基因工程制药复习
基因工程制药复习提纲 答案
名词解释1.基因工程基因工程是值在体外合成或重组特定的DNA，再与载体连接，最后导入到宿主细胞内表达、扩增出人们需要的蛋白质，而且使这种性状可遗传给后代的技术。
包含上游技术和下游技术。
2.基因工程制药基因工程制药是通过基因工程的方法生产药物，具体包含获得目的基因、构建重组质粒、构建基因工程菌、培养工程菌、产物别离纯化、产品加工检验等步骤。
3.逆转录逆转录〔reverse transcription〕是某些RNA病毒由逆转录酶直接利用RNA为模板合成DNA的过程。
4.CDNA以生物细胞的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA的第一条链，然后在合成双链DNA，并将合成的cDNA双链重组到质粒载体或噬菌体载体上，倒入宿主细胞进行增殖。
在这个过程中合成的双链DNA叫做cDNA。
5.引物引物是人工合成的单链DNA小片段，碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的5’端相同。
是PCR的起始点。
6.表达载体所谓表达载体〔expression vector〕是指具有宿主细胞基因表达所需的调节操作序列，能使外源基因在宿主细胞内转录和翻译的载体。
7.克隆载体克隆载体〔cloning vector)是把一个有用的制药DNA片段通过重组DNA技术，送进受体细胞中进行繁殖的工具。
8.载体载体〔vector〕，指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段〔目的基因〕转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。
9.汇报基因载体分子上有一种特别意义的基因序列，它们表达的目的是为了证明载体已经进入宿主细胞，并将含有外源基因的宿主细胞从其他细胞中区分并挑选出来。
这种基因就是汇报基因。
10.启动子启动子是位于结构基因5'端上游的DNA序列，能被RNA聚合酶识别并结合，具有转录起始的特异性11.PCR聚合酶链式反响是一种体外放大扩增特定DNA片段的分子生物学技术，它主要包含变性、退火、延伸三个过程，并且屡次循环。
12.包涵体包涵体〔inclusion body〕是存在于细胞质中的一种不可溶的蛋白质聚集折叠而形成的晶体结构物。
生物技术制药复习知识点
生物技术制药复习知识点第一章绪论1.生物制药的研究内容包括基因工程制药, 细胞工程制药, 酶工程制药和发酵工程制药。
2.生物技术制药, 是采用现代生物技术人为地创造一些条件, 借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品。
3.生物技术药物, 是采用DNA 重组技术、单克隆抗体技术或其它生物新技术研制的蛋白质、治疗性抗体或核酸类药物。
4.生物药物, 指包括生物制品在内的生物体的初级和次级代谢产物或生物体的某一组成部分, 甚至整个生物体用作诊断和治疗的医药品。
5.现代生物药物四种类型: ①应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂。
②基因药物, 如基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等。
③来自动植物和微生物的天然生物药物。
④合成与部分合成的生物药物。
6.生物药物按功能用途分为三类: 治疗药物, 预防药物和诊断药物。
7.生物技术药物的特性：分子结构复杂, 具种属特异性, 治疗针对性强、疗效高, 稳定性差, 基因稳定性, 免疫原性、重复给药会产生抗体, 体内半衰期短, 受体效应, 多效性和网络效应, 质量控制的特殊性, 生产系统的复杂性。
8.生物技术制药特征：高技术, 高投入, 长周期, 高风险, 高收益。
9.基因诊断: 指采用分子生物学的方法在DNA水平或RNA水平对基因的结构和功能进行分析从而对特定的疾病进行诊断。
第二章基因工程制药1.利用基因工程技术生产药品的优点: （1）可以大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等）, 为临床使用提供有效的保障；（2）可以提供足够数量的生理活性物质, 以便对其生理、生化和结构进行深入的研究, 从而扩大这些物质的应用范围；（3）利用基因工程技术可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；（4）内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处, 可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除；（5）利用基因工程技术可获得新型化合物, 扩大药物筛选来源。
(整理)基因工程制药-复习.
