半数致死量的测定..
半数致死量的测定
Reed-Muench法物受到病毒感染后，体内产生特异性中和抗体，并与相应的病毒粒子呈现特异性结合，因而阻止病毒对敏感细胞的吸附，或抑制其侵入，使病毒失去感染能力。
中和试验 (Neutralization Test)是以测定病毒的感染力为基础，以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据，来判定免疫血清中和病毒的能力。
中和试验常用的有两种方法：一种是固定病毒量与等量系列倍比稀释的血清混合，另一种是固定血清用量与等量系列对数稀释(即十倍递次稀释)的病毒混合；然后把血清－病毒混合物置适当的条件下感作一定时间后，接种于敏感细胞、鸡胚或动物，测定血清阻止病毒感染宿主的能力及其效价。
如果接种血清病毒混合物的宿主与对照(指仅接种病毒的宿主)一样地出现病变或死亡，说明血清中没有相应的中和抗体。
中和反应不仅能定性而且能定量，故中和试验可应用于：1.病毒株的种型鉴定：中和试验具有较高的特异性，利用同一病毒的不同型的毒株或不同型标准血清，即可测知相应血清或病毒的型，所以，中和试验不但可以定属而且可以定型。
2.测定血清抗体效价：中和抗体出现于病毒感染的较早期，在体内的维持时间较长。
动物体内中和抗体水平的高低，可显示动物抵抗病毒的能力。
3.分析病毒的抗原性。
毒素和抗毒素亦可进行中和试验，其方法与病毒中和试验基本相同。
用组织细胞进行中和试验，有常量法和微量法两种，因微量法简便，结果易于判定，适于作大批量试验，所以近来得到了广泛的应用。
(一) 定血清－稀释病毒法(病毒中和试验)1.病毒毒价的测定毒价单位：衡量病毒毒价(毒力)的单位过去多用最小致死量(MLD)，即经规定的途径，以不同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致全组试验动物死亡的最小剂量。
但由于剂量的递增与死亡率递增不呈线性关系，在越接近100％死亡时，对剂量的递增越不敏感。
而一般在死亡率越接近50％时，对剂量的变化越敏感，故现多改用半数致死量(LD50)作为毒价测定单位，即经规定的途径，以不同的剂量接种试验动物，在一定时间内能致半数试验动物死亡的剂量。
半数致死量的测定
4、精确配制一号药液
应取原液的量：
40＊5％＝x＊25％ x＝8ml
取原液8ml加入32ml水（一号药液） 从中取出每组药液量供一组使用， 在加入等量生理盐水，从中取出每 组药液量供二组使用，依此类推。
四、试验
［方法］ 一、预试
快速找出0%和100%估计致死量（Dn，Dm）
首先用原液尼克刹米（25%）10倍稀释
液的一系列药液以不同容量各试4鼠，进而 2ml / 10g ＝6ml。
动物：小鼠，体重18－22g ，雌雄各半 将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹腔注射，记录小鼠的死亡情况，计算药物的半数致死量。
半数致死量的测定
半数致死量（LD50）测定 [Bliss法]
(综合性实验)
[目的]
1.掌握药物半数致死量（LD50）测定的基本步骤 2.掌握用Bliss法计算药物的半数致死量。
[原理]
将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹腔 注射，记录小鼠的死亡情况，计算药物的半数致 死量。
[材料]
动物：小鼠，体重18－22g ，雌雄各半 药物：25%尼克刹米、生理盐水 器材：注射器、量筒、烧杯、鼠笼、 电子天平
则可逐渐递增或递减剂量，找到4/4和0/4剂 将一定浓度的药物按一定剂量比值给小鼠腹腔注射，记录小鼠的死亡情况，计算药物的半数致死量。
＝每组药液量／（1－K） 器材：注射器、量筒、烧杯、鼠笼、 电子天平
量即（Dm，Dn）。（0.2X0.7=0.14ml， ＝10＊30g＊ 0.
