天然药物化学试验与指导第三版
《天然药物化学》课程实验教学大纲(生物制药)
《天然药物化学》课程实验教学大纲（生物制药）课程名称（中文）天然药物化学实验课程性质非独立设课课程属性专业课教材及实验指导书名称《天然药物化学实验》学时学分：总学时54 总学分 3 实验学时18 实验学分 1应开实验学期三年级上学期适用专业制药工程（生物制药）先修课程天然药物化学（理论课）一、课程简介及基本要求天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。
通过试验，检验在课堂上所学的理论知识。
使学生对理性知识的理解更加深入，掌握得更加牢固，同时训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。
在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练。
经过多层次，多方式教学的全面训练后，学生应掌握以下技能：（一）提取分离方面1.要求掌握常用的经典方法的原理及操作。
其中包括渗漉法、液-固提取法、液-液萃取法、重结晶法等。
2.掌握纸色谱、薄层色谱、柱色谱的原理和基本操作。
（二）鉴定方面1.化学方法①掌握一般定性反应在鉴定中的作用。
②掌握重要衍生物（乙酰化物、甲基化物生物碱盐类等）的制备方法及其在结构鉴定中的应用。
③了解重要降解反应的原理及应用。
2.光谱方法了解UV、IR、NMR、MS在天然物结构测定中的应用。
目前要求学生能了解黄酮类化合物的UV、NMR波谱、蒽醌的IR谱特征。
二、课程实验目的要求天然药物化学是一门实践性很强的学科，天然药物化学实验是天然药物化学课程的重要组成部分，学生必须在学好理论知识的同时高度重视实验课，通过实验课的学习使学生能印证并加深理解课堂讲授的理论知识，掌握由天然药物中提取、分离、精制有效成分，并对其进行鉴别的基本方法和技能，提高学生独立动手、观察分析、解决问题的能力，培养学生严谨的科学态度和良好的科研作风。
三、适用专业制药工程专业（生物制药）四、主要仪器设备各种实验用玻璃仪器（量筒、试管、烧杯、圆底烧瓶、分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、玻璃层析柱、双槽层析缸等），高效液相色谱系统，纸色谱系统，水浴锅，渗漉装置，旋转蒸发仪，电热套，紫外可见分光光度计，红外光谱仪，核磁共振仪等。
天然药物化学实验报告
天然药物化学实验报告实验报告：天然药物化学实验摘要：本实验采用天然药物提取法，以姜黄素为目标化合物，通过溶剂提取、分离纯化和结构鉴定等步骤，成功地从姜黄中提取出姜黄素。
利用紫外-可见光谱法对姜黄素进行了定性和定量分析，并对其结构进行了确认。
实验结果表明，本实验方法可用于姜黄素的提取和纯化。
引言：天然药物在中药领域有长久的历史，并且越来越被广泛应用于药物研究和治疗中。
本实验旨在利用化学方法从天然药物中提取目标化合物，以姜黄素为例进行研究。
姜黄素是姜黄根茎中的有效成分，具有抗氧化、抗炎和抗癌等多种生物活性。
实验材料与仪器：1.实验材料：鲜姜黄，无水乙醇，乙酸，氯仿，丙酮等。
2.实验仪器：电子天平，恒温槽，高速离心机，紫外可见分光光度计等。
实验步骤：1.预处理姜黄样品：将鲜姜黄切碎并研磨成细粉，加入无水乙醇溶液中，将其置于40℃的恒温槽中提取一段时间。
2.溶剂提取：将提取液过滤，所得过滤液用氯仿萃取，重复该步骤两次，所得的有机相合并，并经旋转蒸发机蒸发浓缩。
3.分离纯化：将提取液溶解在正己烷中，通过硅胶柱层析法进行分离纯化。
首先用正己烷进行洗脱，之后用氯仿-甲醇（20:1）溶液进行洗脱。
4.结构鉴定：通过紫外-可见光谱法进行姜黄素的定性和定量分析，利用相对滴定法测定含量，并与标准品对照鉴定。
实验结果：1.提取纯化：通过溶剂提取和硅胶柱层析法，成功地从姜黄中提取出纯化的姜黄素。
提取纯化过程中，利用纸色谱法监测样品的纯化情况。
2.结构鉴定：利用紫外-可见光谱法对姜黄素进行了定性和定量分析。
通过比对标准品和实验样品的吸收峰位置和峰高，确认了所提取的化合物为姜黄素。
讨论与结论：本实验通过天然药物提取法和硅胶柱层析法成功地从姜黄中提取纯化了姜黄素，并进行了结构鉴定。
实验结果显示，本实验方法可用于姜黄素的提取和纯化，并通过紫外-可见光谱法对姜黄素进行了定性和定量分析。
