实验动物染色体标本的制备
小白鼠染色体标本的制作染色与观察
小白鼠染色体标本的制作染色与观察染色体是生物体内的遗传物质DNA和蛋白质的组合体，通过对染色体的观察可以了解生物种群的遗传信息和进化变化。
染色体观察在遗传学、病理学等领域具有重要的应用价值。
本文将介绍小白鼠染色体标本的制作方法以及染色和观察的步骤。
1.小白鼠染色体标本的制作方法制作小白鼠染色体标本的过程主要包括取材、处理和固定等步骤。
（1）取材选择健康的小白鼠，尤其是发育期的小白鼠，取得其骨髓或肝脏等组织。
取材时要注意卫生和无菌操作，以保证样品的质量。
（2）处理将取得的骨髓或肝脏等组织放入离心管中，加入等体积的生理盐水悬浮液，并在其中加入适量的KCl溶液进行渗透，使细胞膜变得脆弱，易于裂解释放染色体。
（3）固定将处理后的细胞悬浮液滴到已经消毒的玻璃片上，然后迅速将玻璃片倾斜，让细胞悬浮液自然扩散开来。
待其固定后，用甲醛进行固定处理，固定时间一般为5-10分钟。
2.小白鼠染色体染色的步骤（1）裂解将固定的标本玻璃片在室温下迅速加热至约60℃的热板上，使染色体细胞裂解释放出染色体。
裂解时间一般为5-10分钟。
（2）染色将裂解后的细胞标本浸泡在浓度适当的染色液中，常用的染色液有乔治染色液、甲酸-吡啶染色液和乙酸酒精染色液等。
对于小白鼠染色体标本的染色，乔治染色液是较为常用的选择。
（3）洗涤染色后的标本需要进行洗涤步骤以去除多余的染色液和固定剂。
使用生理盐水或磷酸缓冲液进行反复洗涤，直到洗涤液清澈。
3.小白鼠染色体观察的步骤在染色体标本制作和染色之后，我们可以通过显微镜进行小白鼠染色体的观察，并对染色体进行测量和特征描述。
（1）显微镜观察将染色后的标本玻璃片固定在显微镜载玻片上，使用显微镜进行观察。
观察过程中可以选择不同倍数的镜头以获得更详细的图像。
（2）测量和特征描述通过观察染色体在显微镜下的形态和结构，我们可以测量染色体的长度、形状等参数，并对染色体的特征进行描述，如染色体数量、着丝点的位置等。
总结：小白鼠染色体标本的制作染色与观察是一项重要的生物实验技术，可以帮助我们了解生物的遗传特征和疾病的发生机制。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
通过制备动物骨髓细胞染色体标本，进一步了解细胞染色体的形态和结构，以及染色体在遗传学研究中的应用。
实验原理
动物骨髓细胞是一种快速分裂细胞，其中染色体数目和结构较为清晰，因此通常用于染色体分析和遗传学研究。
为了制备动物骨髓细胞染色体标本，需要经过细胞取样、细胞处理与固定、染色和镜检等几个步骤。
实验步骤
1. 取样：在实验动物体内取出一小段骨髓组织，置于离心管中，加入10ml生理盐水，轻轻摇晃，使细胞均匀分散。
2. 细胞处理和固定：取出适量的细胞液，加入等体积的去离子水后进行处理。
将细胞液滴于预先贴有载玻片上的正常细胞培养液中，使其渐渐均匀分散。
将玻片放置在室温下，使细胞贴附在玻片上并进行细胞固定。
细胞固定可用10%甲醛或70%乙醇，也可用50%醋酸处理。
3. 染色：将固定的细胞标本先置于1%琼脂糖中5～10分钟，用注射器吸取琼
脂糖，并把细胞标本冲洗干净，然后用生理盐水洗净。
若要染色，则滴上适量的霉素酚-吡啶溶液或可以染细胞核者，如吉姆萨红溶液或乙酰苯胺-三甲胺水溶液等，等颜色形成后即可洗净。
4. 镜检：放入顶匣，用显微镜观察染色后细胞形态和染色体。
如果需要拍照，则可利用显微摄影技术，对样本进行记录。
实验结果
通过实验可以观察到动物骨髓细胞染色体的形态、数量和结构，进一步了解染色体在遗传学研究中的应用。
同时，该实验对熟悉细胞培养和染色技术也有一定帮助。
实验结论
通过本次实验，我们可以获得动物骨髓细胞染色体标本，并学习了细胞处理、固定、染色和镜检等关键步骤。
实验结果可以为生物学研究提供相关实验基础。
实验九小鼠骨髓细胞染色体标本制备
四、实验步骤
1、预处理：实验 。作用：
2、处死动物：断颈处死小白鼠， 解剖小鼠内生殖器官，鉴别雌雄性别
3、取股骨：剥取股骨，剔去肌肉 组织，剪去两端的股骨头。
11、滴片：用吸管吸取细胞悬液， 滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰 上微微加热，室温晾干。预冷载玻片 的作用：
12、染色：10% Giemsa染液染色30分 钟。
13、镜检：低倍———高倍 。
五、作业
1、选择染色体清晰，分散好的 中期分裂相，计数染色体，显微摄影、 并打印出照片。
2、分析成功或失败的原因。
4、取骨髓：注射器吸取0.6ml生 理盐水, 针头插入股骨一端,反复冲 洗骨髓到10ml的离心管中。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用
6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定；
