陕西中医药大学临床微生物检验课件第十一章 弯曲菌属与螺杆菌属
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第十一章 弯曲菌属和螺杆菌属
采用C-13同位素呼吸试验检测的方法，患者只需要向特定 的一次性专用呼吸检测卡中轻吹一口气，就能检查出引起 胃肠病的病因“幽门螺杆菌”在患者体内的感染数量。通 过口服C-13尿素胶囊，进入胃部后，如果胃部存在幽门螺 杆菌，则此菌就会分解尿素酶水解尿素，尿素被水解后形 成CO₂（二氧化碳）随血液进入肺部并以气体排出，然后 检测患者呼出的气体中有没有被标记的C-13，如果有的话， 代表存在幽门螺杆菌。但需要注意的是，幽门螺杆菌正常 人体内都有，但是超过100dpm便易引起癌变。而且具有 传染性，是世界卫生组织指定的一类致癌源。
形小杆菌 • 暗视野或相差显微镜：投镖样或螺旋样运动
核酸检测
PCR方法检测粪便中弯曲菌核酸
（四）分离培养
• 关键：选择性培养基和孵育条件 • 常用培养基：改良的Skirrow’s 培养基、Campy-BAP等 • 培养条件：5%O2、10%CO2及85%N2 • 温度和时间：
空肠和大肠弯曲菌最适温度为42℃，一般72h后观察菌落； 胎儿弯曲菌最适温度是37℃，一般培养72h~7d观察菌落。 故临床标本需分别置于37℃和42℃中培养，以防漏检。 • 弯曲菌的菌落特征: 菌落细小，粉红灰色、灰白或黄灰色、轻微黏液样， 有些菌落沿接种线有拖尾样外观
• 弯曲菌能引起动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾 病。对人致病的有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等。 可根据生长温度、生化反应结果进行鉴定
• 螺杆菌属有20余种，其中幽门螺杆菌是引起胃部疾病的重要 病原体，可以产生大量高活性脲酶。通过快速测定脲酶的活 性或代谢产物可以帮助诊断幽门螺杆菌感染
第十一章 弯曲菌属检验 螺杆菌属检验
南昌大学第二附属医院 张黎明
第一节 弯曲菌属
一、分类
11第十一章 弯曲菌属检验、螺杆菌属检验
形小杆菌 • 暗视野或相差显微镜：投镖样或螺旋样运动
核酸检测
PCR方法检测粪便中弯曲菌核酸
临床微生物学检验技术
（四）分离培养
• 关键：选择性培养基和孵育条件 • 常用培养基：改良的Skirrow’s 培养基、Campy-BAP等 • 培养条件：5%O2、10%CO2及85%N2 • 温度和时间：
空肠和大肠弯曲菌最适温度为42℃，一般72h后观察菌落； 胎儿弯曲菌最适温度是37℃，一般培养72h~7d观察菌落。 故临床标本需分别置于37℃和42℃中培养，以防漏检。 • 弯曲菌的菌落特征: 菌落细小，粉红灰色、灰白或黄灰色、轻微黏液样， 有些菌落沿接种线有拖尾样外观
临床微生物学检验技术
（二）标本采集
• 标本：粪便（包括肛拭子）和血液 • 标本采集后注意事项
1．应立即送检 2．若在2小时内不能送检，粪便标本应接种
于Cary-Blair运送培养基，置4℃保存 • 标本在4℃可保存3周
临床微生物学检验技术
（三）标本直接检查
直接显微镜检查
粪便与肛拭子： • 普通显微镜：革兰阴性，弧形、S形、海鸥展翅形或螺旋
