gram染色一般细菌涂片检查解析
细菌涂片和革兰染色法
细菌涂片和革兰染色法是常用的微生物学实验技术，用于观察和鉴定细菌。
细菌涂片是一种简单而常见的方法，用于制备细菌样品的薄层。
它通常包括以下步骤：
1.取少量细菌样品：从培养基或临床标本中取少量细菌，并使用吸管或接种环在玻璃
片上均匀涂抹。
2.干燥：将涂片放置在室温下使其自然干燥，以确保细菌固定在玻璃片上。
3.固定：通过加热或使用特定化学药剂（如甲醇）进行固定，以保持细菌在涂片上的
形态结构。
4.染色：涂片可以使用不同的染色方法进行染色，例如格拉姆染色、苏木精染色等，
以区分不同类型的细菌。
5.观察：准备好的细菌涂片可在显微镜下观察。
通过观察细菌的形态、大小、排列方
式等特征，可以初步判断细菌的类型和特性。
革兰染色法是最常用的细菌染色方法之一，用于区分细菌的革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G-）两类。
它包括以下步骤：
1.取少量细菌样品：从培养基或临床标本中取少量细菌，并涂抹在玻璃片上。
2.固定：对细菌进行固定，通常使用加热的方法使其附着在玻璃片上。
3.染色：首先将细菌涂片涂上紫色的革兰染色试剂（如紫晶染剂），然后用碘溶液形
成复合物。
接下来，使用酒精溶液洗去多余染料，并进行脱色。
最后，用蓝色的对
照染剂（如苏木精）进行染色。
4.观察：通过显微镜下观察细菌涂片。
革兰阳性细菌会呈现紫色或深紫色，而革兰阴
性细菌则呈现粉红色。
革兰染色法的结果可以提供有关细菌类型及其细胞壁结构的信息，这对于细菌分类和鉴定非常重要。
它是微生物学中常用的一种初步鉴定方法。
革兰染色涂片检查及结果影响因素浅析
革兰染色涂片检查及结果影响因素浅析革兰染色是一种常用的微生物学检测方法，通过对细菌样本进行染色，来区分细菌的特性。
革兰染色是细菌学中的一项基本技术，主要是根据革兰氏染色法则，将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌，这对于区分不同类型的细菌对于治疗和预防感染病原体变得极为重要。
本文将对革兰染色的涂片检查及结果影响因素进行浅析，并探讨其在临床诊断中的应用价值。
一、革兰染色工作原理革兰染色是由丹麦细菌学家革兰于1882年首先提出的。
该方法主要利用细菌细胞周围的不同结构，在染色时对染料的吸收情况不同，从而使细菌分为革兰阳性和革兰阴性两种。
其基本步骤主要包括：先用紫晶染料染色，然后用碘液固定染料，接着用酒精洗去多余染料，最后用碘液和洗涤液复染后覆以脱水醋液，在显微镜下观察。
革兰阳性和革兰阴性的区分主要依据细菌细胞壁的组成差异。
革兰阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖和脂多糖构成，能够吸收紫晶染料并保持在细胞内，呈紫色；而革兰阴性细菌的细胞壁则含有大量脂质，较薄，不易吸收紫晶染料，但易受到酒精洗去，因此需要用红色染料进行复染。
二、革兰染色涂片检查的操作流程1.准备细菌样本：从病人的标本中提取细菌样本，如血液、尿液、分泌物等，进行标本的处理和培养，以得到纯种菌培养。
2.涂片制备：采用无菌吸头沾取培养物，涂抹在无菌玻璃片上，待涂片干燥后进行染色。
3.染色处理：首先用紫晶染料染色，然后用碘液固定染料，接着用酒精洗去多余染料，最后用碘液和洗涤液复染后覆以脱水醋液。
4.观察检查：将制备好的涂片放在显微镜下进行观察，并根据细菌的染色情况进行判读，并区分细菌类型。
三、结果影响因素浅析1. 染色质量：染色操作的规范与否直接影响着结果的准确性。
如染色时间、染色物浓度、洗涤液使用情况等均会对结果产生影响。
2. 细菌培养情况：细菌培养的时间长短、培养条件等因素会影响细菌的形态和染色情况，进而影响革兰染色的结果。
3. 细菌样本来源：不同来源的细菌样本可能有不同的污染情况，可能会干扰革兰染色结果。
gram染色一般细菌涂片检查
G +菌 坚韧 50层 多
G -菌 疏松 1-3层 少
20-80nm 厚 10-15nm 薄 多占细胞壁 少占细胞壁 干重50-80% 干重5-20% 少 多
+ +
Gram染色的染液组成
结 晶 紫 卢戈碘液 无水乙醇 酸性复红
Gram染色的原理
原理 通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了
不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细
