流式细胞术在免疫学中的应用
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用1. 引言流式细胞术（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生命科学研究和临床诊断的技术。
通过使用流式细胞仪，可以对生物细胞进行快速、精准的多参数分析，为科学家和医生提供了大量的有关细胞的信息。
流式细胞术已成为生物学领域的重要工具，被广泛应用于细胞分析、免疫表型分析、药物筛选等领域。
2. 原理流式细胞术基于细胞在封闭流动系统中单个通过的原理。
其基本流程包括样本制备、细胞标记、细胞检测和数据分析。
2.1 样本制备样本制备是流式细胞术的第一步，它需要将待检测的细胞样本制备成单细胞悬浮液。
这可以通过细胞培养、组织切片或体液等方式获得细胞样本。
重点是要避免细胞凝聚和聚集，以确保细胞在流式细胞仪中单个通过。
2.2 细胞标记细胞标记是流式细胞术的关键步骤之一。
它使用荧光染料或抗体等标记物与目标细胞发生特异性反应。
荧光染料可以通过不同的通道发出不同波长的荧光信号，从而实现多参数分析。
细胞表面标记的抗体通常与荧光素共价结合，以产生可检测的荧光信号。
同时，可以利用染料进行细胞内部器官或分子的标记，以更详细地研究细胞的功能和结构。
2.3 细胞检测细胞检测是流式细胞术中最关键的步骤之一。
它通过流式细胞仪将标记后的细胞悬浮液以单个细胞的形式通过单个检测区域。
这些细胞在流式细胞仪中被激活并产生荧光信号。
光电传感器将捕获和记录这些荧光信号，并将其转化为数字信号，供数据分析使用。
2.4 数据分析数据分析是流式细胞术的最后一步。
通过对获得的荧光信号的数字化处理，可以获得有关细胞的详细信息，包括细胞表面标记物的表达水平、细胞数量统计、细胞大小等信息。
数据分析可以使用专业的流式细胞仪软件完成，也可以使用其他数据分析软件进行更复杂的数据处理。
3. 应用流式细胞术作为一种全面、高通量的细胞分析技术，广泛应用于各个领域。
3.1 免疫学研究流式细胞术在免疫学研究中得到了广泛应用。
通过对免疫细胞的表面标记物进行检测，可以评估免疫细胞亚群的数量、功能和表达水平。
流式细胞术(FCM)的工作原理及其在免疫学上的应用
流式细胞术（FCM）的工作原理及其在免疫学上的应用摘要：流式细胞术(flow cytometry，FCM)是一种可对单细胞进行快速定性、定量分析的新技术。
它借鉴了荧光标记技术、激光技术、单抗技术和计算机技术，具有极高的检测速度与统计精确性，而且从单一细胞可以同时测得多个参数。
随着其分析技术和方法的日臻完善，流式细胞术在临床免疫及科学研究上发挥了非常重要的作用。
本文对流式细胞术的工作原理进行了概括介绍，并对其在免疫学等方面的应用进行了综述，展示了FCM 在免疫学上应用的广阔前景。
关键词：流式细胞术；流式细胞仪；工作原理；免疫学；应用；应用前景流式细胞术(FCM)是70年代发展起来的一种快速对单细胞或微粒定量分析和分选的新技术。
其检测速度之快，统计学精度之高，是其他的方法无可比拟的，可同时从一个细胞中测得多种参数(如DNA、R N A、蛋白质、细胞体积等)进行多参数分析。
流式细胞仪是近代细胞生物学、分子生物学、分子免疫学和单克隆技术、激光技术、电子计算机术等学科高度发展的结晶，在血液学、肿瘤学等学科尤其是在免疫学方面得到广泛应用[1]。
近年来，随着流式细胞免疫学技术的迅速发展，流式细胞术与单克隆抗体技术结合，使细胞表面和细胞内抗原，癌基因蛋白及膜受体的定量检测取得了很大进展。
流式免疫技术克服了普通免疫学方法难以准确定量的不足，形成了流式免疫学独特的科学分支，成为研究细胞免疫学的先进技术之一。
