生物技术制药第4章
第4章生物技术制药
细胞的生长不依赖支持物表面，可在培 养液中呈悬浮状态生长。
3、兼性贴壁细胞
兼具上述两种生长方式的细胞，称为兼性 贴壁细胞。如CHO细胞、小鼠L929细胞。 贴附在支持物表面上生长时呈上皮或成纤 维细胞的形态，而当悬浮于培养基中生长 时则呈圆形。
二、动物细胞的生理特点
1、细胞的分裂周期
2、基因载体的导入和高效表达工程细胞株的筛选 （1）DNA导入动物细胞方法
融合法
细胞融合法化学法物源自法病毒法重组逆转录病毒
DNA-磷酸钙沉淀法 电穿孔法
脂质体介导法 DEAE-葡聚糖法
原生质融合法 染色体介导法
显微注射法 重组DNA病毒
基因枪法 多瘤病毒样颗粒
2、基因载体的导入和高效表达工程细胞株的筛选
四、基因工程细胞的构建和筛选
1. 真核细胞基因表达载体的构建 2. 基因载体的导入和高效表达工 程细胞株的筛选
1、真核细胞基因表达载体的构建
（1）载体种类： 病毒载体： 牛痘病毒：广泛用于构建成多价疫苗， 腺病毒：基因治疗载体 逆转录病毒：基因治疗载体 杆状病毒：成功地用于1000多种外源基 因的高效表达。
② 其次是对选出的细胞进行克隆和亚克隆使其纯化 ③ 最后利用其扩增系统，不断增加其基因拷贝数， 从而获得高效表达而稳定的工程细胞株。
五、细胞库的建立
1. 除原代细胞外，其它的细胞株、细胞系都 需要建细胞库加以保存。 2. 按照我国和美国FDA的规定，用于生产的 工程细胞必须建立两个细胞库： ① 原始细胞库（master cell bank， MCB） ② 生产用细胞库（manufacture's working cell bank，MWCB）或称工作细胞库（working cell bank， WCB）。
【药学课件】生物技术制药(4)
生物技术制药——4
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第一节 概述
• 1890年Behring和北里柴三郎发现白喉抗毒 素，建立了血清疗法，开创了抗体制药。
• 1937年Tiselius用电泳法将血清蛋白分离为 白蛋白，α、β、γ球蛋白，并证明抗体活性 主要存在于γ球蛋白组分。
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第一节 概述
• 抗体（antibody,Ab）是指能与相应抗原 特异性结合具有免疫功能的球蛋白。
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2、体外免疫：不能用体内方法或抗原免 疫原性极弱且引起免疫抑制时。
• 抗原量少（＜10μg）、免疫期短（4-5d）、 干扰因素少、杂交瘤细胞株不稳定。
• 4-8W BALB/c小鼠脾脏制成细胞悬液，加 Ag达0.5-5μg/ml，培养4-5d（370C、 5%CO2），分离脾细胞，细胞融合。
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淋巴细胞 （致敏动物脾细胞）
3、亲和力测定 4、特异性、纯度、识别抗原的相对分子量等
• 单克隆抗体具有高度特异性、均一性、来源 稳定、可大量生产等特点，为抗体制备和应 用提供了全新的手段，还促进了基础和临床 医学的发展。
.பைடு நூலகம்
单克隆抗体的应用：
• 单克隆抗体作为抗体制剂，在临床上主要 用于疾病的诊断和治疗。
• 单克隆抗体检测与某些疾病有关的抗原， 辅助临床诊断。用放射性核素标记单克隆 抗体进行肿瘤显像，做免疫定位诊断。
p3-X63-Ag8.653 P3.653 BALB/c 8-Ag
——
SP2/0-Ag14 SP2/0 BALB/c 8-Ag
——
Fast-Zero FO BLAB/c 8-Ag Y3-Ag1,2,3 Y3 Lou 8-Ag
—— κ链
YB2-3.0-Ag20 YB2 (LouAO)F1 8-Ag
生物技术制药习题答案
