微生物的形态和结构观察
微生物实验报告：微生物形态观察
实验一微生物形态观察一、实验目的1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用；2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构；3．练习手绘微生物图片。
二、实验原理1．细菌基本形态细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。
细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。
球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。
杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多的。
螺旋菌分为弧菌和螺菌。
除此之外，还有一些特殊形态的细菌。
2．细菌特殊结构细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。
鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。
菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状体，与细菌吸附或性结合有关。
芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。
3．真菌的结构特征菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。
可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。
根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。
为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。
比如吸器、假根、子实体。
4．放线菌的结构特征放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。
链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状态。
当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。
微生物学实验一 微生物制片及形态观察
实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。
显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。
光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。
图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。
焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。
油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。
目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。
聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。
聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。
显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。
一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。
有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。
2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。
所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。
要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。
显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。
3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。
微生物常规鉴定技术(带图片)
微生物常规鉴定技术一、形态结构和培养特性观察１、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。
２、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。
不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。
，以此可以对不同微生物加以区别鉴定。
因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要容。
１）细菌的培养特征包括以下容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。
在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。
半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。
２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。
液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。
霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。
霉菌的基菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基菌丝褐色。
霉菌在固体培养表面形成絮状、绒毛状和蜘蛛网状菌落。
革兰氏染色:革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
区分四大类微生物的方法
区分四大类微生物的方法微生物是一种微小的生物体，可以只能通过显微镜观察到。
它们广泛存在于自然界的各个角落，包括土壤、水、空气、动植物体内等。
根据其形态、生态和生理特征，可以将微生物分为细菌、真菌、病毒和原生动物。
本文将对这四大类微生物的方法进行详细介绍。
一、细菌：细菌是一类单细胞微生物，形态各异，可以是球形、杆状、螺旋形等。
它们广泛存在于土壤、水、空气、动植物体内等环境中。
区分细菌的方法主要包括：形态观察和染色；生长特性观察；代谢特性检测；分子生物学方法。
1.形态观察和染色：通过显微镜观察细菌的形态特征，如球菌的球形、链球菌的成串排列、杆菌的杆状等。
同时可以使用染色方法，如革兰氏染色和抗酸染色，以区分细菌的壁和膜结构。
2.生长特性观察：通过培养细菌在不同培养基和条件下的生长特性，如菌落形状、颜色等来识别细菌的种类。
3.代谢特性检测：通过检测细菌的代谢产物，如酶的产生、底物利用等，可以判断细菌的代谢特性，并进一步鉴定其种属。
4.分子生物学方法：如PCR扩增、16SrRNA测序等，可以直接检测细菌的遗传物质，进行细菌种属的快速鉴定。
二、真菌：真菌是一类多细胞微生物，主要由菌丝组成，营养吸收方式独特。
区分真菌的方法包括：菌丝结构观察；菌落形态观察；孢子特征观察；分子生物学方法。
1.菌丝结构观察：通过显微镜观察真菌的菌丝形态特征，如菌丝的直径、分支情况、颜色等，来初步判断真菌的种类。
2.菌落形态观察：通过培养真菌在琼脂培养基上形成的菌落形态特征，如菌落的形状、边缘、颜色等，可以进一步确定真菌的种属。
3.孢子特征观察：通过显微镜观察真菌的孢子形态特征，包括孢子的大小、形状、颜色等，可以鉴定真菌的亚属和种属。
4.分子生物学方法：如ITS序列测定、18SrDNA测定等，可以通过检测真菌的遗传物质，进行真菌种属的快速鉴定。
三、病毒：病毒是一类非细胞的微生物，需要寄生于宿主细胞内进行复制。
区分病毒的方法包括：电镜观察；培养宿主细胞；生物化学方法；核酸检测。
细菌的形态结构观察实验报告
细菌的形态结构观察实验报告实验五微生物菌落形态观察实验五微生物菌落形态观察1、本次实验的目的和要求（1）观察细菌、酵母菌、霉菌三大类微生物具体菌落的形态特征。
（2）总结三类微生物菌落的一般特征并能识别。
（特征描述：形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质地等。
）2、实验内容或原理菌落：单个菌体在固体平面培养基上生长繁殖形成的肉眼可见的群体。
区分和识别各类微生物可从菌落形态（群体形态）和细胞形态（个体形态）两方面进行，菌落形态是无数细胞形态的集中反映，因此每一大类微生物都有其一定的菌落特征，可通过这些特征差异区分和识别。
