蛋白质分析技术
常见的蛋白质结构解析方法
常见的蛋白质结构解析方法蛋白质是生物体中最基本的功能分子之一，其结构与功能密切相关。
了解蛋白质的结构可以揭示其功能，并为药物设计、生物工程等领域提供重要参考。
下面将介绍一些常见的蛋白质结构解析方法。
一、X射线晶体学X射线晶体学是最常用的蛋白质结构解析方法之一。
该方法利用蛋白质晶体对X射线的衍射现象进行分析，从而得到蛋白质的高分辨率结构。
X射线晶体学需要先获得蛋白质的结晶样品，然后通过冷冻技术将样品冷冻到液氮温度下。
接下来，将样品置于X射线束中，通过测量X射线的衍射图样，利用数学方法进行模型构建和优化，最终确定蛋白质的三维结构。
二、核磁共振核磁共振（NMR）是一种利用原子核的磁性性质来解析蛋白质结构的方法。
在NMR实验中，蛋白质溶液会被置于强磁场中，并通过给予一系列的脉冲序列来激发原子核的共振信号。
通过测量这些信号的频率和强度，可以获得蛋白质的二维或三维结构信息。
与X射线晶体学相比，NMR可以在溶液中进行，因此可以研究蛋白质的构象动力学和相互作用等方面。
三、电子显微镜电子显微镜（EM）是一种利用电子束与蛋白质样品相互作用来解析其结构的方法。
与传统的光学显微镜不同，电子显微镜使用的是电子束，具有更高的分辨率。
在EM实验中，蛋白质样品被冷冻或固定在网格上，然后用电子束照射样品。
通过收集和处理电子显微镜图像，可以得到蛋白质的三维结构。
电子显微镜在解析大分子复合物和蛋白质超分子结构方面具有独特的优势。
四、质谱法质谱法是一种通过测量蛋白质的质量和电荷来解析其结构的方法。
质谱法可以分析蛋白质的分子量、氨基酸序列、修饰和折叠状态等信息。
常见的质谱法包括质谱仪、飞行时间质谱和串联质谱等。
质谱法可以快速、高效地分析蛋白质样品，特别适用于高通量蛋白质组学研究。
五、计算方法除了实验方法外，计算方法也在蛋白质结构解析中发挥着重要作用。
通过计算方法，可以预测蛋白质的二级结构、三级结构和折叠动力学等信息。
常用的计算方法包括分子力学模拟、蒙特卡洛模拟和分子动力学模拟等。
蛋白质鉴定方法有哪些
蛋白质鉴定方法有哪些蛋白质是生命体内的重要分子，它们在细胞生物化学过程中起着关键作用。
蛋白质的鉴定方法有很多种，包括传统的生化学方法和现代的生物物理学方法。
下面将介绍一些常用的蛋白质鉴定方法。
一、生物化学方法：1. 纸上电泳法：利用纸质或亲水性膜质将蛋白质电泳分离，可根据蛋白质的迁移率来确定其分子量。
2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）：利用电泳原理将蛋白质分子按照质量进行分离，并通过染色或免疫印迹来检测目标蛋白质。
3. 凝胶渗透色谱法（Gel filtration chromatography）：通过利用大小分子间的排阻效应分离蛋白质，从而确定其分子量。
4. 亲和层析法：利用特定亲和剂将目标蛋白质络合，然后通过洗脱从而实现目标蛋白质的纯化和鉴定。
5. 免疫沉淀法：利用特异性抗体与目标蛋白质发生免疫反应，然后通过沉淀的方式来富集目标蛋白质。
二、质谱分析方法：1. 质谱法：利用质谱仪设备将蛋白质分子离子化并加速，然后根据离子的质量比值得出蛋白质的分子量。
2. 飞行时间质谱法（TOF）：利用质谱法中的一种，通过测量离子从起飞位置飞行到达检测器所需要的时间来确定蛋白质的质量。
3. 离子阱质谱法（IT-TOF）：通过将离子在阱中进行储存和操作，然后采用离子的质荷比和离子的振荡频率来确定蛋白质的分子量。
三、X射线晶体学方法：1. X射线衍射法：将蛋白质结晶后，通过X射线的散射原理来确定蛋白质的晶体结构，从而进一步了解蛋白质的功能。
2. X射线小角散射法（SAXS）：通过测量散射X射线的角度和强度，来推断蛋白质的分子整体形态。
四、核磁共振（NMR）方法：1. 液态核磁共振（NMR）：通过检测蛋白质样品中核磁共振信号的变化来推断蛋白质的结构和动力学性质。
