草莓脱毒种苗研究进展
草莓茎尖组培脱毒和种苗三级繁育体系的建立
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福 建果树 ・ 第 １８期 总 ３
Ｆｊ ｎＦｕｔ２０． 实用技 术 ｕｉ ｒｉ ０６３・ ａ ｓ
作者简介 ：花秀凤 （ ９ ３一） １７ ，女，农 艺师 。从事蔬菜育种与推广研 究 ５ ６
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福 建果树 ・ 第 １ ８期 总 ３
Ｆ ｊ ｎＦｕｔ ２ ０ ． 实用技术 ｕｉ ｒｉ ０ ６ ３・ ａ ｓ
南 酸 枣 特征 特 性 与栽 培技 术
～
８ 月太阳能高温消毒或移栽前用 甲醛消毒。先把
脱毒研究。经过 ３年的实践 ，建立 了较为完善 的草
莓脱毒苗三级繁育体系 ，产生了显著的社会效益和 经济效益。现总结如下 ：
试管苗从培养室移 到普通室 ，选 晴好 的天气移栽。
将培 养 基 冲 洗 干 净 ，用 １０ ００倍 甲基 托 布 津 浸 泡 ５ｉ ｍｎ后直 接 移 栽 室 外 栽 培 基 质 中 ，浇 透 水 后 盖上 小拱 棚膜保 温 保 湿 。 移栽 的头 ３ ｄ如果 是晴 天 ，中 午前 后须 盖 遮 阳网 以防 光 照 过 强 ，３ 撤 去遮 阳 ｄ后
．
止重新感染病毒 ，在扩大繁殖中必须采取严格的隔
水冲洗 ０ ５ ，然后在 ７ ％酒精 中浸泡 ｌ ｉ，再用 ．ｈ ５ ｍｎ
２ 次氯 酸 钠 消 毒 ｌｍｎ ％ Ｏ ｉ，无 菌 水 冲 洗 ３遍 ，在 超
净工 作 台上逐 层剥 去顶 芽外 面 的［ 片 ，用解 剖刀 切 １ － 卜
离措施 。 ２ １ 土壤 消毒 ．
草 莓茎 尖 组培 脱 毒 和 种 苗 三级 繁 育体 系的建 立
草莓病毒病及其脱毒与检测技术研究进展
江西农业学报2010，22(8)：88～90A ct a A gr i cul t ur ae J i an gxi草莓病毒病及其脱毒与检测技术研究进展肖君泽，黄益鸿，姜放军，邓沛怡，阎珂(湖南生物机电职Ⅱk技术学院，湖南长沙410127)摘要：介绍了在草莓病毒病为害特点及其作用机理。
综述了热处理、茎尖培养、花药培养等草莓脱毒技术和运用指示植物、血清学和分子生物学等检测技术。
介绍了草莓无毒苗的栽培效果。
关键词：草莓；病毒病；脱毒；检测技术；无毒苗中图分类号：$668．4文献标识码：A文章编号：1001—8581(20LO)08—0088-03R esear ch P r ogr e s s i n D e t oxi cat i on and Tes t i ng of St raw berr y V i r us D i s ea seX I A O J哪一ze，H U A N G Y i—ha ng，JI A N G Fan g—j u n，D E N G P e i—yi，Y A N K e(H un an B i o l ogi cal a nd E l ec t r om ec hani cal P o l”e chni c，Chan gsha410127，Chi na)A bs t r act：111j S a rt i cl e i nt r oduced t he i niur i o us charact er is t i cs a nd act ion m ec ha ni sm of s t r aw ber r y vir us di seas c，sum m ar i zed s o m e detoxi cati on t echni ques of s t r aw b er r y vi r us di se ase．