• 15%~30%感染者可发展为胃炎、胃溃疡及胃癌等胃部疾病 • 1994年世界卫生组织国际癌症研究机构将其列为I类致癌
原
临床微生物学检验技术
致病因子
• 幽门螺杆菌主要通过特殊结构、毒力因子等致病 • 主要毒力因子：细胞毒素相关基因A蛋白（CagA）、空泡毒素
（VacA）、外膜炎性蛋白、粘附素、脂多糖等 • 所致疾病：
临床微生物学检验技术
鉴定要点
• 革兰染色阴性；菌体弯曲或呈S形、海鸥展翅形；氧化酶和触酶 阳性；不同菌生长温度 (37℃、42℃)试验结果不同
核酸检测
PCR方法检测粪便中弯曲菌核酸
临床微生物学检验技术
（四）分离培养
• 关键：选择性培养基和孵育条件 • 常用培养基：改良的Skirrow’s 培养基、Campy-BAP等 • 培养条件：5%O2、10%CO2及85%N2 • 温度和时间：
空肠和大肠弯曲菌最适温度为42℃，一般72h后观察菌落； 胎儿弯曲菌最适温度是37℃，一般培养72h~7d观察菌落。 故临床标本需分别置于37℃和42℃中培养，以防漏检。 • 弯曲菌的菌落特征: 菌落细小，粉红灰色、灰白或黄灰色、轻微黏液样， 有些菌落沿接种线有拖尾样外观
临床微生物学检验技术
（二）标本采集
• 标本：粪便（包括肛拭子）和血液 • 标本采集后注意事项
1．应立即送检 2．若在2小时内不能送检，粪便标本应接种
于Cary-Blair运送培养基，置4℃保存 • 标本在4℃可保存3周
临床微生物学检验技术
（三）标本直接检查
直接显微镜检查
粪便与肛拭子： • 普通显微镜：革兰阴性，弧形、S形、海鸥展翅形或螺旋
• 15%~30%感染者可发展为胃炎、胃溃疡及胃癌等胃部疾病 • 1994年世界卫生组织国际癌症研究机构将其列为I类致癌
原
临床微生物学检验技术
致病因子
• 幽门螺杆菌主要通过特殊结构、毒力因子等致病 • 主要毒力因子：细胞毒素相关基因A蛋白（CagA）、空泡毒素
（VacA）、外膜炎性蛋白、粘附素、脂多糖等 • 所致疾病：
临床微生物学检验技术
鉴定要点
• 革兰染色阴性；菌体弯曲或呈S形、海鸥展翅形；氧化酶和触酶 阳性；不同菌生长温度 (37℃、42℃)试验结果不同
弯曲菌属和螺杆菌属
培养法（不敏感） 不分解糖类，高尿酶、触酶活性 初步鉴定： 染色，菌落 生长温度： 氧化酶：+ 尿酶：++++ 萘定酸： R ; 头孢噻吩: S 种间鉴定: 马尿酸， 硝酸盐， 氨基酸胺肽酶等
•
药物敏感性： 抗生素： 铋剂：
Gram-negative, very slender, curved rods, which can be S, seagull or spiral shaped.
Very slender, curved rods, which can be S, seagull or spiral shaped. They have a characteristic corkscrew-like darting (to and fro) motility.
Very slender, curved rods, which can be S, seagull or spiral shaped. In older cultures the cells become coccoid.
