生化反应曲线简介
酶的三个曲线
酶的三个曲线
酶促反应时间进程曲线可以分为三个阶段，分别为：
1. 延滞期：在酶促反应开始时，反应速率较慢，随着反应的进行，酶与底物逐渐结合，反应速率逐渐加快。
这一阶段的主要特点是反应速率与时间呈线性关系。
2. 线性期：在这个阶段，反应速率与时间的关系呈线性增长，酶与底物的结合达到饱和，反应速率不再随时间线性增加。
此时，反应速率取决于酶的活性和底物的浓度。
3. 偏离线性期：随着反应的进行，底物逐渐减少，反应速率也开始下降。
此时，反应速率与时间的关系呈非线性特征，受到酶活性、底物浓度以及产物浓度的影响。
这三个阶段反映了酶促反应在不同时间范围内的特征，有助于我们了解酶反应的动力学和酶的调控机制。
在实际应用中，通过研究酶促反应的时间进程曲线，可以优化反应条件，提高酶的活性和反应效率。
生化反应曲线解析1（终点法）
生化反应曲线解析1（终点法）在日常检验工作中，如果校准失败了、质控失控了、标本测值“你认为不准确”了，我们有很多途径去查找原因，其中查看反应曲线就是方法之一，而要想看懂和真正了解反应曲线，那么一定要了解生化检测所采用的分析方法。
目前，常用的分析方法主要分为两大类：终点法和速率法，其中终点法细分为一点终点法和两点终点法，速率法细分为速率法A和两点速率法，本期推送内容通过实例来讲解终点法（下期内容介绍速率法），进而认识反应曲线。
终点法定义：指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，反应液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比，称为终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。
终点法实例1（一点终点法）如TP（总蛋白）项目，样本与双缩尿试剂发生反应，样本中蛋白的肽键与铜离子形成蓝紫色螯合物，通过测定蓝紫色吸光度来求得样品中总蛋白的浓度。
如下图为日立7180全自动生化分析仪反应曲线，其中横坐标表示时间（以测光点表示，10min共记录34次吸光度），纵坐标为吸光度（蓝紫色吸光度），反应模式是先加入样品，再加入R1试剂，开始测光（约每18S记录一次吸光度），由于样本中的总蛋白和双缩尿试剂反应生成蓝紫色螯合物，吸光度上升，通过测定终点的吸光度（如反应曲线紫色区域显示）计算样本中总蛋白的浓度。
图为日立7180全自动生化分析仪图片采用一点终点法项目（一般单试剂）如：ALB、TP、CO2（单试剂）、GLU（单）等。
终点法实例2（两点终点法，一般双试剂）如胆固醇项目，胆固醇试剂中的胆固醇氧化酶特异性分解底物胆固醇，产生过氧化氢，产生的过氧化氢在过氧化物酶的作用下与色原发生氧化反应，生成有色物质（该过程为传说中的Trinder反应），有色物质产生的吸光度大小与样本中胆固醇浓度成正比。
如下图：先加入样本，再加入R1试剂，37度温浴5min（该过程除内源性干扰，如抗坏血酸），取吸光度A1（如下图15和16点吸光度），加入R2试剂启动反应，胆固醇最终转化为有色物质，吸光度上升，取吸光度A2（如下图33和34点吸光度），通过A2-A1的吸光度差用于计算血清中胆固醇的浓度。
反应曲线
C阶段（加入样本）
在加入样本的一瞬间，根据所选择的波长和样本本身 的颜色，可能会导致这一点吸光度的上升或下降。如 果我们在反应曲线或者反应数据中可以清楚的观察到 这一点的吸光度变化，我们就可以确认样本是加进反 应杯中了。同时比较重复性测试的几个相同测试的反 应曲线变化值，我们就可以大致确认样本的加入量是 否一致。 出现吸光度不一致的问题可能原因：样本针甩样、样 本针液面检测故障、液路泄漏、搅拌杆不搅拌、搅拌 杆位置太高、样本注射器位置不固定导致的。
F阶段（续）
反应曲线波动：稳定状态的反应曲线的波动应该不会大 于20，由于不同的试剂配方和反应的不尽相同，很难给 出一个确定的值来界定波动的范围。但是一般测试的波 动如果大于100，就很有可能会有问题。例如搅拌杆打杯、 气泡等等。 由于各个测试的反应度不同，吸光度的波动对测试的影 响就不尽相同。比如搅拌杆打杯引起的吸光度波动一般 在50到300之间，对于白蛋白（反应度为10000以上）就 影响很小，但是对总胆和直胆的影响就很大（反应度300 左右） 。
