饲料中酵母菌的筛选
酵母菌的筛选方案
第一部分：酵母筛选收集一．土样中酵母的分离：1．土壤的采集处理采用五点取样法从葡萄地土壤中取样。
由于土壤中的微生物一般在5-25cm的土层里，所以先用灭菌铲除去土壤的表皮，然后采取土壤200-300g，至于无菌塑料袋内，并标明采取地点、日期。
将其运回实验室后至于冰箱中保存，备用。
将采回的样品用四分法获取样品20-30g，将其置于研钵中研磨均匀。
2. 土壤中菌种的分离：称取1 g土壤，置于液体培养基灭菌葡萄汁，经28 ℃，12 h，180 rpm摇床富集培养。
取1 ml富集培养液，分别进行五个梯度稀释（1:1000、1:5000、1:10000、1:50000、1:100000），再用移液枪分别从每一稀释度各取0.1ml稀释液，注入平板上，利用涂布棒将样品均匀的涂在培养基表面（注意不能使培养基表面破裂），将培养皿盖好，再把培养皿倒置，于适宜温度（一般为25℃或28℃）的恒温箱中培养，每个梯度做三个重复。
观察培养基，直到菌种形成清晰易辩的菌落为止。
为了在筛选过程中排除细菌的干扰，在培养基中加30ug/ml 的链霉素或者100mg/L的氯霉素。
观察并记录菌落颜色与形态，然后在显微观察记录细胞大小、形态，进行分析和初步的归类。
二．葡萄果表酵母的分离:1. 葡萄的采集：葡萄成熟时，在葡萄果皮、果梗上都有大量的酵母菌存在，因此在采收葡萄时，将果梗与葡萄一起采收。
由于酵母菌在稍微破裂的葡萄果实中大量存在，采收时可以选取有裂纹的葡萄，但是，将完整无损的葡萄与有裂纹的分开装袋。
运回实验室置于冰箱中保存，备用。
2. 菌种分离步骤：将腐败变质的葡萄及杂质从果实中挑选出来。
随机选取并称量约10g成熟葡萄，放入盛有90ml 无菌水的三角瓶，分别按30ug/ml添加链霉素，然后振荡培养30min后静置，制成菌悬液，吸取50µl 放入YEPD固体培养基，三个重复，以无菌刮铲刮匀，25℃培养24～48h。
观察菌落的大小及生长状况。
优良酵母菌株的分离和筛选
优良酵母菌株的分离和筛选作者：刘晓辉， 张效川， 辛小玲， 白延琴， 徐文华， 蔡涛， 辛亚平， 昝林森， LIU Xiao-hui， ZHANG Xiao-chuan， XIN Xiao-ling， BAI Yan-qin， XU Wen-hua， CAI Tao， XIN Ya-ping， ZAN Lin-sen作者单位：刘晓辉,LIU Xiao-hui(天津市兽药饲料监察所,天津,300210)， 张效川,ZHANG Xiao-chuan(吴起县畜牧局,陕西吴起,717600)， 辛小玲,XIN Xiao-ling(富平县畜牧兽医工作站,陕西富平,711700)， 白延琴,BAIYan-qin(子长县畜牧兽医局史家畔畜牧兽医站,陕西子长,717300)， 徐文华,XU Wen-hua(榆林市榆阳区牛家梁镇畜牧兽医工作站,陕西榆林,719000)， 蔡涛,CAI Tao(渭南市畜牧技术推广中心,陕西渭南,714000)，辛亚平,昝林森,XIN Ya-ping,ZAN Lin-sen(西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨凌,712100)刊名：家畜生态学报英文刊名：Acta Ecologae Animalis Domastici年，卷(期)：2013,34(1)1.王晓宏.刘大程.殷兆丽复合酵母培养物对奶牛生产性能的影响 2010(10)2.成娟丽.张福元生物蛋白饲料的应用 2006(06)3.肖连冬.马红霞活菌益生高蛋白饲料的生产及应用 2007(28)4.汤少伟.付石军.郭时金酵母培养物在饲料中的应用 2011(08)5.翁鸿珍.池永红奶酒中酵母菌的分离与筛选 2010(04)6.孙满吉.刘彩娟.张永根直接饲喂酵母培养物对奶牛瘤胃发酵的影响 2010(05)7.范亚菊.邰丽萍酵母培养物在奶牛生产中的应用 2011(07)8.辛亚平.昝林森.杜双田几株纤维素分解菌对统糠的混合发酵研究 2010(05)9.辛亚平.昝林森.杜双田降解纤维素菌株筛选及其鉴定 2011(05)本文链接：/Periodical_jcst201301012.aspx。
酵母菌种的筛选及其对反刍动物的影响
１ 影响新型酵母菌筛选 的因素
随着 对酵母 菌研究 的 深人 ，对 研究 对象一 酵母 菌 的筛选无 疑是 至关重 要 的 ，一方 面要保 证所 筛选