第一章绪论选择题1.生物技术的核心和关键是（A ）A 细胞工程B 蛋白质工程C 酶工程D 基因工程2. 第三代生物技术（ A ）的出现，大大扩大了现在生物技术的研究范围A 基因工程技术B 蛋白质工程技术C 海洋生物技术D细胞工程技术3.下列哪个产品不是用生物技术生产的（D ）A 青霉素B 淀粉酶C 乙醇D 氯化钠4. 下列哪组描述（A ）符合是生物技术制药的特征A高技术、高投入、高风险、高收益、长周期B高技术、高投入、低风险、高收益、长周期C高技术、低投入、高风险、高收益、长周期D高技术、高投入、高风险、低收益、短周期5. 我国科学家承担了人类基因组计划（C ）的测序工作A10% B5% C 1% D 7%名词解释1.生物技术制药采用现代生物技术可以人为的创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医学药品，称为生物技术制药。
2.生物技术药物一般说来，采用DNA重组技术或其它生物新技术研制的蛋白质或核酸来药物称为生物技术药物。
3.生物药物生物技术药物是重组产品概念在医药领域的扩大应用，并与天然药物、微生物药物、海洋药物和生物制品一起归类为生物生物药物。
简答题1.生物技术药物的特性是什么？生物技术药物的特征是：（1）分子结构复杂（2）具有种属差异特异性（3）治疗针对性强、疗效高（4）稳定性差（5）免疫原性（6）基因稳定性（7）体内半衰期短（8）受体效应（9）多效应和网络效应（10）检验特殊性2.简述生物技术发展的不同阶段的技术特征和代表产品？（1）传统生物技术的技术特征是酿造技术，所得产品的结构较为简单，属于微生物的初级代谢产物。
代表产品如酒、醋、乙醇，乳酸，柠檬酸等。
（2）近代生物技术阶段的技术特征是微生物发酵技术，所得产品的类型多，不但有菌体的初级代谢产物、次级代谢产物，还有生物转化和酶反应等的产品，生产技术要求高、规模巨大，技术发展速度快。
代表产品有青霉素，链霉素，红霉素等抗生素，氨基酸，工业酶制剂等。
《生物技术制药》理论课教案
《生物技术制药》理论课教案第一章：生物技术制药概述1.1 教学目标1. 了解生物技术制药的定义和发展历程。
2. 掌握生物技术制药的基本原理和关键技术。
3. 了解生物技术制药在医药领域的应用和前景。
1.2 教学内容1. 生物技术制药的定义和发展历程。
2. 生物技术制药的基本原理和关键技术，包括重组DNA技术、细胞培养技术、蛋白质工程技术等。
3. 生物技术制药在医药领域的应用，如重组蛋白药物、抗体药物、基因治疗药物等。
4. 生物技术制药的前景和挑战。
1.3 教学方法1. 讲授：讲解生物技术制药的定义、发展历程、基本原理、关键技术、应用领域和前景等。
2. 互动：提问和回答，讨论生物技术制药的案例和挑战。
1.4 教学资源1. 教材：生物技术制药相关书籍和教材。
2. 课件：生物技术制药的图片、图表和动画。
3. 案例：生物技术制药的案例和实例。
1.5 教学评估1. 课堂参与度：提问和回答问题的情况。
2. 作业：布置相关的练习题和作业。
第二章：重组蛋白药物的生产与制备2.1 教学目标1. 了解重组蛋白药物的定义和特点。
2. 掌握重组蛋白药物的生产和制备方法。
3. 了解重组蛋白药物的应用和前景。
2.2 教学内容1. 重组蛋白药物的定义和特点。
2. 重组蛋白药物的生产方法，包括基因克隆、表达载体的构建、细胞培养等。
3. 重组蛋白药物的制备方法，如亲和色谱、凝胶过滤色谱等。
4. 重组蛋白药物的应用和前景。
2.3 教学方法1. 讲授：讲解重组蛋白药物的定义、特点、生产和制备方法等。
2. 实验演示：展示重组蛋白药物的生产和制备实验。
2.4 教学资源1. 教材：生物技术制药相关书籍和教材。
2. 课件：重组蛋白药物的图片、图表和动画。
3. 实验材料：重组蛋白药物的生产和制备实验所需材料。
2.5 教学评估1. 课堂参与度：提问和回答问题的情况。
2. 实验报告：实验操作的正确性和实验结果的准确性。
第三章：抗体药物的研究与开发3.1 教学目标1. 了解抗体药物的定义和分类。
《生物技术制药》理论课教案