随着科学技术的发展，多种新的荧光探针的不断出现，使FCM技术的应用范围不断扩大，特别是各种各样的荧光探针标记的单克隆抗体和其他蛋白质的出现，为FCM 研究各种组织细胞膜和细胞内抗原、肿瘤性蛋白等开辟了新途径[2]。
1 .流式细胞术与流式细胞仪1.1流式细胞技术：流式细胞技术是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微球，测量其产生的散射光和发射荧光的强度；经染色的细胞或微球在悬液中以单行流过高强度光源的焦点，当每个细胞或微球经过焦点时，发出一束散射光/或荧光；它们经过过滤及光镜系统收集到达一个光电检测器光电倍增管或一个固态装置），光检测器把散射光定量转化成电信号，经数字转换器进行数字化后而成整数，然后进行电子存储，以后数据可以调出显示和进行分析；并可能将感兴趣的细胞进行分选[3]。
流式细胞术的医学应用现状与前景
流式细胞术的医学应用现状与前景流式细胞术是一种用于细胞分析和鉴定的高度精密的技术，通过激光和光学系统对细胞进行高速、高通量的检测和分类。
近年来，随着技术的不断进步和应用范围的扩大，流式细胞术在医学领域的应用越来越广泛，成为了临床医学和基础医学研究的重要工具之一。
本文将就流式细胞术的医学应用现状和未来发展进行详细探讨。
1. 癌症诊断和治疗监测流式细胞术在癌症领域的应用已经成为了常规的操作。
它可以对肿瘤细胞、肿瘤标志物和免疫细胞进行快速鉴定和分析，为临床医学提供了重要的依据。
流式细胞术还可以用于监测肿瘤治疗的疗效，例如监测化疗对肿瘤细胞的杀灭效果或肿瘤标志物的变化情况，为临床医生制定治疗方案提供了重要的参考。
2. 免疫学研究流式细胞术在免疫学研究中有着广泛的应用。
它可以用于检测免疫细胞的表面标志物、细胞因子的表达、细胞亚群的分离和鉴定等。
通过流式细胞术，研究人员可以更加深入地了解免疫细胞的分布和功能，为免疫相关疾病的诊断和治疗提供了重要的科学依据。
3. 感染性疾病诊断在感染性疾病的诊断中，流式细胞术可以用于对血液、体液中的细菌、病毒、真菌等病原体进行快速鉴定和分类。
通过检测免疫细胞的活化状态、细胞因子的表达等指标，可以帮助临床医生更加准确地诊断感染性疾病，制定相应的治疗方案。
4. 干细胞治疗随着干细胞治疗的不断发展，流式细胞术在干细胞的分离、鉴定和纯化中发挥着重要的作用。
通过流式细胞术，可以高效地分离和纯化出具有特定功能的干细胞亚群，为干细胞治疗提供了重要的细胞材料。
二、流式细胞术的医学应用前景1. 单细胞分析技术的发展随着单细胞分析技术的不断进步，流式细胞术在医学领域的应用前景也将更加广阔。
在癌症诊断、干细胞治疗等领域，单细胞分析技术将为研究人员提供更加详细和准确的细胞信息，为个性化治疗提供更加科学的依据。
2. 多参数检测技术的提升随着技术的发展，流式细胞术可以同时检测数十种甚至上百种细胞表面标志物、细胞因子的表达等指标，这为医学诊断和药物研发提供了更加广阔的可能性。
流式细胞术的原理及应用
流式细胞术的原理及应用前言流式细胞术（Flow Cytometry）是一项基于光学技术的分析和分类细胞及其组分的方法。
通过将细胞悬浮液通过流式细胞仪，实现细胞的快速高通量检测和分析。
流式细胞术在生命科学研究、临床诊断、药物研发等领域得到广泛应用。
本文将介绍流式细胞术的基本原理及其主要应用。
1. 原理1.1 细胞悬浮液的注射流式细胞术的第一步是将待检测的细胞悬浮液注入流式细胞仪。
悬浮液中的细胞会依次通过一个细胞注射口，形成细胞流。
1.2 通过激光激发荧光信号流式细胞仪利用激光束激发细胞或标记物的荧光信号。