同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具：
注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品： 0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨 髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造 血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告实验目的：本次实验的目的是通过制备动物骨髓细胞染色体标本，加深对细胞遗传学和染色体结构的理解，同时掌握常规细胞检测技术。
实验原理：细胞核持有着生物体的遗传信息，而染色质可以分为染色体和非染色体两种，其中染色体是由DNA及其辅助蛋白组成的。
通过细胞分裂过程中，染色体会缩短、厚度增加、染色带可清晰分辨等特点来进行分类和编号。
利用这些特点可以制备出动物骨髓细胞染色体标本。
实验步骤：1. 首先准备动物骨髓细胞样品，可通过小鼠骨髓涂片或静脉血（受试者需要同意），将样品转移到已经预处理好的无菌平板上。
2. 在离心管中加入10ug/ml的柱前荧光素-ethidium bromide(PI)，再将细胞样品加入离心管中，轻轻摇晃片刻，稍微放置几分钟。
3. 用宽口的滴管取少许制片液，滴在已经处理好的载玻片上，尽量保证滴管斜着滴落制片液，避免气泡出现，将载玻片浸泡于制片液中。
4. 轻轻捞取离心管中的细胞样品，均匀地滴在制片液的中心处，然后放置在湿度大于80%，温度为37°C的恒温箱内1-2h。
5. 制片完成后，对载玻片进行显微镜检查，选择细胞密度适当、染色较清晰的染色体标本进行下一步操作。
6. 将载玻片放置在冷却的媒体溶液（0.075mol/L KCl及0.9%NaCl）中，冷冻10-20min。
7. 取出载玻片，使用正差相干显微镜观察着染色体的分布和形态，并进行拍照记录。
8. 得到的染色体标本可用于常规染色体学诊断。
实验结果：通过本次实验制备得到的动物骨髓细胞染色体标本，可以进行常规染色体学分析，观察细胞核中的染色体数目、形态和结构等特征，并可以用于细胞遗传学研究和临床诊断。
实验结论：本次实验通过制备动物骨髓细胞染色体标本，加深了对细胞遗传学和染色体结构的理解，同时掌握了常规细胞检测技术。
通过观察和分析染色体标本的形态和结构，可以进行细胞遗传学的研究与临床诊断。
动物染色体标本的制备
动物染色体标本的制备
一、实验目的
1. 了解染色体标本制备的基本原理
2. 掌握滴片法制备染色体标本的一般步骤
二、实验原理
每一物种的细胞一般都具有一定数目、形状和大小的染色体，在秋水仙素的作用下可使分裂细胞阻断在中期，此时染色体形态最典型，然后通过低渗、固定、染色等步骤，便可在显微镜下呈现出其形态。
三、实验用品
器具：显微镜、培养皿、手术剪、镊子、冷冻载片、滴管
试剂：秋水仙素、生理盐水、甲醇、冰醋酸、低渗液、PH6.8磷酸缓冲液、Giemsa染色液
材料：蟾蜍
四、实验方法步骤
1. 前处理实验前3－4小时，按每克体重3ug剂量给蟾蜍的腹腔注射秋水仙素；
2. 取材打开蟾蜍腹腔，截取1－2cm长的一段小肠（以十二直肠为好），用见到剖开成片状，在生理盐水中洗净；
3. 低渗将洗净的小肠投入到盛有5mL低渗液的小试管中，在37℃水浴下处理30分钟以上；
4. 固定弃去低渗液，加入新配制的甲醇（3）：冰乙酸（1）固定液约5ml，静止固定40分钟左右；
5. 解离弃去固定液，加入约2ml60％的冰乙酸，轻轻摇动，使解离的细胞充分散开，5分钟后弃去小肠，即得细胞悬浮液；
6. 滴片吸取少许细胞悬浮液，在适当的高度滴3－4滴于冰冷的载片上，迅速吹斜气；
7. 干燥滴片自然风干或吹风机吹干；
8. 染色在载片上滴十滴磷酸缓冲液，再滴一滴Giemsa染液，橡皮球轻轻吹均匀，染色30分钟左右；
9. 观察吹干后在显微镜下观察。
染色体的标本制作实验
实验六染色体的标本制作及其组型实验在真核生物中染色体的数量和形态具有物种的特异性一直可以作为此物种分类的基本依据之一。
染色体作为遗传物质-DNA 的载体对生物的遗传、变异、进化和个体发生以及细胞的增殖和生理过程的平衡控制等都具有十分重要的意义。
每一个物种的细胞一般都有一定数目、形状和大小的染色体。
将体细胞核中全部染色体按照其大小、着丝粒位置以至带型有序地排列起来此模式图象排列即为核型karyotype或染色体组型。
核型分析均是以中期染色体为标准对制作出的染色体标本进行照相以获得染色体的显微图象并将其剪裁排列即成。
华裔学者庄有兴Joe Hin Tjio腿鸬溲д逜.Levan合作利用低渗法研究胎儿肺组织的染色体标本制做方法终于在1956年首次确定了人类的染色体数目是46条而不是前人所主张的48条这为后来的人类核型研究奠定了基础。
1.实验目的 1.1 初步掌握动物骨髓染色体标本制备基本过程了解操作步骤的原理。