2. 固态核磁共振（ssNMR）：通过固态核磁共振技术来解析蛋白质在非溶液状态下的结构和动态过程。
以上是一些常用的蛋白质鉴定方法，每种方法都有其优缺点，在实际应用中需要根据具体问题和需求来选择合适的方法。
蛋白质含量的测定方法及原理
蛋白质含量的测定方法及原理蛋白质是生物体内一种重要的有机化合物，具有构建细胞结构、调节生理功能等重要作用。
因此，准确测定蛋白质的含量对于生物科学研究和临床诊断具有重要意义。
本文将介绍几种常用的蛋白质含量测定方法及其原理。
一、比色法比色法是一种常用的蛋白质含量测定方法，其原理是利用蛋白质与某些特定试剂形成显色物，根据显色物的光吸收特性来测定蛋白质的含量。
1. 低里氏法低里氏法是一种经典的蛋白质含量测定方法，其原理是利用试剂双硫苏三唑酮（DTNB）与蛋白质中的半胱氨酸残基反应产生黄色的二硫苏三唑，然后通过分光光度计测定其在412nm处的吸光度，根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
2. 伯杰法伯杰法是一种基于酪蛋白与浊度试剂金霉素的显色反应来测定蛋白质含量的方法。
酪蛋白与金霉素结合形成沉淀，通过比色法测定沉淀的光吸收度，再根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
3. 白蛋白-酷伊斯基（BCA）法BCA法是一种常用的高灵敏度蛋白质测定方法，其原理是在碱性条件下，蛋白质与BCA试剂中的铜离子络合生成紫色的离子螯合物，通过比色法测定在562nm处的光吸收度，再根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
二、光谱法光谱法是一种基于蛋白质在特定波长下的吸收特性来测定蛋白质含量的方法。
1. 紫外吸收法紫外吸收法根据蛋白质中的芳香族氨基酸（如酪氨酸、酪氨酸和色氨酸）在紫外光区域（200-400nm）的吸收特性来测定蛋白质含量。
通过分光光度计测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度，再根据标准曲线计算出蛋白质的含量。
2. 近红外光谱法近红外光谱法是一种无损、非破坏性的蛋白质含量测定方法，其原理是利用蛋白质溶液在近红外光区域（700-2500nm）的吸收特性与其含量之间的关系。
通过近红外光谱仪获取蛋白质溶液的光谱图像，然后利用化学计量学方法建立标准模型，通过光谱图像预测蛋白质的含量。
三、生化分析法生化分析法是一种利用生化技术和仪器设备来测定蛋白质含量的方法。
蛋白质生物化学分析技术
蛋白质生物化学分析技术蛋白质是生物体内极其重要的分子，具有多种功能。
为了深入了解蛋白质的结构、功能以及参与的生物过程，生物化学分析技术成为不可或缺的手段。
本文将介绍几种常用的蛋白质生物化学分析技术，帮助读者更好地理解蛋白质研究的重要性。
一、蛋白质的分子量测定技术蛋白质的分子量是指蛋白质分子中所含的氨基酸残基数目。
分子量测定技术有多种方法，其中最常用的是SDS-PAGE凝胶电泳。
SDS-PAGE通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，在一定条件下将蛋白质按照大小分离开来，从而确定分子量。
这种技术简单易行，广泛应用于蛋白质生物化学研究中。
二、蛋白质的二级结构分析技术蛋白质的二级结构是指蛋白质分子中氨基酸残基之间的空间排布关系，包括α螺旋、β折叠等。
常用的二级结构分析技术有圆二色谱和傅里叶变换红外光谱技术。
圆二色谱能够直接测定蛋白质的二级结构特征，而傅里叶变换红外光谱则可以提供蛋白质分子的整体结构信息。
三、蛋白质的三维结构分析技术蛋白质的三维结构是指蛋白质分子中各个氨基酸残基之间的空间排布关系，包括α螺旋、β折叠等。
X射线晶体学和核磁共振技术是常用的蛋白质三维结构分析技术。
