动物疫病监测采样技术
动物疫病监测常用样品采集方法及注意事项
Common Sample Collection Methods and Precautions for Animal Disease Monitoring
FANG Weihong （Animal Disease Prevention and Control Center of Jian'an District，Xuchang City，Xuchang Henan 461100，China）
0 引言
动物疫病监测、实验室诊断检测等工作皆需依据采 集到的动物样品来开展，检测、分析采集到的样品，能 帮助动物防疫机构对地区动物疫病流行状况充分了解， 高效研制与评估疫苗等，样品采集工作会对动物疫病监 测事业的发展产生直接影响。相关人员需深入学习与掌 握样品采集方面的知识技术，明确各个环节的注意要 点，不断提高样品采集水平。
Abstract：Through the development of animal disease monitoring，the effectiveness of the prevention and control of major animal diseases can be improved，and the safety of animal husbandry production and meat food safety can also be guaranteed．Sample collection is a key link in animal disease monitoring．The standardization and scientific nature of sample collection will have a direct impact on the results of animal disease monitoring．The staff should combine the monitoring items and content，choose a reasonable sample collection method，and strictly control the collection process to avoid irregularities，otherwise the sample quality will be affected． Keywords：animal disease monitoring，sample collection，matters needing attention
重大动物疫病采样监测技术
❖ 样品：全血、骨髓、淋巴结、扁桃体、肾脏、 脾脏
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（四）、猪链球菌样品采集
❖ 致病性链球菌经呼吸道或其它途径（受损的 皮肤和粘膜）进入机体后，首先在入侵处繁 殖，很快进入淋巴管和淋巴结。继之冲破淋 巴屏障，沿淋巴系统扩散到血液中，引起菌 血症，最后导致各个实质器官严重病变。
❖ 样品：生前：抗凝全血 死后：肝脏、脾脏
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（五）、新城疫样品采集
❖ 新城疫病毒存在于病鸡所有器官、体液、分 泌物和排泄物，以脑、脾和肺含毒量最高， 骨髓含毒时间最长。
❖ 样品：眼分泌物、泄殖腔拭子、脾脏、气管 粘膜、脑等。
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汇报结束
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❖ （3）、在无法采集水泡皮和水泡液时，可采 集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品3～5克装 入洁净小瓶内，加盖密封尽快冷冻保存。样 品的包装瓶上均要贴上标签，写明采样地点， 动物种类，编号，时间等。
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2、牛、羊 (O—P液)样品采集