suc h签he at—t r ea t m ent，m er i s t em—t i p cul t ur e，ant h er cul t ur e，and de—scr i be d appl yi ng s ev er al t est i ng t echn i ques of st r aw ber r y vi r us di s eas e suc h as i nd i cat ion pl ant s，s er ol ogy and m ol ecul ar bi ology t o en‘s ur e a gre at deal of vi r us—f r ee s eedli ngs br ed f r om vi r us—f r ee m at er nal pl ants．K e y w o r ds：S t r aw ber r y；V i r u s di s eas e；D et oxi cat i on；T es t i ng t ech nol ogy；V i r u s—f r ee s eedl i ng草莓是蔷薇科草莓属宿根性多年生草本水果常绿植物，它具有适应性广、结果早、生长周期短、果实营养丰富、经济价值高的特点，是深受人们喜爱的时令水果之一。
草莓脱毒组培苗特性及栽培技术探讨
２ １ 育 苗 期 生 理 特 性 ．
从育 苗期 观察记 载情 况看 ，脱毒 组培 苗生 长 旺 盛 ，匍匐 茎 出生 早 、数量 多 。特别是 第 １ 原原 种 代 母苗 的匍 匐茎要 比第 ２代原 种母 苗 的匍匐茎 发 生量 更多 ，成 苗率更 高 。与常 规母 苗相 比 ，一 代原 原种 母苗 的匍 匐茎 出生期 早 １ ，二代原 种母 苗匍 匐茎 ２ｄ 的 出生 期 早 ７ ｄ 。一 代 原 原 种 单 株 母 苗 匍 匐 茎 多 ５ ５条 ，匍 匐 茎 苗 多 ４ ． 棵 ，每 ６ ７ ｍ ． ０８ ６ 增 加
条 ，既可保 持 产量 ，更 可 以提 供 新 梢 的有 机 养 分 ， 保持新 梢 正常生 产 。所 以功能 叶 的份 额千 万不 能过
早减 少 ，更 不 能 为 图 嫁 接 操 作 方 便 ，进 行 简 化 嫁 接 ，否 则 将 严 重 影 响 成 活 率 以 及 造 成 新 梢 机 械 损伤 。
式 为 大棚促 成栽 培 。随着种 植年份 的增 加 ，草莓 品 种 的植 株病 毒逐 年加 重 ，种 性退 化 ，影 响草 莓 的产
量 和 品 质 。 因 此 ， 改 良 品 种 和 种 苗 的 提 纯 复 壮
别旺盛 ，营养生 长与生 殖生 长不 协调 ，影 响花芽 分
化和花 朵 生 育 不 良 ，花 药 花 絮 萎 缩 或 推 迟 花 芽 分 化 ，后 遇低 温 侵 袭 不 能 结 果 。 由 于 在 应 用 脱 毒 组培苗 中出现 的这些 不 良现象对 草莓 生产 起不 到实 际效 果 ，也抑制 了草莓 脱 毒组培 苗 的推广 ，为 正确 应用 草莓 脱毒组 培苗 ，特 对草莓 脱毒 组培 苗进行 栽
草莓脱毒种苗繁育技术
草莓脱毒种苗繁育技术你们爱吃草莓吗？那红红的、甜甜的草莓，咬一口满是香甜的果汁，可美味啦。
可是你们知道吗，要种出这么好吃的草莓，有一种很特别的种苗叫草莓脱毒种苗，今天我就来给大家讲讲它的繁育技术。
我们先来说说为什么要有脱毒种苗呢。
就像我们人会生病一样，草莓也会生病。
有些病毒会让草莓长得小小的，结的果实也不好吃。
有个爷爷，他种了一大片草莓，可是他发现那些草莓越来越小，而且很多都长了奇怪的斑点，他以为是自己照顾得不好。
后来才知道是草莓感染了病毒。
那怎么得到脱毒种苗呢？这就像是一场奇妙的旅程。
首先要找到健康的草莓母株，就像在一群小朋友里找到最健康、最活泼的那个小伙伴一样。
这个母株要没有被病毒感染，要长得特别强壮。
比如说，茎要粗粗的，叶子要绿绿的，看起来就充满生机。
然后呢，要把这个母株的一部分，就像从一棵大树上剪下一根小树枝那样，取一小段茎尖。
这个茎尖可神奇了，它就像一个小小的宝藏，里面可能藏着没有病毒的细胞。
把这个茎尖放到一个特别的地方，这个地方就像一个小小的魔法屋，里面有适合它生长的营养物质和环境。
在这个魔法屋里，茎尖会慢慢长大，会长出根和新的叶子。