本实验为天然药物的提取和纯化研究提供了一种有效的方法，对于深入研究姜黄素的药理作用和临床应用具有重要意义。
中药化学实验指导
总液
最后一次
萃取过程
Dragendorff显 色反应示意图
2．亲脂性生物碱中酚性与非酚性碱的分离 上述CHCl3液置分液漏斗中，用2%NaOH水溶液萃取1~2 次，每次50ml，此时碱水层色已很浅，示酚性脂溶性碱已
基本被萃取到 NaOH 层，合并NaOH萃取液，将NaOH 层与 CHCl3液分置2个分液漏斗中，可同时操作： NaOH层加固体NH4Cl至pH 9左右，然后CHCl3萃取2次 （80ml，50ml），第2次CHCl3层生物碱反应应极弱示 萃取基本完全，弃去水相，合并CHCl3层并用蒸馏水洗 至中性，加无水Na2SO4脱水24小时以上，过滤，回收 CHCl3，得粗酚性生物碱。 CHCl3层用蒸馏水洗至中性，加无水Na2SO4脱水24小时 以上，过滤，回收CHCl3，残留物抽松，得非酚性生物 碱的抽松物，称重，取出50mg作第4项。
（Cyclanoline），本实验经提取、分离可得到这些化合物。
H3CO OCH3 OR1 O O OR2
HO
N CH3
H3C
N
H3CO
N
CH3 OH OCH3
R1=R2=CH3 粉防己碱（甲素） R1=H，R2=CH3 防己诺林碱（乙素） R1=CH3，R2=H 小檗胺
轮环藤酚碱
一、实验目的
掌握各种生物碱的分离纯化方法，包括亲脂性 碱与亲水性碱分离，亲脂性碱中酚性碱与非酚 性碱的分离，亲水性生物碱与非生物碱水溶性 成分的分离，亲脂性碱单体的分离 学习生物碱的各种鉴识方法，包括：色谱方法 （TLC及PC），沉淀反应， 学习各种实验技能 提取：回流提取 分离：萃取、柱色谱 精制：沉淀法、柱色谱法 鉴识：色谱法、化学法
步骤
样品制备：拌样上样，取非酚性碱的抽松物
天然药物化学实验指导
天然药物化学实验注意事项天然药物化学试验的特点是实验周期长,所用溶剂和试剂品种多,而且用量较大。
许多有机溶剂具有易燃、有毒、腐蚀性,刺激性和爆炸性等特点。
在实验操作过程中又经常需要加热或减压等操作,学生将接触各种热源和电器。
如果操作不慎,易引起中毒、触电、烧伤、烫伤、火灾、爆炸等事故。
所以要求每个实验操作者,必须加强爱护国家财产和保障人民生命安全的责任心,严格遵守操作规程,树立严密的科学实验态度,提高警惕,消除隐患,预防事故的发生。
为了确保实验的安全进行,特作如下要求:一、实验前要必须充分预习实验内容,明确实验原理、操作步骤及注意事项。
实验开始前应检查仪器是否完整无损,装置是否正确,经检查合格后方可开始实验。
二、实验时要保持室内整齐、清洁、安静。
不准做与实验无关的事情,不得擅自离开岗位。
在实验过程中应密切观察实验进程是否正常,仪器又无漏气,破裂等现象。
三、倒取和存放易燃性有机溶剂时,要远离火源。
不得随意将易燃性、易爆性的有机溶剂及药品倒入水槽或污水缸内。
不得在烤箱内烘烤留有易燃性有机溶剂的仪器或物品。
四、使用精密仪器及电气设备时,应先了解其原理及操作规程,检查好电路,按操作规程进行。
遇到不明了的问题应及时向老师请教,切忌自作主张,乱倒以仪器。
电线及仪器不应放在潮湿处,不要用湿手接触电器。
电器用完后,应立即清理,关好电源。
五、回流或蒸馏易燃性有机溶剂时,应检查冷凝水是否畅通,仪器装置是否漏气。
不得用明火直接加热,应根据其沸点选用水浴、油浴或砂浴。
蒸馏溶剂时要加入沸石,否则将发生爆沸。
添加溶剂时要移开水浴,待溶剂冷却后再加,并应重新加沸石。
六、实验室中常用的苯、卤代苯、苯酚、苯胺、甲醇、二硫化碳、氰化物、汞和铅盐等化合物均为有毒或剧毒药品。
人体中毒的途径一般为消化道、呼吸道或皮肤吸收。
所以取用毒剧药时要注意切勿洒在容器外,不要接触皮肤或口腔。
室内要通风良好,产生毒气的操作应在通风厨内进行。
毒物及废液不得随意乱倒。
天然药物化学实验指导
中药化学实验指导药物化学教研室中药化学实验指导一.说明中药化学是一门实验学科,实验教学占重要地位,通过实验要达到以下目的。
1.能检验学生在课堂上所学的理论知识。
使学生对理论知识的理解更加深入,掌握的更加牢固。
2.训练学生的基本操作技能,培养学生分析问题和解决问题的能力,使学生获得从事中药化学科研工作和实际工作的基本训练。
3.使学生养成严谨的科学态度和良好的科学作风。