的新 型酵母 菌种具 有生 物安全性 ，另 一方 面还要 考
产 品 对 反 刍 动 物 瘤 胃作 用 机 理 及 效 果 做 了 许 多
的研 究工 作 ，无 论在 动物体 内试 验还 是体外 试
验 都 表 明 ，添 加 活 性 酵母 对 反 刍 动 物 的 瘤 胃发
酵 、生 产 性 能 、产 品 质 量 以及 产 品 安 全 性 等 方
虑到不 同酵母 菌 品种对 瘤 胃菌 群 的抑 制作 用差异 性 很 大 ，会 导致 不 同酵母 菌品种对 反刍 动物发 酵性 能 和生产性 能产 生不 同影 响。 因此 ，新 型酵母 品种 的 筛 选工作 应放 在鉴定 新 品种对反 刍动物 瘤 胃发酵性
ｍ ｅ ｈ ｉｍ ｆｙ ｓ ｎ ｒ ｍｉａｎ ｎ ｈｅ ｅ ｆ ｔｏ ｕ ｉａｌ ｉｒ ｅ ｏｌｇ ａ ｅ ｎ ｒ ｓ ａｒ ｈ ｄ ｒ ｃ ｎ ｌ． ｃ ａｎｓ ｏ ｅａ ｔｏ ｕ ｎ ｔａ ｄ ｔ ｆ ｎ ｒ ｍ ｎ ｃ ｏ ｃ ｏ ｙ ｈ ｓ ｂ ｅ ｅ ｅ ｃ ｅ ｅ ｅ ｔ ｅｃ ｍ ｙ
第４卷第２ １ 期
２１ ０ ０年 ２月 东北来自农业大
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Ｊｕ ｎ ｌｏ ｒ ｅ ｓ ｎｃ ｌ ｒｌＵｎｖ ｒｉ ｏ ｒ ａ ｆＮｏｔ ａｔＡｇ ｕｔ ａ ｉｅｓｔ ｈ ｕ ｙ
酵 母菌 种 的筛选 及其 对 反 刍 动物 的影 响
金 龙 ，马清泉 ，张永根 ，林 曦
（ 北 农 业 大 学 动物 科 学 技 术 学 院 ， 哈尔 滨 ｌ０ ３ 东 ５０ ０）
酵母菌在饲料中的应用
酵母菌在饲料中的应用
酵母菌在饲料中的应用如下：
酵母能够通过对有害菌的识别、吸附和排除减少有害菌在肠道的数量，促进有益菌繁殖，调节动物消化道微生态区系平衡，改善肠道功能。
同时酵母粉能够提高动物机体的免疫力，保持肠道的完整性。
还具有良好的天然诱食性，应用在饲料中能够增强动物饲料的适口性。
加强蛋鸡的饲养管理，是增收的重要途径。
在鸡饲料中添加2%至4%的酵母粉，不仅可使产蛋率提高25%至30%，还可以降低饲料费用，促进鸡群健康的生长，使鸡的成活率提高10%至20%，换羽时间可缩短15至20天。
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程引言酵母菌是一类单细胞真核微生物，被广泛应用于食品工业、酿酒工业、生物工程等领域。
酵母菌的筛选思路和分离筛选流程对于提高酵母菌的产量和质量具有重要意义。
本文将介绍酵母菌的筛选思路和分离筛选流程，并以Markdown文本格式输出。
酵母菌的筛选思路1. 依据目标功能进行筛选首先，根据酵母菌在应用领域中的具体功能要求，确定筛选目标。
常见的筛选目标包括产酶能力、抗逆性、代谢产物产量等。
2. 筛选条件的优化确定筛选目标后，需要对筛选条件进行优化，以提高筛选效率和准确性。
优化筛选条件的方法包括：•pH值的调节•温度的调节•增加对抗生素的抗性3. 基于遗传工程的筛选方法如果目标无法通过传统筛选方法获得，可以借助遗传工程的方法进行筛选。
这包括基因操作、基因组重组、基因表达等。
酵母菌的分离筛选流程1. 样品的采集和处理首先，需要根据筛选目标的要求，采集合适的样品。
样品的处理包括：•去除杂质和污染物•对样品进行稀释2. 培养基的选择和制备根据筛选目标的要求，选择合适的培养基。
培养基的制备包括：•加入适当的营养成分•调节pH值和温度•预防细菌污染3. 分离和筛选将处理好的样品接种到培养基上，进行分离和筛选。
分离和筛选的方法包括：•简单扩增法：通过胶体扩散、直接接种等方法进行菌落的扩增，然后通过各种筛选方法进行检测和选择。
•高通量筛选法：利用自动化设备进行酵母菌的扩增和筛选，大大提高了筛选效率。
4. 筛选结果的评估与分析获得候选酵母菌后，需要对其进行评估和分析，判断是否满足筛选目标。
评估和分析方法包括：•酶活力测定•代谢产物测量•生长速率测定•遗传稳定性检测等。
结论酵母菌的筛选思路和分离筛选流程对于提高酵母菌的产量和质量具有重要意义。
在筛选时，根据筛选目标优化筛选条件，利用遗传工程方法进行筛选。
分离筛选流程包括样品的采集和处理、培养基的选择和制备、分离和筛选以及筛选结果的评估与分析。
通过合理的筛选思路和分离筛选流程，可以获得具有优良特性的酵母菌，满足不同应用领域的需求。
实验一 酵母菌株的筛选分离
