4种来源的间充质干细胞的生物学特性比较_彭鹏
不同来源间充质干细胞条件培养基对内源性衰老细胞作用的比较
不同来源间充质干细胞条件培养基对内源性衰老细胞作用的比较郑桂纯;赵姝灿;黄丽贞;张晓芳;王丙云;陈胜锋;陈志胜【摘要】背景:随着经济的发展,人们对美的追求越来越高,抗衰老研究成为当今的研究热点.干细胞是具有自我更新能力和多向分化能力的细胞,间充质干细胞是其中的一种.研究表明间充质干细胞能通过旁分泌作用修复损伤衰老的细胞,但对于不同来源间充质干细胞条件培养基的抗皮肤衰老作用研究甚少.目的:比较人脂肪、羊水、胎盘、脐带来源间充质干细胞条件培养基对自然衰老皮肤成纤维细胞的抗衰老作用.方法:制备人脂肪、羊水、胎盘、脐带4种不同来源的间充质干细胞条件培养基,添加到自然衰老皮肤成纤维细胞中,采用CCK-8法检测细胞活力、β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞衰老率、DCFH-DA探针检测活性氧含量以及qPCR检测p16、p53、COL1、KLOTHO基因表达量.结果与结论:①4种间充质干细胞条件培养基均能提高皮肤成纤维细胞的活力,其中脂肪间充质干细胞条件培养基的效果最好,β-半乳糖苷酶染色率最低;②4种间充质干细胞条件培养基均能降低活性氧含量,脂肪和羊水来源间充质干细胞条件培养基组的活性氧含量最低;③p16和p53在胎盘和脐带间充质干细胞条件培养基组的表达均高于对照组,在羊水来源间充质干细胞条件培养基组的表达较低,脂肪间充质干细胞条件培养基组p16表达显著低于对照组,但p53的表达较高;④COL1基因表达除羊水间充质干细胞条件培养基组外,其他3组均显著高于对照组,KLOTHO基因表达除胎盘间充质干细胞条件培养基组外,其他3组均显著高于对照组,且脂肪间充质干细胞条件培养基组的表达最高;⑤结果显示,4种不同来源间充质干细胞条件培养基能在一定程度上延缓细胞衰老,但作用效果存在差异,其作用机制还有待进一步研究.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2019(023)021【总页数】7页(P3357-3363)【关键词】皮肤成纤维细胞;内源性衰老;脂肪间充质干细胞;胎盘间充质干细胞;脐带间充质干细胞;羊水间充质干细胞;间充质干细胞条件培养基;广东省自然科学基金【作者】郑桂纯;赵姝灿;黄丽贞;张晓芳;王丙云;陈胜锋;陈志胜【作者单位】佛山科学技术学院生命科学与工程学院,广东省佛山市 528200;佛山科学技术学院生命科学与工程学院,广东省佛山市 528200;佛山科学技术学院生命科学与工程学院,广东省佛山市 528200;佛山科学技术学院生命科学与工程学院,广东省佛山市 528200;佛山科学技术学院生命科学与工程学院,广东省佛山市528200;佛山科学技术学院生命科学与工程学院,广东省佛山市 528200;佛山科学技术学院生命科学与工程学院,广东省佛山市 528200【正文语种】中文【中图分类】R459.9文章快速阅读：文题释义：活性氧：正常情况下细胞内活性氧的产生和清除处于平衡，但在细胞衰老进程或刺激因子存在时，其胞内清除活性氧的调节机制失衡，活性氧可诱发膜脂过氧化、蛋白质过氧化、DNA损伤等，导致细胞结构和功能受损。
不同来源间充质干细胞治疗早发性卵巢功能不全的研究进展
不同来源间充质干细胞治疗早发性卵巢功能不全的研究进展赵姗姗(综述);邹琳(审校)
【期刊名称】《中国计划生育学杂志》
【年(卷),期】2022(30)6
【摘要】早发性卵巢功能不全(POI)是指在女性40岁之前卵巢功能衰退或丧失,严重影响女性身心健康和生育功能。
随着国家三孩政策的实施,POI对女性生育的不良影响显得越发严重。
早发现,早治疗,尽早采用医源性手段干预减缓卵巢衰退格外重要。
间充质干细胞(MSCs)具有分化为成骨细胞、软骨细胞及脂肪细胞的特性,愈来愈多的研究证实不同组织来源的MSCs优先植入受损组织,其可表现出极强的再生、分化及修复能力。
目前MSCs已被用于修复化疗引起的卵巢衰竭,但关于MSCs尚有许多未知的谜题。
综合以前的科研成果,本文对不同来源的MSCs通过多样化的生化通路及基因表达途径改善POI女性卵巢功能的国内外最新研究进展进行综述,旨为MSCs治疗POI的手段早日应用于临床,造福广大POI女性提供转化医学的依据。
同时为生殖医师治疗POI提供更新颖的思路。
【总页数】7页(P1445-1450)
【作者】赵姗姗(综述);邹琳(审校)
【作者单位】广东医科大学;广东医科大学附属医院
【正文语种】中文
【中图分类】R32
【相关文献】
1.低氧预处理人脐带间充质干细胞治疗早发性卵巢功能不全小鼠的效果研究
2.人脐带间充质干细胞对早发性卵巢功能不全大鼠的影响
3.骨髓间充质干细胞源性微泡修复大鼠早发性卵巢功能不全的自噬机制
4.组织来源不同的间充质干细胞生物学特性及COPD治疗的研究进展
5.电针联合骨髓间充质干细胞治疗化疗致大鼠卵巢功能不全
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不同来源人的间充质干细胞分离与基本生物学特性的研究
第31卷第5期吉林医药学院学报V01．31N o．52010年10月Jour na l of J i l i n M ed i cal C ol l eg e O ct．2010文章编号：1673-2995(2010)05-0249-03不同来源人的间充质干细胞分离与基本生物学特性的研究郭素红，苑春华，刘慧玲，李欣(吉林医药学院，吉林吉林132013)论著摘要：目的比较人羊水源性及脐血源性的间充质干细胞(M SC s)分离、培养及其生物学特性，为组织工程选取种子细胞提供实验依据。
方法用贴壁分离培养的方法分离两种来源的间充质干细胞，观察其形态与生长曲线，并用细胞化学染色的方法测定其生物化学特性。
结果两种来源的标本均可成功分离出M SC s，但是孕中期羊水源性M SC s增殖能力要明显强于新生儿脐血源性的M SC s，二者有相似的生物化学特性。
结论孕中期羊水与新生儿脐血来源的M SC s是很好的组织工程种子细胞，新生儿脐血来源的M S C s的增殖能力相对较弱，应用受到一定的限制。