❖ （1）、样品采集：被检动物在采样前禁食(可饮水)12小时， 以免胃内容物反流污染O—P液。采样探杯在使用前经0．2 ％柠檬酸或2％氢氧化钠浸泡5分钟，再用洁净水冲洗。每采 完一头动物，探杯要重复进行消毒并充分清洗。采样时动物 站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部10～15cm处， 轻轻来回移动2～3次，然后将探杯拉出。
动物疫病采样技术规范
1范围本规范规定了动物疫病检验的样品采集、采样前准备、废弃物处置、采样记录、运送等技术。
本规范适用于四川省行政区域内动物疫病病原学、病理组织学、血清学、免疫学等实验室检验所需样品的采集。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T16569-1996畜禽产品消毒规范GB/T18635-2002动物防疫基本术语GB/T18935-2003口蹄疫诊断技术NY/T541-2002动物疫病实验室检验采样方法病死及病害动物无害化处理技术规范（农医发〔2017〕25号）《中华人民共和国动物防疫法》《病原微生物实验室生物安全管理条例》《兽医实验室生物安全技术管理规范》《高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范》3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1样品取自动物或环境，拟通过检验反映动物个体、群体或环境有关状况的材料或物品。
3.2病料来自患病或可疑患病动物的被（待）检材料。
3.3采集通过一定的方法，按照特定的程序和要求，对样品进行收集、处理及整理的过程。
4样品采集原则4.1先排除后采样凡发现急性死亡的动物，怀疑患有炭疽时，不得解剖。
应先按NY/T561-2015中2.2的规定采集血样，进行血液抹片镜检。
确定不是炭疽后，方可解剖采样。
4.2采集数量进行流行病学调查、抗体监测、动物群体健康评估或环境卫生检测时，样品数量应满足生物统计学的要求。
4.3采样时限健康动物和濒临死亡动物根据样品采集需求及时采样；病死后的动物要立即采集样品，夏季不超过6h，冬季不超过24h。
4.4无菌操作采集过程中应该注意无菌操作，刀、剪、镊子、器皿、注射器、针头等采样用具应事先严格灭菌，每种样品应单独采集。
4.5尽量减少应激和损害活体动物采样时，应避免过度刺激或损害动物；也应避免对采样者的危害。
关于动物检疫样品的采集和检疫方法
关于动物检疫样品的采集和检疫方法动物检疫样品的采集和检疫方法在动物疫病的早期预警、疫情监测、疫情防控等方面起着重要作用。
下面将详细介绍动物检疫样品的采集和检疫方法。
一、动物检疫样品的采集方法1.动物检疫样品的采集要求动物检疫样品的采集要遵循"快、准、益"的原则，即要快速、准确、有效地采集样品，并确保检测结果的真实性和可靠性。
2.动物检疫样品的采集时间动物检疫样品的采集时间应在疫情爆发后的早期阶段进行，以尽早发现和控制疫情。
3.动物检疫样品的采集方式动物检疫样品的采集方式根据不同的动物种类和疫病类型有所不同，一般包括以下几种方式：-血液样品采集：通过静脉或尾静脉抽血或取耳缘血样。
-分泌物和排泄物样品采集：包括唾液、鼻咽分泌物、肛门分泌物、尿液、粪便等。
-组织和器官样品采集：包括肌肉、心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏等。
-其他样品采集：包括毛发、羽毛、鳞片、脱落细胞、划痕、唾液涂片等。
4.动物检疫样品的采集工具动物检疫样品的采集工具要干净卫生，以避免污染样品。
常用的采集工具包括无菌手套、无菌玻璃纸、无菌瓶、无菌注射器、无菌棉签、剪刀、手术刀片、采样枪等。
5.动物检疫样品的采集标准动物检疫样品的采集要遵循相关的国家标准和规定，并按照规定的程序和方法进行采集。
同时，还要注意样品的保存和储存条件，以保证样品的完整性和稳定性。
二、动物检疫样品的检疫方法1.动物检疫样品的处理动物检疫样品的处理要根据不同的疫病类型和样品特性进行，一般包括以下几种处理方式：-血液样品处理：将采集到的血液样品加入抗凝剂，防止血液凝固，并离心沉淀后提取血清进行后续检测。
-组织和器官样品处理：将采集到的组织和器官样品进行消毒处理，去除外部污染物，并切割或研磨成适当的大小，以便后续的分析和检测。
-分泌物和排泄物样品处理：将采集到的分泌物和排泄物样品进行离心沉淀或过滤除去固体颗粒，得到清晰的液体样品进行后续检测。