《生物技术制药》理论课教案第一章：生物技术制药概述1.1 教学目标1.1.1 了解生物技术制药的概念与发展历程1.1.2 掌握生物技术制药的主要领域和应用1.1.3 理解生物技术制药的优势与挑战1.2 教学内容1.2.1 生物技术制药的定义与发展历程1.2.2 生物技术制药的主要领域和应用1.2.3 生物技术制药的优势与挑战1.3 教学方法1.3.1 讲授法1.3.2 案例分析法1.4 教学资源1.4.1 教材：《生物技术制药》1.4.2 课件1.4.3 案例资料1.5 教学过程1.5.1 引入新课：介绍生物技术制药的定义与发展历程1.5.2 讲解生物技术制药的主要领域和应用1.5.3 分析生物技术制药的优势与挑战1.5.4 案例分析：具体分析几个生物技术制药的案例第二章：重组DNA技术2.1 教学目标2.1.1 理解重组DNA技术的原理与步骤2.1.2 掌握重组DNA技术在制药领域的应用2.1.3 了解重组DNA技术的优势与局限性2.2 教学内容2.2.1 重组DNA技术的原理与步骤2.2.2 重组DNA技术在制药领域的应用2.2.3 重组DNA技术的优势与局限性2.3 教学方法2.3.1 讲授法2.3.2 实验演示法2.4 教学资源2.4.1 教材：《生物技术制药》2.4.2 课件2.4.3 实验器材与材料2.5 教学过程2.5.1 引入新课：介绍重组DNA技术的原理与步骤2.5.2 讲解重组DNA技术在制药领域的应用2.5.3 分析重组DNA技术的优势与局限性2.5.4 实验演示：进行一次简单的重组DNA实验第三章：细胞培养技术3.1 教学目标3.1.1 理解细胞培养技术的原理与步骤3.1.2 掌握细胞培养技术在制药领域的应用3.1.3 了解细胞培养技术的优势与局限性3.2 教学内容3.2.1 细胞培养技术的原理与步骤3.2.2 细胞培养技术在制药领域的应用3.2.3 细胞培养技术的优势与局限性3.3 教学方法3.3.1 讲授法3.3.2 实验演示法3.4 教学资源3.4.1 教材：《生物技术制药》3.4.2 课件3.4.3 实验器材与材料3.5 教学过程3.5.1 引入新课：介绍细胞培养技术的原理与步骤3.5.2 讲解细胞培养技术在制药领域的应用3.5.3 分析细胞培养技术的优势与局限性3.5.4 实验演示：进行一次简单的细胞培养实验第四章：蛋白质工程4.1 教学目标4.1.1 理解蛋白质工程的原理与方法4.1.2 掌握蛋白质工程在制药领域的应用4.1.3 了解蛋白质工程的优势与局限性4.2 教学内容4.2.1 蛋白质工程的原理与方法4.2.2 蛋白质工程在制药领域的应用4.2.3 蛋白质工程的优势与局限性4.3 教学方法4.3.1 讲授法4.3.2 案例分析法4.4 教学资源4.4.1 教材：《生物技术制药》4.4.2 课件4.4.3 案例资料4.5 教学过程4.5.1 引入新课：介绍蛋白质工程的原理与方法4.5.2 讲解蛋白质工程在制药领域的应用4.5.3 分析蛋白质工程的优势与局限性4.5.4 案例分析：具体分析几个蛋白质工程的案例4.5.5 课堂讨论：学生第六章：发酵工程6.1 教学目标6.1.1 理解发酵工程的原理与步骤6.1.2 掌握发酵工程在制药领域的应用6.1.3 了解发酵工程的优势与局限性6.2 教学内容6.2.1 发酵工程的原理与步骤6.2.2 发酵工程在制药领域的应用6.2.3 发酵工程的优势与局限性6.3 教学方法6.3.1 讲授法6.3.2 实验演示法6.4 教学资源6.4.1 教材：《生物技术制药》6.4.2 课件6.4.3 实验器材与材料6.5 教学过程6.5.1 引入新课：介绍发酵工程的原理与步骤6.5.2 讲解发酵工程在制药领域的应用6.5.3 分析发酵工程的优势与局限性6.5.4 实验演示：进行一次简单的发酵工程实验第七章：基因治疗7.1 教学目标7.1.1 理解基因治疗的原理与方法7.1.2 掌握基因治疗在制药领域的应用7.1.3 了解基因治疗的优势与局限性7.2 教学内容7.2.1 基因治疗的原理与方法7.2.2 基因治疗在制药领域的应用7.2.3 基因治疗的优势与局限性7.3 