大鼠取材方案
大鼠取材方案
实验大鼠取材方案［取材内容］1. 取大歸脉血分离血衆血清-80 C保存。
2. 取大鼠门静脉血分离血清-80 C保存。
3. 取大鼠甲状腺组织.制备甲状腺电镜观察标本其余组织液氮冰冻保存备用〃4. 取大鼠胸腺组织制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化孵标本其余组织液氮冰冻保存备用。
5. 取大鼠肺组织制备肺组织电镜观察标本，免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰搽保存备用。
6. 取大鼠肝脏组级制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
7. 取大鼠觴组级制备康腺组织电镜观察标芯免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
8. 取大鼠肠系膜淋巴结组织制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存。
9. 取鳩胃部组级制备胃粘膜组织电飙察标本免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
10. 取大鼠空肠组级制备肠道粘膜组级电镜观察标本■免疫组化观集标本其余组级分装液氮冰冻保存备用。
11. 取大鼠回肠组织制备肠道粘膜组织电镜观舉标技免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
12. 取大關组织制备左肾组级电镜观察标本、免疫组化观察标本右肾组织液氮冰探保存备用。
13. 取大嵐肾上腺组织左侧制备肾上腺组级免疫组化观察标本右侧肾上腺液氮冰冻保存备用。
14. 取大鼠睾丸组级左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本右侧睾丸液氮冰冻保存备有。
［试剂及药品］戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、 3 应二醛磷酸盐缓冲液（PBS0.01mol/LP pH7.4）或 4 戍二肚肝素撤m器械清洗消毒液［器材］备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存氤肝麹真空采血管、微量移液議高速敲杠注射器10ml、5ml、2ml 、无菌手貳冰箱、冰盒、液氮罐［取材动物］Wistar大鼠［取材步骤］1. 取材大鼠前夜禁食自由飮扎2. 腹腔注射戊巴比妥钠（45mg/kg）或10%水合氯醛（300mg/kg）将动物麻醉。
大鼠灌注固定取脑,解剖取材
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大鼠脑组织取材步骤
1.剪开皮肤
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2.用钩镊再眼眶处固定大鼠颅骨，用组织剪再颅骨和颈椎 连接处剪断
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3.组织剪头部伸入枕骨大孔，尽量贴着骨头（不能插太深伤到脑组织）。
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4.组织剪从枕骨大孔处伸入，朝向同侧眼眶方向，贴着骨 头剪，剪到眼眶
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5.从大鼠眼眶之间剪断
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6.左手持钩镊插入大鼠的眼眶固定颅 骨，用弯钳直接夹住枕骨大孔处的骨 头直接就掀起来了
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1.多聚甲醛的配臵： 一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装 有500mlDEPC水的玻璃容器烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅 拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH值至7.4， 使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴 或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温 或4℃保存备用。
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必要性Байду номын сангаас
1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供
也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响
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流程 麻醉 开胸 心尖向左心室穿针
剪开右心耳
4%多基甲醛固定
生理盐水冲洗