细胞通常被染色或标记以便准确识别和分析细胞特定的特征。
1.3 接收荧光信号经过激发后，流式细胞仪会收集荧光信号，并通过各种光学和电子元件将其转化为电信号。
1.4 数据分析与可视化流式细胞仪将收集到的数据传输到计算机进行分析和可视化。
根据不同的荧光信号特性，可以得到细胞的表型、数量、活性等信息。
2. 应用流式细胞术在许多领域有着广泛的应用，在以下几个方面得到了突出的成果和应用：2.1 免疫学流式细胞术在免疫学研究中发挥着重要的作用。
通过流式细胞术，可以对免疫细胞进行表型和功能分析，了解免疫细胞的分布、表达特征、活性等信息，为研究免疫系统的机制提供了强有力的工具。
2.2 癌症研究流式细胞术在癌症研究中广泛应用。
通过流式细胞术，可以对癌细胞进行检测、鉴定和分析，了解癌细胞的异质性、增殖速率、转移能力等特征，为癌症的诊断和治疗提供重要信息。
2.3 微生物学研究流式细胞术在微生物学研究中起到关键作用。
通过流式细胞术，可以快速准确地对微生物进行定量分析和分型鉴定，如对细菌、真菌、病毒的检测和鉴别。
2.4 细胞工程与干细胞研究流式细胞术在细胞工程领域和干细胞研究中有着广泛的应用。
可以通过流式细胞术对干细胞进行分选、分析和富集，并对细胞工程的效果进行评估和监测。
2.5 遗传学研究流式细胞术在遗传学研究中也发挥着重要作用。
流式细胞术原理
流式细胞术原理流式细胞术原理概述：1.什么是流式细胞术：流式细胞术是将多种特定条件下的离体细胞（即细胞不在原生质上）置入一个流式细胞仪，并利用各种仪器和仪器注入液体，通过细胞之间物质交换，使其在有限时间内受到良好的刺激、富集和选择，从而在定量和质量上均匀地输出体外驯化后的细胞。
2.流式细胞术应用：（1）表型分析：基因表达分析、蛋白质表型分析、抗原检测以及多种分子诊断测试；（2）免疫学应用：免疫细胞排序（FACS）、免疫细胞鉴定、免疫细胞功能分析；（3）其他研究：血液细胞分离以及人类疾病细胞的示蹤。
3.Flow Cytometry的原理：首先，将活细胞置于流式细胞术仪中，然后，在仪器里运动，在仪器里的运动速度是一个恒定的流动；接着，激光会从另一边投射进去，在有特定滤波器的情况下，激光射线就会倒射，与细胞中存在的染料结合，以此来分析表达位点上的基因和蛋白的表达情况，并且在此过程中会记录下所有的数据；最后，细胞会流经检测仪的椭圆形游标，当单束仪检测到某个细胞时，就会发出一个电信号，这样就可以将其标记出来，最后可以将所有细胞记录下来，便于分析表达位点或者染料反应情况，从而分析细胞的类型及其分布情况。
4.Flow Cytometry技术优势：（1）快速：流式细胞术可以在几秒钟内完成大量细胞的分析；（2）灵敏：细胞可以通过可调的激光强度以及多样的滤波器在流式细胞术下被准确检测；（3）准确：使用低酵母可以对细胞表面抗原以及内在细胞特性有更加准确的测定；（4）方便：整个实验过程只需要较少的样本量即可完成，且可以重复性进行，从而可以进行大量的分析和比较。
综上所述，流式细胞术是目前用于研究表型分析、免疫细胞排序以及细胞表面抗原及细胞内特性检测等多个研究领域，功能强大，分析快速准确，整个实验过程便捷、经济等特点，极大地拓展了体外实验、单细胞研究和诊断测试领域，成为细胞及分子生物学研究的有力工具。
流式细胞术的原理和应用
流式细胞术的原理和应用流式细胞术是一种广泛应用于生物医学领域的先进技术，它通过对细胞的特定特征进行高效、快速的检测和分析，为科学研究和临床诊断提供了强大的工具。
流式细胞术的原理和应用涉及到许多方面，包括仪器原理、标记技术、数据分析等，下面将对这些内容进行详细阐述。