1.2了解常用实验动物染色体的数目及特点。
通过组型实验掌握染色体组型的基本方法2.实验原理凡细胞处于活跃增殖状态或者经过各种处理后细胞就可进入分裂的任何动物组织均可用于染色体分析。
在正常动物体内精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。
给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期然后采用常规空气干燥法制备染色体即可得到大量可分析的染色体标本。
本方法简便、可靠不需要经体外培养和无菌操作易于推广。
骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。
但在取材方面精巢又比骨髓要简易一些故本实验也选用小鼠的精巢为实验材料。
对于小鼠精巢染色体标本的制作一般包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成使细胞分裂停滞在中期使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀以至于在滴片时细胞被胀破使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。
实验七 动物染色体标本的制备与观察
实验七动物染色体标本的制备与观察实验目的1．初步掌握动物骨髓染色体标本制备过程，了解操作步骤的原理。
2．了解常用实验动物染色体的数目及特点。
实验原理染色体的分析往往是选择细胞处于活跃增殖状态，或者经过各种处理后细胞进入分裂的动物组织。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的组织之一。
给动物注射一定剂量的秋水仙碱即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。
在动物实验时，可在取材前经腹腔注射有丝分裂抑制剂，一般常用秋水仙素，这此方法对于动物的核型分析是非常有用的。
本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。
因此骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。
实验用品一、材料无尾两栖类蛙属或蟾蜍属动物二、器材水平离心机、显微镜、刻度离心管（10ml）、注射器（1ml）、载玻片、烧杯（400ml）、量筒（100ml）、试管架、镊子、剪刀、解剖刀、吸管。
三、试剂1．1%柠檬酸钠溶液：称取1g柠檬酸钠（柠檬酸三钠，Tri-sodium citrate, AR）溶解于100ml 蒸馏水中。
2．500μm/ml、100mg/ml秋水仙素溶液。
3．Giemsa（姬姆萨）原液（pH6.8）Giemsa染粉1g甘油（丙三醇，glycerine, AR）33ml甲醇（methyl alcoholA, AR）45ml将染粉倾入乳钵，加几滴甘油，在乳钵内研磨直到无颗粒为止，此时再将全部剩余甘油倒入，放入60～65℃保温箱中保温2h后，加入甲醇搅拌均匀，保存于棕色瓶中备用。
4．0.067mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.8）Na2HPO4·12H2O 11.81g(或Na2HPO4·2H2O 5.92g)KH2P04 4.5g溶解于蒸馏水中至1000 ml。
5．1:10 Giemsa磷酸缓冲液（pH6.8）：取1ml 姬姆萨原液用9ml 0.067mol/L 磷酸盐缓冲液(pH 6.8)稀释即可。
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5.吸走固定液，换入无水乙醇，蒸汽固定10-20分钟。 6.取出载玻片，缓缓倒去低渗液，用吸管将
固定液II(无水乙醇:冰醋酸=1:2)自载玻片 的一端缓慢滴下形成水幕，固定3-4次，直 立载玻片空气干燥。
Giemsa染色
改良苯酚品红染色
2020体标本的制备成败决定于取材， 若抽取的骨髓太少或太稀，细胞数目过少， 不易获得较多的中期分裂相。
2.低渗处理极为重要，低渗不够，则染 色体聚在一起，分散不好。太过，则造成细 胞破碎，染色体丢失。
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五、实验结果
取前肢1：找到关节所在。
四、实验步骤
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取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。
四、实验步骤
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四、实验步骤
注意，每组做2片 蒸汽固定法