胞壁较厚、肽聚糖层厚且交联致密，遇乙醇脱色处理时，
失水使网孔缩小，且不含类脂，乙醇处理不会出现缝隙，
因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；
革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速
细菌细胞壁的结构
革兰阴性菌细胞壁的肽聚糖结构
细菌细胞壁的结构
G+菌与G-菌肽聚糖结构比较
细菌细胞壁的结构
革兰阳性菌细胞壁结构
革兰阴性菌细胞壁结构
细菌细胞壁的结构
细菌细胞壁的结构
G+菌与G-菌细胞壁结构比较
细菌细胞壁的结构
G+菌与G-菌细胞壁结构比较
细胞壁结构 强度 厚度 肽聚糖层数、含量 糖类含量
清洁度 Ⅰ
Ⅱ
杆菌 多
中
球菌 -少
上皮 细胞
白细胞 个数
满视野 0-5个/HP
½ 视野 5-15个 /HP 少 15-30个 /HP ->30个 /HP
Ⅲ Ⅳ
少 --
多 大量
溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的
临床微生物学检验理论课：02细菌鉴定试验-涂片染色
涂片抗酸染色结果观察
镜检时，油镜下仔细查遍整个涂片或至少100个视野； 抗酸性菌呈红色，其它细菌及细胞呈蓝色； TB为细长，着色不均匀，可2个以上的菌形成V、Y、T
等或平行排列等。
涂片抗酸染色结果报告
结果报告，1984年国内统一暂行规定报告方式： 未找到抗酸菌-； 找到抗酸杆菌1或2个，全视野发现1或2个； 找到抗酸杆菌+，全视野发现3-9个； 找到抗酸杆菌++，全视野发现10-99个； 找到抗酸杆菌+++，每视野发现1-9个： 找到抗酸杆菌++++，每视野发现10个以上。
（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验
吲哚（靛基质或蛋白胨水）试验： 阳性：色氨酸酶，分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚，
加入指示剂形成红色界面； 阴性：加入指示剂不变色； 区分普通变形杆菌（+），奇异变形杆菌（-）。
尿素分解试验： 阳性：尿素分解酶分解尿素产生大量的氨，使培养基
呈碱性，加入指示剂为红色； 阴性：加入指示剂不变色。
4、墨汁染色查隐球菌
新生隐球菌广泛分布于自然界，也可存在于人体体表、 口腔及肠道中；
经呼吸道侵入人体，由肺经血行播散时，可侵犯所有脏 器组织，主要侵犯肺、脑及脑膜；
好发于细胞免疫功能低下者，如AIDS、恶性肿瘤、糖尿 病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者；
临床上怀疑脑膜炎时，常抽取脑脊液检查细菌真菌、抗 酸菌、隐球菌。
3、涂片抗酸染色：检查抗酸杆菌
据世界卫生组织估计，全球每年增加结核病人约800万 1000万，死亡病人约300万；
全人类的三分之一即17亿人曾感染过结核杆菌； 结核病人主要见于发展中国家，尤其经济落后地区； 我国是结核病高发国家，广东地区发病率较高。
微生物实验四细菌的涂片及简单染色法和革兰氏染色法经典法
【实验报告】
• 2）填表
•
表1 细菌形态的描述
【实验报告】
•
2．思考题
•
（1）涂片为什么要固定，固定时应注
意什么问题？
•
（2）你在涂片染色过程中遇到了什么
问题？试分析其中原因？
•
ห้องสมุดไป่ตู้
（3）革兰氏染色中哪一步是关键，为
什么？你如何控制这一步。
•
（4）不经复染这一步，能否区别革兰
氏阳性菌和阴性菌？
• 2、仪器 显微镜(25台)； • 3、材料 载玻片（每组4个），酒精灯（每组1个）
，接种环（每组1个），擦镜纸，二甲苯、香柏油 ，吸水纸，染色缸等；
【实验用品】
• 4、染料 草酸铵结晶紫（Crystal Violet , CV）、沙黄、吕氏碱性美蓝染液。
1）草酸铵结晶紫染液的配制：
A液： 结晶紫
•
染色前必须先固定细菌，其目的有二
：一是杀死细菌，使细胞质凝固，菌体粘
附于玻片上；二是增加其对染料的亲和力
。常用的有加热和化学固定两种方法。固
定时应尽量维持细胞原有形态，防止细胞
膨胀或收缩。
【基本原理】
• 二、革兰氏染色法（经典法）基本原理 • 革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重
要性状 • 革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观