X射线晶体学通过分析蛋白质晶体的衍射图像来确定其空间结构，而核磁共振技术则可以解析蛋白质的原子级结构。
四、蛋白质的功能分析技术蛋白质的功能是其最重要的特性之一，常用的蛋白质功能分析技术包括酶活性测定、蛋白质-蛋白质相互作用分析以及质谱技术。
酶活性测定可以确定蛋白质在生物体内的代谢功能，蛋白质-蛋白质相互作用分析则可以揭示蛋白质参与的生物过程，而质谱技术可以帮助鉴定蛋白质分子中的氨基酸残基。
结语蛋白质生物化学分析技术在现代生物医药领域中扮演着重要的角色，对于探索蛋白质的结构、功能和相互作用机制具有不可替代的意义。
通过学习和掌握这些技术，我们可以更好地理解蛋白质这一类分子在生物体内的作用，为生命科学研究的发展提供有力支持。
希望本文所介绍的蛋白质生物化学分析技术能够对读者有所帮助，激发大家对生物化学领域的兴趣，推动科学技术的进步。
蛋白质质谱分析技术
蛋白质质谱分析技术蛋白质质谱分析技术是一种广泛应用于生物医学研究和药物开发领域的重要分析方法。
它通过测定蛋白质的分子质量、结构以及相互作用等信息，为科学家提供了深入了解蛋白质功能和疾病机制的有力工具。
本文将介绍蛋白质质谱分析技术的原理、方法及其在不同领域的应用。
一、蛋白质质谱分析技术的原理蛋白质质谱分析技术基于质谱仪的原理，该仪器能够将蛋白质分子转化为离子，并通过质谱分析技术对离子进行检测和分析。
质谱分析技术主要包括四个步骤：样品制备、质谱仪分析、数据获取和解析。
在样品制备过程中，蛋白质通常需要经过蛋白质提取、纯化和消化等处理步骤，以获取高质量的样品。
随后，样品通过不同的离子化方法（如电喷雾离子化或激光解析离子化）将蛋白质转化为离子化的状态，并进入质谱仪进行分析。
质谱仪中的离子分离装置（如时间飞行法或四极杆）能够按照质量-电荷比将离子分离并进行测量。
最后，通过数据的获取和解析，科学家可以获得蛋白质的分子质量、序列信息、结构以及相互作用等重要参数。
二、蛋白质质谱分析技术的方法蛋白质质谱分析技术包括多种不同的方法和技术，下面将介绍其中的一些常用方法。
1. 质谱仪类型质谱仪分为多种类型，包括飞行时间质谱仪（TOF）、电子捕获质谱仪（ESI-MS）、多杆质谱仪等。
不同类型的质谱仪适用于不同的蛋白质分析需求，具有不同的优势和适用范围。
2. 核心技术蛋白质质谱分析中的核心技术包括蛋白质消化、亲和纯化、离子化方法以及质谱数据分析等。
消化方法如胰蛋白酶消化、化学消化等可将复杂蛋白质分子分解为易于分析的肽段。
亲和纯化方法则能够富集特定的蛋白质或肽段。
离子化方法常用的有电喷雾离子化和激光解析离子化，能够将蛋白质或肽段转化为离子态以进行分析。
质谱数据的解析和处理涉及到数据库比对、蛋白质定量以及结构分析等多个方面。
三、蛋白质质谱分析技术的应用蛋白质质谱分析技术在生物医学研究和药物开发领域有着广泛的应用。
1. 蛋白质鉴定蛋白质质谱分析技术可以用于鉴定复杂混合物中的蛋白质成分，如细胞蛋白质组、组织蛋白质组等，为研究蛋白质功能和疾病相关基因的表达提供重要的手段。
蛋白质质谱分析技术
蛋白质质谱分析技术蛋白质是生物学研究中最基本的分子之一。
它们对于细胞的结构和功能至关重要。
但是，我们对于这种生物分子的理解还远远不够深入。
这是因为蛋白质分子是非常复杂的，其结构和化学性质都是多变的。
为了更好地理解这种分子，开发出了蛋白质质谱分析技术。
什么是蛋白质质谱蛋白质质谱是一种用于鉴定和分析蛋白质的分子量、序列、组成和修饰的技术。
其基本原理是将蛋白质分子经过离子化后，通过高精度的仪器进行检测。
这样可以得到蛋白质分子的质谱图像和整体的分子结构信息。
蛋白质质谱分析技术的种类在蛋白质质谱分析技术中，有许多种不同的方法。
其中最常见的包括质谱半定量、质谱定量、质谱物联网等。
质谱半定量技术质谱半定量技术是一种将质谱分析作为定量化工具的方法。
通过标准曲线，可以将蛋白质样品浓度进行测量。
质谱半定量技术提供了一种直接测量低限的方法，也是代表了一种标准化的技术。