这时候就像看着一颗小种子慢慢发芽，一点点变成小幼苗，特别有趣。
不过这个过程要很小心，温度啊、光照啊都要刚刚好。
就像我们照顾小宠物一样，冷了不行，热了也不行，光照太强或者太弱都不好。
等小幼苗长大了一些，就可以把它移栽到小盆子里啦。
这就像给小朋友换了一个更大的房间，可以让它有更多的空间生长。
这个小盆子里面的土也要很有营养，就像我们吃的饭要营养丰富一样。
慢慢地，这些小幼苗会长成大的草莓苗，这个时候它们就可以被种到田地里啦。
种到田地里之后，它们会长出好多好多的草莓。
这些草莓因为是脱毒种苗长出来的，所以会长得又大又甜。
草莓栽培技术(十一)草莓脱毒苗繁育
草莓栽培技术（十一）草莓脱毒苗繁育草莓组培苗在植物学性状、果实性状、丰产性及抗病性等方面均优于自繁苗，可比自繁苗增产30%以上。
目前，草莓茎尖组培脱毒技术已经较为成熟，在草莓生产上应推广采用工序简单、易掌握、生产成本低的组织培养手段进行草莓组培脱毒苗的规模化生产。
现将该技术总结如下。
01、匍匐茎的选择与消毒3－5月从生长健壮、无病虫害、具有品种典型性状的植株上采集处于抽生盛期的草莓匍匐茎，将匍匐茎用纱布包好，用流水冲洗30min以上，然后用70%酒精消毒30s，再用0.1%升汞消毒6～8min，最后用无菌水漂洗干净并用灭菌滤纸吸干水分，包好后放置于超净工作台上待用。
02、茎尖脱毒在超净工作台解剖镜下剥取0.2mm大小的茎尖生长点，切下后立即放置于诱导培养基上（MS培养基＋0.3～0.5mg/L 6-BA＋0.05mg/L GA＋0.01mg/L IBA＋3%蔗糖30g，pH值5.8）。
将接好的苗放置于培养室中进行培养（温度为25±1℃，每天光照14h，光照强度2000lx），经过2～3个月即可长成。
03、病毒检测待组培瓶苗长至2～4cm高时，切取叶片提取RNA或DNA，利用PCR法检测病毒。
去除带病毒的幼苗，将无病毒幼苗继续利用诱导培养基进行培养或扩繁，在定植前15～20d用3/4MS培养基进行生根培养，当幼苗长出3～5条根时进行驯化移栽。
04、定植苗床的准备使用无土育苗基质，要求基质理化性质稳定，具有良好的保水保肥能力，透气性好，pH值5.5～6.5。
多次使用过的基质必须灭菌。
一般将2～3种基质混合后使用，如将草炭、蛭石按体积比2∶1或将草炭、珍珠岩按体积比3∶1混合后使用，并用普力克1000倍液浇透，以杀死基质中残存的病原菌。
在苗床上铺设加温线，然后将基质铺为10cm厚。
用竹竿或钢管做好小拱棚，除用于保温保湿外，还可搭设遮阳网用于遮阳。
在小拱棚外的塑料大棚或温室两边加上防虫网，以防止蚜虫和叶蝉等病毒介体传毒。
草莓茎尖脱毒繁育体系研究进展
草莓茎尖脱毒繁育体系研究进展作者：马秀明缪军王俊峰韩伟孙杨来源：《安徽农业科学》2021年第24期摘要草莓茎尖脱毒技术能够从生产上解决草莓因长期无性繁殖，易受到多种病毒的侵染，从而导致植株长势变弱、果实品质劣化、产量下降等品种退化现象。
从草莓茎尖消毒、茎尖选取、培养基的筛选、多种脱毒方式结合、病毒检测、驯化移栽、种苗繁育等方面综述了草莓茎尖脱毒繁育体系的研究进展，以期为草莓茎尖脱毒繁育体系的建立提供参考。
关键词草莓;茎尖脱毒;种苗繁育中图分类号 S668.4 文献标识码 A文章编号 0517-6611（2021）24-0018-06doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.24.004Research Progress on Stem Apex Detoxification and Breeding System of StrawberryMA Xiu-ming，MIAO Jun，WANG Jun-feng et al （Institute of Vegetables，Shandong Academy of Agricultural Sciences，Shandong Provincial Key Laboratory of Vegetable Biology，Shandong