实验中,重点是加强对学生基本技能的训练。
二.实验须知1.遵守实验室制度,维护实验室安全,不违章操作,严防爆炸、着火、中毒、触电、漏水等事故的发生。
若发生事故应立即采取措施并报告指导老师。
2.实验前做好预习,明确实验内容,了解实验的基本原理和方法。
安排的实验计划,争取准时结束,实验过程中应养成及时记录的习惯,凡是观察到的现象和结果及有关数据,应随时如实地记录。
实验完毕,要认真总结,写好实验报告,实验所得的提纯物要包好,贴上标签,交给老师。
3.实验室内应保持安静,不得大声喧嚷,不许抽烟。
进入实验室必须穿工作服,实验过程中,不许随便离开。
4.实验台前应保持整洁,与实验无关的物品不得放在台前。
实验中废弃的固体物,要丢入废物桶内。
5.爱护仪器,节约药品,仪器损坏后应填写报损单,注明原因,由指导教师按规定处理。
6.实验过程中要节约用水、用电。
7.每次实验结束后,值日生应将实验室打扫干净,倾倒废物桶,关好水、电、门窗,方可离去。
实验一粉防已生物碱的提制和鉴识粉防已是防已科千金藤植物粉防已Stephania tetrandra S.Moore 的根。
又名汉防已、倒地拱、百木香,是一种解热镇痛药。
中医用于风湿止痛、利尿消肿以及毒蛇咬伤等。
粉防已的有效成分是生物碱,其总碱含量为 1.2%左右,主要是粉防已碱(Tetrandrine 和防已诺林碱(Fangchinoline 及轮环藤酚碱(Cyclanoline ,本实验经提取,分离可得到这3个生物碱结晶。
天然药物化学实验指导书
天然药物化学实验指导书前言天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。
其目的主要是：1．通过实验检验在课堂上所学的理论知识。
使学生对理性知识的理解更加深入，掌握得更加牢固。
2．通过实验训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力，使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。
3．通过设计性实验，培养学生独立从事科研工作的基本能力。
在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练。
天然药物化学实验要求学生掌握以下技能：（一）提取分离方面1．要求掌握常用的经典方法的原理及操作。
其中包括液—固提取法（浸渍、渗漉、煎煮、回流提取）、液—液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法）、重结晶法等。
要求学生了解常见溶剂的性能，并能较好地选择提取溶剂。
２．掌握纸色谱、柱色谱（包括吸附柱、离子交换柱）、薄层色谱的原理及基本操作。
以后要创造条件，使学生能逐步地学到气相色谱、高效薄层及高压液相的基本操作。
（二）鉴定方面１．化学方法①掌握一般定性反应在结构鉴定中的应用。
②掌握重要衍生物（乙酰化物、甲基化物生物碱盐类等）的制备方法及其在结构鉴定中的应用。
③了解重要降解反应的原理及其在结构鉴定中的应用。
（芦丁的酸水解）２．光谱方法了解UV、IR、NMR、MS在天然产物结构鉴定中的应用。
目前要求学生能了解黄酮类化合物的UV、NMR波谱，蒽醌的IR、NMR谱特征。
通过设计性实验逐步培养学生独立进行实验的能力。
对某些实验内容，要求学生有一定的设计能力，为今后从事科研工作打下必要的基础。
本实验指导书主要是供理科基地班天然药物化学实验的参考书。
天然药物化学实验须知在天然药物化学实验中，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、刺激性、甚至爆炸性药品，实验操作又经常在加温、加压等情况下进行，需要各种热源、电器或其他仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。
但只要加强责任心和防患意识，提高警惕、消除隐患，注意实验规则，事故是可以避免的。
天然药物化学实验
实验一天然产物化学成分系统预试验天然产物中所含的化学成分种类很多，在深入研究之前应首先了解其中含有哪些类型的化学成分，如生物碱、皂苷、黄酮类等等。
这就需要进行各类化学成分的系统定性预试验。
或根据研究的需要进行单项预试法来初步判断。