一、名词解释1.杂交核酸分子杂交技术：具一定同源性的两条（DNA或RNA）单链在适宜的温度及离子强度等条件下，可按碱基互补配对原则特异性地复性，形成双链。
2.探针：一段序列已知的单链核酸片段，通过互补的方式检测单链核苷酸序列。
3.粘粒粘粒载体（cos质粒载体）：Cos质粒是一类人工构建的含有λ-DNA cos序列和质粒复制子的特殊类型的载体。
4.同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。
如BamH I、BglⅡ、Bcl I、XhoⅡ等。
5.同裂酶：来源不同的内切酶，识别和切割的是同样的核苷酸靶序列的酶。
不同同裂酶对位点的甲基化敏感性有差别，用来研究甲基化作用。
6.cDNA文库：某生物mRNA反转录产生cDNA片段分别与合适的克隆载体相连，通过转化贮存在一种受体菌的群体之中，把这种包含某生物基因组全部基因cDNA的受体菌群体，称为该生物cDNA文库。
7.基因工程药物：指利用基因工程技术研制和生产的药物，主要包括重组蛋白（多肽）药物、反义核酸药物、DNA药物和基因工程抗体等。
8.盐析盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。
9.星活性星号（*）活性：高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH值等，会使一些核酸内切酶的识别和切割序列发生低特异性，即所谓的“星活性”现象。
Eco RI*代表Eco RI的星号活力。
星活性的特点：限制酶识别序列特异性降低例如：EcoRI（高pH值或低盐离子强度）5’G AATTC3’变成5’N AA TTN3’，另有一种情况是对AATT中的A、T分辨不严格。
二、简答题1.如何克隆微生物的纤溶酶基因？PCR法分离目的基因：根据核酸序列的相关信息，设计简并引物，通过对mRNA进行反转录得到cDNA，以cDNA为模板，然后将目的基因通过PCR方法扩增，或者直接从基因组DNA扩增的方法。
根据已知探针克隆基因：首先将探针作放射性或非放射性标记，再将其与用不同内切酶处理的基因组DNA杂交，最后将所识别的片段从胶中切下来，克隆到特定的载体（质粒、噬菌体或病毒）中作序列测定或功能分析。
基因工程制药
第三章基因工程制药第一节：基因工程制药基本环节基因工程技术六个基本过程：分离→酶切→连接→转化→筛选→验证。
（一）基因工程中常用的工具酶：ⅰ：核酸限制性内切酶：是一类能够识别双链DNA分子上特定核苷酸序列，并进行切割的水解酶，简称内切酶。
主要存在于原核微生物中。
（1）限制和修饰系统：原核微生物中存在限制性内切酶及甲基化酶，它们对DNA底物有相同的识别序列，但有相反的生物功能。
而甲基化酶具有宿主专一性，可识别宿主双链DNA分子的特定序列进行甲基化修饰，而不修饰外源性DNA分子，从而避免了限制酶对宿主DNA的降解。
（2）限制性内切酶的分类：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型。
其中Ⅱ型限制性内切酶识别和切割产物是特异性的。
（3）Ⅱ型核酸限制性内切酶：1．酶切方式有两种：①断裂位置交错，形成粘性末端，又可分为从5′粘性末端和3′粘性末端；②对称轴处断裂形成平头末端。
2．同裂酶：是指来源不同，识别序列相同的酶，其切割位点同，产生平头或粘性末端。
3．同尾酶：来源和识别序列都不同，但切割后产生相同的粘性末端的酶。
4．限制性内切酶产生的末端的连接方式有三种：①匹配粘性末端的连接②平端连接③不匹配粘性末端的连接（有两种：67）5．限制性内切酶反应的影响因素：DNA的纯度、反应速度、反应体系的缓冲液、酶量、体积、时间、DNA甲基化程度、DNA的分子构型等。
ⅱ：DNA连接酶：是指催化两条分别具有5′-磷酰基末端与3′-羟基末端的DNA单链连接形成磷酸二酯键的酶。
目前使用的DNA连接酶:T4噬菌体DNA 连接酶、大肠杆菌（E.coli）DNA连接酶。
特点1．T4-连接酶：能够连接含粘性末端或平头末端连接的DNA片段或双链DNA 的切口。
连接反应中 ATP+作能源辅助因子。
2．大肠杆菌：只能连接粘性末端DNA片段或双链DNA的切口，不能连接平头末端DNA片段。