enteric pathogen worldwide, characterized susequantly)
C. jejuni subsp. doylei
C. jejuni subsp. fetus
---continued
大肠弯曲菌（C . coli） 胎儿弯曲菌（C . fetus）
C. fetus subsp. fetus (major veterinary pathogen) C. fetus subsp. venerealis (Infrequent septicemia)
Butzler Medium: Skirrow Medium: 非肠道标本（主要分离C. fetus） 血液标本 环境 微需氧菌，capnophilic，氧浓度范围：5 ~ 10%（v/v） 最佳气体环境：氧： 5 ~ 10% ；CO2 : 10%；氮气：85% 实验室设备： 专门CO2 孵箱；烛缸 生长温度： C. jejuni, C. coli: themophlic, 最适生长温度42~430，比370C 生长好。250C不生长。 C. fetus最适生长温度370C ，比250C 生长好, 420C不生长
弯曲菌属和螺杆菌属PPT课件
21
broth culture of H. pylori ATCC 43504 (A)， atypical
a plate culture of H. pylori ATCC 43579 (B),classic
弯曲菌属和螺杆菌属 （Campylobacter and Helicobacter）
1
•分类
新伯杰分类：薄壁菌门，群2（需氧/微需氧，有动 力，螺型/类弧形革兰阴性细菌）
弯曲杆菌属（Campylobacter） 空肠弯曲菌（C . jejuni）
三个亚种：C. jejuni subsp. jejuni (major human
pathogen)
C. fetus subsp. venerealis (Infrequent
septicemia)
螺杆菌菌属（Helicobacter）
幽门螺杆菌（H . pylori）
H. cinaedi and H. fennelliae
3
16SrRNA分型： Campylobacter,Helicobacter,Wolinella, Arcobacter and Flexispira 属于一个完全不同于一 般革兰阴性杆菌的系统发生群
传统分型：
•重要性：
C. jejuni:
弯曲菌病;
格林-巴力综合症（Guillain-Barre syndrome,GBS）
C. fetus ssp. fetus:
H. pylori:
4
弯曲菌属（Campylobacter）
•生长特性：
培养基：
肠道标本（主要分离C. jejuni ssp.）
15
which can be S, seagull or spiral shaped.
微生物学检验弯曲菌属和幽门螺杆菌及检验PPT课件
2021/3/12
• 专性需氧 • 营养要求不高 • 氧化酶：＋ • O/F：O • Mac生长：＋ • 产生水溶性色素
2021/3/12
铜绿假单胞菌－－形态染色
• 革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单 或丛鞭毛
2021/3/12
铜绿假单胞菌－－培养特性
• 专性需氧、营养要求不高 • 最适温度35℃，42 ℃ 生长，4℃不生长 • 产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素，
Campy-BAP） • 两种类型菌落：扁平湿润边缘不整齐，
沿穿刺线扩散生长；圆形、突起、湿润 、黏液样外观
2021/3/12
生化反应
• 氧化酶阳性 • 触酶阳性 • 不分解和不发酵糖 • 不分解尿素