快速找出0%和100%估计致死量（Dn，Dm）
1、每组均取10只小鼠，腹腔注射尼克刹米按照不况。（40分）
药物半数致死量(LD50)的测定
2
0.25
LD50= lg-1 [Xm-i(Σp-0.5)] =lg-1[2.3522-0.0457(3.375-0.5)]
序贯法
取10只小鼠编号、称重 从最大剂量开始给药(尼可刹米0.1ml/10g) ，
观察10min. 若死亡，则下一只小白鼠降低一级 剂量，若没死亡，则用高一级剂量，依次类推， 直至10只小白鼠全死. 记录结果 计算X·R、∑（X·R） 按公式计算尼可刹米的半数致死量
LD50(median lethal dose)：
药物引起半数实验动物死亡的剂量。
治疗指数(therapeutic index TI)：
LD50和ED50的比值，药物安全性指标。
安全范围(margin of safety)：
LD5/ED95的值或 LD5 ~ ED95之间的距离。
LD50 、ED50的意义
-⑧
0 1 1 2.535
LD50=lg-1( C/n ) = lg-1(30.675/11)
= (mg/kg)
注意事项
要对实验动物进行随机化分组 各组药物浓度不能搞错，给药剂量要准
确 注意选择正确的给药部位（腹腔注射），
进针的深浅要一致
实验后处理
列表显示实验数据 统计全班实验结果，计算出普鲁卡因和
实验设计书格式
题目（居中） 设计者（居中） 专业、班别（居中） 指导老师（居中） 1．实验目的 2．立题依据（包括参考文献） 3．实验方案
(1)实验材料 (2)实验分组 (3)观察指标 (4)实验方法与步骤 4．创新点 5．实验结果预测
实验设计书评分标准
1.设计内容为学生原创，有创新性 2.设计依据充分，阐述相关理论知
列表统计P值 按公式计算普鲁卡因的半数致死量 LD50＝lg-1 [Xm-i(Σp-0.5)]
实验普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
DJY
2
测定LD50的方法很多 本实验用的是简化机率单位法
y = a+bx
机 率 单 位 y
对数剂量x
DJY 3
药物的剂量与效应关系
死 亡 数 累 积 死 亡 率
剂量
累 积 死 亡 率 对数剂量
DJY
剂量 机 率 单 位 对数剂量
4
测定药物LD50的设计方法 1.预实验：摸索接近100%和0%死亡的剂量 2.按比例设5-7个剂量组（0.65~0.90） 3.随机分组，动物数不少于10只（小鼠） 4.实验条件均应相等
【注意事项】
1.动物应随机分组
2.各小组的动物标记要统一
3.剂量由小到大，注射量要准。
DJY
9
思考题
1.什么是LD50?
2.测定LD50的根据和意义何在?
DJY
10
【结果与统计】
对数剂量 动物数 死亡率 机率单位 死亡数 (mg/kg) (x) (n) (%) (y) 剂量 1 2 110.8 147.7 2.0445 2.1694
3 4
5
196.9 262.5
350.0
2.2942 2.4191
2.5441
y = a+bx
用直线回归法求 a, b, r
DJY 8
DJY
5
测定LD50的用药设计方法 同一浓度 不同浓度 不同剂量 同一剂量
DJY
6
【方法与步骤】
1.分组：随机分成5个剂量组，每组2只小白鼠。
2.给药：采用不同浓度,同一剂量的方法
0.20ml/10g,腹腔注射，涂上标记
3.观察：用药1小时后,观察小白鼠死亡情况,并记
录各组动物的鲁卡因半数致死量(LD50)的测定
药理学-半数致死量(LD50)测定
半数致死量(LD50)
特点：1、是药物的剂量反应曲线上最敏感的 一点。
死亡率
50%
剂量
LD50
2、 测量简单，准确性高，误差小，易重复。
2020/7/28
实验目的
测定药物的LD50 了解常用的测定和计算方法
2020/7/28
实验方法
改良寇氏法 可直接用实验动物的死亡率进行计算，方法简 单，计算简便。
2 一组小鼠编号1-25，另一组小鼠编号26-50。 标签上排写编号，下排写体重，体重取整数。