4、各阶段具体描述
A B C D E F
阶段－加入试剂 阶段－试剂1加热 阶段－加入样本 阶段－试剂1和样本混合 阶段－加入试剂2 阶段－反应开始到结束
A阶段（加入试剂1）
测试周期为0的一点为杯空白（BS-300是用杯 空白来校零的，反应曲线上所有的吸光度都是 实际的吸光度减去杯空白的吸光度），在第1 个测试周期，试剂1加入反应杯中，这一点的 吸光度应该为试剂1的试剂空白。对不同的试 剂，A点的吸光度会有不同，我们要认真阅读 试剂说明书。
B阶段（试剂1升温）
试剂一在升温的过程中吸光度应该是没有什么变化的，其中某些试 剂在此过程中吸光度会缓慢上升共计200（0.02A）左右也是有的， 但是连续的两个检测周期吸光度的波动范围正常的是20以内。如果 远远超过这个限制，比如100以上，我们要考虑： 反应杯中有干扰因素：常见的是气泡或杯子不干净。这种波动也局 限于个别杯子中，其他大部分杯子会是好的。 光电采集时间和光路配合不好：常见的是光电采集位置参数变化或 反应盘转动不稳定。这种波动对于某个波长会在所有的杯子中出现， 而且波动的程度也相对较大。 光路本身不稳定：常见原因是光源灯老化。光源灯使用2000小时以 上便无法再保证性能。可以通过更换光源灯进行确认。
化学中的反应速率曲线及相关知识点总结
化学中的反应速率曲线及相关知识点总结1.引言反应速率曲线是研究化学反应速率随时间变化的一种图形表示方法。
通过对于反应速率曲线的分析可以了解一个化学反应的速率、动力学和机理等方面的信息。
本文将总结反应速率曲线的基本形状和相关知识点。
2.反应速率曲线的基本形状反应速率曲线通常呈现出以下几种基本形状：直线型曲线: 反应速率在整个反应过程中保持一定的恒定值。
这表明反应为零级反应，反应物浓度对速率无影响。
上升型曲线: 反应速率随时间的增加而增加。
这表明反应为正级反应，反应物浓度对速率有影响。
下降型曲线: 反应速率随时间的增加而降低。
这表明反应为反级反应，反应物浓度的增加导致速率的减小。
S型曲线: 曲线上升较快，然后趋向平缓。
这表明反应开始时存在一个较高的活化能。
3.反应速率曲线的相关知识点反应速率曲线除了基本形状外，还涉及以下重要知识点：反应初速率: 曲线上初始的速率，即反应开始时的瞬时速率。
反应平衡态: 曲线趋于水平，反应物和生成物浓度达到平衡。
在平衡态下，反应速率为零。
反应活化能: S型曲线中的活化能是指反应开始时的较高能垒。
该能垒需要克服才能使反应发生。
反应中间态: 曲线上可能存在的反应过程中的中间状态，如反应物和生成物之间的中间物种。
4.结论反应速率曲线是研究化学反应速率变化的重要工具。
通过对曲线的分析可以了解反应的速率规律、动力学和机理等方面的信息。
形状与相关知识点的了解有助于深入理解化学反应的本质。
参考文献：1] ___。
___。
化学反应动力学与反应速率曲线。
北京：化学出版社。
20XX.。
反应曲线的名词解释
反应曲线的名词解释在化学领域中，反应曲线是指描述化学反应中物质浓度或反应速率随时间变化的图形。
通过观察反应曲线的形态和趋势，我们可以深入了解反应的机理以及优化反应条件。
1. 初期阶段反应曲线通常从一个初始状态开始，这个阶段被称为初期阶段。
在这个阶段，反应物浓度较高，反应速率随着时间的增加而快速增加。
初期阶段的反应曲线呈现出一个明显的上升趋势，直到达到峰值。
2. 社中期阶段接下来是中期阶段，反应物的浓度逐渐减少，产物的浓度逐渐增加。
在这个阶段，反应速率逐渐减缓，但仍然高于初期阶段中的速率。
中期阶段的反应曲线一般呈现出平缓上升或平缓下降的趋势。
3. 稳态阶段稳态阶段是指反应曲线趋于平稳的状态。
此时，反应物的浓度接近于极限值，反应速率也逐渐接近于零。
稳态阶段的反应曲线呈现出一个平稳或平缓下降的趋势，并在一定时间后趋于平衡。
在观察和分析反应曲线时，以下几个关键参数需要考虑：1. 反应速率反应速率指的是单位时间内反应物浓度或产物浓度的变化率。
可以通过斜率或曲线的变化率来确定反应速率的大小和变化趋势。
反应曲线的斜率越大，则反应速率越快。
2. 反应过程反应过程是指反应物转变为产物的途径和顺序。