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常见问题
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1.灌注取脑不可用于Western blot及PCR的原因
多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不 变，从而能使其对应的抗体，准确检测其表达的位臵和量。 Western中，要用去污剂使各种蛋白发生变性、解聚，并变成统一 的线性肽链，从而能够用凝胶电泳进行分子量的梯度分离。多聚 甲醛会影响蛋白的解聚，从而使其无法用凝胶分离。 另外，WB和 免疫组化所使用抗体的抗原表位也不同，WB的抗体一般识别蛋白 的一级结构，所以可能也无法识别甲醛处理的蛋白。 PCR要提RNA，RNA非常容易降解，必须新鲜取组织，然后尽快超 低温冷藏或者马上抽提，否则非常容易降解。灌注固定的组织， 原则上是能够提得出DNA和RNA的，但是肯定会有较多的降解， 一般不会这样做。
大鼠灌注固定取脑解剖取材讲义
• 或4℃保存备用。
• 2.制作灌注装置，用两瓶塑料包装的输液瓶 装灌注液。同时配好输液器备用。
• 3.10％水合氯醛按4mL/100g的剂量腹腔注射 麻醉动物。
• 4.沿两侧肋弓剪开皮肤，打开腹腔，用止血 管钳夹持剑突并向上提拉，用弯
5.体循环与肺循环的鉴别
• 体循环时大鼠肝脏变白现象出现较早,在灌 注多聚甲醛后,四肢会出现明显的抽搐现象, 尾巴和四肢明显僵硬。若灌流针误插入右 心室,会导致灌流液沿肺循环途径灌流,这时 肝脏变白出现的较慢,四肢的抽搐现象没有 体循环明显,且鼻腔中有时会有灌流液流出。 因肺循环会影响组织器官的灌流效果,因此 进针时要准确,避免肺循环的发生。一旦出 现肺循环指征,应及时调整进针角度。
• 短期灌注：采用心脏穿刺快速灌注20 min, 其中生理盐水灌注50~100mL,4 %多聚甲醛 缓冲液灌注150 mL。
• 长期灌注：灌注时间延长到1 h,其中生理盐 水灌注200mL,4 %多聚甲醛缓冲液灌注400 mL。
• 短期灌注组脑组织结构保留基本良好,与长 期灌注组相比稍差,研究皮层和海马结构损 伤基本可以满足;长期灌注组结构保留最好, 但是耗时长、固定液用量大,致使试验进度
大鼠脑组织取材步骤
1.剪开皮肤
• 2.用钩镊再眼眶处固定大鼠颅骨，用组织剪 再颅骨和颈椎连接处剪断
• 3.组织剪头部伸入枕骨大孔，尽量贴着骨头 （不能插太深伤到脑组织）。
• 4.组织剪从枕骨大孔处伸入，朝向同侧眼眶 方向，贴着骨头剪，剪到眼眶
5.从大鼠眼眶之间剪断
6.左手持钩镊插入大鼠的眼眶固 定颅骨，用弯钳直接夹住枕骨大 孔处的骨头直接就掀起来了
大鼠灌注固定取脑解剖取材
必要性
1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供 也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。 3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响
麻醉
流程
开胸
心尖向左心室穿针
剪开右心耳
• 3.经心脏灌注，有时穿刺针会误进右心室，那样灌注主要在肺 循环起作用，体循环的血液影响不大。所以观察将穿刺针插入 到主动脉内可以确保起到体循环灌注冲洗血液的效果，脑组织 的血液冲干净后，才不会影响免疫组化的效果，不然到处都是 红细胞造成的背景染色。
• 4.灌注时注意排空输液管中的气泡，不然容易气栓，影响灌注 效果。一定要看到大鼠较剧烈抽搐，不然证明灌注不好。
• 简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱 • 密封放置2天，就能全溶。若是很急，55去除小
的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。
• 也可用10%福尔马林溶液，甲醛1：10稀释 甲醛100ml 磷酸二氢钠4g 磷酸氢二钠6.5g 蒸馏水900ml 或甲醛100ml加900mlPBS缓冲液。
大鼠脑组织取材步骤
1.剪开皮肤
• 2.用钩镊再眼眶处固定大鼠颅骨，用组织剪 再颅骨和颈椎连接处剪断
• 3.组织剪头部伸入枕骨大孔，尽量贴着骨头（不能插太深伤到脑组织）。
• 4.组织剪从枕骨大孔处伸入，朝向同侧眼眶 方向，贴着骨头剪，剪到眼眶
5.从大鼠眼眶之间剪断
6.左手持钩镊插入大鼠的眼眶固定颅 骨，用弯钳直接夹住枕骨大孔处的骨 头直接就掀起来了
• 5.快速滴注生理盐水(室温)，同时剪开右心耳。约注入100~150mL，至流出液 • 体血色较浅基本澄清，停止灌注。肝脏、眼珠、爪子迅速变白是排出血液的 • 有效观察指标。
实验大鼠取材方案
实验大鼠取材方案引言：实验大鼠作为研究生物学和医学领域的重要动物模型，广泛用于疾病机制研究、药物毒理学评价以及创伤修复等实验中。
为了保证科学合理、可靠可重复的实验结果，大鼠取材方案的制定十分重要。
本文将详细介绍一个实验大鼠取材方案，包括大鼠的选择与购买、饲养与管理、实验前准备及取材方法。
一、大鼠的选择与购买实验大鼠的选择应该根据研究的目的和要求，选用符合实验条件和研究对象的品种，如Sprague Dawley大鼠、Wistar大鼠等。