特征描述：形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质地等。
细菌菌落特征：凝胶状、表面较光滑、湿润、与培养基结合不紧密，易挑取，正反颜色一致。
酵母菌菌落特征（与细菌相似) ：比细菌大而厚，不透明，表面光滑、湿润、粘稠，易用针挑起。
多呈乳白色，少数呈红色。
霉菌的菌落特征：比细菌菌落大，由菌丝组成疏松的绒毛状、絮状或蜘蛛网状，有的无固定大小，延至整个培养基中，产色素，使菌落显色。
3、需用的仪器和试剂（1）培养基：PDA培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、YEPD 培养基（2）菌落观察：（a）霉菌：黑曲霉、黑根霉、青霉、犁头霉、毛霉（b）酵母菌：酿酒酵母菌（c）细菌：大肠杆菌4、实验步骤1.细菌菌落形态观察包括：菌落大小、颜色、形状（圆形、不规则、假根形）、边缘（整齐光滑、叶状、波浪状、锯齿状、丝状）、隆起（扁平、低凸起、高凸起）、透明度（透明、半透明、不透明）、光泽（金属光泽、油脂性光泽）、质地（油脂状、膜状、粘稠状）、表面状态（光滑、褶皱、颗粒状、龟裂状）等。
2.大多数酵母菌的菌落与细菌相似，呈圆形，湿润有粘性，不透明，表面光滑，有油脂光泽。
多数为白色或乳白色，少数为红色，培养时间长了，颜色会变暗。
与培养基结合不紧，易被挑起。
质地粘稠，边缘皱褶状。
3.霉菌由分枝状菌丝组成，菌丝粗而长，形成菌落疏松，菌丝有绒毛状、棉絮状、蜘蛛网状，菌落很大是细菌的几十倍，表面蔓延，有多种颜色，菌落正反面颜色多有不同。
形态结构观察实验报告
一、实验目的通过本次实验，观察并记录不同生物的形态结构特征，加深对生物形态学知识的理解，提高观察和记录实验结果的能力。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌水、刀片、镊子、植物叶片、动物组织、微生物培养皿、食用菌菌丝体、子实体等。
2. 实验仪器：光学显微镜、解剖镜、放大镜、植物学实验台、培养箱、酒精灯、火柴等。
三、实验方法1. 观察植物叶片（1）用刀片将植物叶片切成薄片，放入载玻片中央。
（2）滴加无菌水，盖上盖玻片。
（3）用显微镜观察叶片的表皮、叶肉、叶脉等结构。
2. 观察动物组织（1）取动物组织一小块，放入载玻片中央。
（2）滴加无菌水，盖上盖玻片。
（3）用显微镜观察动物组织的细胞结构、组织结构等。
3. 观察微生物（1）将微生物培养皿置于显微镜下，观察菌落形态。
（2）用无菌镊子取一小块菌落，放入载玻片中央。
（3）滴加无菌水，盖上盖玻片。
（4）用显微镜观察微生物的细胞形态、菌落结构等。
4. 观察食用菌菌丝体与子实体（1）观察食用菌菌丝体的形态、颜色、生长速度等。
（2）观察食用菌子实体的形态特征，如菌盖、菌柄、菌褶等。
（3）观察食用菌的锁状联合现象。
四、实验结果与分析1. 植物叶片观察结果显示，植物叶片由表皮、叶肉、叶脉组成。
表皮具有保护作用，叶肉负责光合作用，叶脉负责运输水分和养分。
2. 动物组织观察结果显示，动物组织由细胞、组织、器官组成。
细胞具有细胞膜、细胞质、细胞核等结构，组织具有相似结构和功能，器官由多个组织构成，具有特定的生理功能。
3. 微生物观察结果显示，微生物具有多种形态，如球形、杆形、螺旋形等。
菌落形态各异，如绒毛状、絮状、颗粒状等。
4. 食用菌观察结果显示，食用菌菌丝体呈白色、细长、有分支，生长速度快。
子实体具有菌盖、菌柄、菌褶等结构，颜色多样，形态各异。
五、实验总结通过本次实验，我们观察了植物叶片、动物组织、微生物、食用菌等生物的形态结构特征，加深了对生物形态学知识的理解。
实验一细菌形态与结构观察
眼睛在侧方 注视物镜 防止载玻片 碎裂 10
观察后注意 1.玻片放入消毒缸
顺镜头直 径方向擦， 2.擦拭镜头：限取1张擦镜纸 不要旋转 和来回擦
把油镜转离光轴
用二甲苯滴湿的擦镜纸擦1次
3.显微镜载物台下降到最低 ，镜头 呈八字形、罩上防尘罩、放回原处
11
【结果】
葡萄球菌（紫色）——革兰阳性菌（G+）
微镜、香柏油(镜油)、拭镜纸等。
6
【步骤】 涂片
载玻片中央加半滴生理盐水 分别将二种细菌涂布于盐水中
干燥（用试管夹夹住玻片 ）
自然干燥或于火焰高处烘干 固定
将标本以钟表摆动的速度通过火焰三次
7
【步骤】 染色：
初染：结晶紫，1分钟，水洗 媒染：碘液，1分钟，水洗 脱色：95%酒精，0.5~1分钟，水洗
实验室规则
1.实验材料为病原微生物，具有感染性
1）穿好白大衣，除必要的书籍及
文具外，其他个人用品不得带入实验 室；白大衣不能穿或带进食堂！ 2）实验室禁止饮食，未经许可严 禁将实验材料带出实验室
1
2.爱护实验器材，实验用过的器材放置