关键词：孕中期羊水；间充质千细胞；脐血中图分类号：R364．3文献标识码：ASt udy on i s ol at i on and ba si c bi ol ogy char act er i s t i cs of M SC s f r om di f f e r ent or i gi nsG U O Su—hong，Y U A N C hun—hua，LIU H ui-l i ng，LI X i n(J i l i n M edi cal C ol l ege，Ji l i n C i t y，Ji l i n P r ovi nce，132013，C hi—na)A bst r act：O bj ect i ve To com pa r e i sol a t i on m et hods and bi ol ogy ch ar ac t er i st i c s of m es enc hym al s t em cel l s(M SC s) i n second t r i m est er a m ni ot i c f l ui d and cor d bl ood t o provi de or gani zat i ona l pr oj eel s w i t h exper i m enm l bas i s f or sel ecr i ng s eed cel l s．M et hods M SC s f rom t w o di f f e r ent s o ur c es w e re i sol at ed by adherence cul t ur e，t he i r m or ph ous and grow t h c ur v e w e re ob s er v ed；C yt ochem i cal st ai ni n g w a s a ppl i ed t o a na l yze t he bi ochem i cal ch ar ac t er i st i c s of M S C s．R es ul t s M S C s c oul d be succ ess f ul l y i s ol at e d fr om bot h of t he t w o s am pl es．M SC s f rom di f f e r ent s o ur c es had si m i l a r bi ochem i cal c ha r ac t er i st i cs．C onc l us i on S e cond．t r i m es t e r am ni ot i c f l ui d and c ord bl ood w er e bet t er s eed cel l s f or or gani z at i ona l proj ect s．M SC s fr om co r d bl ood and m i d—pr egna ncy am ni ot i c f l ui d w er e w eaker i n r epr oduc t i ve c apa c i t y and t hei r appl i ca t i on s houl d be l i m i t ed．K ey w or ds：s econd．t r i m es t er a m ni ot i c f l ui d；m esenchym al s t e m cel l s；co r d bl ood问充质干细胞(m ese nchym a l s t em cel ls，M SC s)具有多向分化潜能，是细胞治疗及基因治疗的理想种子细胞。
不同代次骨髓间充质干细胞的生物学特性
７９９－８１２． ［１２］ Ｌｅｅ ＫＳ，Ｍｉｎ ＫＨ．ＫｉＩｎ ＳＲ，ｅｔ ａｌ．Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ
ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－９ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａｓｔｈｍａ［Ｊ］．Ａｉｎ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ， ２００６，１７４（２）：１６１－１７０． ［１３］ Ｋｉｍ ＪＨ，Ｌｅｅ ＳＹ，Ｂａｋ ＳＭ．ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍａｔｉｘ
１．４ 免疫荧光鉴定 目 前 还 没 有 直 接 的 方 法 可 以 鉴定 ＢＭＳＣｓ。鉴 定 ＢＭＳＣｓ的 方 法 全 都 是 根 据 细 胞培养 过 程 中 出 现 分 化 表 型 后 逆 推 判 断 是 否 为 ＢＭＳＣｓ，ＢＭＳＣｓ 的 细 胞 阳 性 表 面 标 志 如 ＳＨ－２、 ＳＨ－３、ＳＨ－４、ＳＢ－１０、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ７１、ＣＤ９０、 ＣＤ１０６ 、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２４ 等，而 ＥＳＡ、ＣＤ１ａ、ＣＤ３１、 ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ４５、ＣＤ５６ 等 为 阴 性［７－８］，第 ２ 代 细 胞表面标志 ＣＤ４４，ＣＤ１０６，ＣＤ１０５均呈阳性表达，其 阳 性 率 分 别 为 ９５．１３％，６２．１２％，３９．１３％；而 ＣＤ３４，ＣＤ４５ 则 呈 阴 性 表 达 ，其 表 达 率 分 别 为０．４３％
中 图 分 类 号 ：Ｒ３２９．２＋７ 文 献 标 识 码 ：Ｂ 文 章 编 号 ：１０００－７４４Ｘ（２０１５）０１－００８３－０４ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ＩＳＳＮ．１０００－７４４Ｘ．２０１５．０１．０３５
间 充 质 干 细 胞 来 源 主 要 有 骨 髓 ，外 周 血 ，脐 带 脂 肪组织，外 周 血，胎 盘 羊 水，其 他 部 位 如 胰 腺、胎 肝、