同时，购买大鼠的时候需要注意以下几个方面：2.注意大鼠的种类、性别、年龄等信息，确保符合实验需求；3.检查大鼠的体表特征，确保健康、无畸形、无伤口等；4.购买大鼠前可以进行一定的初检，如测量体重、观察活动情况等。
二、大鼠的饲养与管理实验大鼠的饲养与管理是保证实验结果可靠性的重要环节。
1.饲养环境：-温度：保持恒温（20-25度），避免极端温度的影响；-湿度：保持适宜湿度（40-70%），避免湿度过高导致疾病的发生；-光照：保持适宜光照，如12小时昼光与12小时黑暗的交替；-通风：保持通风良好，避免污浊空气对大鼠健康的影响。
2.饲料与水：-提供优质饲料，如标准饲料或专门配制的实验饲料；-饲料的存放应防潮、通风，保证其营养成分的稳定性；-提供清洁、安全的饮用水，确保水质的卫生。
3.健康监测：-定期检查大鼠的健康状况，观察是否存在异常行为或症状；-定期测量大鼠的体重、体温等生理指标。
三、实验前准备在进行实验前，需要对大鼠进行一些必要的准备工作：1.环境适应：-将大鼠从饲养环境转移到实验环境前，应进行适应期的过渡；-适当调整温度、湿度和光照等条件的过渡，减少对大鼠的应激。
2.实验前禁食：-固定禁食时间，如12小时或更长时间；-禁食能够减少胃肠道内容物对实验结果的影响。
3.麻醉和体表消毒：-根据实验需要选择合适的麻醉方式，如乙醚麻醉、氧化氮麻醉等；-在取材前进行局部体表消毒，减少感染风险。
实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项
实验大鼠常见脏器形态学取材方法和注意事项[取材内容]大鼠肺组织、大鼠肝脏组织、大鼠胰腺组织、大鼠胃部组织、大鼠空场回肠组织、大鼠肾组织、门静脉血、淋巴组织、大鼠心脏。
[试剂及药品]戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液[器材]备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml 、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐[取材动物]大鼠[取材步骤]1. 取材前夜禁食，自由饮水。
2. 小鼠称重，按照50mg/kg的比例用5ml的注射器配合针头抽取戊巴比妥钠备用。
3. 正左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴，另外三个手指抓住大鼠的颈部，使大鼠头部向向下。
这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部，防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
右手持注射器，从腹部近腿根处刺入后再腹部皮下穿行深入，动作轻柔，缓慢注射。
注射完药物后，缓缓拔出针头，手指按住针口对小鼠腹部轻柔按摩，促进麻醉药物的吸收，掐小鼠尾部检测小鼠麻醉程度。
4.将小鼠四肢固定于解剖台上，暴露小鼠整个胸部和腹部，修剪去腹部毛发，75%酒精消毒。
5.沿腹侧正中线自阴茎上源由下而上剪开腹部皮肤直至剑突，向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织，暴露腹壁浅肌层。
沿白线钝性分离腹壁肌肉，剪开腹膜，暴露腹腔，将肝脏向上翻起，显露肝门。
6.门静脉血采集：将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉，抽取门静脉血2ml，无创血管夹夹闭门静脉止血。
将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜，4℃离心，3000-3500/min，10分钟，吸出上清液，分装，-80摄氏度保存备用。
大鼠灌注固定取脑解剖取材ppt课件
2.没有灌注固定的大鼠脑组织,能不 能做切片和免疫组化？
• 如果没有灌注固定，而是直接取材然后放 入固定液中，可以进行免疫组化染色，只 是效果不如灌注固定的好 • 尤其是要做电镜时更明显。有的标记蛋白 要求较高，固定不好就难以染好。
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3.用4%多聚甲醛固定但保存了2周才做石蜡切 片，对免疫组化有无影响？
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从小脑处将脑组织向上推起，用小 剪刀剪断脑神经
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注意事项 • 1.多聚甲醛气味刺激，配置时做好自我保护。 • 2.暴露心脏这一步骤，容易损伤肺、心脏或者肝脏，“夹持剑 突并向上提拉，用弯剪在膈肌与胸骨柄相连处剪一小口，造成 人工气胸”，人工气胸后，肺萎缩，胸腔里的空间增大，提拉 剑突后，不容易损伤肺、心及肝脏，出血少。 • 3.经心脏灌注，有时穿刺针会误进右心室，那样灌注主要在肺 循环起作用，体循环的血液影响不大。所以观察将穿刺针插入 到主动脉内可以确保起到体循环灌注冲洗血液的效果，脑组织 的血液冲干净后，才不会影响免疫组化的效果，不然到处都是 红细胞造成的背景染色。 • 4.灌注时注意排空输液管中的气泡，不然容易气栓，影响灌注 效果。一定要看到大鼠较剧烈抽搐，不然证明灌注不好。