-其他样品处理：根据不同的样品类型和目的进行相应的处理，如清洗、离心、过滤等。
动物疫病实验室检验采样方法
动物疫病实验室检验采样方法 (NY/T541-2002)1 范围本标准规定了动物疫病诊断实验室的样品采集方法。
本标准适用于病因(原)学、病理组织学、血清学、免疫学等实验室检验所需样品的采集。
2 样品采集的一般原则和采集前的准备2.1 样品采集所遵循的一般原则2.1.1 凡发现患畜(包括马、牛、羊及猪等)有急性死亡时，如怀疑是炭疽，则不可随意解剖，应采取患畜的血液，万不得已时局部解剖作脾脏触片的显微镜检查。
只有在确定不是炭疽后，方可进行剖检。
2.1.2 采取病料的种类，根据不同的疾病或检验目的，采其相应的脏器、内容物、分泌物、排泄物或其他材料；进行流行病学调查、抗体检测、动物群体健康评估或环境卫生检测时，样品的数量应满足统计学的要求。
采样时应／jxjD,．谨慎，以免对动物产生不必要的刺激或损害和对采样者构成威胁。
在无法估计病因时，可进行全面的采集。
检查病变与采集病料应统筹考虑。
2.1.3 内肌病料的采取，如患畜已死亡，应尽快采集，最迟不超过6h。
2.1.4 血液样品在采集前一般禁食8h。
2.1.5 应做好人身防护，严防人畜共患病感染。
2.1.6 应防止污染环境，防止疫病传播，做好环境消毒和病害肉尸的处理。
2.2 使用器械的消毒刀、剪、镊子等用具煮沸消毒30min，使用前用酒精擦拭，用时进行火焰消毒。
器皿(玻制、陶制等)经103kPa高压30min，或经160C干烤2h灭菌；或放于0．5％一1％的碳酸氢钠(NaHCr~)水中煮沸10min 15rain，水洗后，再用清洁纱布擦干，保存于酒精、乙醚等溶液中备用。
注射器和针头放于清洁水中煮沸30rain。
一般要求使用“一次性”针头和注射器。
采取一种病料，使用一套器械与容器，不可用其再采其他病料或容纳其他脏器材料。
采过病料的用具应先消毒后清洗。
检查过传染性海绵状脑病的器械要放在2mol／L的氢氧化钠(NaOH)溶液中浸泡2h以上，才可再使用。
3 样品的采集3.1 血液3.1.1 采血部位大的哺乳动物可选用颈静脉或尾静脉采血，也可采胫外静脉和乳房静脉血。
动物防疫样品采集技术规范标准
动物防疫样品采集技术规1 围本标准规定了动物卫生监督、动物疫情监测样品采集的基本原则、采样前的准备、样品采集的一般程序与要求。
2 规性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 18635-2002 动物防疫基本术语NY/T 541-2002 动物疫病实验室检验采样方法NY/T 5344.6-2006 无公害食品产品抽样规第6部分：畜禽产品NY/T 561-2002 炭疽诊断技术DB 43/306-2006 动物防疫监督管理规《中华人民国动物防疫法》（中华人民国主席令第71号）《高致病性动物病原微生物菌毒种或者样本运输包装规》（农业部公告第503号）３术语和定义下列术语和定义适用于本标准。
3.1 动物卫生监督对各项有关动物防疫的法律、法规、标准、措施执行情况进行检查和评价，并依据检查情况按规定进行监督、批评以至处罚。
3.2 动物疫情监测对动物疫病的发生、流行、分布及相关因素进行系统的长时间的观察与检测，以把握动物疫病的发生情况和发展趋势。
3.3 样品取自动物或环境、拟通过检验反映动物个体、群体或环境有关状况的材料或物品。
3.4 抽样单元同一饲养地、同一饲养条件下的动物群体或个体；同一产地、同一批次的动物产品。
3.5 病料来自患病或可疑患病动物的被（待）检材料。
3.6 采样从动物或环境取得样品的过程。
3.7 随机抽样按照随机化的原则（总体中每一个观察单位都有同等的机会被选入到样本中），总体中抽取部分观察单位的过程。
3.8 流行率某个时间，特定地区某病（新老）感染动物数占调查动物总数的百分率。
3.9 被动监测动物或动物产品出现异情况、或怀疑有疫病存在，由相关部门作出的针对性监测。
疫病监测的样品采集及处理技术