Branch of National Center for Vegetable Improvement，Jinan，Shandong 250100）Abstract The technology of stem apex detoxification of strawberry can solve problems that finally results in the weakening of plant growth，deterioration of fruit quality and decline of yield，which due to long-term asexual reproduction that easily infected by a variety of viruses.This paper summarized the research progress on stem apex detoxification and breeding system of strawberry from the disinfection of stem apex，selection of stem apex，screening of culture medium，virus detection，combination of multiple detoxification methods，domestication and transplanting，seedling breeding and other aspects，in order to provide reference for the establishment of stem apex detoxification and breeding system of strawberry.Key words Strawberry;Stem apex detoxification;Seedling breeding基金项目 2021年度山东省农业科学院农业科技创新工程（CXGC2021A28）。
草莓病毒病及脱毒技术研究进展
草莓病毒病及脱毒技术研究进展
董佳鑫;刘鹏丽;吴景莹;张抗萍;王璐;张晶晶
【期刊名称】《现代园艺》
【年(卷),期】2024(47)9
【摘要】草莓()是一种多年生草本植物。
由于草莓具有栽培方式简单、生长周期短、产量高、休眠期短、繁殖速度快等特点,成为我国水果产业中发展最快的新兴果种。
但是,草莓无性繁殖方式容易导致病毒积累,产生品种退化现象,造成品质降低和产量下降,影响了商品价值和经济价值。
近年来,通过对草莓病毒的检测和试验,草莓脱毒技术被不断应用到生产当中,通过脱毒处理的草莓苗表现出长势旺盛、抗病性强、
亩产量高等特点,具有良好的栽培前景。
本研究综述了4种草莓病毒、4种草莓脱
毒技术和脱毒苗栽培繁育的内容,有助于掌握草莓病毒和草莓脱毒技术研究最新进展,为草莓脱毒技术进一步发展提供理论参考。
【总页数】3页(P75-77)
【作者】董佳鑫;刘鹏丽;吴景莹;张抗萍;王璐;张晶晶
【作者单位】太原学院
【正文语种】中文
【中图分类】S66
【相关文献】
1.草莓病毒病及其脱毒与检测技术研究进展
2.草莓病毒病研究现状、脱毒技术及病毒鉴定研究进展
3.草莓病毒病、脱毒技术及病毒检测研究进展
4.草莓病毒病及脱毒技术研究现状
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草莓生物技术研究领域及进展
仅２ ％。所以花 药培养 脱毒 苗有较 大的生 产价值 。但 从培 ０
养时 间和增殖率 来看 ，花药培 养均不 及茎 尖培养 ，若 以增 殖快繁为 目的仍 以茎尖培 养较 好。
何欢 乐等恻 现草莓 茎尖的成 活率与 剥取 的茎尖大 小有 关 ， 发 在 相同的 培养基上 ，剥 取茎尖越 大 ，成 活率越 高 ，通 常茎
对丰 富和 繁荣水 果 市场 、发展 食 品工业 均 有深 远 的意 义 。