一、流式细胞术的原理流式细胞术的原理基于细胞在流动液体中依次通过激光束后的单个检测区域，通过检测细胞在不同参数下的散射或荧光信号来获取关于细胞数量、大小、形态、表面标记物等信息。
流式细胞术通常包括以下步骤：1. 样本制备：将样本中的细胞进行适当的处理，如酶消化、离心、过滤等，以获得单细胞悬浮液。
2. 细胞标记：利用标记物（如荧光染料、抗体等）对待测细胞进行特异性标记，以便在流式细胞仪中对其进行检测和分析。
3. 流式细胞仪检测：将标记后的细胞悬浮液通过流式细胞仪，激光束依次照射每个细胞，并通过检测散射光和荧光信号来获得相关信息。
4. 数据分析：通过专门的流式细胞数据分析软件对获得的数据进行处理和分析，获取细胞的数量、特征等信息。
二、流式细胞术的应用1. 免疫学研究：在免疫学领域，流式细胞术可用于分析免疫细胞的类型、数量和功能，如淋巴细胞亚群的鉴定、T细胞的活化状态等，为免疫学研究提供了重要的数据支持。
2. 癌症诊断和治疗：流式细胞术可用于检测肿瘤细胞的类型和数量，分析肿瘤细胞的表面标记物，评估肿瘤的侵袭性和预后，指导临床治疗方案的选择和疗效监测。
3. 干细胞研究：流式细胞术可用于干细胞的鉴定和分离，分析干细胞的表面标记物和多能性，为干细胞研究和应用提供重要的技术支持。
4. 病原微生物检测：流式细胞术可用于检测微生物感染，分析微生物的数量、类型和毒力，评估感染的严重程度和治疗效果。
5. 血液分析：流式细胞术可用于分析血液中各类细胞的数量和功能，如白细胞亚群的鉴定、血小板的活化状态等，为临床诊断和治疗提供重要信息。
流式细胞术作为一种高效、敏感的细胞分析技术，在生物医学领域有着广泛的应用前景。
流式细胞术在免疫学中的应用
流式细胞术在免疫学中的应用
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种利用流式细胞仪对细胞或其他生物颗粒进行快速、多参数、定量分析和分选的技术。
在免疫学领域，流式细胞术具有广泛的应用，为免疫学家提供了一种强大的研究工具。
1. 免疫细胞分型和计数：流式细胞术可以通过标记抗体与细胞表面或内部的特定抗原结合，从而对不同类型的免疫细胞进行分类和计数。
这对于监测免疫系统的状态、研究免疫疾病以及评估免疫治疗效果非常重要。
2. 细胞活化和功能分析：流式细胞术可以检测细胞表面标志物的表达水平，从而评估免疫细胞的活化状态和功能。
例如，通过检测 CD69、CD25 等活化标志物的表达，可以研究T 细胞的活化；通过检测细胞因子的表达，可以分析 Th1、Th2、Th17 等不同类型的 T 细胞亚群。
3. 免疫细胞凋亡检测：流式细胞术可以通过 Annexin V/PI 双染色法等技术，检测免疫细胞的凋亡情况。
这对于研究免疫细胞的生存和死亡调节机制、评估药物对免疫细胞的影响以及探讨免疫相关疾病的发病机制具有重要意义。
4. 免疫细胞分选：流式细胞仪可以根据细胞的物理或生物学特性，将目标细胞从混合细胞群体中分离出来。
这一技术在细胞培养、基因转染、单细胞分析等方面具有重要应用。
5. 高通量筛选：流式细胞术可以同时分析大量样本，实现高通量筛选。
这对于药物筛选、抗体发现以及寻找新的免疫治疗靶点等研究具有重要价值。
总之，流式细胞术在免疫学中的应用非常广泛，为深入了解免疫系统的结构和功能、探索免疫相关疾病的发病机制以及开发新型免疫治疗策略提供了重要的技术支持。
流式细胞术临床应用范围
流式细胞术临床应用范围流式细胞术是一种广泛应用于生物医学领域的高端技术，通过流式细胞仪可以对细胞进行高通量单细胞分析。
随着技术的不断创新和发展，流式细胞术在临床应用中的范围也逐渐扩大，为疾病的诊断、治疗和预防提供了重要的支持和帮助。