2021/3/12
临床意义
• 传播方式：经口感染 • 致病物质：产生肠毒素、细胞毒素、内
毒素等致病物质 • 空肠弯曲菌可引起急性肠炎、格林巴利
标本
分离培养 （血平板、麦毛染色
2021/3/12
氧化酶
O/F 硝酸盐还原
KIA斜面底层不变色 其他生化反应
测验1
• 关于铜绿假单胞菌，错误的是 A 革兰阴性杆菌 B 氧化酶－、触酶－ C 硝酸盐还原－ D 产生水溶性蓝绿色素 E 菌落有金属光泽
2021/3/12
可疑菌落（性状、色素）
初步鉴定 最后鉴定
色素鉴定 生化反应 42℃生长 分型
O/F：O 枸櫞酸盐利用＋ 精氨酸双水解＋ 乙酰胺酶＋ 明胶液化＋
铜绿假单胞菌－－检验方法
• 显微镜检查：标本直接涂片革兰染色镜 检；鞭毛染色镜检
• 培养：标本接种血平板、Mac平板分离 培养，血标本先增菌，再转种
2021/3/12
2021/3/12
• 专性需氧 • 营养要求不高 • 氧化酶：＋ • O/F：O • Mac生长：＋ • 产生水溶性色素
2021/3/12
铜绿假单胞菌－－形态染色
• 革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜，单 或丛鞭毛
2021/3/12
铜绿假单胞菌－－培养特性
• 专性需氧、营养要求不高 • 最适温度35℃，42 ℃ 生长，4℃不生长 • 产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素，
Campy-BAP） • 两种类型菌落：扁平湿润边缘不整齐，
沿穿刺线扩散生长；圆形、突起、湿润 、黏液样外观
2021/3/12
生化反应
• 氧化酶阳性 • 触酶阳性 • 不分解和不发酵糖 • 不分解尿素
2021/3/12
临床意义
• 传播方式：经口感染 • 致病物质：产生肠毒素、细胞毒素、内
毒素等致病物质 • 空肠弯曲菌可引起急性肠炎、格林巴利
标本
分离培养 （血平板、麦毛染色
2021/3/12
氧化酶
O/F 硝酸盐还原
KIA斜面底层不变色 其他生化反应
测验1
• 关于铜绿假单胞菌，错误的是 A 革兰阴性杆菌 B 氧化酶－、触酶－ C 硝酸盐还原－ D 产生水溶性蓝绿色素 E 菌落有金属光泽
2021/3/12
可疑菌落（性状、色素）
初步鉴定 最后鉴定
色素鉴定 生化反应 42℃生长 分型
O/F：O 枸櫞酸盐利用＋ 精氨酸双水解＋ 乙酰胺酶＋ 明胶液化＋
铜绿假单胞菌－－检验方法
• 显微镜检查：标本直接涂片革兰染色镜 检；鞭毛染色镜检
• 培养：标本接种血平板、Mac平板分离 培养，血标本先增菌，再转种
2021/3/12
2021/3/12
弯曲菌和螺杆菌
弯曲菌和螺杆菌 P216
适用教材《微生物学和微生物学检验》 俞树荣主编 人卫97年10月版
检卫学院 李超
第一节 弯曲菌属 campylobacter
弯曲菌属是一类氧化酶阳性、动力阳性、革 兰阴性弯曲、微需氧的细菌。
生物学性状：弯曲菌菌体轻度弯曲似逗点 状，长1.5～5 μm,宽0.2～0.8 μm。菌体 一端或两端有鞭毛，运动活泼，在暗视 野镜下观察似飞蝇。有荚膜，不形成芽 胞。
致病性与免疫性
本菌主要引起人类肠道内和肠道外感染，其 中空肠弯曲菌是引发散发性细菌性肠炎的常 见菌之一。 空肠弯曲菌的某些血清型(O:19)与人的神经 组织有共同抗原，可引起交叉免疫反应而导 致急性感染性多发性神经根疾病，如格林巴 利综合症。 胎儿弯曲菌主要引起肠道外感染。
空肠弯曲菌
空肠弯曲菌的两端单鞭毛
Hp的生物学性状：革兰阴性，菌体细长而弯 曲呈螺旋形、弧形、S形或海鸥状。菌体一 端或两端有多根带鞘的鞭毛。
Hp生化反应特性
氧化酶过氧化氢酶均阳性，快速脲酶试验 阳性。
微生物学检验
快速脲酶试验：将小的组织块装入有christensen尿素培养基的小瓶内，如培养基由 黄变红为阳性。提示该菌产生的高活性的 脲酶已将尿素分解。