近 年来 ，现代生物 技术广 泛应用 在草莓 育种 研究 中。如 已 开展 了茎尖脱毒培 养 、花 药脱毒 培养 、离体 胚培 养 、原 生 质体培 养与融合等 方面 的研究 ，在生物 育种 方面 的研究 及 分 子水平方面研究也取得 了突破性 进展。
中国园艺文摘 ２ 年第１期 ０１ １ ０
草莓生物技术研究领域及进展
韦持 章 王文林 邱文武
（ 广西南亚热 带农业科 学研 究所 ，广西 龙 州 ５２１） ５４５
摘 要 ：综述草莓 茎尖脱毒 培 养、花药脱毒培 养、快速繁殖等 方 面的脱毒快繁培 养研 究，生物 育种 方 面的单倍体
行这方面的研究 。侯喜林 究不 同品种和激素对草莓花药培 研
养的影响，发现不同品种草莓花药培养可经愈伤组织直接形成 不定芽 ，所获得的再 生植株有９ ％脱 除草莓病毒。杨振英等目 ４ 以 ‘ 美香莎 ’ ‘ 、 鬼怒甘 ’ ‘ 、 五丰二号 ’ ‘ 、 幸香 ’ ‘ 、 西班牙 １号 ’ ‘ １ 、 吐德拉 ’６ － ４ 草莓品种采用花药大规模培养无菌病毒
尖 取材在０ ５ ｍｍ以上成 活率可达 ９ ％。覃兰 英［ ． ８ ４ １ 认为 用于 快繁可 取较大茎尖 ，若用于脱毒苗则应 小于０ ５ Ｉｎ 。苟桂 ． ｎ ｌ
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草莓组脱毒种苗培育研究进展马宗新阜阳市农业科学院摘要：本文综述了2006年-2013年最近几年来国内草莓脱毒种苗研究进展，提出了草莓脱毒种苗下一步研究的发展对策。
引言：草莓（Fragaria x ananassa ）是蔷薇科（Rosaceae）草莓属的浆果，为多年生草本植物，世界各地均有栽培。
自20世纪30年代以来，世界上很多国家都开展了草莓病毒病的研究，弄清了病毒病的发生和为害状况,实现了草莓无病毒栽培,获得了良好的经济效果。
我国是草莓的原产地之一，近年来，我国引进了一大批优良的草莓品种，生产发展很快，但草莓病毒病也随之加重。
[2、4、11、13、12]我国也曾对草莓主载区的病毒种类及其危害情况进行了调查研究。
[11,12]但由于我国起步较晚，投入力量少，就全国而言，仍处于种类不清，情况不明之中。
目前，世界各地已报道的草莓病毒病大约有30多种。
[12]其中对生产造成严重损失的病毒病害主要由草莓斑驳病毒(strawberry mottle virus ,SMV)、草莓皱缩病毒(strawberry crinkle virus , SCV)、草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus，SVBV)、草莓轻型黄边病毒( strawberry mild yellow edge virus ,SMYEV)等4种病毒引起。
[9,12]草莓病毒的发生具有特殊的复杂性，大部分草莓病毒都具有潜伏特性，在栽培种草莓上很少产生明显的症状，草莓病毒侵染的另一特点是，一些主要病毒常常是复合侵染，因此，对草莓病毒病的研究和防治、病毒鉴定和检验都需要特殊的方法。
草莓感染病毒后，通常造成品种退化。
而脱病毒培养是目前获得无毒苗的方式之一。
[2,4,11,12]我国在此方面研究较晚，始于80年代，北京农林科学院、中国农业科学院、沈阳农业大学、八一农学院等单位较早开展了利用草莓茎尖分生组织培养、花药组织培养、热处理等方法进行草莓脱毒研究工作，也获得一些脱毒苗，但均投有形成产业化。
直至90年代，我国才先后有几个单位建立起产业化草莓脱毒研究及生产技术体系。
1、草莓病毒：草莓病毒几乎不是单独发生的，经常是几个病毒同时存在，一起造成更为严重的产量下降和果实品质降低。
草莓病毒通过蚜虫、线虫以及其他介体传播。
蚜虫是最重要的传播媒介。
主要蚜虫传播病毒为草莓皱缩病毒（SCV）、草莓斑驳病毒（SMV）、草莓镶脉病毒（SVBV）、以及草莓轻型黄边病毒（SMYEV）他们常常造成包括果实在内的植株器官的畸形，这些病毒常复合发生。