一、实验目的：1.通过酒母中酵母的筛选实验，熟悉微生物分离纯化、接种微生物操作实验；2.熟悉产酒精酵母的TTC显色平板等性能筛选实验；二、实验材料与仪器：培养基：YPD培养基、MEB、TTC显色培养基；酵母膏、蛋白胨、葡萄糖、TTC、0.1%吕氏碱性美蓝仪器：灭菌锅、恒温培养箱、厌氧培养箱；移液管、涂布棒，接种环，平板、三角瓶、试管（15*150mm）、硅胶塞、杜氏小倒管、纱布、报纸；三、实验步骤：1.1 培养基的配制YPDS固体培养基（1L）：称取酵母膏10g、蛋白胨20g、葡萄糖20g溶于1L的水当中，分装到三角瓶中后加入2%琼脂粉，115℃灭菌20min；注：为抑制霉菌菌丝的生长。
可在培养基中加入0.5%-1%的脱氧胆酸钠。
YPD液体培养基（1L）：按YPDS配方配制，不加琼脂，121℃灭菌20min；TTC显色培养基：每100mlYPDS培养基中加入0.05g的TTC；1.2 酵母的分离纯化：1.2.1 梯度稀释将酒样混匀后取1ml加入到9ml的无菌水中制成10-1浓度梯度，之后从中取出1ml再加入到9ml的无菌水当中，浓度梯度为10-2，依次往下推，分别制得10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释度的菌液；1.2.2 涂布将稀释得到的10-2,10-3,10-4三个梯度的菌液取0.5 ml到预先倒好的TTC显色培养基平板中，沿一个方向均匀的进行涂布，然后将涂布好的平板用报纸包好避光培养，倒置于恒温厌氧培养箱中28℃培养2-3d。
1.3 酵母的保藏将划线纯化后的酵母菌株接种在YPDS斜面试管上，用记号笔写上将接种的菌名、日期和接种者，28℃培养1-2d，培养好后放置于4℃冰箱保存；四、实验结果1、对实验过程中所得到的实验结果进行拍照；注：左上图浓度梯度10-2，右上图浓度梯度10-3左下图浓度梯度10-4，右下图为酵母菌株接种在YPDS 斜面试管2、 记录所筛选到酵母菌株的颜色分级并进行编号；酵母菌株的颜色随浓度梯度增加而变深，如颜色深：10-2>10-3>10-4五、思考题1、涂布之前稀释的目的？答：稀释涂布平板的目的是降低菌的浓度.浓度过高的菌会在培养基上长出过多的菌落,以至于没法挑出单菌落,那样就无法获得单一种类的菌,或者无法统计菌落数来计算菌液浓度了.2、如何获得纯化的微生物菌株？ 答：1）划线分离法2）稀释分离法3）组织分离法3、酵母菌TTC 筛选的原理是什么？答：TTC （2，3，5一氯化苯基四氮哇）是一种显示剂。
饲用酵母菌的筛选鉴定及抗逆性分析
饲用酵母菌的筛选鉴定及抗逆性分析陈秀秀，孙洪浩，孙小涵，吕福军*（辽宁波尔莱特农牧实业有限公司，沈阳110000）摘要：为了筛选出可作为微生态制剂及用于发酵饲料的优良菌株，试验以蜂蜜及水果酵素为原料，进行菌株的分离鉴定，并对分离出的酵母菌进行抗逆性研究。
结果显示：从蜂蜜中分离出7株菌（A、H、I、J、K、L、M），从苹果酵素中分离出2株菌（DM和DS），从葡萄酵素中分离出2株菌（E1和E3），通过细菌形态学及26S rDNA 序列鉴定，确定A是假丝酵母，DM、DS是毕赤酵母，E1是假鲁氏接合酵母，E3是鲁氏接合酵母，H、I、J、K、L和M是酿酒酵母。
6株酿酒酵母菌中K的产气能力最强，发酵15h后产气达到满管，其次是I、J和L；在葡萄糖含量为100~500g·L-1条件下，6株菌均可以生长，其中J的耐糖性最好；当pH值为1~5时，6株菌均可生长，耐低pH性由高到低为J>L>I>H>M>K；H的高温耐受性最好，I、J和L较好，K和M略差；胆盐浓度为0.03%~0.3%时，I、J和M完全耐受且存活率可达100%。
本研究为发酵饲料生产提供具备耐高糖、耐低pH、耐高温、耐胆盐等应用潜力的菌株。
关键词：酿酒酵母；筛选鉴定；抗逆性研究中图分类号：S816.6文献标志码：A文章编号：1001-0084（2022）01-0001-06Screening,Identification and StressResistance of Feed YeastCHEN Xiuxiu,SUN Honghao,SUN Xiaohan,LYU Fujun*（Liaoning Powerlight Agricultural and Animal Husbandry Enterprise Co.,Ltd.,Shenyang110000,China) Abstract:In order to screen