3 根据Excell软件取随机数字,排序随机数字。 4 按随机数字取小鼠于另一鼠笼20/7/28
实验结果
解磷定LD50的实验结果
组别
1# 2# 3# 4# 5#
小白鼠 浓度
(只) （mg/ml）
10
1.5％
10
1.2％
10
0.96％
10
0.77％
10
0.61％
剂量 (mg/kg)
300 240 192 154 123
对数剂量
2.48 2.38 2.28 2.18 2.08
动物死亡数 死亡率
(只)
(％)
注：动物死亡数只统计给药后2小时内的死亡数
2020/7/28
3
1.5％
300
3
2#
3
0.75％
150
1
3#
3
0.375％
75
0
4#
3
0.188％ 35.5
0
2020/7/28
实验步骤
小鼠50只，称重，随即分为5组
1＃组10只
腹腔注射 1.5%的解 磷定溶液
普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定和计算
权重 系数 0.343 0.576 0.637 0.343
权重* Ｗ 3.43 5.76 6.37 3.43 ΣW
WX WX2
2.1554 1.3545 4.1766 3.0284 5.2374 4.3062 3.1525 2.8975 ΣWX ΣWX2
* 权重＝权重系数×各组动物数(n)
11.586 18.99 14.7219 6
例：将某批中药厚朴注射液腹注射于小鼠，三天内的死亡率如下：
剂量(g/kg)：
4.25 5.31 6.64 8.30
死亡率(死亡数/试验动物数)： 1/10 3/10 5/10 9/10
求LD50及其95%可信限，计算步骤如下：
（1）列计算用表
将各项数据填入表11-6，机率单位和权重系数分别查附表Ａ和附表Ｂ。
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首先用较大的剂量间距确定致死剂量的范围进而在此范围内设定若干剂量组剂量按等比方式设计相邻两个剂量间距比例在065085之间给药后观察714天内动物一般情况和死亡数根据死亡率计算ld50
普鲁卡因半数致死量(LD50)的测定和计算
目的 通过实验了解测定药物LD50的方法、步骤和计算过程。
材料 小鼠（体重17~25克，雌雄均可，应注明性别）；鼠笼，天平，1ml注射器；2%盐酸普鲁卡因溶液 ，苦味酸溶液。
（2）计算LD50 logD与机率单位之间有线性关系，因此将logD作为X，机率单位作为Y，用计算器作直线 回归。LD50的对数值与机率单位5相对应，故输入5(Y值)，连续按“SHIFT”和“…)]”键后显示的 X值，即为LD50的对数(称为m)，取其反对数，就是LD50。在此例，结果为： m=logLD50=0.7891 LD50=log-1m=6.1532g/kg （3）计算LD50的95%可信限 由于实验求得的LD50存在抽样误差，因此须按统计学方法确定LD50值95%可能出现的 范围(95%可信限)。在此例，由于n数相等，计算方法如下： m±1.96Sm(Sm为m的标准误) m=logLD50=0.7891(见上述计算步骤) Sm2=1/b2[(m-X)2/∑W(X-`X)2+1/∑W]
常见的药物半数致死量(LD50)的测定
常见的药物半数致死量(LD50)的测定1. 阿司匹林阿司匹林作为一种常见的解热镇痛药，其LD50值为每千克体重250500毫克。
在大鼠体内进行的实验表明，口服阿司匹林的LD50值约为每千克体重200400毫克。
2. 青霉素青霉素是一种广泛应用的抗生素，但其对某些动物（如小鼠、大鼠）的LD50值较高，约为每千克体重500010000单位。
需要注意的是，青霉素的毒性因物种而异，对人类的毒性较低。
3. 地高辛地高辛是一种用于治疗心脏病的药物，其LD50值为每千克体重13毫克。
在犬体内的实验显示，地高辛的LD50值约为每千克体重0.52毫克。
4. 吗啡吗啡是一种强效镇痛药，其LD50值为每千克体重300500毫克。
在大鼠体内进行的实验表明，口服吗啡的LD50值约为每千克体重400600毫克。