料送兽医化验室进行细菌学化验 ，以便了解和掌握动物疫病的动 最好是喂料前 （ 早上或下午 ） 进行。采血场所有充足的光线 ；室 态 ，为 防范 动 物疫 病 的 发生 提供 强 有 力 的措 施 。笔 者 通过 多 年来 温 夏季 最好 在 ２ ５ ℃一 ２ ８ ℃ ，冬 季 １ ５ ℃ 一２ ０ ℃为宜 。 对 兽 医 实验 室 工作 的认识 了解 ，深 深 体会 到 采集 动 物样 品进 行兽 ２ ． ３ ． １ 家兔 确 定 心 脏 的生 理 部 位 。家 兔 的 心脏 部 位 约在 胸 前 医临 床诊 断 是 动物 免 疫抗 体 监测 和 疫 病监 测 工作 中的 重要 内容 。 由下 向上 数 第 ３ 与第４ 肋 骨 间 。选 择 用 手 触 摸 心 脏 搏 动 最 强 的部 本 文介 绍 了样 品采 集 、处理 、送 检 等技术 。 位 ，去 毛 消 毒 。将 稍 微 后 拉 栓 塞 的注 射 器 针 头 由剑 状 软 骨 左 侧
棉球 、干 棉球 、 口罩 、乳胶 手 套 、防护 服 、防护 帽 、一 次性 注 射 器 （ 采血针 ） 和注射器 、保定棍 、绳子若干、记号笔 、采样记录 单及 相 关 表格 等 ，还 要 准备 采 集后 的用 具等 消 毒 、清 洗 用 的消 毒 液及 容器 等用 品 。
动物疫病监测的常用样品采集方法及注意事项
养殖与饲料2021年第01期动物疫病监测的常用样品采集方法及注意事项吴学青1王志远2李华林3*1.宁夏吴忠市利通区扁担沟镇畜牧兽医工作站，宁夏吴忠751100；2.宁夏吴忠市利通区金积镇畜牧兽医工作站，宁夏吴忠751100；3.宁夏吴忠市利通区东塔寺乡畜牧兽医工作站，宁夏吴忠751100摘要在动物疫病监测采样中，技术方法和样品质量决定着监测结果的准确性。
因此，采样必须遵循一般的原则，对采样技术人员、方法及操作程序都有特定的要求。
本文从采样原则、样品种类、采样技术方法及注意事项等方面进行总结，确保样品质量和检测结果的准确性，为重大动物疫病诊断和防控提供技术支持和科学依据。
关键词疫病监测；采样技术；注意事项收稿日期：2020-09-28*通讯作者吴学青，男，1967年生，兽医师。
1监测采样的一般原则1）应该遵循适时、典型、无菌、适量和生物统计的原则。
2）凡是急性死亡病例、发现有血液凝固不良、口鼻、肛门天然孔出血、尸僵不全等疑似炭疽症状表现的，应先采集耳尖血液制作血涂片染色镜检，发现呈竹节状排列的大杆菌确诊为炭疽病的，严禁解剖。
3）采样时应先采集无菌心、肺、肝等实质器官，再采集胃肠、粪便等容易污染的组织，避免交叉感染。
4）要根据不同的检验目的要求和对病例的初步判断分析采集样品。
采集的病料样品应具有代表性，采集的组织器官病变要明显。
病因不明时，可对组织器官、分泌物、排泄物等进行全面采集。
5）采集血液、O-P 液等样品应提前禁食4~6h 。
采集血样应根据不同采样对象、检验项目及所需血量多少采取不同方法与部位。
6）采样时做好个人生物安全防护，穿好防护服，佩戴好口罩、帽子、胶套、手套等防护用品，避免人畜共患病感染或环境污染发生。
7）采样数量要求：诊断时，可采样1~3只（头）病死动物的组织器官；疫苗免疫注射抗体效果主动监测时，免疫后21d 每个场（户）采集30份血样；种群疫病监测净化，制定方案确定采样次数和采样日期，逐头采样。
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住舌头，右手缓慢放入探杯。 组织样品：解剖，洁净取样。
SUCCESS
THANK YOU
2019/6/12
血液样品的分离方法
抗凝血：采血前在试管或注射器内按比例加 抗凝剂，运输时必须减少震荡以免溶血。
非抗凝血：分离血清
血清析出好的因素：容器：玻璃试管优于塑 料离心管；斜面：与空气接触面要大。温度： 最佳温度是体温；时间：室温静置最短2小 时；离心：转速要低，2000转。
胶冻状血清的成因：采血前刚刚喂食（没有 空腹）；凝血时间不够；脂肪血（营养过剩）
粪便、棉拭子和O/P液样品 的采集
泄殖腔拭子的采集：将棉拭子插入泄殖腔约 1.5~2cm,旋转后沾上粪便。
血清学检测样品：静脉采血3 ml左右，注射器内留一 定空间，静置过程或已凝固的血液应低温冷冻，以免 溶血。短时间内，可在4度左右保存；如时间较长应冻 结保存，注意不能反复冻融.
病理学检测样品：保证样品新鲜，应选择病变最典型 最明显的部位，且连同部分健康组织一并采集。 浸泡 于酒精或福尔马林溶液中，冷藏保存和运输。
样品存放用具：塑料离心管（1.5，2，5ml），自封口 样品袋，试管架，塑料样品盒，胶布，封口膜，冰袋。
防护用具：一次性手套，鞋套，口罩，隔离衣等。 记录用具：不干胶标签、圆珠笔、油性记号笔、采样单、
记录本等
2、采样前准备—采样技术