干细胞来源的选择与比较
干细胞来源的选择与比较干细胞是一类具有自我复制和分化为多种细胞类型潜能的细胞，被广泛应用于医学研究和临床治疗中。
根据来源的不同，干细胞可以分为多种类型，包括胚胎干细胞和成体干细胞。
在选择使用干细胞时，研究人员需要考虑多方面的因素，如细胞的获取难度、细胞的特性和潜能、伦理考虑等。
本文将围绕干细胞来源的选择与比较展开讨论。
胚胎干细胞是来源于早期胚胎的细胞，具有极高的分化潜能和自我复制能力。
这些细胞可以分化为人体各种细胞，如心脏细胞、肌肉细胞等，因此在再生医学和组织工程领域具有巨大的潜力。
然而，由于胚胎干细胞的获取需要损毁胚胎，从伦理角度来看存在争议。
此外，胚胎干细胞的使用也受到法律和政策的限制。
相比之下，成体干细胞是来源于已经发育成熟的组织或器官中的细胞。
这种干细胞主要分为两类：组织干细胞和诱导多能性干细胞。
组织干细胞存在于成体组织中，如骨髓、脂肪组织和皮肤。
与胚胎干细胞相比，组织干细胞的获取相对容易，且不存在伦理问题。
然而，组织干细胞的分化潜能和自我复制能力有限，某些特定类型的细胞难以分化。
由于组织干细胞的使用受到限制，诱导多能性干细胞的出现成为突破口。
诱导多能性干细胞是通过基因工程技术将成体细胞转化为类似胚胎干细胞的细胞。
这种方法克服了胚胎干细胞的伦理限制，能够提供具有多潜能性的细胞。
然而，目前诱导多能性干细胞的技术还不成熟，存在转化效率低、细胞质量差和肿瘤发生的风险等问题。
此外，诱导多能性干细胞与胚胎干细胞之间的功能差异还需要进一步的研究和验证。
除了上述几种主要的干细胞来源外，还有其他一些特殊来源的干细胞被广泛关注，如脐带血干细胞和间充质干细胞。
脐带血干细胞是通过从新生儿脐带中采集血液获取的，具有较高的分化和自我复制能力。
这种来源的干细胞具有较低的免疫排斥反应，适用于供受体不匹配的情况。
间充质干细胞存在于多种组织中，如脂肪、骨髓和胎盘。
它们具有广泛的分化潜能，可以分化为成骨细胞、成软骨细胞和成脂细胞等，且细胞的获取相对容易。
不同来源间充质干细胞治疗急性肺损伤的作用及机制研究
不同来源间充质干细胞治疗急性肺损伤的作用及机制研究急性肺损伤是一种常见的临床病症，其发病原因多种多样，包括感染、创伤、吸入有害气体等。
急性肺损伤的主要特点是肺泡膜通透性增加，并伴随着肺水肿和炎症细胞浸润，严重的时候甚至会导致呼吸衰竭甚至死亡。
目前，我们常用的治疗手段包括抗感染、呼吸机辅助通气、积极氧疗等，但是总体来说疗效并不理想。
寻找新的治疗方法成为了当前的研究热点之一。
干细胞治疗因其独特的生物学特性，如多能性、自我更新、分化潜能和免疫调节等广泛应用于多种疾病的治疗上。
充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一类具有多向分化潜能的干细胞，来源广泛，包括骨髓、脂肪组织、胎盘和囊胚等，且在治疗急性肺损伤中显示出了良好的疗效。
本文将重点介绍不同来源间充质干细胞治疗急性肺损伤的作用及机制研究。
一、不同来源间充质干细胞治疗急性肺损伤的作用（一）骨髓来源间充质干细胞治疗急性肺损伤骨髓来源间充质干细胞（BMSCs）因其来源广泛，易获得，且具有较强的增殖和分化潜能，因而成为了治疗急性肺损伤的研究热点之一。
研究表明，经过适当培养和扩增的BMSCs可以通过静脉输注等方式进入循环系统并最终定位到受损的肺组织，分泌具有抗炎、抗氧化和再生修复作用的生长因子、细胞因子以及外泌体等，从而缓解肺部炎症反应，促进肺泡膜修复，改善肺功能。
（二）脂肪组织来源间充质干细胞治疗急性肺损伤脂肪组织来源的间充质干细胞（ADSCs）由于来源便捷、易获得，且含有丰富的脂肪干细胞资源，被认为是一种理想的治疗干细胞。
研究表明，ADSCs具有良好的抗炎和修复效果，可以通过直接静脉输注或通过支气管镜等方式将ADSCs输送到肺部，减轻肺组织炎症反应，促进肺泡膜修复，提高肺功能。
（三）胎盘来源间充质干细胞治疗急性肺损伤胎盘来源间充质干细胞（PLMSCs）由于来源特殊、生物学活性高，可克服免疫排斥等优点而备受关注。
研究发现，PLMSCs在治疗急性肺损伤中显示出了良好的抗炎、抗氧化和修复效果，能够有效减轻肺组织炎症反应、促进肺泡膜修复，改善肺功能。
两种不同来源间充质干细胞的生物学特性比较
《中国组织工程研究》 Chinese Journal of Tissue Engineering Research文章编号:2095-4344(2018)17-02705-06 2705www.CRTER .org·研究原著·王刚，男，1971年生，四川省井研县人，汉族，2000年华西医科大学毕业，博士，教授，主要从事妇产科临床、科研和教学工作。
通讯作者：王刚，博士，主任医师，佛山市第一人民医院妇产科，广东省佛山市 528000中图分类号:R394.2 文献标识码:B稿件接受：2018-01-28Wang Gang, M.D., Professor, Chief physician, Department of Obstetrics and Gynecology, The First P eople’s Hospital of Foshan , Foshan 528000, Guangdong Province, ChinaCorresponding author: Wang Gang, Department of Obstetrics and Gynecology, The First P eople’s Hospital of Foshan, Foshan 528000, Guangdong Province, China两种不同来源间充质干细胞的生物学特性比较王 刚1，李东升2，管玉涛1，朱瑜苑1，廖品福2，许峻荣2，陈智聪2 (1佛山市第一人民医院妇产科，广东省佛山市 528000；2广东唯泰生物科技有限公司，广东省佛山市 528231)DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.0500 ORCID: 0000-0002-9640-5154(王刚)文章快速阅读：文题释义：沃顿胶：又称华通氏胶(Wharton's Jelly)，为构成脐带的凝胶状物质，主要成分是黏多糖，也含有成纤维细胞和巨噬细胞，是一种黏膜组织。