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省时省剂的方法 夹闭腹主动脉：只灌注上肢及头脑，固定 的好又快，又省试剂。先灌注生理盐水 约100ml，见到老鼠两前肢及两肺变白即可 改灌注多聚甲醛。多聚甲醛用100ml以下即 可。 灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠前肢剧 烈抽动（下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完 全）；前肢及颈部僵硬；所灌注的脑组 织白而硬
脑内血液都在he染色后可去除红细胞背景影响流程麻醉心尖向左心室穿针剪开右心耳生理盐水冲洗4多基甲醛固定具体过程大鼠经深度麻醉后固定于自制的手术木板置于解剖盘中开胸暴露并游离出心脏经左心室插入灌流针并固定切开右心耳先灌注冰冻无菌生理盐水4xml直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清后再灌注冰冻44多聚甲醛xml断头取脑多聚甲醛浸泡固定24小时
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法
一种大鼠腰膨大背根神经节取材的改良方法为了获得高质量的大鼠神经节样本，本文提出了一种改良的取材方法。
通过对大鼠腰椎进行解剖，切除脊柱并暴露出神经节，使用显微镊子和显微注射器进行取材，避免了常规方法中可能出现的神经节损伤和污染，同时保证了样本的完整性和纯度。
本方法在研究神经退行性疾病等方面具有应用前景。
关键词：大鼠腰椎；神经节；取材；改良方法引言神经节是神经系统中重要的组成部分，其功能与神经元的生存和发展密切相关。
因此，研究神经节的结构和功能对于理解神经系统的发育和疾病具有重要意义。
大鼠是神经科学领域中常用的实验动物，其神经节样本的获取对于研究神经退行性疾病等具有重要意义。
然而，传统的取材方法存在一些问题，如神经节损伤、污染等，影响了样本的完整性和纯度。
因此，本文提出了一种改良的大鼠神经节取材方法，以期提高样本的质量和可靠性。
材料与方法1. 实验动物本研究使用雄性Sprague-Dawley大鼠，体重250-300g，由实验动物中心提供。
2. 取材工具显微镊子、显微注射器、手术刀、剪刀、镊子、无菌手套、无菌巾等。
3. 取材步骤3.1 麻醉和解剖将大鼠置于麻醉盒中，用异氟醚气体麻醉2-3分钟，待大鼠完全麻醉后，将其移至手术台上。
用无菌巾将大鼠的四肢固定，用手术刀在腰部进行皮肤切开，剪开腹肌，暴露出腰椎。
3.2 切除脊柱用剪刀将腰椎两侧的肌肉和韧带剪开，用镊子将椎弓切除，将脊柱暴露出来。
用剪刀将脊柱切开，切除椎体和椎间盘，暴露出神经节。
3.3 取材用显微镊子将神经节取出，放置在无菌PBS缓冲液中。
用显微注射器将PBS缓冲液注入神经节，使其膨胀，便于后续的分离和处理。
将取出的神经节进行离心，去除PBS缓冲液，即可得到纯净的神经节样本。
结果本方法成功地获得了大鼠腰膨大背根神经节样本，样本完整、纯净。
与传统的取材方法相比，本方法避免了神经节的损伤和污染，取材效率高，样本质量好。
讨论本文提出的大鼠神经节取材方法具有一定的优势。
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实验大鼠取材方案[取材内容]1. 取大鼠静脉血分离血浆、血清-80℃保存。
2. 取大鼠门静脉血分离血清-80℃保存。
3. 取大鼠甲状腺组织制备甲状腺电镜观察标本其余组织液氮冰冻保存备用。
4. 取大鼠胸腺组织制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存备用。
5. 取大鼠肺组织制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
6. 取大鼠肝脏组织制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
7. 取大鼠胰腺组织制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
8. 取大鼠肠系膜淋巴结组织制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存。
9. 取大鼠胃部组织制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
10. 取大鼠空肠组织制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
11. 取大鼠回肠组织制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。
12. 取大鼠肾组织制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本右肾组织液氮冰冻保存备用。
13. 取大鼠肾上腺组织左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本右侧肾上腺液氮冰冻保存备用。
14. 取大鼠睾丸组织左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本右侧睾丸液氮冰冻保存备有。