教学方法7.3.1 讲授法7.3.2 案例分析法7.4 教学资源7.4.1 教材：《生物技术制药》7.4.2 课件7.4.3 案例资料7.5 教学过程7.5.1 引入新课：介绍基因治疗的原理与方法7.5.2 讲解基因治疗在制药领域的应用7.5.3 分析基因治疗的优势与局限性7.5.4 案例分析：具体分析几个基因治疗的案例第八章：生物仿制药8.1 教学目标8.1.1 理解生物仿制药的概念与要求8.1.2 掌握生物仿制药的制备与评价方法8.1.3 了解生物仿制药的优势与挑战8.2 教学内容8.2.1 生物仿制药的概念与要求8.2.2 生物仿制药的制备与评价方法8.2.3 生物仿制药的优势与挑战8.3 教学方法8.3.1 讲授法8.3.2 实验演示法8.4 教学资源8.4.1 教材：《生物技术制药》8.4.2 课件8.4.3 实验器材与材料8.5 教学过程8.5.1 引入新课：介绍生物仿制药的概念与要求8.5.2 讲解生物仿制药的制备与评价方法8.5.3 分析生物仿制药的优势与挑战8.5.4 实验演示：进行一次生物仿制药的制备与评价实验第九章：生物安全与伦理问题9.1 教学目标9.1.1 理解生物安全的重要性与措施9.1.2 掌握生物技术制药中的伦理问题9.1.3 了解生物安全与伦理问题的关联性9.2 教学内容9.2.1 生物安全的重要性与措施9.2.2 生物技术制药中的伦理问题9.2.3 生物安全与伦理问题的关联性9.3 教学方法9.3.1 讲授法9.3.2 案例分析法9.4 教学资源9.4.1 教材：《生物技术制药》9.4.2 课件9.4.3 案例资料9.5 教学过程9.5.1 引入新课：介绍生物安全的重要性与措施9.5.2 讲解生物技术制药中的伦理问题9.5.3 分析生物安全与伦理问题的关联性9.5.4 案例分析：具体分析几个生物安全与伦理问题的案例第十章：第十章：生物技术制药的未来趋势10.1 教学目标10.1.1 理解生物技术制药当前的挑战与机遇10.1.2 掌握生物技术制药的未来发展趋势10.1.3 了解生物技术制药对医药产业的潜在影响10.2 教学内容10.2.1 生物技术制药当前面临的挑战10.2.2 生物技术制药的机遇与未来发展趋势10.2.3 生物技术制药对医药产业的潜在影响10.3 教学方法10.3.1 讲授法10.3.2 前瞻性分析法10.4 教学资源10.4.1 教材：《生物技术制药》10.4.2 课件10.4.3 相关研究报告与文章10.5 教学过程10.5.1 引入新课：讨论生物技术制药当前的挑战10.5.2 讲解生物技术制药的机遇与未来发展趋势10.5.3 分析生物技术制药对医药产业的潜在影响10.5.4 小组讨论：学生分组讨论未来的生物技术制药创新方向10.5.5 课堂讨论：学生提问、教师解答第十一章：案例研究：成功的生物技术制药公司11.1 教学目标11.1.1 理解成功生物技术制药公司的商业模式11.1.2 掌握成功生物技术制药公司的关键成功因素11.1.3 了解生物技术制药公司的市场竞争策略11.2 教学内容11.2.1 成功生物技术制药公司的商业模式11.2.2 成功生物技术制药公司的关键成功因素11.2.3 生物技术制药公司的市场竞争策略11.3 教学方法11.3.1 讲授法11.3.2 案例分析法11.4 教学资源11.4.1 教材：《生物技术制药》11.4.2 课件11.4.3 案例研究资料11.5 教学过程11.5.1 引入新课：介绍成功生物技术制药公司的案例研究的重要性11.5.2 讲解成功生物技术制药公司的商业模式11.5.3 分析成功生物技术制药公司的关键成功因素11.5.4 案例分析：具体分析几个成功生物技术制药公司的案例11.5.5 课堂讨论：学生提问、教师解答第十二章：生物技术制药的市场分析12.1 教学目标12.1.1 理解生物技术制药市场的现状12.1.2 掌握生物技术制药市场的预测方法12.1.3 了解生物技术制药市场的主要驱动因素和挑战12.2 教学内容12.2.1 生物技术制药市场的现状12.2.2 生物技术制药市场的预测方法12.2.3 