superior strains as microecologics,and aimed to use for fermented feed.Natural honey and friut were taken as the materials,isolation and identification were carried on.Meantime,the isolated forage yeasts were carried on the stress resistance.The result showed that seven strains were isolated from natural honey(A,H,I,J,K,L and M),and two strains(DM and DS)were isolated from appleenzyme,two strains(E1and E3) were isolated from grape enzyme.A was Starmerella sorbosivorans,DM and DS were Pichia deserticola,E1was Zygosaccharomyces pseudorouxii,E3was Zygosaccharomyces rouxii,H,I,J,K,L and M were Saccharomyces cerevisiae through the analysis of morphological and26S rDNA gene sequences identified.Among the six strains of Saccharomyces cerevisiae,K had the strongest gas production and reached full gas production after15h of fermentation,followed by I,J and L;under the condition of glucose content of100-500g·L-1,all the six strains could grow,among which J had the best sugar tolerance.When the pH value was1-5,all the six strains could grow, and the high temperature tolerance from high to low,pH was J>L>I>H>M>K;H,I,J and L were better,K and M were slightly worse.When the concentration of bile salt was0.03%-0.3%,I,J and M were completely tolerated and the survival rate could reach100%.The study provided potential strains,which had glucose tolerance,level 收稿日期：2021-12-13作者简介：陈秀秀（1988—），女，黑龙江哈尔滨人，硕士，研究方向为饲用益生菌。
酵母菌选育、最适培养基筛选及菌种发酵培养
酵母菌选育、最适培养基筛选及菌种发酵培养[摘要]在无菌条件下，用紫外线对酵母菌(yeast)进行不同时长的照射诱变处理，选出合适的诱变菌种进行振荡培养。
经振荡培养后的诱变菌种运用正交试验设计的方法采用四个因素三个水平选出最适的菌种培养基，进行进一步的发酵培养。
在发酵罐中加入最适培养基成分和合适的酵母菌诱变菌种进行发酵扩培，最终获得大量的菌种和发酵产物。
[关键词]酵母菌，紫外线，最适培养基，正交试验设计，发酵培养面包酵母(Saccharomyces cerevisiae)是一种单细胞微生物，是酵母菌的一种,它含蛋白质50％左右，氨基酸含量高，富含B族维生素，还有丰富的酶系和多种经济价值很高的生理活性物质。
几千年前人类就用面包酵母发酵面包和酒类，在现代食品工业方面，广泛用作人类主食面包、馒头、包子、饼干糕点等食品的优良发酵剂和营养剂。
本实验选用的物理诱变因子为紫外线，DNA能强烈吸收紫外线，尤其是碱基中的胸腺嘧啶，从而在形成二聚体，改变DNA结构，引起基因突变。