一、疾病诊断流式细胞术在临床诊断中的应用范围非常广泛，可以用于各种类型的疾病的确诊和分型。
例如，在血液学领域，流式细胞术可以用于白血病和淋巴瘤等血液系统疾病的诊断与鉴别诊断；在免疫学领域，流式细胞术可以用于自身免疫性疾病的诊断和病情监测。
二、免疫细胞治疗随着免疫细胞治疗技术的不断成熟，流式细胞术在该领域的应用也越来越广泛。
通过流式细胞术可以对患者的免疫细胞进行分选、激活和扩增，用于治疗各种肿瘤和疾病。
例如，CAR-T细胞治疗就是基于流式细胞术的原理开发而来，已经在临床上取得了较好的疗效。
三、药物筛选在药物研发领域，流式细胞术被广泛应用于药物的筛选和评估。
通过流式细胞术可以快速、准确地评估药物对细胞的毒性和活性，为药物研发提供重要的数据支持。
同时，流式细胞术还可以用于研究药物的作用机制和药效评价。
四、疾病预防与流行病学研究流式细胞术在疾病预防和流行病学研究中也发挥着重要作用。
通过流式细胞术可以对疫情中的病原体进行快速检测和鉴定，为疾病的早期诊断和防控提供重要的支持。
此外，流式细胞术还可以用于研究疾病的发病机制和流行规律，为疾病的预防和控制提供科学依据。
综上所述，流式细胞术在临床应用中的范围十分广泛，涉及到疾病诊断、治疗、药物研发、疾病预防和流行病学研究等多个领域。
随着技术的不断进步和应用的深化，相信流式细胞术将在未来发挥更加重要的作用，为人类健康事业作出更大的贡献。
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细胞因子的分布及检测方法
主要分为： 1)、细胞内或细胞膜结合细胞因子的检测； 2)、可溶性细胞因子(即体液中的细胞因子)的测定。 细胞因子的检测方法很多,在流式中主要采用的是免疫荧光技术。
细胞内或细胞膜结合细胞因子的检测方法：
1．用淋巴细胞分离液分离PBMC； 2．细胞培养与收集；
3．细胞固定；
一、流式细胞免疫学样品制备的基本原理
统的免疫学方法，其基本原理是细胞上的抗原(或 细胞膜受体)与相关的单克隆抗体结合，形成带有荧光 的抗原抗体复合物，通过流式细胞术测定其特定荧光量。
二、流式免疫学染色方法
流式免疫样品的染色: 1)直接免疫标记法 2)间接免疫标记法
原理：用包被有细胞因子特异性抗体的微球（代替
某细胞因子的抗原）捕获血清、血浆、体液或体外培 养上清液中的细胞因子，再用荧光标记的抗细胞因子 单抗来和被捕获的细胞因子结合，然后通过流式细胞 仪检测微球上荧光强度，用已知的标准品和对照标准 曲线就可得出溶液中的细胞因子浓度。
五、FCM白血病免疫分型的临床意义
• FCM白血病免疫分型是对形态分型的重要补充和深入探讨。 对下列情况意义更大。 1.用形态学.细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。 2.形态学为急淋或急性未分化的白血病,但缺乏特异性淋巴细胞 系列抗原标志。 3.混合性白血病。 4.部分髓性白血病。 5.慢性淋巴细胞白血病。 6.白血病微小残留监测
七、肿瘤基因蛋白产物的免疫标记
流式细胞术通过对肿瘤基因蛋白尤其是具有肿瘤标志物特 性的肿瘤基因蛋白的检测从而对肿瘤的早期诊断具有重大 的意义。
八、FCM在AIDS病检测的应用
FCM通过检测患者静脉血中CD3\CD4\CD8，从而对AIDS疾病进行诊 断。以及监测AlDS病程和治疗过程中患者的免疫状态，预后估计 CD4细胞的百分比。 AIDS病的一个特征的免疫学诊断指标，T淋巴细胞总数减少(正常为 65-81%)，T细胞亚群比值倒置，Th/Ts<1.0(正常为1.3-2.1：1)，尤以 Th细胞下降显著(正常在44-50%)在9－20%左右，而Ts细胞增高(正常 值27－29%)至35-50%，NK细胞减少或活力下降，但B淋巴细胞群则 在正常范围。