指定位置；实验示教玻片标本损坏需 赔偿
3.实验完毕后，整理实验台，值日生负
大肠杆菌
霍乱弧菌
4
一、细菌的形态和特殊结构观察
（二）细菌的特殊结构（示教）
1.荚膜
2.芽孢
3.鞭毛
肺炎链球菌
破伤风梭菌
伤寒沙门菌
5
二、革兰染色法 （操作） 【材料】 1.葡萄球菌、大肠杆菌培养物
2.革兰染色液：结晶紫、卢戈氏碘液、
95％乙醇、石炭酸复红。
3.生理盐水、二甲苯、载玻片、试管夹、 接种环、酒精灯、火柴、消毒缸、显
真核微生物的构造和形态观察：形态构造、繁殖方式和生活史、菌落特征、常见霉菌
真核微生物的构造和形态观察
项目二 霉菌的构造和形态观察
一、霉菌的形态和结构
1 霉菌的概述 ➢ 霉菌（mold）和酵母同属于真菌； ➢ 为丝状真菌的统称，凡是在营养基质上能形成绒毛状、网状或絮状菌丝体的 真菌（除少数外），统称为霉菌（会引起物品霉变的真菌）； ➢ 按Smith分类系统，霉菌分属于真菌界的藻状菌纲 、子囊菌纲和半知菌类。
四、常见霉菌
２
常用霉菌－根霉
➢分布：分布于土壤、空气中，常见于淀粉食品上，可引起霉腐变质和水果、蔬菜的腐 烂，接合菌纲毛霉目； ➢形态特征：菌丝为白色、无隔多核的单细胞真菌，多呈絮状，主要区别在于根霉有假 根和匍匐枝，与假根相对处向上生出孢囊梗，孢子囊梗与囊轴相连处有囊托，无囊领； ➢繁殖：无性繁殖产孢囊孢子，有性繁殖产生接合孢子。根霉的孢子囊和孢囊孢子多为 黑色或褐色，有的颜色较浅； ➢应用：对酿酒业有特殊作用，（因为酵母菌不能直接利用淀粉，而根霉能产很强的淀 粉酶）在酿酒工业上常用做糖化菌；能产生乳酸、延胡索酸等有机酸。
二、霉菌的繁殖方式和生活史
３
霉菌的有性繁殖
➢ 子囊孢子的形成：霉菌不同性别的菌丝，分化出雄器（小）和产囊器（大），两个性器 官接触后，雄器的内含物通过受精丝进入产囊器，进行质配；质配后，产囊器生出许多 短菌丝（称产囊丝），产囊丝顶端的细胞是双核的，在顶端细胞内发生核配，成子囊母 细胞（2n）；再经有丝分裂和减数分裂产生1-8个子囊孢子。
➢ 子囊果：在子囊和子囊孢子发育过程中，雄器和雌器下面的细胞生出许多菌丝，形成保 护组织，整个结构成为一子实体。这种有性的子实体称为子囊果，子囊包在其中。
➢ 子囊果三种类型：完全封闭式称闭囊壳;有孔口的称子囊壳;开口呈盘状的称子囊盘。
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实验一微生物的形态和结构观察
一、实验目的
1、掌握普通光学显微镜的正确使用方法；
2、掌握革兰氏染色法的原理及操作步骤；
3、在显微镜下观察细菌、酵母菌等的个体形态和结构。
《
二、基本原理
普通光学显微镜是由一组光学系统和支持及调节光学系统的机械系统组成。
普通光学显微镜是由一组光学系统和支持及调节光学系统的机械系统组成。
机械系统包括镜座、镜臂、镜台、物镜转换器、镜筒及调节器等。
镜座是显微镜的基座，使显微镜能平稳地放置在桌子上；镜台又称载物台，是放置标本的地方，镜台上有压片夹用以固定被检标本，标本移动器可使标本前后和左右移动，有的标本移动器带有游标尺，
可指明标本所在位置；镜臂用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位；镜筒是连接目镜和物镜的金属筒，镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接；物镜转换器安装在镜筒的下端，其上装有3~5个不同放大倍数的物镜，可以通过转动物镜转换器随意选用合适的物镜；调节器安装在镜臂基部，是调节物镜与被检标本距离的装置，通过调节粗、细螺旋便可清晰地观察到标本。
光学系统主要包括目镜、物镜、聚光镜和反光镜等，较好的显微镜有内光源。
目镜一般由两块透镜组成，不同的目镜上刻有5×、10×和15×等字符以表示该目镜的放大倍数；物镜是显微镜中很重要的光学部件，由多块透镜组成，根据物镜的放大倍数和使用方法的不同，分为低倍物镜（4×、10×和20×）、高倍物镜（40×和45×）和油镜（90×、95×和100×）等。
被检物体经显微镜的目镜和物镜放大后的总放大倍数是物镜的放大倍数和目镜放大倍数的乘积。
形态观察主要包括群体形态和个体形态观察两方面。
细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，显示出细菌的一般形态结构及特殊结构，在显微镜下用油镜进行观察。
根据细菌个体形态观察的不同要求，可将染色分为简单染色、鉴别染色和特殊染色。
本实验主要观察微生物的个体形态，掌握在细菌学中广泛使用的重要鉴别染色法——革兰氏染色法；通过此染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。