本实验的面包酵母菌经不同时长的紫外线诱变处理，培养出的适合的诱变菌种进行最适的菌种培养基的筛选和发酵培养。
最适菌种培养基的筛选是通过正交实验设计进行的。
正交试验设计(Orthogonal experimental design)是研究多因素多水平的又一种设计方法，它是根据正交性从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了“均匀分散，齐整可比”的特点，正交试验设计是分式析因设计的主要方法,是一种高效率、快速、经济的实验设计方法。
正交表是一整套规则的设计表格，用L为正交表的代号，n为试验的次数，t为水平数，c为列数，也就是可能安排最多的因素个数，本实验采用了四因素三水平进行最适培养基的筛选。
选出合适的诱变菌种和适合诱变的酵母菌生长的培养基后，便可以能过发酵罐进行发酵培养，分时段观察记录发酵过程中的PH，溶氧，菌种数。
绘制出面包酵母的生长曲线１材料与方法1.1实验材料菌种：面包酵母菌仪器：高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，光学显微镜，恒温培养摇床，分析天平，小型发酵罐用品：枪头及1mL和0.5mL移液器，三角瓶，试管，玻璃涂棒，平皿，血球计数板，酒精灯，棉塞，试管架，盖玻片，记号笔试剂：酵母膏，蛋白胨，(NH4)SO4，葡萄糖PDA培养基，PDA液体培养基（不加琼脂）：去皮马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂20克、自来水1000毫升、自然PH [其做法是称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，再加10～20g葡萄糖和17～20g琼脂，，高压蒸气（121℃）灭菌20分钟，冷却后贮存备用。
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饲料中酵母菌的筛选
一、
问题的提出：酵母菌单细胞蛋白常用于配制畜类饲料，如何从普通饲料中提取实验所需的酵母菌菌株？
二、
1.实验假设：
认为当前从市场上采集到的饲料标本含有实验所需的酵母菌，且酵母菌在饲料中的含量能够满足普通实验室提取所需的标准
2.理论依据：
（1）饲料样本中通常含有细菌、霉菌、酵母菌、放线菌。
（2）霉菌与放线菌属好氧菌，酵母菌为兼性好痒型，细菌多数好痒，少数厌氧。
（3）酵母菌的培养时间（2~3天）较霉菌（3~5天）和放线菌（5~7天）的培养时间短，较细菌（24h）的培养时间长。
（4）酵母菌能适应pH值（3~7.5）较低的培养基，其他三种菌则不能。
（5）上述四种菌的菌落特征区分度较大。
酵母菌菌落表面一般光滑、湿润，有粘稠性，大多数是乳白色，边缘呈褶皱状，用针不易挑取，且挑起后的菌块不易散开。
三、
实验目标：
获得纯度较高的酵母菌菌种，保存于冰箱中备用。
四、实验方法
（1）：将购得的饲料用四分法获取样品20~30 g，然后置于研钵中研磨均匀。
（2）：称取1g饲料，置于PDA液体培养基中（含氯霉素），经28 ℃，24 h，180 rpm 摇床富集培养。
（3）：取1ml 富集培养液，分别进行5个梯度稀释（1∶500，1∶1000，1∶1500 1∶2000 1∶2500）
（4）：用移液枪分别从每一稀释度各取0.1ml 稀释液，注于平板上，用涂布棒将样品涂布均匀。
盖好培养皿，并倒置于28℃恒温箱中培养，每个梯度做三个重复。
观察各培养基，直到形成清晰易辨的菌落。
（5）：配置pH=3的PDA固体培养基。
（6）：选定（4）中最接近酵母菌菌落特征的部分，用针尖挑取少量菌块，稀释100倍，点接于（5）中培养基表面，28℃下培养48 h。
选取杂质较少的菌落，重复3次
培养。
（7）制取高层琼脂培养基，在普通试管中灌注大约10cm高的琼脂。
从（6）中最后一次所得的菌落中选取杂质最少的菌落。
稀释100倍后，进行穿刺接种。
接种完
后，在培养基表面加一层液体石蜡。
28℃恒温箱中培养48小时，得到菌落后，
重复进行三次。
最终得到的菌落即可认为是纯种酵母菌形成的菌落。
即所得菌种为实验所需的酵
母菌。
五、
将上述菌种接种在适宜的斜面培养基上，培养至产生大量菌落后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于低温（4～6℃）干燥处进行保存。