流式细胞术在免疫学 中的应用
河北医科大学第四医院 刘亮
流式细胞术在免疫学中的应用
CD14 PE (log) CD45 FITC (log)
流式细胞术简介
• 流式细胞术（Flow Cytometry. FCM） 是20世纪70 年代发 展起来的一种快 速对单细胞 定量分析 和分选的新 技 术, 能定量分析细胞的生物化学成分 及对实验者感兴趣的细胞进行分离。
按CK作用的靶细胞类型分类
1.作用于巨噬细胞的CK 有巨噬细胞趋化因子（MCF）、巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、巨噬 细胞活化因子 （MAF）等。 2.作用于白细胞的CK 有白细胞移动抑制因子（LIF）、 白细胞趋化因子（LCF）、集落刺激因 子（CSF）等。 3.作用于淋巴细胞的CK 如致分裂因子（MF）、转移因子（TF）、白细胞介素（IL）等。 4.作用于其他类型细胞的CK 如淋巴毒素（LT）、破骨细胞活化因子（OSF）、表皮生长因子 （EGF）等。
FCM检测T细胞亚群的参考值
细胞表面抗原
CD3 CD4 CD8 CD56 CD4/CD8
正常人参考范围
61.1%－77.0 % 35.4 % －52.0 % 18.4 % －31.2 % 10.4 % －19.8 % 0.98 －1.94
四、流式细胞术分析细胞因子及其受体
细胞因子为一组蛋白性介质,在机体发育、功能、调控免疫系统和其它 系统等方面起重要作用。细胞因子在免疫反应或炎症过程或其它病理过程 中起重要作用,细胞被激活后产生细胞因子,参与跨膜信息传递。细胞因子 的所有成员被称为细胞因子家族。
CD14 PE (log)
CD45 FITC (log)
R1=单核细胞 R2=淋巴细胞 R3=中性粒细胞
②T淋巴细胞为CD3+
根据T淋巴细胞免疫表型和功能不同可分为 ①T总淋巴细胞 CD3+ ②T辅助性细胞 CD4+/CD3+ ③T抑制/细胞毒性细胞 CD8+/CD3+ ④NK细胞 CD16+CD56+/CD3-
…
谢谢！
六、血小板膜表面受体的标记
血小板活化时其质膜糖蛋白较其静止期发生显著改变，FCM 可 以通过单抗免疫荧光标记(血小板膜糖蛋白Iib .IIIa.CD62.CD63 等)监测血小板功能及活化情况，用于血小板膜糖蛋白异常所致 疾病的诊断，包括先天性或获得性血小板疾病，有利于血栓栓 塞性疾病的诊断和治疗。FCM还可用于评价活化血小板程度在 血栓疾病和血栓前状态发生发展中的作用。
中的T细胞亚群，而B细胞与体液免疫功能有关。目前可通过FCM检测细胞分化抗原的单 克隆抗体技术将淋巴细胞进行免疫分型。 ①淋巴细胞为CD45+表达，颗粒度较低的一群细胞。
③ B淋巴细胞为CD19+ ,CD20+、CD22+等 ④NK细胞为CD16+ CD56+ CD3- ，主要执行免疫监视 功能和杀伤靶细胞作用。
• 缺点有：由于二抗常为多克隆抗体， 非特异性荧光背景较强， 非特异性结合较多，影响了实验结果的分析，因此，在样品 制备的同时应增设阴阳性对照，避免测定结果的假阳性，另 外，由于间接免疫荧光标记步骤较多，增加了细胞的丢失。
三、流式细胞术检测细胞免疫功能
与人体免疫功能有关的主要是淋巴细胞，具有细胞免疫功能细胞主要是淋巴细胞
• 但缺点是在检查每一抗原时都要制备与抗原相关的荧光标记 抗体，不但荧光抗体制备复杂，而且费用昂贵。
2. 间接免疫荧光标记法：