通过观察反应曲线，我们可以推测反应过程中的中间产物和反应物之间的相对浓度变化。
这能帮助我们了解反应的机理和可能的反应途径。
3. 反应平衡在稳态阶段，反应物和产物的浓度趋于平衡。
平衡态发生在反应物浓度和产物浓度之间的动态平衡，也可以通过反应曲线的平缓阶段来判断。
平衡态可以帮助我们评估反应的收率和理解反应系统的稳定性。
4. 温度和催化剂温度和催化剂是影响反应曲线形态的关键因素。
温度的变化可以改变反应速率和平衡位置。
催化剂可以降低反应能垒，提高反应速率。
观察反应曲线时，我们可以考虑不同温度下和有无催化剂情况下的曲线变化，以及了解它们对反应行为的影响。
通过学习反应曲线的名词解释，我们可以更好地理解和分析化学反应的动力学和平衡过程。
反应动力学标准曲线
反应动力学标准曲线
起始阶段，在反应刚开始时，反应物的浓度较高，反应速率也相对较快。
在这个阶段，反应速率随着时间的增加而迅速增加，但是随着反应物浓度的降低，速率逐渐减慢。
指数增长阶段，随着反应物浓度的减少，反应速率逐渐减缓，但仍然保持指数增长。
这是因为反应物之间的碰撞频率减少，反应速率受到限制。
平稳阶段，当反应物浓度进一步减少时，反应速率逐渐趋于稳定。
在这个阶段，反应物的浓度和生成物的浓度之间达到了动态平衡，反应速率保持相对稳定。
末期阶段，当反应物浓度接近于零时，反应速率趋近于零。
这是因为反应物的浓度已经非常低，碰撞频率非常稀少，反应速率几乎可以忽略不计。
总的来说，反应动力学标准曲线展示了反应速率随时间变化的趋势。
起始阶段速率快，指数增长阶段速率减缓但仍指数增长，平
稳阶段速率趋于稳定，末期阶段速率接近于零。
这个曲线可以用于研究反应的速率常数、反应机理以及影响反应速率的因素等。
反应曲线在临床生化检验中的意义
反应曲线在临床生化检验中的意义目的对临床生化检验中反应曲线的意义进行分析和探讨。
方法分别观察临床标本检测、质控品、标准品和试剂空白的检测中出现的反应曲线，对正常反应曲线和异常反应曲线进行对比和分析。
结果在临床生化检验中，反应曲线能够对标本性状、标本检测结果异常、试剂变质、生化分析仪不稳定等情况进行反应。
结论反应曲线对临床生化检验具有重要的意义，有助于迅速地发现异常结果，提高临床生化检验的准确性。
标签：反应曲线；临床生化检验；异常结果在临床中经常用到生化检验来为临床诊断提供必要的依据，这就要求临床生化检验的结果必须准确。
在临床生化检验的每一个环节中，都要严格遵守操作规范，提高临床生化检验结果的准确性[1]。
反应曲线在临床生化检验中能够对异常结果进行反应，及时发现异常结果，使临床生化检验更加科学。
本文对反应曲线对检验仪器、试剂变质、标本检测过程、临床患者标本方面的异常问题进行了分析，现报告如下。
1资料与方法1.1一般资料选取正规厂家生产的、质量合格的生化检测试剂、生化分析仪和校准品，确保其能够通过每天的质检品测验。
1.2方法通过将临床标本检测、质控品、标准品和试剂空白检测中的正常反应曲线和异常反应曲线进行对比，分析异常反应曲线的特点。
反曲线的横轴为时间，纵轴为吸光度，无明显波动、光滑平坦的曲线为正常反应曲线，相反则为异常反应曲线[2]。
2结果2.1反应曲线对生化检验仪器问题的反应在进行临床标本碱性磷酸酶在检测过程中，检测结果是224 U/L。
此时可以发现，反映曲线在试剂2加入后，呈现出了一个向下峰，反应曲线明显异常。
此时再重新检测该标本，曲线无异常波动，检测结果是77 U/L。
此时可以对反应曲线的异常原因进行分析，很可能是第一次检测时检测仪器的状态不稳定导致的。
在进行临床标本直接胆红素的检测时，反应曲线出现异常波动，此时发现在同时段内进行的其他检测的反应曲线也出现了类似的波动，究其原因可能与光源灯的老化或者不稳定有关系。
助力实验室结果判断之读懂反应曲线
离心条件
患者情况 (服药状況等)
室内温度 15～32℃ 室内湿度 45～85%RH 室内温度的变动
±2℃
測定結果
经验年数 理解程度 熟练程度 判断能力
血样品測定 操作程序确认 样品量确认
组間差
试剂准备
试剂保存
试剂稳定性 使用状況 (追加等)
质控管理 标准品的批間差
測定者
測定
试剂
仪器校正
38
END
谢谢
实例-终点法
单试剂一点终点法 例如:TP.