在我国草莓生产区，已调查和鉴定的草莓病毒病主要有4种：草莓斑驳病毒病、草莓轻型黄边病毒病、草莓皱缩病毒病和草莓镶脉病毒病。
目前，在生产上，草莓带病毒株率平均为80.2％，单种病毒侵染株率为41.6％，2种以上病毒复合侵染株率为38.6％。
[2,4,9,11,12,13]袁芳[12]比较了草莓主栽品种丰香携带斑驳病毒(SMoV)、脱毒微繁殖苗及携带斑驳病毒匍匐茎苗的田间生长情况和抽生匍匐茎能力。
在整个生长期,丰香草莓的株高和冠径都表现为:携带斑驳病毒匍匐茎苗>脱毒微繁殖苗>携带斑驳病毒微繁殖苗。
草莓苗平均单株抽生匍匐茎的数量,2种微繁殖苗是匍匐茎苗的2～3倍,而微繁殖苗之间没有明显差异。
感染斑驳病毒导致草莓植株生长势明显下降。
与常规的分株繁殖方法相比,采用微繁殖方法繁育的草莓苗,生长势较弱,但匍匐茎抽生能力明显增强。
表1、草莓病毒种类2、脱毒技术草莓病毒一旦感染植株后，在自然条件下永远保存在植株中，无法消除。
只有通过特殊处理，方可脱除病毒。
刘健认为草莓因病毒感染造成种性退化一般减产30%-80%。
用化学药物对病毒病进行防治效果甚微,故生产上多采用无病毒种苗来控制病毒病的蔓延。
[2,4,5,11,13,19,22]2.1草莓热处理热处理脱毒是最早应用于培育各种营养繁殖植物无病毒母株的有效方法。
[6,7,10,15]通常应用的有温汤浸种和高温蒸汽处理，温汤浸种对植株损害较大，一般采用高温空气消毒处理。
一般用盆栽植株在高温处理箱中。
多数研究者认为：在一定的高温条件下，能使一些病毒钝化。
取下在热处理期间长出的新芽进行实生嫁接，以及对土壤进行消毒，或进行组织培养，得到无病毒的原种植株。
热处理采用恒温或变温的热空气处理带病母株，其脱毒效果较好。
草莓采用37—38℃，恒温或35—38℃变温处理能有效地减少热处理中植株的死亡。
热处理中相对湿度宜保持在70％一80％，在光照5000 lx下处理16 h，处理后取其匍匐茎繁殖后代。
热处理脱毒根据病毒的抗热性及其种类，选择35-40℃温箱中处理，同时为防止长期高温下草莓死亡，还应对根部进行降温处理。
因此，热处理法往往与茎尖组培相结合。
将茎尖组织培养法与热处理法结合起来应用于草莓脱毒研究，可显著提高脱毒效果。
田燕[39]在热处理过程中将盆栽小苗2个月后或未经脱毒的试管苗置于恒温箱中,在35～40℃条件下变温处理4～5周。
白天保持40℃处理5h,夜间在35℃下处理6h。
湿度维持在50%～70%,盆栽苗土壤水分保持在草莓苗生长不萎蔫为宜。
刘健[10]通过对不同温度水浴处理后的草莓匍匐茎进行茎尖脱毒培养,并用小叶嫁接法和电镜检测法进行病毒检测,筛选出效果最好的草莓脱毒热处理温度。
经40℃高温处理匍匐茎后再剥取茎尖,得到的试管苗能达到100%脱毒率。
张志宏[22]认为热处理能够脱除草莓试管苗中的SMoV,但不能脱除SMYEV,39℃恒温处理30 d,SMoV脱除率达到63．0％。
2.2茎尖培养脱毒技术茎尖培养脱毒是在超净工作台上，利用解剖镜切取茎尖生长点接种于最佳诱导培养基上，在培养室进行培养的方法。
茎尖培养脱毒效果与茎尖大小密切相关，因为植株分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，这种传递速度赶不上细胞分裂和活跃生长速度，所以生长点带病毒数量微小。
法国学者Georgls Morel最早应用茎尖培养作为无性系繁殖手段，同时首先证明已感染病毒的植株可以通过茎尖分生组织培养恢复成无病毒植株。
Morel首先通过茎尖分生组织培养获得了大丽菊无病毒植，同时建立了茎尖培养脱毒的技术体系。
至今众多研究者采用茎尖培养脱毒方法已相继获得烟草、马铃薯、草莓、香蕉、葡萄等的无病毒植株。
1962年Miller1o首先用茎尖培养方法脱除了草莓SMYEV、SCrV、SVBV病毒。
Muu也用此法获得脱除掉SMYEV、SMoV的植株，并指出SMYEV是最难脱除掉的病毒。
庄子孝一认为以获得无病毒苗为目的的茎尖培养，以0.3-0.5 mm、包含1枚叶原基的茎尖材料为好。