[试剂及药品]戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液[器材]备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐[取材动物]Wistar大鼠[取材步骤]1. 取材大鼠前夜禁食自由饮水。
2. 腹腔注射戊巴比妥钠(45mg/kg) 或10%水合氯醛(300mg/kg)将动物麻醉。
用5ml的注射器配合5.57号针头。
腹腔注射时右手持注射器左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴另外三个手指抓住大鼠的颈部使大鼠的头部向下。
这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。
进针的动作轻柔防止刺伤腹部器官。
尤其是对于体重较小的大鼠腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行一小段距离最好是从腹部一侧进针穿过腹中线后在腹部的另一侧进入腹腔注射完药物后缓缓拔出针头并轻微旋转针头防止漏液。
待动物麻醉成功后仰卧位固定于解剖台。
3. 修剪去颈部及腹部毛发75%酒精消毒。
4. 沿腹侧正中线自阴茎上缘由下而上剪开腹部皮肤直至剑突向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织暴露腹壁浅肌层。
沿白线钝性分离腹壁肌肉剪开腹膜暴露腹腔将肝脏向上翻起显露门并游离静脉将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉抽取门静脉血2ml无创血管夹夹闭门静脉止血。
将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜4℃离心3000-3500/min10分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
5. 把胃与脾之间的薄膜除去可见到在其下方有如树枝状的肉色组织分为左、右两叶钝锐结合整体取下胰腺组织及脾脏组织结扎止血。
胰腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取胰腺体部约1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②胰腺体部相邻部位组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余组织全部液氮冰冻保存备用。
生理盐水冲洗操作器械。
6. 剔除脾周组织放置脾脏于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①从脾脏一端切取5×5mm脾组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②继续切取脾约1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定③其余组织液氮冰冻保存备用。
7. 从剑突继续向上剪开皮肤自颌下向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织暴露胸廓及颈浅肌层。
沿正中剪开胸廓、胸膜避免损伤胸腺的胸腔脏器。
暴露心脏找到上下腔静脉后确认右心房5ml注射器直接穿刺右心房最大量抽取外周回心静脉血。
加4ml静脉血入肝素锂真空采血管摇匀室温静置10分钟4℃离心3000-3500/min5分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
2ml加入普通真空采血管低温静置过夜4℃离心3000-3500/min5分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。
8. 展开肠系膜于肠系膜根部寻找淡蓝色结节样淋巴结组织剔取肠系膜淋巴结数枚放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①取部分淋巴结组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②其余组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
心管5ml、9. 上端于贲门上端结扎食管下端于直肠远端结扎直肠末端钝锐结合完整取下胃肠道。
10. 离断胃放置于无菌培养皿残端结扎。
①沿胃大弯剖开生理盐水洗涤切取约1mm×1mm×1mm胃窦和胃体黏膜组织各3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②剪取宽约0.5-1.0cm包含胃窦、胃体组织1条浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余胃组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
11. ①距treitz韧带10cm处切取空肠10cm距回盲部10cm处切取回肠10cm生理盐水洗涤切取约1mm×1mm×1mm空肠和回肠黏膜组织各3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②剪取宽约0.5-1.0cm包含全层的空肠和回肠组织各1条做标记浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余空肠和回肠组织全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