双试剂两点终点法 例如：T-CHO(双试剂)…
实例-速率法
速率A 如:ALT.AST
两点速率法 如：CO2
通过反应曲线对不同方法学的认识
1. 一点终点法和两点终点法的差异 2. 速率法中底物耗尽限的理解 3. 参数Application内四个测光点如何理解 4. P模块中R1至R4的除了可添加四种试剂外还有什么功能
当发现有异常数据出现时，分析反应曲线是非常重要的手段 用反应曲线来判断数据“异常”还是“正常”时，必须要先知 道什么是“正常”的反应曲线
如何确认正常的反应曲线・・・
•
参考校准品或质控样品的反应曲线
实例---跳点
出现跳点，F,W报警 光源灯远远超出使用时间
实例---跳点
光源灯超出使用寿命所致
助力实验室结果 判断之
读懂反应曲线
目录
01 反应曲线的概括 02 异常反应曲线的分析
仪器运行原理
1.样品加入 2.试剂加入（R1，R2) 3.混匀 4.比色
光源
水浴反应槽
反应杯
光栅 检测器
全过程反应监测
A
终点法
R2
当相应的比色杯通过光路系统时，光路系 统会测量并记录下相应的吸光度
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
下面看我们工作中遇到的一个ALT的反应曲线
为什么结果不出来？
正 常
ALT
反 应 曲 线
ALT检测原理 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、pH7.4的条件下， 可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸反应生成 谷氨酸和丙酮酸：
ALT
足 够 的 底 物
L-丙氨酸
+ α-酮戊二酸
α-丙酮酸
30 20 10 1 2 3 4 5 6
Abss Concx = 待测样本浓度 Concs = 标准品浓度 Δ Absx = 样本吸光度 Abss = 标准品吸光度
(amount of color)
浓度 (amount of substance)
Lambert-Beer 定律适合于任何均匀非散射的介质
开始加入R2 试剂
开始读点 底物耗尽
平台期
对于这种结果，我们将此标本稀释后重新检测，但是检测后一定要 再看反应曲线，如果读点区还是有一段平台区，说明我们的稀释倍 数不对，我们应该加大稀释倍数，直到反应曲线没有平台区。
谢
谢
聆
听
+
L-谷氨酸
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成 反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红 棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸 的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处 理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清 中ALT的活性。
Vt反应体系总体积 Vs样品体积 ε摩尔消光系数 d比色杯光径
采用理论K值的前提
应当是样品和试剂的加量准确、比色杯光径准确、温度控 制精确以及波长准确等。但事实上由于各型分析仪在注射器
容积步进电机精度、滤光片带宽等方面的差异，可造成样品
和试剂加量以及吸光度检测的偏差，温度的影响有时也非常
大。
校准K值
下图是正常的质控反应曲线，波长545/658nm，读点区2个读点
最终读点
空白读点
再看这个反应曲线
R2加入后 形成下降， R2试剂有 不明干扰 存在，更 换试剂后 解决
为高度溶血样本 产生的曲线，从 R1加入开始， 吸光度就急剧升 高，等到R2加 入反而形成负反 应（R2后的终 点吸光度小于样 本空白），导致 结果出现负数。
生化反应曲线简介
生化室 常明杰
目录
A
生化分析基本原理
B
生化反应曲线
物质对光吸收的基本定律－ Lambert- Beer定律
-------光吸收的基本定律
Lambert－Beer定律表达为: 当一束平行的单色光通过含有均匀吸光物质的溶液时,溶液的吸光度(A)
与溶液的浓度(C)和光透过液层厚度(L)的乘积成正比。物质对光吸收的吸
终点吸光度的大小求出被测物浓度，称为终点法。
• 该法称为平衡法更为恰当。从时间-吸光度曲线来看，到达反应
终点或平衡点时，吸光度将不再变化。终点法参数设置简单，反
应时间一般较长，精密度较好。