Hp在胃十二指肠疾病中的作用
许多研究表明，Hp在胃十二指肠疾病患者的胃 粘膜中检出率远远高于正常者。其中最高的为 十二指肠球部溃疡，为80%～100%，其次为慢 性胃炎，为70%～90%，胃溃疡，57%～85%， 以及残胃炎，十二指肠炎，非溃疡性消化不良 症，碱性反流性胃炎等。目前已有充分的证据 揭示Hp与胃腺癌有关联，药物预防高危人群可 有效地降低胃腺癌的危险，多呈纵向排列；金属镀膜
第二节 螺杆菌属 Helicobacter
适用教材《微生物学和微生物学检验》 俞树荣主编 人卫97年10月版
检卫学院 李超
第一节 弯曲菌属 campylobacter
弯曲菌属是一类氧化酶阳性、动力阳性、革 兰阴性弯曲、微需氧的细菌。
生物学性状：弯曲菌菌体轻度弯曲似逗点 状，长1.5～5 μm,宽0.2～0.8 μm。菌体 一端或两端有鞭毛，运动活泼，在暗视 野镜下观察似飞蝇。有荚膜，不形成芽 胞。
致病性与免疫性
本菌主要引起人类肠道内和肠道外感染，其 中空肠弯曲菌是引发散发性细菌性肠炎的常 见菌之一。 空肠弯曲菌的某些血清型(O:19)与人的神经 组织有共同抗原，可引起交叉免疫反应而导 致急性感染性多发性神经根疾病，如格林巴 利综合症。 胎儿弯曲菌主要引起肠道外感染。
空肠弯曲菌
空肠弯曲菌的两端单鞭毛
Hp的生物学性状：革兰阴性，菌体细长而弯 曲呈螺旋形、弧形、S形或海鸥状。菌体一 端或两端有多根带鞘的鞭毛。
Hp生化反应特性
氧化酶过氧化氢酶均阳性，快速脲酶试验 阳性。
微生物学检验
快速脲酶试验：将小的组织块装入有christensen尿素培养基的小瓶内，如培养基由 黄变红为阳性。提示该菌产生的高活性的 脲酶已将尿素分解。
Hp在胃十二指肠疾病中的作用
许多研究表明，Hp在胃十二指肠疾病患者的胃 粘膜中检出率远远高于正常者。其中最高的为 十二指肠球部溃疡，为80%～100%，其次为慢 性胃炎，为70%～90%，胃溃疡，57%～85%， 以及残胃炎，十二指肠炎，非溃疡性消化不良 症，碱性反流性胃炎等。目前已有充分的证据 揭示Hp与胃腺癌有关联，药物预防高危人群可 有效地降低胃腺癌的危险，多呈纵向排列；金属镀膜
第二节 螺杆菌属 Helicobacter
第11章弯曲菌
• 抗体检测： ELISA——血清中HP菌体抗体或尿 素酶抗体等
• 碳标记呼吸试验： 用13C或14C标记尿素、测定病人呼吸 中释放的标记CO2的量
复习要点
• 弯曲菌的培养特性及鉴定要点 • 幽门螺杆菌的培养及主要生化特性
41
• 悬滴法观察动力（投镖样/螺旋 状运动）
分离培养：
• 选择性平板——Campy-BAP • 标本分别置于37℃和42℃培养 • 微需氧环境培养 • 72h后观察菌落
弯曲菌属的鉴定要点：
• G-、菌体弯曲或呈S形、海鸥展翅形 • 动力（+） • 微需氧环境生长 • 氧化酶、触酶（+） • 脲酶（-）
第十一章 弯曲菌属检验、螺杆菌属检验
弯曲菌属检验
微需氧菌
•G-、菌体弯曲呈弧形或螺旋形等 •氧化酶（+）、动力（+） •引起人类肠道感染/肠道外感染的病原 菌
分类
临床常见的有： • 空肠弯曲菌 • 大肠弯曲菌 • 胎儿弯曲菌 • 痰液弯曲菌、简明弯曲菌、红嘴鸥弯
曲菌等
致病因素：
• 鞭毛 • 粘附素 • 肠毒素、细胞毒素、内毒素等 • 仍处研究阶段
抵抗力：
• 较弱，室温下很快死亡 • 56℃5min即被杀死 • 干燥环境中仅存活3h • 培养物放置4℃冰箱中可存活3周
微生物学检验
标本采集与运送： • 根据感染部位采集相应标本 • 立即送检，如不能及时送检，标
本应种入卡-布运送培养基，4℃ 保存
直接镜检：
• 粪便、肛拭涂片G染色镜检，找 G-弧形、S形、螺旋形等细菌
• 加入多黏菌素B、万古霉素、两性 霉素、TMP等抑制、少 数7天才能形成菌落，次代培养需 2~3天