一、实验目的与要求掌握未知成分的天然产物是怎样初步提取分离的，熟悉各主要成分的试管试验、沉淀反应和纸层析、薄层层析的方法并根据试验结果判断含有什么类型的化学成分。
二、基本原理利用各类成分的颜色反应和沉淀反应，对天然产物的提取液进行检查可以初步判断其中的化学成分。
由于提取液大多数颜色较深，影响对颜色变化的观察，可以使用薄层层析（TLC）或纸层析（PC）等方法对天然产物的提取液进行初步分离，再进一步检查。
三、实验内容：利用不同成分在各种溶剂中的溶解度的不同，一般可采用以下3种溶剂分别提取，试验。
1．水浸液：取中草药粗粉5 g加水60 ml，在50~60℃的水浴上加热1小时，过滤，滤液进行下列试验。
试管进行，△在滤纸或硅胶CMC-Na薄层板上进行，下同。
糖鉴定（1）α-萘酚一硫酸试剂检查还原糖。
①溶液I：10％α-萘酚乙醇溶液。
溶液II：硫酸。
取1ml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I 2滴～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液II，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。
（2）斐林试剂检查还原糖。
溶液I：6．93g结晶硫酸铜溶于100ml水中。
溶液II：34．6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于100ml水中。
取1ml样品热水提取液，加入4滴～5滴用时配制的溶液I、II等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。
如检查多糖和苷，取1ml样品水提液，加入1m110% 盐酸溶液，在沸水浴上加热10min，过滤，（成盐去除杂质）再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。
或者直接用高效液相色谱看色谱图。
酚类鉴定试剂（1）三氯化铁试剂检查酚类化合物、鞣质1％～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。
天然药物化学试验
残渣
滤液
在60—70℃下用浓盐酸调 pH4—5, 静置1小时, 抽滤
芦丁精品
注: ①加石灰乳时pH不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而不溶于水而析出； ②加热过程中须不断补充蒸发掉的水分，以保持pH8—9； ③pH ④可利用芦丁在冷热水中溶解度差别来达到结晶目的。得到的沉淀要粗称一下，
按芦丁在热水中1: 200溶解度加蒸馏水进行重结晶。
实验原理
利用乙醇为提取溶剂, 可把不同类型性质互异的蒽醌类成分 提取出来；
总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度, 故回收乙醇后得总提 取物可用乙醚提取总苷元；
根据蒽醌衍生物的酸性强弱, 用不同的碱液进行萃取, 最后 得到不同的蒽醌苷元。
实验方法
1.大黄中总蒽醌成分的提取分离
大黄粗粉100g
置1000ml 圆底烧瓶中, 加入95%乙醇250ml, 回流提取2hr, 趁热抽滤
醇液
醇液
药渣
加入95%乙醇200ml, 回流提取1.5hr, 趁热抽滤
药渣
乙醇提取液
静置冷却, 抽滤
滤液
减压回收乙醇至糖浆状, 将浓缩物转移至250ml三
角瓶中 乙醇总提物
放冷, 加入乙醚60ml冷浸, 振摇20′将乙 醚液倾入500ml三角瓶中
乙醚层
浸膏
40ml乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次15′）
2.芦丁的鉴定
（1）芦丁的定性反应:
取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使溶解，分成三份做下述试验。
① 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，再酌加少许镁粉注意观察 颜色变化情况。
② 取上述溶液1~2ml，然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记 录