生物技术制药市场的主要驱动因素和挑战12.3 教学方法12.3.1 讲授法12.3.2 数据分析法12.4 教学资源12.4.1 教材：《生物技术制药》12.4.2 课件12.4.3 市场研究报告与数据12.5 教学过程12.5.1 引入新课：讨论生物技术制药市场的意义12.5.2 讲解生物技术制药市场的现状12.5.3 分析生物技术制药市场的预测方法12.5.4 数据分析：学生分组分析生物技术制药市场的数据12.5.5 课堂讨论：学生提问、教师解答13.1 教学目标13.1.1 理解生物技术制药商业计划书的基本结构13.1.3 了解生物技术制药商业计划书的作用与重要性13.2 教学内容13.2.1 生物技术制药商业计划书的基本结构13.2.3 生物技术制药商业计划书的作用与重要性13.3 教学方法13.3.1 讲授法13.3.2 实务操作法13.4 教学资源13.4.1 教材：《生物技术制药》13.4.2 课件13.4.3 商业计划重点和难点解析重点：1. 生物技术制药的基本概念、技术原理与应用领域。
生物技术制药课后思考题
第一章：绪论思考题1.什么是生物技术？生物技术所包含的内容及定义。
答：1）生物技术又称生物工程，指人们以现代生命科学为基础，结合先进的工程技术手段和其他基础学科的科学原理，按照预先的设计改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需产品或达到某种目的的技术。
2）包括基因工程、细胞工程、发酵工程、酶工程、蛋白质工程、抗体工程、糖链工程、海洋生物技术及生物转化等。
（具体定义见P1）。
2.生物技术药物的概念及分类。
答：1）指采用DNA重组技术或其他生物技术生产的用于预防、治疗和诊断疾病的药物，主要是重组蛋白或核酸类药物。
2）a.按照用途：预防、诊断、治疗；b.按作用类型：细胞因子类、激素类、酶类、疫苗、单克隆抗体类、反义核酸、RNA干扰类、基因治疗药物；c.按照生化特性：多肽类、蛋白质类、核酸类、聚乙二醇化多肽或蛋白质。
3.生物技术药物在理化性质、药理学与作用、生产制备和质量控制方面的特性。
答：1）理化性质（从药物多是蛋白质或核酸出发）：a.相对分子质量大；b.结构复杂；c.稳定性差；2）药理学作用：a.活性与作用机制明确；b.作用针对性强；c.毒性低；d.体内半衰期短；e.有种属特异性；f.可产生免疫原性；3）生产制备特性：a.药物分子在原料中含量低；b.原料中常存在降解目标产物的杂质；c.制备工艺条件温和；d.分离纯化困难；e.产品易受有害物质污染；4）质量控制特性：a.质量标准内容的特殊性；b.制造项下的特殊规定；c.检定项下的特殊规定。
4.生物技术制药的概念和主要研究内容与任务。
答：1）指利用基因工程、细胞工程等生物技术的原理和方法，来研究、开发和生产预防、治疗和诊断疾病的药物的一门科学。
2）主要研究内容与任务：a.生物制药技术的研究、开发与应用；b.利用生物技术研究、开发和生产药物。
第二章：基因工程制药思考题1.简述基因工程制药的基本原理和基本流程。
答：1）利用重组DNA技术将外源基因导入到宿主菌或宿主细胞进行大规模培养和诱导表达以获取蛋白质药物的过程称为基因工程制药。
生物技术制药第四章抗体制药(ppt)
一、抗原与动物免疫
• （2）稳定的杂交瘤的获得
• 因免疫动物品系和骨髓瘤细胞在种系发生上距离
越远，产生的杂交瘤越不稳定，故一般采用与骨 髓瘤供体同一品系的动物进行免疫。目前常用的 骨髓瘤细胞系多来自BALB/c小鼠和Lou大鼠，因 此免疫动物也多采用相应的品系，最常用的也是 BALB/c小鼠。
• 选择动物时应考虑到动物品系的免疫应答基因
生物技术制药第四章抗体制药 (ppt)
（优选）生物技术制药第四章 抗体制药
第一节 概述
• 1890年：Behring和北里柴三郎等发现了白喉抗毒素，并
建立了血清疗法，开抗体制药之先河。
• 1937年：Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、