• 圆形的小菌落，无色半透明呈露滴 状，直径约0.5~1mm，BAP上有轻度 溶血
[医学微生物学]弧菌属 螺杆菌属 厌氧性细菌
![[医学微生物学]弧菌属 螺杆菌属 厌氧性细菌](https://img.taocdn.com/s3/m/259696ca9e31433238689321.png)
病原生物学教研室
教学目第弧的菌11与属章要求
(一）掌握霍乱弧菌生物学特性、致病物质 和所致疾病；掌握霍乱肠毒素及其作用机制； 副溶血性弧菌所致疾病。 （二）熟悉微生物学检查方法及防治原则。
弧菌属（Vibrio）
一大群菌体短小，弯曲成弧形的G-
第一节 霍乱弧菌（Vibrio cholerae）
第二节 副溶血性弧菌(V. parahemolyticus)
Vibrio cholerae 二、致病性与免疫性
（三）免疫性
感染霍乱弧菌后，机体可获得牢固免疫力。 SIgA起主要作用。
Vibrio cholerae
三、微生物学检查法
1.标本
污染水、食物和粪便，病人肛试子。
2.直接镜检
悬滴法观察细菌呈穿梭样运动；涂片 可见G－弧菌，鱼群状排列。
3.分离培养
碱性蛋白胨水或选择培养基TCBS增菌。
90%：十二指肠溃疡；50-80%胃溃疡 传染源：人 传播途径：粪-口途径
Helicobacter pylori 二、致病性与免疫性
幽门螺杆菌的感染可刺激机体产生IgM、 IgG和IgA型抗体，但是否对机体有保护作 用尚不清楚。
Helicobacter pylori
一、生物学特性
（一）形态与染色 ★
G－，弧型或逗点状，单鞭毛； 液体中，运动非常活泼，呈穿梭样； 涂片中，排列整齐，呈鱼群状。
Vibrio cholerae
一、生物学特性
（二）培养特性 ★
耐碱不耐酸，在pH8.8-9.0的碱性蛋白胨水、碱 性琼脂平板上生长良好。 TCBS培养基（thiosulfate-citrate-bile-sucrose, TCBS） （三）抵抗力
*1979-1981年，Warren和Marshall首次在胃活检 组织中发现并分离培养出Hp。
教学目第弧的菌11与属章要求
(一）掌握霍乱弧菌生物学特性、致病物质 和所致疾病；掌握霍乱肠毒素及其作用机制； 副溶血性弧菌所致疾病。 （二）熟悉微生物学检查方法及防治原则。
弧菌属（Vibrio）
一大群菌体短小，弯曲成弧形的G-
第一节 霍乱弧菌（Vibrio cholerae）
第二节 副溶血性弧菌(V. parahemolyticus)
Vibrio cholerae 二、致病性与免疫性
（三）免疫性
感染霍乱弧菌后，机体可获得牢固免疫力。 SIgA起主要作用。
Vibrio cholerae
三、微生物学检查法
1.标本
污染水、食物和粪便，病人肛试子。
2.直接镜检
悬滴法观察细菌呈穿梭样运动；涂片 可见G－弧菌，鱼群状排列。
3.分离培养
碱性蛋白胨水或选择培养基TCBS增菌。
90%：十二指肠溃疡；50-80%胃溃疡 传染源：人 传播途径：粪-口途径
Helicobacter pylori 二、致病性与免疫性
幽门螺杆菌的感染可刺激机体产生IgM、 IgG和IgA型抗体，但是否对机体有保护作 用尚不清楚。
Helicobacter pylori
一、生物学特性
（一）形态与染色 ★
G－，弧型或逗点状，单鞭毛； 液体中，运动非常活泼，呈穿梭样； 涂片中，排列整齐，呈鱼群状。
Vibrio cholerae
一、生物学特性
（二）培养特性 ★
耐碱不耐酸，在pH8.8-9.0的碱性蛋白胨水、碱 性琼脂平板上生长良好。 TCBS培养基（thiosulfate-citrate-bile-sucrose, TCBS） （三）抵抗力
*1979-1981年，Warren和Marshall首次在胃活检 组织中发现并分离培养出Hp。