间充质干细胞的生物学特性及多向分化潜能_张凯
中国组织工程研究与临床康复 第 12 卷 第 3 期 2008–01–15 出版Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research January 15, 2008 Vol.12, No.3综 述间充质干细胞的生物学特性及多向分化潜能*★张 凯1，王 毅1，邢国胜2Bio-characteristics and multi-differentiation potency of mesenchymal stem cellsZhang Kai1, Wang Yi1 Xing Guo-sheng2 AbstractBACKGROUND: Mesenchymal stem cells (MSCs) are an important cell type in hematopoietic microenvironment. They can differentiate to lots of tissues and have low immunogenicities. It has been verified by clinical tests that MSCs transplanting can be used for tissue repair and disease treatment of mesenchymal tissue genetic defects. OBJECTIVE: To understand bio-characteristics and multi-differentiations potency of MSCs. RETRIEVAL STRATEGY: A computerized search through the PubMed database was undertaken during January 1995 to December 2005. The key words were "mesenchymal stem cells, differentiation, biological character", and searching language was restricted in English. Meanwhile, a resemble search was conducted to the correlated articles basing on Chinese Journal Full-Text Database from January 1995 to December 2005, with the key words of "mesenchymal stem cells, differentiation, biological character", and the language was restricted in Chinese. Totally 78 related papers were searched out. Data were checked in the first trial. Inclusion criteria:①The literatures should be closely related with biological character and differentiation of MSCs.②The recent articles of the same field and that published in authority journals were preferred. Exclusion criteria: ①Repetitive study. ②Meta analysis. LITERATURE EVALUATION: The literature was compiled and analyzed about the biological character and multiple differentiation of MSCs. Thirty papers were selected, in which 4 were reviews and the others were clinical or fundamental researches. DATA SYNTHESIS: ①MSCs are especially rich in myeloid tissue and also present in placent, amniotic fluid, umbilical vein subendothelial layer, peripheral blood, liver, fat, muscles and skin. MSCs have potentials of fast proliferation, self renewing and multi-differentiation. Based on different inducing conditions, they can be differentiated into cartilage, bone, skeletal muscles, muscle tendon, fat, nerve and kidney parenchymal cell, etc.