甲种（）球蛋白、乙种（ ）球蛋白和丙种（ ）球 蛋白，并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。
一、抗原与动物免疫
• （3）免疫方法：体内免疫法和体外免疫法
• 体外免疫法：用于不能采用体内免疫法的情况下，
如制备人源性单克隆抗体，或者抗原的免疫原性 极弱且能引起免疫抑制时使用。
• 体外免疫法所需要的抗原量少，一般只需几个g，
免疫期短，仅4~5天，干扰因素少，已成功制备 出针对多种抗原的单克隆抗体，但融合后产生的 杂交瘤细胞株不够稳定。其基本方法是用4~8周 龄BALB/c小鼠的脾脏制成单个细胞悬液，再加 入 37适℃当下抗培原养使4~其5天浓，度再达分0.离5~脾5 脏g细/m胞l，，在进5%行C细O胞2、 融合。
• 20世纪60年代初期：抗原决定簇，精制单价血清。 • 1975年：Köhler和Milstein等，单克隆抗体，其具有高度
特异性、均一性，以及来源稳定可大量生产等特点。
• 1984年：人-鼠嵌合抗体 • 1984年至今：单克隆抗体的鼠源性及分子过大的问题得
生物技术Biotechniques.pdf
细胞培养制药工艺
细胞系
3、蛋白质糖基化与分泌表达
蛋白质合成场所：粗糙内质网上的核糖体
糖基化场所：内质网合成各种糖类，粗糙内质 网腔内和高尔基体，加工修饰。
不同细胞系糖基化特征不同，选择适宜细胞 系。
对于分泌型蛋白，分泌泡与细胞膜融合，释放 到胞外，完成了蛋白质的分泌表达。
细胞培养制药工艺
细胞系
4.1.3 生产用细胞系
1. 人源细胞系
Namalwa：
类淋巴母细胞，非整体，悬浮生长。
英国Wellcome公司：Sendai病毒诱导，大规模生产 α干扰素，批准上市。产品逐渐淘汰。
细胞培养制药工艺
细胞系
动物细胞培养的应用
作为反应器用于制药：EPO，tPA 作为宿主细胞用于制药：病毒性疫苗 杂交瘤细胞：单克隆抗体，诊断、治疗 组织再生与器官移植（个体克隆）： 本身作为产品：皮肤移植，干细胞治疗 药学研究应用：分子与细胞药理、毒理、代谢 生命科学研究：器官发生，细胞、分子、遗传学
细胞培养制药工艺
细胞系
3.有限细胞系Finite cell line
概念:生长和寿命有限的细胞系。二倍体细胞系 特点：多次传代培养，失去增殖能力，老化死亡。 寿命：取决于细胞来源的物种和年龄、器官。 人细胞最高培养次数为50－60代。 胚成纤维细胞：人，50代；鸡胚，30代；小鼠，8代。
细胞培养制药工艺
生产特征
3.天然结构与活性的药物
完善的翻译后蛋白质修饰功能 游离核糖体：合成细胞质基质内的蛋白质。 与膜结合的核糖体：合成分泌性和膜整合蛋 白，多数为糖蛋白。 修饰：内质网加工，高尔基体加工、转运、分 泌，糖链。糖基化、磷酸化、酰胺化等。 活性分子：装配折叠形成精确的三维结构。
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二、改形抗体
用鼠源性单克隆抗体的互补决定区序 列替换人免疫球蛋白分子中的互补决 定区序列，则可使人的免疫球蛋白分 子具有鼠源性单克隆抗体的抗原结合 特异性。由于抗体分子中鼠源部分只 占很小比例，可基本消除免疫原性。 最大问题是抗体的亲和力下降，甚至 丧失活性。
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三、小分子抗体
第四章
抗体制药
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本章主要内容
第一节 概述 第二节 单克隆抗体 第三节 鼠源性单克隆抗体的改造 第四节 基因工程抗体和抗体工程 第五节 抗体诊断药物 第六节 抗体治疗药物
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第一节 概述
抗体是能与相应抗原特异性结合的具有 免疫功能的球蛋白。