5. 苯巴比妥苯巴比妥是一种镇静催眠药，其LD50值为每千克体重200500毫克。
在小鼠体内进行的实验显示，苯巴比妥的LD50值约为每千克体重300400毫克。
需要注意的是，LD50值并非绝对固定，它受实验条件、给药途径、动物种类等多种因素影响。
因此，在评估药物安全性时，应以实际实验结果为准，并结合其他毒性指标进行综合分析。
同时，我们还需关注药物在人体内的实际毒性，以确保用药安全。
当然，让我们继续探讨药物半数致死量(LD50)的测定，并补充一些额外的信息。
6. 氯霉素氯霉素是一种广谱抗生素，其对小鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。
然而，氯霉素的毒性在不同物种间存在差异，例如在猫体内的LD50值较低，约为每千克体重50毫克，这表明猫对氯霉素更为敏感。
7. 哌甲酯（利他林）哌甲酯是一种用于治疗注意力缺陷多动障碍（ADHD）的药物，其LD50值为每千克体重190毫克（大鼠口服）。
需要注意的是，哌甲酯的毒性作用可能与其药理作用相似，因此在用药时需严格控制剂量。
8. 硫酸亚铁硫酸亚铁是一种常用的补铁药物，其对大鼠的LD50值为每千克体重250300毫克。
测定ld50的方法
测定ld50的方法
LD50的方法是通过给试验动物（通常是小鼠或大鼠）以不同剂量的物质，然后观察其死亡率来确定该物质对生物体的毒性程度。
LD50是指半数致死量（Lethal Dose 50），即致死一半动物所需的剂量。
LD50的测定方法包括以下几种：
1.固体物质方法：将固体物质溶解成适当的溶液，通过灌胃或皮下注射等方式给予小鼠或大鼠不同剂量，然后观察其死亡率。
2.液体物质方法：将液体物质稀释成一系列不同的浓度，然后通过灌胃或静脉注射给予试验动物，观察其死亡率。
3.气体物质方法：将气体物质暴露给试验动物，通常通过密封的容器或特定装置来控制气体浓度和曝光时间，然后观察其死亡率。
4.皮肤接触方法：涂抹或注射测试物质于试验动物的皮肤上，然后观察其死亡率。
测定LD50的实验通常需要一系列的试验动物和剂量，可以通过统计方法计算出剂量-死亡率的关系曲线，从而确定LD50值。
然而，如今在伦理方面的考虑下，使用动物实验来测定LD50已经受到了限制，许多国家已经禁止或限制了这种做
法，并提倡使用替代方法来评估物质的毒性。
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也可以直接按照前面的校正公式计算
计算步骤
2、求lgLD50的反对数LD50 3、求lgLD50的标准误SlgLD50 Pi(1 Pi) SlgLD50=d ni 4、求lgLD50的95%的置信区间 Ig-1（lgLD50 ± 1.96SlgLD50）
测定结果
某试剂的LD50值测定结果
对数剂量
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
+ + + + + + + + + -
20
21
22 23
1.95 1.90 1.85 1.80 1.75
+ + + x
整理与计算
对数剂量x 1.95 1.90 1.85 1.80 1.75 死亡 1 2 6 3 0 存活 0 1 2 5 3 合计n 1 3 8 8 3
寇氏法在实际工作中较常用，计算简便，结果 较准确。
【条件】 1.剂量必须按等比级数（剂量对数按等级数）分组。 2.各组动物数应相等。 3.“反应”应大致呈正态分布。最小剂量组的死亡率 （Pn）应为0%，最大剂量组的死亡率（Pm）应为 100%；如果Pn<20%或Pm>80%用校正公式计算； 如Pn>20%或Pm<80% 用此法计算结果不太准确。 3 Pm Pn 校正公式：lg LD50＝XK－d ( P 4 )
特别注意
后一动物剂量上升或下降由由前一动物的死 亡或存活决定，从第一只改变算起到最后一 只止，最后的终止号也作为一次实验结果。 若最后一只动物死亡，下降一格画“x”， 以存活计数；若最后用一只动物存活，上升 一格画“x”，以死亡计数。
例题