②Three isolation and culture methods are mainly used in vitro: Density gradient centrifugation and adherent culture methods: Basing on the density difference between MSCs and other cells, Percoll or Ficoll separation liquid can be used to separate cells and meanwhile separate the MSCs from the non-adherent cells depending on the adherent growing character of MSCs; Flow cytometer: It can be used for MSCs separation on the basis of its small volume and particle deficiency; Magnetic activated cell sorting: Positive or negative selection is carried out according to MSCs surface antigenic component is presented or deleted, and the relatively pure MSCs can be obtained by immobilizing with antibody. DMEM medium containing 5%－20% fetal bovine serum is commonly used for culturing MSCs. The identification of MSCs is mainly according to its morphous and functions. Furthermore, the surface marker is different from different sources.③Under specific physical and chemical environment or induced by cytokine, MSCs can differentiate into multiple types of cells, such as osteoblast, fat cell, nerve cell, cardiac myocyte, endothelium cell and so on. It can be affected by lots of factors and has low immunogenicity. So it is an ideal source of tissue engineering seed cells. Moreover, MSCs are easy to transfect and express the exogenous gene, so they will be widely used in cell therapy and genetic therapy. CONCLUSION: Because of the multi-differentiation properties, MSCs will be widely used in tissue engineering damage repair, cell replacement therapy, supporting effect of hemopoiesis and genetic therapy. But the monoclonal cell can not be obtained by separation and culture approaches currently used in vitro, and now the reliable identification standard also lacks. The problems, such as what are the differences between MSCs of different sources, should be solved. Zhang K, Wang Y, Xing GS.Bio-characteristics and multi-differentiation potency of mesenchymal stem cells.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu 2008;12(3):539-542(China) [/zglckf/ejournal/upfiles/08-3/3k-539(ps).pdf]1Department of Clinical Laboratory, Tianjin Hospital, Tianjin 300211, 2 China; Institute of Orthopaedics, Tianjin Hospital, Tianjin 300211, China Zhang Kai★, Master, Associate chief laboratorian, Department of Clinical Laboratory, Tianjin Hospital, Tianjin 300211, China zkkmail@yahoo. Supported by: General Program of Tianjin Science and Technology Committee, No. 05YFJMJC07600* Received:2007-09-13 Accepted:2007-11-02天 津 医 院 ,1 检 验 2 科， 骨科研究所， 天津市 300211 张 凯★，女， 1971 年生，天津 市人，汉族，2003 年南开大学毕业， 硕士， 副主任检验 师， 主要从事风湿 病、 骨代谢疾病实 验 室 检 测方 面 的 研究。
间充质干细胞-是干细胞家族的重要成员,来源于发育早期的中胚层和外胚层
间充质干细胞-是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层间充质干细胞-是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层，最初在骨髓中发现，随后被证实是存在于骨髓基质中的非造血成体干/祖细胞样细胞的不同种类的群体，因此，被称为骨髓基质细胞、间充质干细胞或多能间充质基质细胞。
除骨髓外，间充质干细胞样细胞还存在于多种组织，包括脂肪、关节滑膜、骨、皮肤、胰腺、血液、胎肝、肺脏和脐血中。