在连接反应中用NAD+作能源辅助因子。
ⅲ：聚合酶：（68）（二）载体：概念：（1）载体：是指凡来源于质粒或噬菌体的ＤＮＡ分子，可以供插入或克隆目的基因ＤＮＡ并具有运载外源ＤＮＡ导入宿主细胞能力的片段。
生物技术制药复习题
生物技术制药复习题第一章绪论第一节生物技术的发展史1、生物技术：以生命科学为基础，利用生物体的特性和功能，设计构建具有与其性状的新物种或新品系，并与工程结合，利用这样的新物种进行加工生产，为社会提供商品服务的一个综合性技术体系。
它的范畴：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、生化工程。
基因工程是生物技术的核心。
P12、蛋白质工程----第二代基因工程；海洋生物技术-----第三代生物技术P13、生物技术发展史：传统、近代（抗生素、发酵罐）、现代（DNA重组）P31974年，Boyer和Cohen建立了DNA重组技术1975年，Koher 和Milstein 建立了单克隆抗体技术1982年，第一个基因工程药物重组人胰岛素被批准上市1989年，我国第一个基因工程药物干扰素批准上市2003年，中国的重组腺病毒-p53注射液成为石阶上第一个正式批准的基因治疗药物。
第二节生物技术药物1、生物技术制药：生物技术制药：采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品。
P42、生物技术药物：采用DNA重组技术活其他生物技术研制的蛋白质或核酸类药物。
它与天然生化药物、微生物药物、海洋药物和生物制品共同归为生物药物。
3、现代生物药物分为4类：重组DNA技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂；基因药物；天然药物；合成与部分合成药物。
4、生物药物按用途分为：治疗药物；预防药物；诊断药物。
5、生物技术药物的特征：（1）分子结构复杂；（2）具有种属特异性；（3）治疗针对性强、疗效高；（4）稳定性差（5）基因稳定性；（6）免疫原性；（7）体内半衰期短；（8）受体效应；（9）多效性和网络性效应；（10）检验的特殊性。
第三节生物技术制药1、生物技术制药的特征：高技术、高投入、长周期、高风险、高收益。
P52、生物技术在制药中的应用有哪些？P7（1）基因工程制药：① 开发基因工程药物，如干扰素（IFN）、红细胞生成素（EPO）等②基因工程疫苗，如乙肝基因工程疫苗③基因工程抗体，它可以作为导向药物的载体④基因诊断与基因治疗⑤应用基因工程技术建立新药的筛选模型⑥应用极影工程激活素改良菌种，产生新的微生物药物⑦改进药物生产工艺⑧利用转基因动、植物生产蛋白质类药物。
生物技术制药复习知识点
生物技术制药复习知识点第一章绪论1.生物制药的研究内容包括基因工程制药，细胞工程制药，酶工程制药和发酵工程制药。
2.生物技术制药，是采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品。
3.生物技术药物，是采用DNA 重组技术、单克隆抗体技术或其它生物新技术研制的蛋白质、治疗性抗体或核酸类药物。
4.生物药物，指包括生物制品在内的生物体的初级和次级代谢产物或生物体的某一组成部分，甚至整个生物体用作诊断和治疗的医药品。
5.现代生物药物四种类型：①应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂。
②基因药物，如基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等。
③来自动植物和微生物的天然生物药物。
④合成与部分合成的生物药物。
6.生物药物按功能用途分为三类：治疗药物，预防药物和诊断药物。
7.生物技术药物的特性：分子结构复杂，具种属特异性，治疗针对性强、疗效高，稳定性差，基因稳定性，免疫原性、重复给药会产生抗体，体内半衰期短，受体效应，多效性和网络效应，质量控制的特殊性，生产系统的复杂性。
8.生物技术制药特征：高技术，高投入，长周期，高风险，高收益。
9.基因诊断：指采用分子生物学的方法在DNA水平或RNA水平对基因的结构和功能进行分析从而对特定的疾病进行诊断。