我国在草莓茎尖脱毒方面也进行了研究，其中括研究茎尖大小对脱毒效果的影响、不同培养条件及不同基因型对培养效果的影响。
顾地周[7]获得可用于生产的无病毒草莓种苗。
在试管内对深山草莓花瓣愈伤组织分化产生的优良变异新品种的试管苗进行匍匐茎诱导,并采取试管内高温处理结合茎尖培养对该品种进行脱毒研究,利用试管内高温处理结合茎尖脱毒的方法可以完全脱除草莓病毒,从而建立了草莓脱毒体系。
张志宏认[22]为0．2 mm茎尖和0．5 mm茎尖都能够有效地脱除SMoV和SMYEV。
综合考虑0．5 mm茎尖培养是适宜的草莓病毒脱除方法。
冷春玲[2]玲剥离培养0.3mm的草莓微茎尖,脱毒率可达100%。
最佳芽诱导培养基为MS+BA1.0mg/L;最佳继代培养基为MS+BA0.5mg/L;最佳生根培养基为MS+BA0.1mg/L+活性碳1.0g/L。
许杰 [5]利用茎尖剥离技术剥离出微茎尖,将微茎尖在培养基中诱导丛生芽,将丛生芽在生根培养基中诱导生根,并进行病毒检测,去除草莓的病毒病;经田间试验,脱毒草莓增产效果明显,并能保持品种的遗传特性。
孙崇波[34]不同大小茎尖脱除病毒效果不同:0.2mm茎尖可完全脱除3种病毒,但成苗率低;0.5mm茎尖可有效脱除SMoV和SVBV,但对SMYEV脱除不彻底;0.5mm茎尖成苗率明显高于0.2mm茎尖,但较难脱除SMYEV。
2.3花药培养脱毒技术大泽胜次在通过花药培养获得八倍体再生植株时发现再生植株为脱毒植株，脱毒率达100％。
众多研究者认为花药培养作为脱毒手段，可以省去病毒鉴定的程序。
因此，花药培养已成为草莓培养无毒苗的重要方法。
[1,8,14,16,17,37]谷延泽[37]认为草莓传统繁殖易受病毒感染,使产量大幅度下降。
而利用组织培养中的花药培养技术使其脱毒率可达100%。
李强峰[14]通过对红太后草莓新品种进行花药培养,筛选出花药培养过程中各阶段适宜的培养基,并成功对试管苗进行炼苗、移栽,获得红太后草莓品种脱毒苗。
马洪爱[17]以草莓新品种"卡麦罗莎"的花药为供试材料,系统地筛选了花药脱毒苗培养过程中各阶段的最适培养基,使愈伤组织诱导率达81%,不定芽分化率达30.8%,丛生芽平均增殖系数达4.46,形成了一套较为完整的花药脱毒培养"原原种"苗的技术体系。
孟志卿[16]发现单核期花药的诱导率高达78.9%,单核靠边期或接近双核期花药的诱导率只有21.1%。
晁慧娟[1]以花粉发育处于单核靠边期的‘甜查理’草莓花蕾为外植体进行花药脱毒培养。
发现预冷处理72 h是最适合的花药低温处理时间。
花药愈伤组织出愈率为70.9%;不定芽分化率为38.0%。
肖君泽[8-9]研究章姬草莓脱毒苗的技术，发现外植体宜选择处于单核期的花粉(其花蕾直径在4 mm左右,花瓣尚未开裂,花药直径约1 mm且呈淡黄色)孙崇波[34]发现花药愈伤组织再生苗途径对3种草莓病毒,即斑驳病毒(strawberry mottle virus,SMoV)、轻型黄边病毒(strawberry mild-yellow edge virus,SMYEV)和镶脉病毒(strawberry vein-band virus,SVBV)的脱除率为100%。
因此孙崇波认为对花药再生频率较高的草莓基因型(如红颊)可以采用花药愈伤组织再生途径进行病毒脱除,而对于花药再生困难的基因型可以考虑选用茎尖分生组织途径获取脱毒苗。
2.4超低温脱毒技术超低温脱毒技术是近年来发展起来的一项用于多种植物高效率脱毒的理想方法。
其原理是在特殊保护剂的保护下，利用-196℃超低温条件，破坏含有病毒的植物成熟细胞，而不含病毒的生长点细胞因为有保护剂的保护，可以在一定的条件下恢复生长，从而达到大批量快速脱毒的目的。
目前，超低温脱毒技术刚刚起步，在草莓应用尚少。
[27]蔡斌华[27]以草莓品种明宝为材料,取茎尖做初代培养,继代扩繁5次后,取2mm左右的茎尖,利用玻璃化超低温技术对SMYEV进行脱除,并利用结合内标的多重RT-PCR技术对再生植株进行病毒检测。