学术术语来源——脐血血浆替代胎牛血清培养脐带间充质干细胞及冷冻保存文章亮点：1 胎牛血清是细胞培养中最为经典的营养补充物，但在临床治疗中若使用含胎牛血清的培养体系，存在被病原体或其他动物源性成分污染及异种蛋白引起人体免疫反应等不安全因素。
实验采用人脐血血浆原代培养脐带间充质干细胞，结果显示，其形态、免疫表型及分化能力与胎牛血清培养体系下获得的细胞类似，且增殖速度显著优于后者。
2 低温冻存是长期保存干细胞的有效方法，但传统的冻存液中含有体积分数为20%或更高体积分数的胎牛血清，在细胞复苏用于临床治疗前，应反复洗涤或稀释以避免残留。
实验采用人脐血血浆冻存脐带间充质干细胞，结果证实复苏后的细胞保持了间充质干细胞的基本生物学特性，且具有更好的贴壁效率及扩增能力。
3 由于脐血来源丰富，不涉及伦理问题，可以替代胎牛血清用于脐带间充质干细胞的分离培养及冷冻保存，为临床大量应用间充质干细胞进行细胞治疗提供了更为安全的保障。
关键词：干细胞；脐带脐血干细胞；脐血；脐带间充质干细胞；体外扩增；免疫表型；成骨分化；成脂分化；冷冻保存；复苏主题词：胎血；血浆；脐带；间质干细胞；冷冻摘要背景：采用胎牛血清扩增培养及冷冻保存的间充质干细胞，在临床应用中存在一定的风险。
目的：探讨以脐血血浆替代胎牛血清体外分离培养、扩增及冷冻保存脐带间充质干细胞的可行性。
方法：选择符合广州脐血库供者合格性筛选标准的脐血，收集脐血干细胞制备过程中去除的血浆，经病原学及微生物检测合格，多份混合用于细胞培养。
不同来源间充质干细胞生物学特性差异
不同来源间充质干细胞生物学特性差异方洪松;周建林;彭昊;邓爽;翁金清;刘丰;陈森;周观金【摘要】背景：间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为软骨、肌肉、肌腱等。
间充质干细胞进行的临床试验主要包括组织损伤修复，如骨、软骨、关节损伤的修复，心脏、肝脏、脊髓损伤和神经系统疾病的治疗。
<br> 目的：比较各种来源的间充质干细胞的生物学特性。
<br> 方法：检索1987到2015年PubMed数据库和中国知网数据库收录的与间充质干细胞来源，间充质干细胞生物学特性相关的文献。
从细胞表面标记物，增殖、分化、迁移能力，以及功能方面进行分析总结，探讨了各种来源的间充质干细胞的优缺点。
<br> 结果与结论：不同来源的间充质干细胞的增殖潜力和表面标记物存在差异。
不同组织来源的间充质干细胞免疫活性可能与间充质干细胞处于不同组织中的活化状态、种属差异、组织来源和培养条件的不同有关，从而导致不同源性间充干细胞免疫活性也不完全相同。
深入认识影响不同组织来源间充质干细胞迁移的因素和机制，可以增强不同源性间充质干细胞靶向迁移的能力，提高其在创伤愈合、组织修复和再生中的治疗效率。
%BACKGROUND:Mesenchymal stem cels, underin vivo orin vitro specific induction conditions, can differentiate into the cartilage, muscle, tendons and so on. Clinical trials concerning mesenchymal stem cels mainly include tissue repair (such as bone, cartilage and joint repair) and treatment of heart, liver, spinal cord injury and nervous system diseases.<br> OBJECTIVE:To compare the biological characteristics of mesenchymal stem cels from different sources. <br> METHODS: PubMed and CNKI databases were retrieved for articles related to sources of mesenchymal stem cels and biological characteristics of mesenchymal stem celspublished from 1987 to 2015. The retrieved articles were summarized and analyzed in the folowing aspects: cel surface marker, proliferation, differentiation, migration, and function, so as to explore the merits and demerits of mesenchymal stem cels from different sources. <br> RESULTS AND CONCLUSION:A difference in the proliferation ability and surface markers is found between different sources of mesenchymal stem cels. Immunological competence of mesenchymal stem cels from different sources may be correlated with their activation status, species differences, tissue sources and culture conditions, resulting the immunological competence of mesenchymal stem cels from different sources is not exact the same. In-depth understanding of the factors and mechanisms by which influence the migration of mesenchymal stem cels from different sources can enhance the migration ability of different sources of mesenchymal stem cels, and increase their efficiency in wound healing, tissue repair and regeneration treatment.