颜色变化情况。 ③ 取上述溶液1~2ml， 加等体积的10%α—萘酚乙醇溶液，摇匀，
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天然药物化学实验与指导编者：杨长水于红艳扬州大学医学院药学系目录实验室安全守则 (1)实验一掌叶大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 (3)实验二槐花米中芦丁的提取、分离和鉴定 (8)实验三人参皂苷的提取、分离与结构鉴定 (11)实验四粉防己生物碱的提取、分离与结构鉴定 (14)附录 (18)1. 常用有机溶剂及有关数据表 (18)2. 常用层析材料及有关数据表 (21)实验室安全守则天然药物化学实验是天然药物化学课程的重要组成部分，是更好掌握天然药物有效成分提取、分离和检验的基本操作技能，是提高学生分析和解决问题能力，使同学进一步理论联系实际，养成严密科学态度和良好工作作风必不可少的教学环节，为此，提出如下实验须知：1. 遵守实验制度、维护实验室安全。
不违章操作，严防爆炸、着火、中毒、触电、漏电等事故的发生。
若发生事故应立即报告指导教师。
2. 实验前做好预习，明确实验内容，了解实验的基本原理和方法，安排好当天的计划，争取准时结束，实验时应养成及时记录的习惯，凡是观察到的现象以及有关的重量、体积、温度或其他数据，应立即如实记录。
实验完毕后认真总结，写好报告，提取纯化所得单体产物包好，贴上标签（写下日期、样品名称、纯度、m.p.、b.p.、TLC、重量）交给老师。
3. 实验室中保持安静，不许大声喧哗，不许抽烟，不迟到，不随便离开。
实验台面应保持清洁，使用过的仪器及时清洗干净后，存放在指定位置。
废弃的固体和滤纸等丢入废物缸内，绝不能丢入水槽和窗外，以免堵塞和影响环境卫生。
4. 公用仪器及药品用完后立即归还原处，破损仪器应填写破损报告单、注明原因。
将实验台、地面打扫干净，倒清废物缸，检查水、电（是否关闭水龙头，拔下电插头）。
关闭门窗。
23实验一 掌叶大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定【简介】药典收载的正品大黄为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（R.tanguticum Maxim.ex Balf.）及药用大黄（R. officinale Baill.）的根及根茎。
大黄始载于《本经》，列为下品。
历代本草均有记载。
大黄性寒、味苦，具泻热毒、破积滞、行淤血等功效。
多用于便秘、谵语发狂、痢疾初起、血热吐衄、淤血经闭等。
现代药理研究发现，大黄具泻下、抗菌、降血压、收缩血管、止血、降低血管脆性的作用，而且对小鼠的黑色素瘤、乳腺瘤及腹水型艾氏癌有抑制作用。
大黄中的主要成分为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。
其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和大黄酚的酸性最弱。
根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。
【目的】1. 熟悉蒽醌类成分的提取分离方法。
2. 掌握pH 梯度提取法的原理和操作技术。
3. 学习用硅胶柱色谱法分离精制大黄素。
4. 学习羟基蒽醌类化合物的鉴定方法。
【基本原理】（大黄中主要羟基蒽醌类化合物的理化性质）1. 大黄酚（Chrysophanol ）：金黄色片状结晶，mp196~197 ℃（乙醇或苯），能升华。
可溶于丙酮、乙酸、氯仿、甲醇、乙醇、热苯和氢氧化钠水溶液，微溶于石油醚、乙醚，不溶于水、碳酸氢钠和碳酸钠水溶液。
UV （MeOH ） λ max 225,258,279,288,432nm IR （KBr ）νmax 1679,1622,1605,1560,1470cm -12. 大黄素甲醚 （Physcion ）：砖红色针状结晶，mp206 ℃（苯），能升华，溶解性能与大黄酚相似。