血液样品：牛、马、羊从颈静脉或尾静脉采血； 猪从前腔静脉采血，用量少时也可从耳静脉抽 取；家禽从翅静脉抽取。
桃体 粪便样品：新鲜，湿润的 生殖道和精液样品 皮肤样品：皮屑 分泌液和渗出液样品：舌面或蹄部的水
泡液
血液样品
血液：最常用的样品，可以做血清学试验的样品，也可以作 为病原学试验的样品。
全血（抗凝血）：抗凝剂有肝素，阿氏液，枸橼酸 钠和4%EDTA，或者用玻璃珠，脱纤维蛋白。
血清：不加抗凝剂的血液，在室温静置2~4h（或 37℃1h），待血液完全凝固后，析出上清即为血清。
根据信息来源分为：问卷调查和实验室监测。 实验室监测的关键:样品和检测技术。
实验室检测技术
病原检测：病原本身检测，病原特有蛋白检 测，病原特有核酸检测，动物试验
抗体检测：琼扩，试管凝集，平板凝集，血 凝和血凝抑制，中和试验，各种ELISA等。
在检测技术过关的情况下，监测结果是否具 有代表性，是否能够真实反映出疫病的真实 情况都与监测样品的采集有重要关系。
样本\样品的数量
样本：总体中的一部分代表；样品：检测的原 始材料。
概率抽样（随机抽样）：是按照随机原则进行抽样，
不加主观因素，组成总体的每个单位都有被抽中的概率（非零概 率）
比例抽样：按养殖规模成比例抽样。 多阶段抽样：全市分区，每个区随机选县，每
个县选乡镇，每个乡镇选养殖场。
样本量，符合统计学要求，决定因素：疫病在 群体中的发生率，可信水平，检测方法 的敏 感性和特异性。
动物疫病监测的采样技术
邱荣斌
西南科技大学生命科学与工程学院 2014年11月18日
主要内容
动物疫病监测的概念及其意义 检测样品存在的问题 样品的种类 高品质样品的特征 如何得到高质量的样品
动物疫病监测
定义：调查动物群体中某种疫病或病原的存 在情况。
通过监测可以了解动物疫病的流行现状、危 害程度、风险因子和发展趋势，早期识别疫 病的爆发和流行。
几种重要疫病的采样时机
禽流感、新城疫：发病初期采全血，泄殖腔\咽 喉棉拭子；后期采集新鲜粪便；剖剪后的气管， 肺脏，肾脏等
口蹄疫：全血，水泡皮，水泡液，O/P液及口腔 分泌物和咽喉棉拭子
猪瘟，猪伪狂犬，蓝耳病：全血，血清，组织病 料：肺脏，脾脏，淋巴结，扁桃体，流产胎衣等， 新鲜精液或冷冻精液
猪流感：在发热期采集鼻咽棉拭子和肺组织病料。
三、高品质样品的特征
样本\样品数量适当 样品新鲜
样品标记明确 采样单填写规范
四、如何得到高质量的样品
高质量样品
采样前准备 采样的时效性 样本的数量
样品的标记
样品的保存 和运输
1、采样前的准备-器具
采样工具：一次性注射器，解剖刀，剪刀，镊子，酒精 灯，酒精棉，棉签，保定动物专用工具
如何做好采样工作
送检样品中的问题
合格样品
如何得到合格样品
采样中应注意问题
一、样品存在的问题
样品的真实性（假样品，一个样品分开） 样品的质量（溶血，腐败，反复冻融） 采样单填写的信息不全（畜禽日龄，免疫情
况等） 组织样品采集的太大，不专业。 样品编号不能追溯回去。
二、样品的种类
血液样品：血清，全血抗凝血，血浆 组织样品：心肝脾肺肾脑，淋巴结，扁
血浆：抗凝血混匀后，静置，上清即为血浆。
检测样品的分类
细菌学检测样品：采集发病典型或刚死亡的整体动物 送实验室为最好。无菌采集，冷藏，保存液中不加任 何抗生素。
病毒学检测样品：病毒检测应在动物病初、体温升高 期间采集。以组织脏器、血液、粪便等样品为主 。冷 藏或冷冻，保存液中加抗生素。
咽喉拭子、鼻腔拭子的采集：将灭菌的干棉拭子插 入口腔至咽的后部或鼻腔，轻轻擦拭并慢慢旋转将 拭子拔出，将棉拭子放入缓冲液内。
O/P液是从动物食道/咽喉刮取的黏膜样品，用特制 的食道探环刮取黏膜，放入样品保存液中。
水泡液及水泡皮的采集
用75%酒精消毒水泡表皮，用灭菌生理盐水擦 去酒精，用注射器穿刺吸取水泡液，置于含 抗生素的PBS缓冲液中；然后用剪刀将水泡皮 剪下，放入含抗生素的PBS缓冲液中。
3、采样的准确性和时效性
代表性：应该考虑到整个监测区域的地理分布，选 取有代表性的点。如动物品种分布、日龄、饲养密 度、地势特点、交通特点、动物迁徙习性等因素。 如禽流感采样时，疫区交接处，野鸟迁徙途径，水 禽家禽混合饲养处等。
时效性：如抗体监测，免疫后14天左右才可以采集； 监测病原时，注意排毒时间和病原的易嗜细胞和组 织，在监测时要根据不同时期，采集不同部位的组 织进行检测。如口蹄疫病毒首先是在咽喉部和肺上 皮细胞扩增，然后进入血液，通过分泌物、水泡排 毒。