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2015(000)032【总页数】6页(P5243-5248)【关键词】干细胞;培养;间充质干细胞;造血干细胞;脐带;胎盘;骨髓;细胞分化;细胞增殖;国家自然科学基金【作者】方洪松;周建林;彭昊;邓爽;翁金清;刘丰;陈森;周观金【作者单位】武汉大学人民医院骨关节外科，湖北省武汉市 430060;武汉大学人民医院骨关节外科，湖北省武汉市 430060;武汉大学人民医院骨关节外科，湖北省武汉市 430060;武汉大学人民医院骨关节外科，湖北省武汉市 430060;武汉大学人民医院骨关节外科，湖北省武汉市 430060;武汉大学人民医院骨关节外科，湖北省武汉市 430060;武汉大学人民医院骨关节外科，湖北省武汉市 430060;武汉大学人民医院骨关节外科，湖北省武汉市 430060【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章亮点：1 此问题的已知信息：间充质干细胞是体内一类具有增殖、分化潜能的成体干细胞，能靶向迁移到损伤组织，并对损伤部位进行修复，具有极好的迁移能力，在临床炎症疾病的治疗中显示了广阔的应用前景。
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４种来源的间充质干细胞的生物学特性比较彭鹏1，曾庆贵1，李敏2，姜蓉21.重庆市急救中心，重庆400014；2.重庆医科大学组织学与胚胎学教研室，重庆400016摘要：目的比较骨髓、骨骼肌、肋软骨膜及软骨来源的间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）的生长、免疫表型及体外诱导分化能力的差异。
方法分别获取新西兰大白兔的骨髓、骨骼肌、肋软骨膜细胞及软骨细胞，体外培养观察其生长形态、表型特征及其诱导成骨、成脂的分化能力。
结果4种来源的MSCs均从第2代开始转变为梭形，第3代逐渐出现漩涡状排列；骨髓、骨骼肌和软骨膜来源的细胞生长状态良好，可传10代以上，但软骨来源的细胞在第5代后，逐渐退变死亡。
骨髓来源的原代细胞部分表达CD29、CD90、CD34，传代后不表达CD34，但CD29、CD90的表达逐代增强；骨骼肌、软骨膜及软骨来源的原代细胞均不表达CD29、CD90和CD34，从第2代开始均表达CD29、CD90，且不断增强；仅原代软骨细胞表达Ⅱ型胶原，至第2代基本不表达；无细胞表达Desmin。
4种来源的第3代细胞经诱导均可分化为成骨细胞或成脂细胞。
结论4种来源的干细胞均具有MSCs的特点，但骨髓、骨骼肌、软骨膜来源的干细胞的生长明显强于软骨来源的干细胞。
关键词：骨髓；骨骼肌；软骨膜；软骨；间充质干细胞中图分类号：Q28文献标识码：A文章编号：1004-5503（2014）09-1145-05Comparison of biological characteristics of mesenchymal stem cellsderived from four kinds of tissues in rabbitPENG Peng*，ZENG Qing-gui，LI Min，JIANG Rong*Chongqing Emergency Medical Center，Chongqing400014，ChinaCorresponding author：ZENGQing-gui，E-mail：284490744@Abstract：Objective To compare the growths，immunophenotypes and abilities in induction of differentiation in vitro of mesenchymal stem cells（MSCs）derived from four kinds of rabbit tissues.Methods Cells were isolated from the bone marrow，skeleton muscle，rib perichondrium and rib cartilage of New Zealand white rabbits，cultured in vitro，and observed for growth，phenotype and ability in induction of osteogenic and adipogenic differentiations.Results The cells derived from four kinds of tissues were in a spindle shape starting from passage2，of which the passage3were in a whirlpool arrangement.The cells derived from bone marrow，skeleton muscle and rib perichondrium grew well and couldbe subcultured for more than ten passages.However，senescence and death were observed in the cells derived from rib cartilage after subculture for more than five passages.CD29，CD90and CD34were expressed in primary cells derivedfrom bone marrow.In these cells after subculture，no CD34was expressed，while