12. 结扎剪断肝门管道系统钝锐结合完整取出大鼠肝脏放置于无菌培养皿生理盐水冲洗称重并记录。
①切取肝左叶约1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②左叶肝组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③右叶肝组织称重记录分装后全部放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
13. 于腹膜外腰部脊柱两侧寻找到肾脏表面光滑、背腹略扁呈蚕豆形。
在肾脏的前方内侧和腰下肌的腹面相接处寻找到肾上腺。
右侧肾上腺呈豆状长轴指向后内侧左侧呈卵圆形长轴指向腹外侧。
钝锐结合摘取两侧肾上腺。
①左侧肾上腺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定②右叶肾上腺放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
14. 剪开后腹膜结扎剪断双侧肾门钝锐结合取下双侧肾脏剔除肾周筋膜组织放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①于中间肾门部横行切开左侧肾脏切取上端肾脏1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②下端脾脏浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③右侧肾脏放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
15. 大鼠的阴囊是由肛门腹侧会阴部皮肤下垂所形成的囊袋。
性成熟的大鼠睾丸和附睾下降入阴囊使表面凸出并突向后方。
小心剪开双侧阴囊可见椭圆形睾丸钝锐结合摘取双侧睾丸、附睾放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
16. 颈白线钝锐结合分离颈前肌群直至气管向上显露甲状腺。
仔细操作切取包括甲状软骨在内的甲状腺。
①切取约1mm×1mm×1mm组织各3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②其余组织全部浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定。
切取左侧睾丸下端1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②余左侧睾丸组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③右侧睾丸组织放置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
17. 大鼠胸腺由两叶组成似等边三角形。
大部分位于胸腔前纵膈顶端近喉部基底部附着于心包腹面的前上方。
钝锐结合完整取下胸腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取胸腺1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②切取胸腺5mm×5mm×5mm组织1块浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定③其余组织置于无菌冻存管液氮冰冻保存备用。
18. 整体取下大鼠心肺组织剪开分离双侧肺脏置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。
①切取左肺1mm×1mm×1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定②余左肺浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定冻存管液氮冰冻保存备用。
19. 各取样标本细致编号登记。
20. 大鼠废弃尸体处理。
[注意事项1. 戊巴比妥钠配成1%生理盐水溶液平均每只大鼠用量12.6mg 1.2ml左右。
2. 大鼠腹腔注射可以大鼠腹腔注射的给药容积一般为510ml/kg。
3. 完整取下胃肠道后已将肠系膜撕碎不易寻找肠系膜淋巴结所以先取淋巴结。
取下胃肠道由专人操作取胃肠道及胃肠道取下后取材的操作器械单用一套。
4.取材时三人同时操作取一只大鼠结合取材方案多脏器并行取材缩短取材时间。
③右肺组织置于无菌1、解剖后应迅速将脏器称重，以免水分蒸发造成差异，特别是肾上腺等小器官的称重。
2、脏器称重前应尽量将周围脂肪组织和结缔组织剔除，并用滤纸吸去脏器表面血液及体液，特别是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的器官，更要新鲜称重，防止器官干燥失水而重量减轻。
3、空腔器官称重前，应清除其腔内液体，如心脏应除去血块。
信你自己罢！只有你自己是真实的，也只有你能够创造你自己。