质谱定量技术质谱定量技术是可以定量地检测蛋白质质量荷比，通过测量非常灵敏的质谱仪将分子分离后，这种技术可以测量蛋白质分子的数量，以及精确的蛋白质质量荷比。
质谱定量技术被广泛应用于生物医学研究领域。
质谱物联网技术质谱物联网技术提供了一种更加高效、准确、低成本的质谱分析方法。
通过将分析所需的离子分离优化，并将样品在冷凝器中等离子体冷却之前测量，提供了更加直接、快速和准确的质谱检测。
蛋白质质谱分析的应用蛋白质质谱分析技术的应用十分广泛，从基础研究到临床应用都有各种应用。
其中最常见的有三个方面：生产质量控制在生产过程中，质谱分析技术可帮助监测物质鉴定、纯度、污染等类似质量控制的这些过程。
疾病诊断质谱分析技术可用于疾病诊断和治疗，如糖尿病、肿瘤等。
质谱分析技术能够分析代谢产物的组成，帮助疾病的诊断和疗效的评估。
药物研究质谱分析技术在药物研究中必不可少。
它可帮助药物化学家理解其疗效、药代动力学等方面的信息，包括药的成分、代谢过程、体内药物浓度和消除机制等等。
结论蛋白质质谱分析技术是生物学界中非常重要的一种技术，它可为生物学家提供各种蛋白质分别的质谱信息，详细的让我们了解了蛋白质的结构和化学性质。
测定蛋白质常用方法
测定蛋白质常用方法印迹法是一种常见的定性分析方法，主要是通过利用电致沉淀效应，将蛋白质物质在电场中集中，形成一个凝胶层，以提取出蛋白质。
在实验中，先制备一个有活性、有保留度和有稳定性的蛋白质样品，然后将其放入体外，在受到电场作用下，蛋白质物质会被电致沉淀，形成一个凝胶层，从而获得蛋白质。
该方法的特点是准确度高，样品消耗量少，可以高效地完成蛋白质的测定，但对于那些含有非蛋白质物质的样品，其测定效果不理想。
（二）酶探针法酶探针法是一种定性分析，利用一种特殊酶和一种特殊探针，运用其特异性以及特殊的结构，来测定蛋白质的特殊部位。
实验中，首先选择一种酶，如DNase I、DNase II、RNase A，然后将其与相应的探针（如荧光标记的核酸或多肽）相结合，这样结合的物质会与蛋白质产生特异性的结合作用，从而可以测定蛋白质的特定位点。
优点是准确度高，可以测定蛋白质的特定位点，但由于其方法复杂，在一定程度上增加了实验技术难度。
二、定量分析（一）荧光法荧光法是一种常用的定量分析方法，主要利用某种荧光探针和荧光激发光，以及荧光探针的特异性与蛋白质的特异性，激发一定的荧光，从而测定蛋白质的含量。
实验过程中，首先将荧光探针结合到蛋白质上，然后把探针/蛋白质混合物放入荧光仪中，将一定强度的荧光激发光照射到探针/蛋白质混合物上，从而发生特定的荧光反应，通过记录荧光发射强度，就可以测定蛋白质的含量。
优点是准确度较高，可以在不同范围内快速地进行测定，而且样品消耗量少，但该方法的应用范围较窄，只能用于测定那些可以与荧光探针发生特异性结合的蛋白质。
（二）比色法比色法是一种定量分析方法，它利用蛋白质与一定比例的钠稀释液发生相互作用，产生稳定的色谱，从而测定蛋白质的含量。
实验过程中，先将蛋白质样品与钠稀释液做混合，然后在420nm的色谱仪上测定色谱，测定出其颜色深浅，然后利用已知的标准曲线，计算出蛋白质的含量。
比色法的优点是灵敏度高，可以在较低消耗的样品情况下完成蛋白质的测定，而且在实验中只需要使用普通的外设，操作简便，但是存在一定的滞后度，不能测定出瞬时变化的蛋白质含量。
细胞分子生物学中的蛋白质分析技术
细胞分子生物学中的蛋白质分析技术随着人类对生命科学的研究不断深入，细胞分子生物学作为生物领域中的一个重要研究方向也日渐受到关注。
在细胞分子生物学领域中，蛋白质是一种极其重要的生物分子，它们在细胞内担任着许多重要的功能角色。
因此，研究蛋白质的结构、功能和代谢途径，对深入理解细胞生命活动机理具有至关重要的作用。
蛋白质分析技术的不断发展，为该领域的研究提供了重要的手段和方法。
一、质谱法分析蛋白质质谱法分析蛋白质是当前蛋白质分析的一种主要技术手段。