the expression levels of CD24andCD90increased with the increasing passage.However，no CD29，CD90or CD34was expressed in primary cells derivedfrom skeleton muscle，rib perichondrium and rib cartilage，while CD29and CD90were expressed in the cells after subculture for more than two passages，and the expression level increased with the increasing passage.CollagenⅡwasonly expressed in primary cells derived from rib cartilage but disappeared in the cells of passage2.Desmin was unexpressed in any cells.All of cells of passage3derived from four kinds of tissues could be differentiated into osteoblasts or adipose cells.Conclusion All of the cells derived from four kinds of tissues showed characteristics of MSCs.However，the growths of stem cells derived from bone marrow，muscular tissues and rib perichondrium were superior to that derived from rib cartilage.Key words：Bone marrow;Skeleton muscle;Rib perichondrium;Rib cartilage;Mesenchymal stem cells（MSCs）·基础研究·间充质细胞是一种胚胎中胚层的结缔组织细胞，可分化为软骨、骨、血液、骨骼肌等多种细胞。
出生后仍有少量间充质细胞保留在结缔组织中，称为未分化间充质细胞，即成体干细胞。
间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）可从多种组织中分离获取，具有来源的多样性、无特定的表面标记以及体外诱导的多向分化性等特点［1-3］。
因此，在再生、DOI:10.13200/ki.cjb.000551通讯作者：曾庆贵，E-mail：284490744@组织工程、细胞治疗等的研究中备受关注［4-6］。
已有报道，不同来源MSCs的分离成功率、免疫表型和分化能力均有差异，这直接影响干细胞的应用［7-9］。
本实验拟观察4种来源的MSCs的生长、免疫表型及体外诱导分化能力，为MSCs在再生、组织工程、细胞治疗等方面的应用研究提供实验依据。
1材料与方法1.1实验动物SPF级新西兰大白兔，雌雄各半，3～4周龄，体重（400±10）g，由重庆医科大学实验动物中心提供，动物合格证号为SCXK（渝）2007-0001。
实验动物的处置符合我国科学技术部相关要求［10］。
1.2主要试剂Ⅱ型胶原酶、β-甘油磷酸钠、维生素C、3-异丁基-1甲基黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxan-thine，IBMX）、地塞米松、胰岛素、吲哚美辛、油红O 均购自美国Sigma公司;DMEM-HG、DMEM／F12培养基购自美国Hyclone公司；胎牛血清购自杭州四季青公司；胰蛋白酶购自美国Invitrogen公司；兔抗兔CD29、CD34、Ⅱ型胶原多克隆抗体及DAB显色盒购自北京博奥森生物技术有限公司；鼠抗兔CD90单克隆抗体购自美国Thermo scientific公司；SP试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司；鼠抗兔Desmin 单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.3骨髓及骨骼肌源细胞的分离及培养将大白兔麻醉后，经耳缘静脉注射5ml空气处死后，75％酒精浸泡15～20min，无菌分离胫骨、股骨及附着的骨骼肌，经含青霉素和链霉素的PBS冲洗胫骨和股骨骨髓腔2～3次，收集冲洗液，1000×g离心5min，弃上清，加入1ml DMEM／F12培养液，制备细胞悬液；骨骼肌用无菌PBS反复冲洗后，剪至1cm×1cm大小，移至含0.5mg／mlⅡ型胶原酶溶液中，37℃消化2h后，用200目细胞筛过滤，1000×g离心5min，弃上清，加入1ml DMEM／F12培养液，制备细胞悬液。
将细胞悬液接种至玻璃培养瓶中，加入含10％胎牛血清的DMEM／F12培养液5ml，置37℃，5%CO2饱和湿度培养箱中培养（下同）。
骨髓源细胞72h后首次换液，骨骼肌源细胞2h后首次换液，继续培养，每隔3d换液，待细胞长满瓶底80%时，经0.25％胰酶消化，常规传代培养。
于倒置相差显微镜下观察细胞生长及形态特征。
1.4软骨膜和软骨源细胞的分离及培养无菌切开兔胸壁，避开肋生长板区，取出肋软骨，去尽附着组织，经含青霉素和链霉素的PBS冲洗，解剖显微镜下剥离收集软骨膜及软骨。
取少量软骨，固定后进行HE染色，检验是否已剥离干净软骨膜。
将软骨膜和软骨均剪成1cm×1cm碎片，双抗PBS冲洗，将软骨碎片先加入0.25％胰酶消化30min，双抗PBS 冲洗后，再加入含0.2％Ⅱ型胶原酶的DMEM∕F12培养液，置37℃恒温摇床中消化过夜；软骨膜碎片加入Ⅱ型胶原酶5ml，置37℃恒温摇床消化3h。
软骨膜和软骨消化后悬液分别经200目滤网过滤，1500×g离心10min，弃上清，加入1ml DMEM／F12培养液，制备细胞悬液，分别接种于含10％胎牛血清的DMEM／F12培养液2.5ml的玻璃培养瓶中，置37℃，5%CO2培养箱中培养。