第二章基因工程制药1.利用基因工程技术生产药品的优点：（1）可以大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等），为临床使用提供有效的保障；（2）可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围；（3）利用基因工程技术可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；（4）内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除；（5）利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。
2.基因工程技术就是将目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建工程菌（或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。
《基因工程制药》期终考试试卷
《基因工程制药》期终考试试卷一、选择题（每小题只有一个正确的答案，每小题1分，共30分）1．天然限制性内切酶BamH I的来源是：( ) A．Bacillus amyloliquefaciens B．Escherichia coliC．Haemophilus influenzae D．Providencia stuartii2．天然限制性内切酶EcoR I的来源是：( ) A．Bacillus amyloliquefaciens B．Escherichia coliC．Haemophilus influenzae D．Providencia stuartii3．大肠杆菌连接酶需要的辅助因子分别是：( ) A．NAD B．ATP C．ADP D．NADH4．一限制性内切酶识别6个核苷酸的序列，该识别序列的出现概率为：( ) A．1/64 B．1/66C．1/46D．1/ 445．两平滑末端DNA片段间的连接可用以下哪种连接酶：( ) A．大肠杆菌DNA连接酶或T4 DNA连接酶B．大肠杆菌DNA连接酶C．T4 DNA连接酶D．两者都不能用6．某一线性DNA含有n个限制性核酸内切酶Hind III的识别序列，用Hind III 完全酶切该双链环状DNA后，产生的片段数为：( ) A．n B．n+1 C．n-1D．n+27．PCR反应中，在最优条件下，经过n次循环后，待扩增的特异性DNA片段基本上达到多少个拷贝数：( )A．2 n B．2n C．n D．2 n-18．Western印迹杂交作用的对象是：( ) A．DNA B．RNA C．蛋白质D．以上都不对9．DNA分子在电场作用下，可在凝胶中向正极方向移动，对其迁移率描述正确的是：( ) A．迁移率与DNA分子的构型和大小相关，而与DNA分子中的碱基组成和顺序无关B．迁移率与DNA分子的构型和大小以及DNA分子中的碱基组成和顺序都相关C．迁移率与DNA分子的构型和大小无关，而与DNA分子中的碱基组成和顺序相关D．迁移率与DNA分子的构型和大小以及DNA分子中的碱基组成和顺序都无关10．以下哪种细胞不是原核生物受体菌：( ) A．大肠杆菌B．枯草杆菌C．蓝细菌D．酵母菌11．限制性核酸内切酶以双链DNA为底物，在合适的反应条件下，识别一定的核苷酸序列，使两条核苷酸链上特定位置的什么键断开，产生具有3’-OH基团和5’-P基团的片段：( ) A．氢键B．磷酸二酯键C．磷酸三酯键D．其他化学键12．PCR延伸的温度是多少：( ) A．37℃B．42℃C．56℃D．72℃13．下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是：( ) A．质粒是共价环状的双链DNA 分子B．天然质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列C．质粒在宿主细胞内能独立于染色体DNA 自主复制D．质粒并非其宿主细胞生长所必需14．下列五个DNA 片段中含有回文结构的是：( ) A．GAAACTGCTTTGAC B．GAAACTGGAAACTG C．GAAACTGGTCAAAG D．GAAACTGCAGTTTC15．