通过质谱法，可以对蛋白质的分子量、结构和功能等进行深入研究。
质谱法分析蛋白质需要采用一系列操作和步骤，包括样品处理、离子化、加速器加速和检测等，较为复杂。
其中，样品处理和衍生化是质谱分析中一项重要的工作，可以提高质谱分析的准确性和可靠性。
在对复合蛋白质复杂样品进行分析时，还需要采用多维质谱技术，以提高样品的分离程度和质谱鉴定的准确性。
二、蛋白质组学蛋白质组学是指对蛋白质的组成、结构、功能和表达等进行系统研究的一种综合学科。
近年来，蛋白质组学技术的不断发展，为研究蛋白质组学提供了更为广阔的空间和更加精确的方法手段。
目前，蛋白质组学主要采用质谱技术、二维凝胶电泳技术和高通量蛋白质芯片技术等，来分析蛋白质群或者是细胞、组织、器官和生物流体等样品中包含的蛋白质集合。
这种技术可以更快地发现特定蛋白质，以及确定特定蛋白质在生物科学和临床医学领域的应用价值。
三、原位蛋白质分析原位蛋白质分析技术是指不需要分离和纯化样品就能够直接在细胞或者是组织水平上研究蛋白质结构、功能和亚细胞定位等的技术。
通过使用荧光标记蛋白质或者是酶标记抗体等，可以实现在细胞或者是组织级别上对蛋白质原位分析的目的。
目前，原位蛋白质分析技术已经成为细胞生物学和蛋白质组学领域中的重要研究手段。
尤其是在癌症的研究中，该技术具有很高的应用价值。
四、三维结构分析三维结构分析是指通过X射线晶体学、核磁共振技术等方法，对蛋白质的三维结构进行深入研究的技术。
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反胶团萃取法
• 利用反胶团将蛋白质包裹其中而达到提取蛋白质的目的。反胶团是当表 面活性剂在非极性有机溶剂溶解时自发聚集而形成的一种纳米尺寸的聚 集体。
• 优点是萃取过程中蛋白质因位于反胶团的内部而受到反胶团的保护。
蛋白质的分离纯化——分子量
蛋白质是一种大分子物质,并且不同蛋白质的分子量大 小不同,因此可以利用一些较简单的方法使蛋白质和小分子 物质分开,并且不同分子量的蛋白质也得到分离。
常 • 透析 用 • 超滤 方 • 离心 法 • 凝胶过滤
蛋白质的分离纯化——分子量
主要内容
理化性质 蛋白质分离纯化 蛋白质浓度测定 蛋白质印迹实验 酶联免疫吸附实验 免疫沉淀 其他
理化性质
氨基酸——多肽链——蛋白质 一级结构、二级结构、三级结构、四级结构 分子量 等电点 活性
蛋白质分离纯化
蛋白质的分离纯化
溶解度 分子量 所带电荷 特殊亲和性
度梯度离心。
常用的密度梯度有蔗糖梯度、聚蔗糖梯度和其它合成材料 的密度梯度。
可以根据所需密度和渗透压的范围选择合适的密度梯度。。
蛋白质的分离纯化——分子量
凝 胶 过 滤
也称凝胶渗透层析,是根据蛋白质分子大小不同分 离蛋白质最有效的方法之一。
原理是当不同蛋白质流经凝胶层析柱时,比凝胶珠 孔径大的分子不能进入珠内网状结构,而被排阻在 凝胶珠之外,随着溶剂在凝胶珠之间的空隙向下运 动并最先流出柱外;反之,比凝胶珠孔径小的分子 后流出柱外。
这两种方法都可以将蛋白质大分子与无机盐为主的小分子分开，经 常和盐析、盐溶方法联用。在进行盐析或盐溶后，这两种方法除去引 入的无机盐。
蛋白质的分离纯化——分子量
离 心
经常和其它方法联用的一种分离蛋白质的方法。 蛋白质和杂质的溶解度不同时，可利用离心进行分
离。 蛋白质在具有密度梯度的介质中离心的方法称为密
蛋白质的分离纯化——溶解度
影响因素
pH值 离子强度 介电常数 温度
同一条件下,不同的蛋白质因分子结构的不同而有不同 的溶解度。根据蛋白质分子结构的特点,适当地改变外部条 件,就可以选择性地控制蛋白质混合物中某一成分的溶解度, 达到分离纯化蛋白质的目的。
蛋白质的分离纯化——溶解度
等电点沉淀
透析
将待分离的混合物放入半透膜制成的透析袋中,再浸入透析液进行 分离。
超滤
利用离心力或压力强行使水和其它小分子通过半透膜,而蛋白质被 截留在半透膜上的过程。