革兰氏染色有着重要的理论与实践意义，其染色原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。
革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈紫色。
而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联疏松，而且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，因而细胞被脱色，再经蕃红复染后细胞呈红色。
《
三、仪器和药品
仪器：显微镜酒精灯接种柄接种环洗瓶载玻片滤纸镜油擦镜纸无菌水烧杯药品：结晶紫95%乙醇草酸铵碘碘化钾蕃红二甲苯降酚细菌（培养18~24小时的斜面菌种）细菌酵母菌等标本片。
草酸铵结晶紫染液：A液结晶紫2.0g，95%乙醇20mL；B液草酸铵0.8g，蒸馏水80mL。
将A和B充分溶解后混合静止24小时过滤使用。
革氏染液：碘1g ，碘化钾2g ，蒸馏水300mL。
蕃红染液：%蕃红的乙醇溶液10mL，蒸馏水100mL混合过滤。
脱色液：95%乙醇。
…
四、实验步骤
（一）、显微镜的使用
1、标本放置
下降镜台或升高镜筒，把标本片置镜台上，用载玻片夹夹牢。
2、调焦
转动粗调节螺旋，升高镜台或下降镜筒，使低倍物镜的前端接近载玻片，在物镜上观察，可看到物像，然后转动细调节螺旋，使物像清晰。
3、使用油镜
用低倍镜看到物像后，选择合适的视野，并把要观察的部位置于视野的中央；把孔径光阑开到最大，使与油镜的数值口径相匹配，选择合适的照明；转动粗调节螺旋，使镜台下降或镜筒上升，在染色标本处滴加1~2滴镜油，转动物镜转换器，把油镜置镜筒下方；转动粗调节螺旋，使镜台上升或镜筒下降，让镜头的前端浸入镜油中。
操作时要从侧面仔细观察，只能让镜头浸入镜油中紧贴着标本而避免让镜头撞击载玻片，导致玻片和镜头损坏；然后在目镜下进行观察，并缓慢地转动粗调节螺旋，使镜台下降或镜筒上升即可看到物像，再转动细调节螺旋使物像清晰。
`
转动粗调节螺旋，使镜台下降或镜筒上升时，若油镜已离开油滴，必须重新进行上述操作；不得边在目镜上观察，边转动粗调节螺旋，使镜台上升或镜筒下降使镜头前端浸入油滴中，否则易使镜头撞击载玻片，损坏标本和镜头。
4、显微镜使用后的处置
观察结束后，转动粗调节螺旋使镜台下降或镜筒上升，取出染色标本片，然后先用擦镜纸擦去油镜上的镜油，再用擦镜纸沾少许二甲苯擦去粘在油镜上的镜油，最后用擦镜纸擦净二甲苯；把镜头转成“八”字形，套入镜罩后放入显微镜柜中。
（二）革兰氏染色
1、涂片
取洁净的载玻片一张，将其在火焰上微微加热，除去上面的油脂，冷却，在中央部位
滴加一小滴无菌水，用接种环在火焰旁从培养24小时的斜面上挑取少量菌体与水混合；烧去环上多余的菌体后，再用接种环将菌体涂成直径约1cm的均匀薄层。
制片是染色的关键，载玻片要洁净，不得沾污油脂，菌体才能涂布均匀。
注意初次涂片，取菌量不应过大，以免造成菌体重叠。
2、干燥
]
涂布后，待其自然干燥。
3、固定
将已干燥的涂片标本面向上，在微火上通过3~4次进行固定。
固定作用为杀死细菌，使蛋白质凝固，菌体牢固粘附于载玻片上，染色时不被染液或水冲掉，增加菌体对染料的结合力，使涂片易着色。
4、染色
在涂片处滴加草酸铵结晶紫染液1~2滴，使其布满涂菌部分，染色1分钟。
斜置载玻片，倾去染液后用水轻轻冲去染液至流水变清。
注意水流不得直接冲在涂菌处，以免将菌体冲掉。
5、媒染
滴加革氏碘液冲去残水，并用碘液覆盖1分钟，用水冲去碘液。
6、乙醇脱色
-
斜置载玻片于一烧杯上，滴加95%乙醇，轻轻摇动载玻片，至乙醇液不呈现紫色时停止（约分钟）；立即用水冲净乙醇并用滤纸轻轻吸干。
脱色是革兰氏染色的关键，必须严格掌握乙醇的脱色程度。
若脱色过度则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时阴性菌被误染为阳性菌。
7、复染
蕃红染液复染1分钟后水洗。
8、吸干并镜检
用滤纸轻轻吸干载玻片上的水分，干燥后镜检。
在研究工作中要确证未知菌的革兰氏反应时，则需要同时用已知菌进行染色作为对照。
]
五、实验结果
1、描述所观察微生物的特征；
2、绘出所观察微生物的形态图；
3、记录革兰氏染色结果，分辨出革兰氏阳性菌或阴性菌；如果染色结果不理想，分析原因。
六、讨论
1、为什么必须用培养24小时以内的菌体进行革兰氏染色
2、要得到正取的革兰氏染色结果，必须注意那些操作哪一步是关键步骤为什么
3、当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作正确，结果可靠。