• 取一定量的细胞或细胞核悬液约 1x106 细胞 /ml 加入特异的第一抗 体，待结合反应一定时间后，洗去多余的抗体，加入荧光标记的第 二抗体，形成一种抗原－抗体－抗抗体免疫复合物，通过FCM检测 其荧光。 • 本方法优点是操作较简单，费用较低，只要制备相关的第一抗体， 二抗可较广泛的应用。
1. 直接免疫荧光标记法：
• 该方法是国内外学者利用最多的一项免疫荧光技术 。
• 取一定量的细胞(约1×l06细胞/ml)直接加入与荧光素交联的抗体 进行免疫标记反应，如做双参数标记染色，可把两种标有不同荧 光素的抗体同时加入。
• 本方法的优点是所测定结果准确，操作简便，阴阳性结果易 分析，适用于同一细胞群体多种参量标记的测定。
4．封闭非特异性结合位点； 5．标记单抗或染色。
上述方法是以细胞为基础，是测定细胞内或结 合在细胞膜上的细胞因子，但在生物学效应时 的细胞因子很大一部分是可溶的细胞因子，通 过远端分泌发挥作用。如：分泌到淋巴细胞间 或组织液，血液，胸腹水，这类细胞因子除了 用传统的生物免疫学方法外最近有一种新方法 问世，Cytometric Bead Array（CBA），即流 式液相多重蛋白定量技术，它是用流式细胞仪 通过免疫学方法与一种塑料微球结合检测体液 中的细胞因子，这是流式实验技术的一项新突 破。
细胞因子的分类
细胞因子（cytokine,CK）的分类至今尚未统一，主要的分类法为：
按产生细胞因子的细胞类型分类 1.淋巴因子（lymphokine） 主要由淋巴细胞产生，包括 IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、 IL-10、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IFN-γ、TNF-β、GM-CSF等。 2、单核细胞因子（monokine） 主要由单核/巨噬细胞产生，包括 IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、 IFN-α、G-CSF和 M-CSF等。 3、其他细胞产生的 CK 主要由上皮细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、骨髓及胸腺基质细胞 等产生，如IL-11、IL-8、SCF和IFN-β等。
细胞因子（cytokine,CK） 一般属分泌蛋白，但某些CK除有分泌型外， 还存在跨膜型。后者常是前者的前体，经某些水解酶的作用，可转换 为分泌型CK。TNF-α、TGF-α、M-CSF、SCF及某些生长因子如EGF、 肝素结合生长因子（HBGF）、神经鞘瘤生长因子（schwannomaderived growth factor）、c-erb B2/HER2配体等均属于此类CK。跨膜型 CK主要在局部通过细胞-细胞之间的直接接触发挥作用，介导细胞之 间的黏附、邻近细胞的刺激、细胞毒作用、杀瘤作用等。
按CK的主要功能分类
1、介导天然免疫的CK: 多为单核/巨噬细胞激活产生的单核因子，如 TNF-α、IL-1、IL-6、IL8D等趋化性细胞因子、IFN-α、IFN-β等， 它们参与抗病毒感染、激发抗菌、炎症反应等。 2、 介导特异性免疫的CK: 如IL-2、IL-4、IL-5、TGF-β等，它们介导淋巴细胞激活、增生并分化 成抗原特异性效应细胞。 3、激活炎症细胞的CK: 如IFN-γ、MAF、IL-8、IL-10、IL-12、LT、MIF等，其主要功能是激活 非特异性效应细胞，介导细胞免疫的效应过程。 4. 刺激造血的CK: 如IL-3、CSF（GM-CSF、G-CSF、M-CSF）、EPO、IL-7、SCF等，它们能强 烈刺激造血干细胞增生、分化成各种成熟血细胞，并形成细胞集落，统称为CSF。