3.在载玻片上滴1滴蒸馏水，然后滴加2滴第2步获得的骨髓细胞悬液。轻 轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。18-20℃下静置， 低渗处理20-30分钟。注意防止水分蒸发。
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人外周血淋巴细胞染色体（Giemse 染色）
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三、实验用品
• 试剂：0.65％生理盐水，甲醇—冰醋酸(3:1)固 定液, 蒸馏水，Giemsa染液。
• 器材：显微镜，离心机，搪瓷盘，剪刀，骨剪， 离心管，注射器，染色缸。
1．找出最好的几个分裂相，数出染色体条数. 2. 画出两个好的分裂相的显微图。画图里用铅笔，
对照着显微镜视野来画，不要画“想象图”。 3. 取骨髓前，为什么要给牛蛙注射秋水仙素？
牛蛙染色体，2n = 26
五、实验结果
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• 材料：肉用成体牛蛙
四、实验步骤
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动物的药物处理（课前已经完成）
牛蛙称重，按每克体重2 μg的剂量腹腔注射 秋水仙碱溶液(用0．65％生理盐水配制)。注射 后3.5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。
四、实验步骤
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1．每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫腓 骨等长骨。剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程度以刚刚露 出骨髓组织为宜。每组保证有1根后肢长骨，或者2根前肢长 骨。
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实验 7 动物染色体的制备
--牛蛙骨髓细胞染色体标本的制备、观察
一、实验目的
1.了解制备中期染色体标本的原理。 2.熟悉并初步掌握制备骨髓染色体的操作方法。
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二、实验原理
染色体是生物遗传基因的载体。在物种进化、作物育种、 性别鉴定、基因定位以及癌症和遗传性疾病的诊断中，有时 需要制备染色体标本。动物的骨髓中存在大量活跃的进行有 丝分裂的细胞，是染色体制备的理想材料。给动物注射了特 异作用于微管系统的秋水仙素后，可以抑制纺锤体的形成， 使分裂细胞阻断于有丝分裂中期。收集骨髓细胞，低渗处理， 使细胞质膜破裂，以利染色体的分散。细胞经固定后，于预 冷的载玻片上滴片，使染色体散开，再用姬姆萨染色，便可 以制成染色体标本。
四、实验步骤
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四、实验步骤
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取后肢：剪开牛蛙后肢与躯干接合部的肌肉，可看到膨大的关节部。
四、实验步骤
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取后肢2：用剪刀顺着关节外围剪开。
四、实验步骤
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取后肢3：剪开后的后腿关节。
四、实验步骤
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13
45°
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四、实验步骤
蒸汽固定法
7.在干净的培养皿中放入两垛盖玻片（每垛3片），将固定并充 分干燥的载玻片有细胞的一面向下，放置于盖玻片上，将 Giemsa染料用吸管注入载玻片和培养皿底的间隙中，扣染 20-30分钟。
8.用蒸馏水稍洗使脱去浮色，吸水纸吸干载玻片底面和周围的 水分，空气干燥后在显微镜下观察。不使用油镜的情况下不 需要盖玻片。
2．在小烧杯中加入3 ml的0.65％生理盐水，取带针头的 注射器，吸入1 ml 0.65％生理盐水，将针头沿骨的长轴方向 从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲 洗到10ml离心管中。注意：冲洗时动作要徐缓，以免溶液 喷出，损失骨髓细胞。此3ml的生理盐水要反复使用，直到 把所有材料中的骨髓冲出为止。将骨髓冲出物中大块白色脂 肪组织用针头挑出弃去。