由于超滤过程中,滤膜表面容易被吸附的蛋白质堵塞,以致超滤速度 减慢,截流物质的分子量也越来越小。所以在使用超滤方法时要选 择合适的滤膜,也可以选择切向流过滤得到更理想的效果。
• 对比一价离子中性盐如NaCl、NH4Cl，同样浓度的二价 离子中性盐,如MgCl2、(NH4)2SO4对蛋白质溶解度影响 更明显。
• 盐析是提取血液中免疫球蛋白的常用方法,如多聚磷酸 钠絮凝法、硫酸铵盐析法,其中硫酸铵盐析法广泛应用 于生产。
• 利用盐溶和盐析对蛋白质进行提纯后,通常要使用透析 或凝胶过滤的方法除去中性盐。
带有正电荷的阴离子交换树脂 带有负电荷的阳离子交换树脂。
蛋白质的分离纯化——所带电荷
电泳
在外电场的作用下, 不处于等电点状态的蛋白质分子将向着与其电 性相反的电极移动。
聚丙烯酰胺凝胶电泳 等电聚焦电泳 双向电泳
离子交换层析
是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平 衡离子进行可逆交换时结合力大小的差别而进行分离的一种层析方 法
• 冷乙醇分离法最初用于免疫球蛋白的提取，是目前 WHO规程和中国生物制品规程推荐的方法。分辨率高、 提纯效果好。
蛋白质的分离纯化——溶解度
双水相萃取技术
• ATPE（Aqueous two phase extraction）, 是指亲水性聚合物水溶液在一定 条件下形成双水相,被分离物在两相中分配不同便可实现分离。此方法可 以在室温环境下进行,双水相中的聚合物还可以提高蛋白质的稳定性,收率 较高。
蛋白质的分离纯化——溶解度
有机溶剂提取法
• 与水互溶的有机溶剂能使蛋白质在水中的溶解度显著 降低。
• 室温下,有机溶剂使蛋白质沉淀的同时伴随着变性。 将有机溶剂冷却, 加入时不断搅拌防止局部浓度过高。
• 对于和脂质结合比较牢固或分子中极性侧链较多、不 溶于水的蛋白质,可用乙醇、丙酮和丁醇等有机溶剂 提取,它们有一定的亲水性和较强的亲脂性,是理想的 提取液。
目前常用的凝胶有交联葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺 凝胶和琼脂糖凝胶等。
蛋白质的分离纯化——所带电荷
电泳
在外电场的作用下, 不处于等电点状态的蛋白质分子将向着与其电 性相反的电极移动。
聚丙烯酰胺凝胶电泳 等电聚焦电泳 双向电泳
离子交换层析
是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平 衡离子进行可逆交换时结合力大小的差别而进行分离的一种层析方 法
带有正电荷的阴离子交换树脂 带有负电荷的阳离子交换树脂。
聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
丙烯酰胺与甲叉丙烯酰胺聚合形成网状结构。 分子筛效应 调节浓度可控制孔径大小 与所带电荷、分子量大小有关
聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）
在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态。 依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的
常
pH值调节
用
方
盐溶和盐析
法 有机溶剂提取法
萃取法
பைடு நூலகம்
蛋白质的分离纯化——溶解度
等电点沉淀 • 不同蛋白质的等电点不同,而蛋白质在
其等电点时溶解度最低。
pH值调节 • 有些蛋白质在特定pH值时溶解较高，
因而可以通过调节溶液的pH值来分离 纯化蛋白质。
蛋白质的分离纯化——溶解度
盐溶和盐析
• 中性盐可显著影响球状蛋白质溶解度。增加蛋白质溶 解度的现象称盐溶,反之为盐析。
电荷量而逐渐呈梯度分开。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）