【方法步骤】
• 3、染色
•
⑴初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结
晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色1-2min。
倾去染色液，用自来水小心地冲洗。
•
⑵媒染 滴加(Lugol)碘液，染1-2min，水洗。
•
⑶脱色 滴加95%乙醇2-3次，脱色20-25s立
革兰染色涂片检查及结果影响因素浅析
革兰染色涂片检查及结果影响因素浅析革兰染色涂片检查是一项常规的微生物学实验技术，常用于细菌分类和鉴定。
本文将从革兰染色涂片检查的原理、实验步骤和结果影响因素三个方面进行浅析。
一、原理革兰染色涂片检查是一种常用的细胞壁染色方法，通过革兰染色剂的着色，根据细胞壁的结构特征，将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。
革兰氏阳性菌有较厚的细胞壁，革兰氏染色后呈现紫色，常见的包括链球菌、葡萄球菌等。
而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，革兰氏染色后呈现红色，常见的包括大肠杆菌、鲍曼不动杆菌等。
二、实验步骤1. 在玻璃片上涂取待检测细菌液体。
2. 用火焰将钢制火焰灼杯内的革兰染色液烧热至滚沸。
3. 用长枪头平行于涂片表面晕开革兰染色液，待液滴朝干垂直方向流过锡箔纸后，均匀晕开。
4. 在煤油火焰上加热，使革兰染色液蒸发干燥。
5. 将涂片沾上滴布，在沸水上蒸气加热8-10秒钟。
6. 用滤纸或干液棒沾取水分浸润的涂片，清洗过秤。
7. 在显微镜下观察菌落形态和革兰染色结果。
三、结果影响因素1. 培养情况：细菌在培养基上的生长情况会影响革兰染色涂片结果，如过度生长或生长不足都会导致结果出现误差。
2. 涂片技术：涂片的均匀性和涂片干燥程度会影响结果准确性，如涂片干燥不充分或涂片上细菌分布不均匀等，都会影响显微镜下观察的革兰染色结果。
3. 染色液的质量：革兰染色液的质量会直接影响结果的准确性，所以选择质量好的染色液很有必要。
4. 显微镜和操作人员：显微镜的放大倍数和仪器质量会影响观察结果的准确性，同时操作人员的操作技术也会影响最终结果是否准确。
总之，对于革兰染色涂片检查，要严格按照实验步骤操作，严格控制实验环境和操作技术，夯实基础知识，才能准确判断细菌的革兰氏染色结果。
革兰染色涂片检查及结果影响因素浅析
革兰染色涂片检查及结果影响因素浅析革兰染色涂片检查是临床诊断中常用的一种细菌染色检查方法，通过染色涂片的观察，可以初步判断细菌的形态特征，从而对细菌进行初步的分类和鉴定。
本文将就革兰染色涂片检查的原理、方法和结果影响因素进行深入分析和探讨。
一、革兰染色涂片检查的原理和方法革兰染色涂片检查是根据细菌细胞壁的不同成分对染色剂的特异性反应而进行的细菌染色检查方法。
根据细菌在染色后的不同染色结果，分为革兰阳性和革兰阴性两种。
革兰阳性细菌的细胞壁主要由大量的肽聚糖和大量的脂肪酸构成，所以在染色时会将革兰染色涂片变为紫色。
典型的革兰阳性细菌有著名的金黄色葡萄球菌和肺炎球菌等。
而革兰阴性细菌的细胞壁中脂多糖含量较高，所以在染色时会呈现粉红色。
典型的革兰阴性细菌有大肠杆菌和沙门氏菌等。
革兰染色涂片检查的方法主要包括以下几个步骤：1. 取一枚干净的载玻片，加入细菌涂片，用炉头加热烘干；2. 用草炭砷酸的蓝色纤维素染色涂片，覆盖在载玻片上；3. 用神经酸液滴于染色涂片上，加热并洗脱，使涂片干。
通过以上步骤，就可以完成革兰染色涂片的制备。
然后通过显微镜观察染色涂片中细菌的形态和染色结果，初步判断细菌的革兰染色结果。
二、革兰染色涂片检查结果的影响因素1. 细菌培养情况革兰染色涂片检查的结果受到细菌培养情况的影响。
若细菌培养不纯，可能会导致染色结果产生偏差，影响准确性。
2. 革兰染色涂片制备技术革兰染色涂片的制备技术对最终的染色结果也有一定影响。
如果制备不当，可能造成染色的不均匀性，导致阴性细菌染色效果不明显或阳性细菌染色效果过于深重。
3. 革兰染色剂的选择革兰染色剂的选择也影响了染色结果的准确性。
染色剂的浓度、纯度和使用方式都会影响到染色效果。
4. 革兰染色反应时间革兰染色反应时间的长短也会对染色结果产生影响。
反应时间过长或过短都可能导致染色结果的不准确性。
5. 细菌的生长状况细菌的生长状况也会对革兰染色涂片检查结果产生影响。
发酵染菌的检查及分析
染菌的检查及原因分析