UV λmax 226,255,267,288,440nm IR （KBr ）νmax 1625,1688,1570,3400 cm -13. 大黄素 （Emodin ）：橙黄色针状结晶，mp256~257 ℃（乙醇或冰醋酸），OH OHR 1R 2O O大黄酸 R 1 = H R 2 = COOH大黄素 R 1 = CH 3 R 2 = OH芦荟大黄素 R 1 = H R 2 = CH 2OH 大黄素甲醚 R 1 = CH 3 R 2 = OCH 3大黄酚 R 1 = CH 3 R 2 = H能升华。
其溶解度如下：四氯化碳0.01%、氯仿0.071%、二硫化碳0.009%、乙醚0.14%、苯0.041%、易溶于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，几乎不溶于水。
UV λmax 300,269,289, 441nmIR（KBr）νmax 3464,1627cm-14. 芦荟大黄素（Aloe-emodin）：橙黄色针状结晶，mp223~224 ℃（甲苯），能升华。
可溶于乙醚、苯、热乙醇、稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液。
UV λmax 300,259,289,433nmIR（KBr）νmax 3430,1628cm-l5. 大黄酸（Rhein）：黄色针状结晶，mp321~322 ℃（升华），不溶于水，能溶于吡啶、碳酸氢钠水溶液，微溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚。
UV（MeOH）λ max229,258,435nmIR（KBr）νmax 1701,1637cm-1羟基蒽醌苷类（表1）：表1 大黄中羟基蒽醌类成分中文名英文名性状mp （℃）大黄素甲醚葡萄糖苷Physcionmonoglucoside 黄色针状结晶235芦荟大黄素甲醚葡萄糖苷Aloe-emodinmonoglucoside 239大黄素葡萄糖苷Emodinmonoglucoside 浅黄色针状结晶190~191大黄酸葡萄糖苷Rhein-8-monoglucoside 266~270大黄素-1-O-β-D-葡萄糖1-O-β-D- glucopyranosyl emodin 239~241芦荟大黄素-ω-C-β-D-葡萄糖ω-C-β-D- glucopyranosylaloe-emodin187~189【主要仪器及试剂】仪器：天平，250mL烧杯，500mL烧杯，250mL分液漏斗，索氏提取器，布氏漏斗，100mL量筒，250mL圆底烧杯，真空冷凝管，牛角管，250mL锥形瓶，pH试纸。
试剂：乙醚，20%H2SO4溶液，盐酸，5%碳酸氢钠溶液，5%碳酸钠溶液，0.25%氢氧化钠溶液，5%氢氧化钠溶液，石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯（7:3），石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯（15:1）。
45【操作方法】实验流程图：1. 酸水解 用天平称取大黄粉末10g ，置500mL 烧杯中，加20%H 2S04水溶液100mL ，直火加热1小时，用布氏漏斗抽滤，过滤,水洗后于70℃左右干燥。
2. 总羟基蒽醌苷元的提取 滤饼经干燥后，置索氏提取器中，加入乙醚100mL ，回流提取2小时，得乙醚提取液。
乙醚提取液经薄层色谱检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。
薄层板为硅胶CMC-Na 板，展开剂为石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯 （7:3），近水平或直立展开，在可见光下可看到4个斑点，R f ≈0.9的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚混合物，在此条件下分不开，其余3个斑点，依R f 值由大到小分别为大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点）。
3. pH 梯度萃取分离（大黄酚）（大黄素甲醚）浅黄色沉淀（大黄酚大黄素甲醚）（回收）%H 2SO 4（1）大黄酸的分离和提纯：将上述乙醚提取液以5%碳酸氢钠溶液振荡提取，水层呈紫红色。
分出水层，再重复提取数次，直至不显红色为止。