终点分析法（Endpoint assays）
一点终点法 （1-point end）
两点终点法（2-point end）
间吸光度差值相等）的吸光度值，并以此线性期的单位吸
光度变化值（ΔA/min）计算结果。
连续监测法反应曲线
A单试剂连续监测法
B双试剂连续监测法
连续监测法的优点
可以确定线性期并计算ΔA/min，根据此值再准确地计算酶 活性，因而使自动生化分析仪在酶活性测定方面显著地优于手 工法。连续监测法也可用于测定呈线性反应的代谢物浓度，一 般是某些基于酶法测定的代谢物。
酶活性（U/L）＝ΔA/min×理论（或校准）K值。
代谢物浓度CU=ΔA/min×校准K值。
理论K值
多用于酶活性测定中，因酶活性尚无公认的
校准品可用。根据酶活性的国际单位定义得出酶
活性的计算公式为：
103 Vt 酶活性 (U/L)=ΔA/min× ε Vs d 3 10 Vt 将此式中 以K来表示，即为理论K值 ε Vs d 可作为分析参数输入到分析仪中。
一点终点法（one point end assay）
• 在反应到达终点，即在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时选择一个终点
吸光度值，用于计算结果。
• 结果计算公式：待测物浓度CU=（待测吸光度AU－试剂空白吸光度AB）×K K为校准系数
两点终点法
在被测物反应或指示反应尚未开始时，选择第一个吸光度，在反应到达终 点或平衡时选择第二个吸光度，此两点吸光度之差用于计算结果。
Reaction Monitor Trig
7000
6000
5000
Absorbance
4000
3000
2000
1000
0 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55 57 59 61 63 65 67 69
光系数（e）为常数。
☆其数学表达式：A = ɛ×C×L
I0
I
透射光
light detector
根据Lambert- Beer定律来计算待测物浓度 如若吸光系数 (ε )未知，我们就需要采用定标曲线来计算 待测物的浓度。
此值为定值
70 60 50
Concx =Δ Absx x Concs
吸 光 度
40
酶活性校准品经校准操作后由分析仪自动计算得出。在 进行酶学测定时，如果分析条件的变化如温度、样品试剂 加量和吸光度检测偏差可同等程度地影响校准物和待测样 品，则使用校准品能进行补偿。一般来说以使用校准K值为
好，但必须有两个先决条件：①必须使用配套的试剂；②
必须使用配套的高质量的校准品，该校准品应具有溯源性 。
Cycles
primary λ
仪器读数原理
反应转盘不停的周期旋转
当相应的比色杯通过光路系统时，光路 系统会测量并记录下相应的吸光度
在不同的时间点加入相应的反应试剂
全自动生化分析仪常用的方法
1
终点法
2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
速率法
（一）终点法（end assay）
• 被测物质在反应过程中完全被转变为产物，到达反应终点，根据
A单试剂两点终点法
B双试剂两点终点法
两点终点法的特点
去除了样本的本底 采用两个测量点 针对两个或多个试剂的项目 第一个读数点一般选在添加最后一个试剂之前 第二个读数点一般选在加入最后一个试剂之后且已经达到了反应终点
A (样本)
+
B1 (试剂1) + B2 (试剂 2)
C + D (显色产物)
直接胆红素 双试剂两点终点法 正反应 下图是校准曲线图
葡萄糖正常反应曲线
再看异常反应曲线
原因是R2 加入后的搅 拌不良，反 应过于迟缓， 以至于在读 点的时候还 未到达终点， 更换搅拌单 元解决问题。
连续监测法（continuous monitoring assay）
又称速率法（rate assay），是在测定酶活性或用酶法测定
代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期（各两点
——分光光度法定量分析的依据
生化比色分析
特定蛋白透射比浊分析
当相应的比色杯每一次通过光路系统时，光路系统会测 量并记录下相应的吸光度 光路系统可以测量后分光后12个波长的相应吸光度。 12 有效波长: 340, 376, 415, 450, 480, 505, 546, 570, 600, 660, 700, 800nm 多数检测项目都使用双波长检测方法。（可去除干扰物对检测 结果的影响）