高效液相色谱法测定吡虫啉 · 氟酰脲悬浮剂

高效液相色谱法测定吡虫啉氟酰脲悬浮剂龚会琴;赵亚洲;陈迎丽【摘要】建立高效液相色谱仪同时检测吡虫啉、氟酰脲的分析方法.以甲醇-水为流动相,使用ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)和DAD检测器,在254 nm波长下对18%吡虫啉· 氟酰脲悬浮剂进行分离和定量分析.该方法检测吡虫啉、氟酰脲的线性相关系数均为0.9997,测定结果的相对标准偏差分别为1.66%,2.86%(n=5),平均回收率分别为103.8%,101.0%.该分析方法操作简便、快速,分离效果好,准确度和精确度高,适于吡虫啉· 氟酰脲悬浮剂中双组分的同时测定.%HPLC method was established for the simultaneous determination of imidacloprid and fluorine ureide in suspending agent. The sample was analyzed with ZORBAX SB-C18 stainless steel column and DAD at 254 nm,while the mixture solution of methyl alcohol and ultrapure water was used as the mobile phase. The results showed that the linear correlation coefficients of imidacloprid and fluorine ureide were both 0.9997. The relative standard deviation of the test results was 1.66%, 2.86%(n=5), and the average recovery rate was 103.8%, 101.0%, for imidacloprid and fluoride ureide, respectively. The method has the advantages of fast speed, good separation, high precision and accuracy, and it is suitable for simultaneous determination of imidacloprid and fluorine ureide in suspending agent.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2017(026)002【总页数】3页(P73-75)【关键词】吡虫啉;氟酰脲;悬浮剂;高效液相色谱【作者】龚会琴;赵亚洲;陈迎丽【作者单位】贵州省分析测试研究院,贵阳 550002;贵州省分析测试研究院,贵阳550002;贵州省分析测试研究院,贵阳 550002【正文语种】中文【中图分类】O657.7吡虫啉是烟碱类超高效杀虫剂，于20世纪90年代投产推广，具有内吸、喂毒与触杀作用［1］。

其杀虫机制主要是选择性抵制昆虫神经系统烟碱型乙酰胆碱受体，阻断昆虫中枢神经系统的正常传导，导致昆虫麻痹进而死亡［2］，具有广谱，高效，低毒，低残留，害虫不易产生抗性，对人、畜、植物和天敌安全等特点［3-4］。

氟酰脲，又名双苯氟脲，是美国道农科公司开发的苯甲酰脲类杀虫剂，通过抑制几丁质的合成，破坏白蚁和其它节肢动物的独有酶系统而达到杀虫的效果［5］，具有较高环境安全性，对鳞翅目昆虫极佳的杀虫活性，易于人工合成等优点［6-7］。

悬浮剂(SC)［8］能够与表面活性剂等助剂发生物理作用，使不溶或难溶原药颗粒分散入水体，形成稳定的悬浮体系，有流动性好、润湿性好、无粉尘等优点，是很热门的农药剂型。

目前吡虫啉的应用和检测研究较多［2，9-12］，关于氟酰脲的研究主要侧重于合成［13-14］，检测方法研究较少［15-16］。

吡虫啉·氟酰脲悬浮剂作为新药，其分析方法暂无报道。

笔者采用反相高效液相色谱法，优化设计分离、分析吡虫啉·氟酰脲悬浮剂的色谱条件，并对18%吡虫啉·氟酰脲悬浮剂进行定量分析，以期达到操作简便、快速、准确，分离效果好，准确度和精密度高的定量分析要求，为产品质量控制及应用研究提供帮助。

1.1 主要仪器与试剂高效液相色谱仪：Agilent 1260型，配DAD检测器，美国安捷伦科技有限公司；滤膜：孔径0.45μm；甲醇：HPLC级；吡虫啉标准样品：纯度为99.1%，农业部农药检定所；氟酰脲标准样品：纯度为99.0%，农业部农药检定所；吡虫啉·氟酰脲悬浮剂：含吡虫啉15.5%，氟酰脲2.5%，以色列安道麦马克西姆有限公司；实验用水为超纯水，电阻率为18.2 MΩ·cm。