它是机体免疫系统受到抗原物质刺激后 ，B淋巴细胞被活化、增殖和分化为浆细 胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。
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血清蛋白分为白蛋白、甲种(α)球蛋白、乙种 (β)球蛋白和丙种(γ)球蛋白
抗体活性存在于丙种球蛋白组分. 将具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球
蛋白统称为免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)
Ig结构
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可变区
恒定区 异种抗原性
Ig结构
医Hale Waihona Puke ppt5由于病原微生物是具有多种抗原决定 簇的抗原物质，因此这些抗体制剂也 是多种抗体的混合物，称为多克隆抗 体，即针对多种抗原决定簇的抗体。 它们在应用过程中经常会出现非特异 性交叉反应。
一段连接肽连接而成的重组蛋白；
4、单域抗体，由重链的或轻链的单个可变 区（ VH或VL ）组成；
5、最小识别单位，由互补决定区构成。
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单链抗体的优点
1、分子小，容易渗透到组织中（包括 肿瘤），增加有效药物浓度；
2、单链易于进行分子改造，如与毒素 拼接；
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存在于红细胞、白细胞和血小板等细 胞和组织中的组胺和5-羟色胺在机体 感染病原体而引起炎症反应时，可使 炎症部位的毛细血管迅速扩张，血流 量增加，毛细血管通透性增强，大量 淋巴细胞从毛细血管穿越进入炎症区。
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特异性免疫：当机体受到抗原刺激时， 体内的抗原特异性淋巴细胞识别抗原， 然后被活化，发生一系列的增殖和分 化等变化，最终表现出一定的细胞免 疫或体液免疫。
基因工程的小分子抗体仅表达鼠源性单 克隆抗体的可变区，其相对分子量仅为 原抗体的八十分之一到三分之一。
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正在研制的小分子抗体
1、Fab片段抗体，由完整的轻链L和重链 的可变区加部分恒定区(VH+CH1)；
2、FV抗体，VH和VL组成； 3、单链抗体（SCFV），由 VH和VL 通过
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双功能抗体的优点
一个臂识别肿瘤细胞表面抗原，包括 肿瘤相关抗原、癌基因产物、特殊的 白细胞分化抗原、病毒蛋白抗原、特 异性受体等，并有效结合；另一个臂 可识别免疫效应细胞及分子,如CD3(T 细胞识别抗原的单位）、毒素、药物等。
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五、抗体融合蛋白
构建抗体融合蛋白的原则：将第一个蛋 白的终止密码子删除，再接上带有终止 密码子的第二个蛋白基因，即可实现两 个基因的共表达。
各种免疫球蛋白（抗体），然后在体 液中发挥免疫作用的过程。
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第三节 鼠源性单克隆抗体的改造
最初制备的单克隆抗体都是鼠源性的， 大量应用于人体时可产生人抗鼠抗体， 使其作用和效果都受到严重影响，甚 至有毒副作用。
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可变区
恒定区 异种抗原性
Ig结构
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改造目的