基因工程操作的三大基本元件是：( ) I 供体II 受体III 载体IV 抗体V 配体A．I + II + III B．I + III + IVC．II + III + IV D．II + IV + V16．SDS-PAGE中的染色剂是：( ) A．EB B．考马斯亮蓝C．溴酚蓝D．二甲苯青17．T4-DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是：( ) A．2' -OH 和5' -P B．2' -OH 和3' -PC．3' -OH 和2' -P D．3' -OH 和5' –P18．蓝白斑筛选，重组菌呈现：( ) A．蓝色B．白色C．红色D．无色19．RNA在多少波长处有最大吸收峰：( ) A．260nm B．280nm C．560nm D．600nm20．限制性内切酶切割方式有：( ) A．切成平头B．切成5′端突出黏性末端C．切成3′端突出黏性末端D．以上都对21．下列五个DNA 片段，最可能含有EcoRⅠ酶切位点的是：( ) A．GAAACTGCTTTGAC B．GAAAAGATCTACTG C．GAAACTGGTCAAAG D．GAAAGAATTCTTTC22．下列哪一个不是II型限制性内切酶的特点：( ) A．通常识别4-8个相连的核苷酸B．识别序列为旋转对称C．序列内通常富含GC D．切割位点一定在识别序列内23．关于PCR说法错误的是：( ) A．变性温度是95℃B．需要镁离子的参与C．退火温度是55℃D．循环次数一般是3024．下列哪些是重组子的筛选鉴定方法：( ) A．电泳鉴定B．PCRC．核酸印迹D．以上都行25．蛋白质分子量的测定可以用哪个方法：( )A．琼脂糖凝胶电泳B．SDS-PAGEC．PCR D．Northern blot26．组成核酸分子的核苷酸有多少种：( ) A．5 B．6 C．8 D．1227．限制性核酸内切酶作用的底物是()。
基因工程复习资料含复习资料
基因工程复习资料含复习资料基因工程复习题一、名词解释：（10～20%）基因工程基因工程工具酶限制性内切酶限制性内切酶的Star活性PCR引物PCR扩增平台期DNA芯片基因组文库cDNA文库转化限制与修饰系统原位杂交：将细胞或组织的核酸固定保持在原来的位置上，然后用探针与之杂交的一种核酸分子杂交技术，该方法可较好地反映目的基因在细胞或组织中的分布和表达变化。
粘性末端：双链DNA被限制性内切酶切割后，形成的两条链错开几个碱基，而不是平齐的末端。
Northern印迹杂交：将RNA进行变性电泳后，再转移到固相支持物上与探针杂交的一种核酸分子杂交技术，可用于检测目的基因的转录水平。
转位：一个或一组基因片段从基因组的一个位置转移到另一个位置的现象。
基因工程：在体外，用酶学方法将各种来源的DNA与载体DNA 连接成为重组DNA，继而通过转化和筛选得到含有目的基因的宿主细胞，最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子的过程称为基因工程，又称基因克隆、DNA克隆和重组DNA等。
目的基因：基因工程中，那些被感兴趣的、被选作研究对象的基因就叫作目的基因。
连接器：人工合成的一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段，连接到目的基因的两端，便于基因重组中的切割和连接。
转化：受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变的过程。
停滞效应：PCR中后期，随着目的DNA扩展产物逐渐积累，酶的催化反应趋于饱和，DNA 扩增产物的增加减慢，进入相对稳定状态，即为停滞效应，又称平台期。
逆转录PCR：以mRNA为原始模板进行的PCR反应。
PCR: 即聚合酶链式反应。
在模板，引物，4种dNTP和耐热DNA 聚合酶存在的条件下，特异性地扩增位于两段已知序列之间的DNA区段地酶促合成反应。
α-互补（α-complementation）：指在M13噬菌体DNA或PUC 质粒序列中，插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸的核苷酸序列（又称α-肽），该序列不能产生有活性的β-半乳糖苷酶。