1.2 溶液的配制吡虫啉-氟酰脲混合标准样品溶液：称取吡虫啉标准样品0.02 g（精确至0.000 2 g）和氟酰脲标准样品0.02 g（精确至0.000 2 g），置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至标线，摇匀。

吡虫啉·氟酰脲悬浮剂试样溶液：称取18%吡虫啉·氟酰脲悬浮剂0.01 g(精确至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至标线，摇匀。

1.3 色谱条件色谱柱：ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm，美国安捷伦科技公司)；流动相：甲醇-水，流量为1 m L ／min；梯度洗脱程序：0～4 min甲醇-水体积比为50∶50，4～12 min甲醇-水体积比为82∶18，16 min时甲醇-水体积比为50∶50；柱温：30℃；进样体积：20.0 μL。

1.4 实验步骤1.4.1 测定在1.3色谱条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针吡虫啉-氟酰脲混合标准样品溶液，直至相邻两针吡虫啉-氟酰脲混合标准样品溶液的响应值相对变化小于1.5%，按照吡虫啉-氟酰脲混合标准样品溶液、吡虫啉·氟酰脲悬浮剂试样溶液、吡虫啉·氟酰脲悬浮剂试样溶液、吡虫啉-氟酰脲混合标准样品溶液的顺序进行测定。

1.4.2 结果计算将测得的2针吡虫啉·氟酰脲悬浮剂试样溶液及相邻前后2针吡虫啉-氟酰脲混合标准样品溶液中吡虫啉、氟酰脲的色谱峰面积分别进行平均，然后利用外标法进行定量。

2.1 吸收波长的确定吡虫啉、氟酰脲紫外吸收图谱分别见图1和图2。

由图1和图2可知，吡虫啉在250～280 nm之间有较强的吸收，在269 nm处吸收最强；氟酰脲在252 nm处吸收最强。

为了避免吡虫啉·氟酰脲悬浮剂试样溶液中其它杂质的干扰，同时保证吡虫啉、氟酰脲有较高的响应，选择检测波长为254 nm。

2.2 流动相的选择试验结果表明，用甲醇-水（50∶50）作为流动相时，吡虫啉在4 min内可以被完全洗脱，保留时间约为3.7 min，但氟酰脲在20 min内不能出峰，分析时间太长。

本试验采用梯度洗脱的方式，在吡虫啉出峰后逐渐改变流动相的组成，使氟酰脲被快速洗脱。

梯度洗脱的程序：自4 min开始，到6 min时将流动相中甲醇与水的体积比由50∶50逐渐调整为82∶18，并保持到12 min，这样可以将氟酰脲的洗脱时间提前到约10.6 min，此条件下吡虫啉、氟酰脲的色谱峰与杂质的色谱峰可以完全分离。

在梯度洗脱条件下对流动相流量进行优化。

分别设置流动相流量为0.6，0.8，1.0，1.2 mL／min进行试验，结果表明流动相流量为0.6，0.8，1.0 mL／min时吡虫啉与氟酰脲均分离良好。

当流动相流量较小时两组分出峰时间延长；当流量为1.2 mL／min时，两组分出峰时间均提前，但吡虫啉与杂质峰不能很好地分离，氟酰脲的色谱基线也不够平稳。

为了保证吡虫啉和氟酰脲均能在较短的时间内出峰，又能达到较好的分离效果，最终确定流动相最佳流量为1.0 mL／min。

吡虫啉-氟酰脲混合标准样品溶液及吡虫啉·氟酰脲悬浮剂试样溶液的高效液相色谱图分别见图3、图4。

2.3 线性关系和检出限将200.0 mg／L的吡虫啉-氟酰脲混合标准样品溶液分别稀释成0.50，1.0，2.0，5.0，10.0 mg／L系列混合标准样品溶液，按1.3色谱条件进行分析，分别以吡虫啉、氟酰脲的质量浓度为横坐标，对应的色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得吡虫啉线性方程为y=53.85x+2.85，线性相关系数为0.999 7；氟酰脲线性方程为y=39.19x+2.45，线性相关系数为0.999 7。

