点 是由可解离基团的种类和数目决定的，而这在不 同的蛋白质中是不同的。
不同蛋白质的酸性氨基酸残基和碱性氨基酸 残基的多少，直接影响蛋白质等电点的大小。
蛋白质在等电点时的溶解度最小，因此不同 蛋白质的等电点不同来沉淀不同的蛋白质，分离 蛋白质混合物。
与亚硝酸的反应 与甲醛的反应 与2，4-二硝基氟苯的反应 与异硫氰酸苯酯的反应
成盐和成脂反应 （2）羧基参加的反应
脱羧反应
（3）氨基和羧基共同参加的反应
两性解离（两性离子、两性解离、等电点）
茚三酮反应
成肽反应
（4）由侧链基团参加的反应
双缩尿反应 黄蛋白反应 乙醛酸反应 坂口反应 酚试剂反应 米伦氏反应
第二章 蛋白质
蛋白质主要元素组成：C、H、O、N、S 及 P、
Fe、Cu、Zn、Mo、I、Se 等微量元素。
蛋白质平均含N量为16％,这是凯氏定 氮法测蛋白质含量的理论依据：
蛋白质含量＝蛋白质含N量×6.25
第一节 蛋白质的分类
一、根据分子形状分类
二、根据分子组成分类
单纯蛋白质（如清蛋白等） 结合蛋白质（如核蛋白等）
O
HN CH C NH CH C
R1
R2
HNΒιβλιοθήκη SNH C ONH2CH
R1
N CS
C NH O CH
R1
O CH C R2
• 肽链（N端氨基酸）与PITC偶联，生成PTC-肽
• 环化断裂：最靠近PTC基的肽键断裂，生成PTC-氨基酸和少
•
一残基的肽链，同时PTC-氨基酸环化生成PTH-氨基酸
• 分离PTH-氨基酸
与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应
• Edman （苯异硫氰酸酯法）：由Edman于1950年 首先提出，为α- NH2的反应，用于N末端分析，又 称Edman降解法。此法的特点是能够不断重复循环， 将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。
NC S
H HN
O
O
CH C NH CH C
R1
R2
H
N C S: O
3、蛋白质的变性
（1）、变性的概念
在变性因素作用下，天然蛋白质一级结构保 持不变，高级结构发生了异常的变化，由天然态 的折迭态变成了变性的伸展态，引起生物功能的 丧失，理化性质的改变的现象。
氨基酸的甲醛滴定
* 反应特点 A.为α- NH2的反应 B.在常温，中性条件，甲醛与α- NH2很快反应，生成羟甲基衍生物，释放氢离子。 * 应用：氨基酸定量分析—甲醛滴定法（间接滴定） A.直接滴定，终点pH过高（12），没有适当指示剂。 B.与甲醛反应，滴定终点在9左右，可用酚酞作指示剂。 C.释放一个氢离子，相当于一个氨基（摩尔比1：1） D.简单快速，一般用于测定蛋白质的水解速度。
Leu、Ile、
含芳香环及杂环R基：Phe、 Trp、Pro
不带电荷的极性R基：Ser、Thr、 Asn、Gln、Tyr、Cys
极性R基氨基酸
带正电荷的极性R基：Lys、His、 Arg
带负电荷的极性R基：Asp、Glu
2、按R基的化学结构不同来分类
脂肪族氨基酸
含一氨基一羧基的 中性氨基酸： 含羟基的氨基酸： 含酰基的氨基酸：
Gly、Ala、Val、Leu、Ile、 Cys、Met
Ser、Thr、 Asn、Gln
含一氨基二羧基的 酸性氨基酸： 含二氨基一羧基的 碱性氨基酸：
Phe、Tyr
杂环族氨基酸： Trp、His、Pro
Asp、Glu Lys、Arg
三、氨基酸的理化性质
1、一般物理性质
2、化学性质
（1） 氨基参加的反应