合并水层提取液，用盐酸酸化至pH3左右，即得黄色沉淀。
过滤，先用水洗沉淀数次，再以少量冰冷的丙酮洗以除去有色杂质。
干燥后以冰醋酸或吡啶结晶2~3次，得黄色针状结晶。
经熔点测定、纸色谱或薄层色谱，与标准品对照鉴定为大黄酸。
（2）大黄素的分离和提纯：碳酸氢钠溶液提取后的乙醚层再以5%碳酸钠溶液振荡提取数次，水层呈红色，合并水层提取液，加盐酸至酸性，得黄色沉淀，过滤，用水洗沉淀，以冰冷丙酮洗，在冰醋酸或吡啶中结晶数次，得橙色大针状结晶。
经熔点测定、纸色谱或薄层色谱，与标准品对照鉴定为大黄素。
（3）芦荟大黄素的分离和提纯：碳酸钠溶液提取后的乙醚层，再经0.25%氢氧化钠溶液振荡提取数次，水层呈红色，合并水层提取液，加盐酸至酸性，得橙色沉淀。
过滤后用水洗沉淀，干燥后在冰醋酸或乙酸乙酯中结晶数次，得橙色长针状结晶。
经熔点测定、纸色谱或薄层色谱鉴定为芦荟大黄素。
（4）大黄酚和大黄素甲醚的分离和提纯：上述芦荟大黄素分离后的乙醚液用5%氢氧化钠溶液振荡提取数次，直至元色。
合并深红色的水层溶液，加盐酸至酸性，得黄色沉淀。
过滤，水洗，干燥后得大黄酚和大黄素甲醚混合物。
将此混合物溶于乙酸乙酯，用硅胶柱色谱分离。
洗脱剂为石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯（15:1）混合液。
先洗脱下的化合物为大黄酚，后洗脱下的化合物为大黄素甲醚，再分别经乙酸乙酯结晶纯化，两者经熔点测定、薄层色谱鉴定皆为纯品。
4. 硅胶柱色谱分离大黄酚和大黄素甲醚（1）装柱：取100~200目硅胶约10g，按湿法装柱（柱床1.5cm × 8.5cm）；（2）加样：将提取物粉末（已备）溶解于5mL石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯（7:3）混合溶剂中，用吸管吸取样品溶液于色谱柱床顶端；（3）洗脱：用石油醚（沸程60~90℃）-乙酸乙酯（7:3）为洗脱剂洗脱，分段收集，每份10mL，用硅胶薄层板跟踪检查。
5. 实验产物结构鉴定的相关谱图示例以大黄素为例将相关图谱附在文后供参考，见附图大黄素（Emodin）:IRνmax: 3462,3414,1628,1616,1400,1367,1136,1105,760cm-l；6【注意事项】1. 酸水解过程中加热时间应足够长，以保证水解充分。
2. 同一碱液提取时可分为几次萃取，以保证提取充分，可以用薄层色谱作监测。
3. 乙醚总提取物要用保鲜膜封严实，防止乙醚挥发。
【学习要求及思考题】1. 掌握大黄蒽醌化合物的主要性质，酸性与结构的关系，重要的显色反应及其应用。
2. 掌握大黄蒽醌类成分的分离方法及其原理。
3. 如何检识中药中是否存在蒽醌类成分?4. 比较大黄酸、大黄素及大黄素甲醚的酸性及在硅胶G吸附色谱板上的R f值。
【参考文献】1. 肖培根主编.新编中药志. 化学工业出版社,2002, 第一卷,66～672. 中华本草.上海科技出版社,1999, 第二册,第六卷,708～7213. 王乃利,陈英杰.分离方法的改进与设计. 沈阳药学院学报,1979,(11),84～894. 陈琼华,戴汉松,苏学良.中药大黄的综合研究XXX I大黄蒽醌衍生物系统分离的改进方法.天然产物研究与开发,2001,13(3):58～605. 陈琼华.中药大黄的生物化学研究XXXX III大黄蒽醌衍生物系统分离的方法改进. 药物生物技术,1995,2(2):33～366. 李晓莹,黎知林.大黄中蒽醌类成分提取分离方法研究. 广东药学,1999,9(4),27～297. 姚新生主编. 天然药物化学（第三版）. 北京：人民卫生出版社,2001,143～1668. 中国药科大学中草药化学教研室. 天然药物化学实验.1999,121～1229. 王振月,李延冰,匡海学.毛脉酸模根中大黄酚、大黄素的分离鉴定.中医药学报,1996,(02),5410. 李尚德,关雄泰.中国芦荟化学成分研究—芦荟大黄素的分离与结构鉴定.广东微量元素科学,1994,1(2),52～5411. 胡军,屠鹏飞,果德安. 秦岭大黄化学成分研究.西北药学杂志,1997,12(4),153～1557实验二槐花米中芦丁的提取、分离和鉴定【简介】芦丁也称芸香苷，广泛存在于植物界，其中在槐花米和莽麦叶中含量较高，可作为提取芦丁的原料。