结果表明，在0.5～10 mg／L之间，吡虫啉和氟酰脲的质量浓度与色谱峰面积线性关系良好。

2.4 精密度试验测定5份吡虫啉·氟酰脲悬浮剂试样溶液中吡虫啉、氟酰脲的含量，测定结果见表1。

由表1可知，吡虫啉、氟酰脲含量测定结果的相对标准偏差分别为1.66%，2.86%(n=5)，表明该方法精密度良好。

2.5 加标回收试验向已知含量的吡虫啉·氟酰脲悬浮剂试样溶液中分别加入吡虫啉和氟啶胺标准样品，在1.3色谱条件下进样测定吡虫啉、氟酰脲的含量，测定结果见表2。

由表2可知，吡虫啉、氟酰脲的加标回收率分别为102.0%～105.0%，96.0%～103.0%，表明本法测定结果准确、可靠。

目前对混配制剂中有效成分的定量检测方法十分繁琐，不同的成分通常采用不同的检测方法进行分析，影响检测效率。

笔者选择具有共同吸收又不受杂质干扰的分析波长，采取梯度淋洗方式将两种组分完全分离，建立了一种高效液相色谱法，可同时简便、快速、准确地测定混配制剂中的吡虫啉和氟酰脲的含量。

【相关文献】［1］ Farouk M, Hussein L A A, El Azab N F. Different techniques for determination of imidacloprid insecticide residues［J］. International Journal of Environmental Analytical Chemistry, 2014，94(2)： 194-209.［2］赵秀玲.食品中吡虫啉检测技术的研究进展［J］.江苏调味副食品，2015，143(4)： 11-14. ［3］刘长令.世界农药大全杀虫剂卷［M］.化学工业出版社，2012：244-251.［4］宋卫国，赵志辉，饶钦雄，等.水蜜桃中吡虫啉残留检测和安全性评价［J］.农药，2013，52(2)： 125-127.［5］刘长令.世界农药大全杀虫剂卷［M］.北京：化学工业出版社，2012： 178-180.［6］陈莉，汪清民，黄润秋.苯甲酰脲类昆虫几丁质合成抑制剂开发进展［J］.新农药，2004，36(4)： 1-4.［7］柳菡，沈崇钰，赵增运，等.高效液相色谱-串联质谱法测定大豆与玉米中的苯甲酰脲类农药残留［J］.分析测试学报，2010，29(11)： 1 180-1 184.［8］仲苏林.农药悬浮剂的开发现状和展望［J］.世界农药，2010，32(3)： 47-51，58.［9］劳水兵，刘丽辉，莫仁甫，等.高效液相色谱法快速检测香蕉及土壤中的吡虫啉［J］.湖北农业科学，2015，54(11)： 2 741-2 743.［10］吴俐勤，吴声敢，刘宇.高效液相色谱测定吡虫啉的残留研究［J］.现代科学仪器，2003(1)：52-55.［11］刘丽，何正川，白建保，等.吡虫啉在烟草中的残留分析及调制对其残留的影响［J］.烟草科技，2016，49(8)： 64-69.［12］ Jae Koo Lee, Ki Chang Ahn, Oee Suk Park, et al. Development of an ELISA for the detection of the residues of the insecticide in idacloprid in agricultural and environmental samples［J］. J Agric Food Chem，2001(10)： 2 159-2 167.［13］周彦峰，高中良，邱继平，等.几丁质抑制杀虫剂双苯氟脲的合成研究［J］.化工中间体，2007(10)： 12-14.［14］周彦峰，高中良，邱继平，等.杀虫剂双苯氟脲的合成研究［J］.河南工业大学学报：自然科学版，2008，29(1)： 64-67.［15］吴余颖.食品中苯甲酰脲类农药残留分析研究［D］.福建农林大学，2009.［16］郑鹭飞，董崭，金茂俊，等.高效液相色谱同时检测10%氟酰脲·联苯菊酯悬浮剂中有效成分［J］.农药，2016，55(10)：739-741.。