为测定某试剂的安全性，用序贯法测定此试剂小 白鼠腹腔注射的LD50（mg/kg）,选用1月龄小 白鼠22只，给药的对数剂量应从估计最可能接 近LD50的剂量开始，本例从1.85开始，死亡记 为“+”号，存活记为“-”号。
例题
为了研究铵碘消毒剂对建鲤毒力的影响，随机捞取210尾 规格基本一致的鲤鱼，放入缸内，每缸30尾，1组对照， 6组处理。以等对数间距设置6个剂量水平（单位ml/m3）， 量取药液并加入缸内，搅拌均匀，96小时后得如下表中结 果。试求铵碘对建鲤的半数致死量。
不同剂量铵碘对建鲤的致死资料
组别
1 2 3 4 5 6
lgLD50 =∑（nx）/∑n =（1x1.95+3x1.90+8x1.85+8x1.80/kg
即此试剂小白鼠腹腔注射的LD50为81.9596mg/kg。
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半数致死量的测定
半数致死量LD50是药物、毒物及病原微生物等毒力水平的一 个标志。它表示使全部实验对象有一半死亡所需的药物剂量 或浓度。测定LD50的方法很多，如目测机率单位法、寇氏法、 直线回归法、累计法及序贯法等。
预防兽医学 弓建芳
1309064006
一、寇氏法（Karber's method）
二、序贯法
最节省实验动物的方法，又称“上下法”，适于反应快速的药 物 实验，但不能估计误差，无法进行LD50的显著性检验。 方法： 1、根据经验选择一个近50%反应率的等比级数剂量组，通常 用4-6个剂量组； 2、给动物注射，当前一只动物出现阴性反应时，就选用较高 一级的剂量给予下一只动物；当出现阳性反应时，就给下 一只动物较低一级的剂量，直到实验结束； 3、计算各剂量动物总数n与剂量对数x的乘积之和∑（nx ）； 4、计算lgLD50=∑（nx）/∑n ； 5、取反对数得到LD50 。
计算步骤
1、计算lgLD50
1 公式为 lgLD50= ∑（Xi+Xi+1）×（Pi+1–Pi） 2
i—组号； （Xi+Xi+1）—相邻两组对数剂量之和 （Pi+1–Pi）—相邻的两组死亡率之差
简化公式
若相邻对数剂量是等差级数即药物剂量是等 比级数则公式为 lgLD50=Xk –d/2∑（Pi+Pi+1）
计算结果
铵碘消毒剂对建鲤的半数致死量在95%的置信 区间为：56.079ml/m3—61.572ml/m3。 即铵碘消毒剂使一半建鲤死亡的平均剂量最小 为56.079ml/m3最大为61.572ml/m3，做 出这一推断的置信度为95%。
计算结果
LD5099%的置信区间 Ig-1（lgLD50 2.58SlgLD50） =Ig-1（1.7688 2.58x0.0105）
铵碘消毒剂对建鲤的半数致死量在99%的置信区 间为：55.171ml/m3—62.501ml/m3。 即铵碘消毒剂使一半建鲤死亡的平均剂量最小为 55.171ml/m3最大为62.501ml/m3，做出这一 推断的置信度为99%。
公式推导
由图可知：
矩形AFED＝AF×AD ＝lg LD50×1 ＝lg LD50 =XK-d/2∑(Pi+Pi+1) =XK-d/2 (P1+P2+P2+P3...+Pi+1) =XK-d/2 【2∑P—（P1+Pi+1）】 =XK-d（∑P—0.5）
剂量
40.000 47.156 55.592 65.538 77.262 91.085
动物数
30 30 30 30 30 30
死亡数
0 3 15 20 27 30
死亡率
0.000 0.100 0.500 0.667 0.900 1.000
解题步骤
1、计算lgLD50 lgLD50=Xk –d/2∑（Pi+Pi+1） 1 .156 =lg91.085– 2 (0+0.1+...+0.9+1) lg 47 40.000 =1.7688 2、LD50=Ig-1（lgLD50）=58.722 1 0.1 0.9 1 0 ... 3、 SlgLD50=0.0714 030 30 30 =0.0105 4、LD5095%的置信区间 Ig-1（lgLD50 1.96SlgLD50） =Ig-1（1.7688 1.96x0.0105)