一、染菌的检查和判断
发酵过程是否染菌应以无菌试验的结果为依据进行判断。
在发酵过程中，如何及早发现杂菌的污染并及时采取措施 加以处理，是避免染菌造成严重经济损失的重要手段。因 此，生产上要求能准确、迅速的检查出杂菌的污染。 目前常用于检查是否染菌的无菌试验方法主要有显微镜检 查法、肉汤培养法、平板（双碟）培养法、发酵过程的异 常观察法（如溶氧量）等。
空气系统染菌 设备问题 管理和操作不当
1、染菌的杂菌种类分析
对于每一个发酵过程而言，污染的杂菌种类的影响是不同的。
发酵产品 青霉素 链霉素 四环素 柠檬酸 谷氨酸
杂菌
危害大的杂菌 细短产气杆菌 细短杆菌、假单胞菌、产气杆菌 双球菌、芽胞杆菌、荚膜杆菌 青霉 噬菌体
原因
危害小的杂菌 粗同污染时间分析
染菌发生在种子培养阶段，或称种子培养期染菌。通常是 由种子带菌、培养基或设备灭菌不彻底，以及接种操作不 当或设备因素等原因而引起染菌。 在发酵过程的初始阶段发生染菌，或称发酵前期染菌。大 部分也是由于种子带菌、培养基或设备灭菌不彻底，以及 接种操作不当或设备因素、无菌空气等原因而引起。 发酵后期染菌大部分是由空气过滤不彻底、中间补料染菌、 设备渗漏、泡沫顶盖以及操作问题而引起。
二、发酵染菌原因分析
发酵染菌后，一定要找出染菌的原因，以总结防治发酵染菌的经验 教训，积极采取必要措施，把杂菌消灭在发生之前。如果对已发生 的染菌不作具体分析，不了解染菌原因，未采取相应的措施来防治 染菌，将会对生产造成严重的后果。 造成发酵染菌的原因很多，且因工厂不同而有所不同，但设备渗漏、 空气净化达不到要求、种子带菌、培养基灭菌不彻底和技术管理不 善等造成各厂污染杂菌的普遍原因。 上海天厨味精厂谷氨酸发酵染菌分析 染菌原因 染菌百分率/％ 32.05 15.46 11.34 染菌原因 补料、取样带菌 种子带菌 环境污染及原因不明 染菌百分率/％ 4.30 1.72 35.13
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细菌细胞壁的结构
革兰阴性菌细胞壁的肽聚糖结构
细菌细胞壁的结构
G+菌与G-菌肽聚糖结构比较
细菌细胞壁的结构
革兰阳性菌细胞壁结构
革兰阴性菌细胞壁结构
细菌细胞壁的结构
细菌细胞壁的结构
G+菌与G-菌细胞壁结构比较
细菌细胞壁的结构
G+菌与G-菌细胞壁结构比较
细胞壁结构 强度 厚度 肽聚糖层数、含量 糖类含量
脂类含量 磷壁酸 外膜
G+菌 坚韧 50层 多
G-菌 疏松 1-3层 少
20-80nm 厚 10-15nm 薄 多占细胞壁 少占细胞壁 干重50-80% 干重5-20% 少 多
+ +
Gram染色的染液组成
结 晶 紫 卢戈碘液 无水乙醇 酸性复红
Gram染色的原理
原理 通过结晶紫初染和碘液媒菌 多
中
球菌 -少
上皮 细胞
白细胞 个数
满视野 0-5个/HP
½ 视野 5-15个 /HP 少 15-30个 /HP ->30个 /HP
Ⅲ Ⅳ
少 --
多 大量
Gram染色 一般细菌涂片检查
沧州市人民医院检验科 王 迁
Gram染色一般细菌涂片检查
细菌细胞壁的结构 Gram染色的染液组成 Gram染色的原理 Gram染色的方法 Gram染色一般细菌涂片检查示例
细菌细胞壁的结构
革兰阳性菌细胞壁的肽聚糖结构
细菌细胞壁的结构
革兰阳性菌细胞壁的肽聚糖结构
溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的
溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经红色染料复染，
就使革兰氏阴性菌呈红色。
Gram染色方法 Gram stain
结 晶 紫
卢戈碘液
无水乙醇 酸性复红
革兰染色结果比较
革兰染色阳性菌（葡萄球菌）
革兰染色阴性菌（大肠杆菌）
Gram染色一般细菌涂片检查示例
不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细
胞壁较厚、肽聚糖层厚且交联致密，遇乙醇脱色处理时，
失水使网孔缩小，且不含类脂，乙醇处理不会出现缝隙，
因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；
革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖
层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速