改造鼠源性单克隆抗体的目的有两个 ：
特异性免疫又分为体液免疫和细胞免 疫。
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细胞免疫主要是指机体受到异己物质抗原 的刺激后，一类小淋巴细胞—依赖胸腺的 T细胞发生增生，分化，直接攻击靶细胞 或间接地释放一些淋巴因子从而使机体达 到免疫的过程。
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体液免疫是当机体受到抗原刺激后， 来源于骨髓的小淋巴细胞—B淋巴细胞 进行增生和分化为浆细胞，进而合成
抗体酶，酶-抗体型融合蛋白，在药物 治疗中有广阔的前景，它可在靶向位置 上将前体药物转化成有效的药物，从而 避免了对正常组织的损害。
3、免疫原性小，体内半衰期短。
缺点：稳定性较低；功能单一；亲和 力低，稳定性差，体内清除过快。
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四、双功能抗体
就是双特异性单链抗体：将抗A抗原抗 体的轻链可变区(VLA)与抗B抗原抗体 的轻链可变区(VLB) 通过短肽连接构成 的双链抗体。
结合抗原的两个臂具有不同的特异性。
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第二节 单克隆抗体
单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有 无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合， 通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细 胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的 。这种抗体是针对一个抗原决定簇的 抗体，又是由单一的B淋巴细胞克隆产 生的，故称为单克隆抗体。
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单克隆抗体和多克隆抗体
大分子物质由血循环进入脑组织和脑室。 ;
血胎屏障：由介于胎盘和母体血循环之间
的子宫内膜基蜕膜和胎儿的绒毛膜滋养层 细胞所组成，可阻挡母体内有害物质进入
胎儿体内 。
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吞噬作用
抗原性物质 包涵体
溶菌酶进入包涵体
抗原被分解
抗原碎片
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不直接杀死病原体，但能配合免疫细 胞、抗体或其他防御因子使它们发挥 较强的免疫功能，如补体、干扰素。
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免疫学知识:
人体和动物都有免疫系统，包括特异 性免疫和非特异性免疫。
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非特异性免疫
宿主的屏障; 吞噬细胞; 正常组织和体液中的抗菌物质; 炎症反应.
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皮肤;
黏膜;
血脑屏障：由介于血循环与脑实质间的软
脑膜、脉络丛的脑毛细血管壁和包于壁外 的胶质膜所组成，能阻挡病原生物和其他
1、一是降低免疫原性； 2、二是降低相对分子量，增加组织穿
透能力。
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一、人-鼠嵌合抗体
抗体同抗原结合的功能取决于抗体分 子的可变区，同种性免疫原性则决定 于抗体分子的稳定区。
人-鼠嵌合抗体：鼠源性单克隆抗体的 可变区基因和人免疫球蛋白的稳定区 基因连接起来，再共转染骨髓瘤细胞 ，就可表达出完整的人-鼠嵌合抗体。