实验二--紫外-可见分光光度法测定水中苯酚含量
紫外可见分光光度法测定苯酚含量的实验步骤
紫外可见分光光度法测定苯酚含量的实验步骤紫外可见分光光度法是一种常用的分析方法，可用于测定无机和有机物质的浓度。
在本实验中，我们将利用紫外可见分光光度法测定苯酚的含量。
下面是实验步骤。
实验原理苯酚在紫外和可见光区都有吸收峰，根据它的吸收峰特征可以测定其含量。
在本实验中，我们将利用苯酚在240 nm处的吸收峰进行测定。
实验仪器、试剂以及玻璃仪器仪器：紫外可见分光光度计试剂：苯酚、甲醇玻璃仪器：比色皿、移液管、醇灯、玻璃棒、烧杯等。
实验步骤步骤1：制备苯酚样品溶液将1 g的苯酚粉末称到50 mL的烧杯中，加入约30 mL甲醇并混合均匀，然后用甲醇稀释到50 mL。
最后用玻璃棒搅拌至完全溶解。
步骤2：制备苯酚标准曲线将制备好的苯酚样品溶液定容到50 mL，在紫外可见分光光度计中，设置检测波长为240 nm，然后将苯酚标准溶液分别放入比色皿中，取0、0.2、0.4、0.6、0.8 mL苯酚标准溶液，然后用甲醇稀释成10 mL。
最后，利用紫外可见分光光度计测量各个标准溶液的吸光度。
步骤3：测定未知样品将待测样品取5 mL，加甲醇稀释成50 mL，然后放到紫外可见分光光度计中测量样品的吸光度。
根据标准曲线可以计算出样品中苯酚的含量。
注意事项1.制备苯酚样品溶液的时候，要充分混合均匀，防止苯酚沉淀。
2.操作过程中，不可碰触紫外光管等易损部件。
3.实验前，应进行紫外可见分光光度计的预热操作，以保证测试准确性。
实验结果及分析根据实验测定的吸光度可以绘制出苯酚标准曲线，通过计算未知样品的吸光度，即可求出其苯酚含量。
对测量的结果进行分析，可以了解到此方法的准确性和可行性。
总结本实验介绍了紫外可见分光光度法测定苯酚含量的实验步骤。
通过本实验的学习，不仅能够掌握该分析方法的原理、仪器和操作要点，还能够提高实验技巧，从而为今后的实验研究奠定基础。
紫外分光光度法测定水样中的苯酚
0.9 0.8 0.7
a
A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 220
A
b
240
260
280
300
320
(nm)
三氯苯酚（a）和苯酚（b）的紫外吸收曲线
a Aa b ' A1a' A2 ' a (k1a k 2 ) ca
k a ca
Aa b ' Aa b ' ca a a k1' k2' k a
注：须满足两个基本条件 • 选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点
• 选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大
特点：
使用时来回拉动吸收池 →移动误差 • 对光源要求高 • 比色池配对
•
图4
单光束分光光度计基本结构示意图
特点：
不用拉动吸收池，可以减 小移动误差 • 对光源要求不高
• •
可以自动扫描吸收光谱
图5 双光束分光光度计结构示意图
特点： •
•
利用吸光度差值定量 消除干扰和吸收池不 匹配引起的误差
消除a的影响测b
a 选 a 的等吸收点1和2 A1a A2
A
a b
A A
b 1
b 2
b (k1b k 2 ) cb
kb cb Aa b Aa b cb b b k1 k2 k b
消去b的影响测a
b 选 b 的等吸收点1' 和2' A1b' A2 '
a b a A2 k2 ca cb b k2
3．两组分吸收光谱完全重叠——混合样品测定
（1）解线性方程组法 （2）等吸收双波长消去法
紫外测苯酚实验报告
一、实验目的1. 熟悉紫外分光光度法的基本原理和操作方法。
2. 掌握苯酚在紫外光区域的吸收特性。
3. 通过紫外分光光度法测定水样中苯酚的含量。
二、实验原理紫外分光光度法是一种利用物质在紫外光区域吸收特定波长的光而进行定量分析的方法。
苯酚分子中含有共轭双键，在紫外光区域具有特定的吸收峰，通过测定苯酚溶液在特定波长下的吸光度，可以计算出苯酚的浓度。
实验原理如下：1. 根据比尔定律，吸光度A与溶液的浓度c和光程L成正比，即A = εlc，其中ε为摩尔吸光系数。
2. 通过绘制苯酚标准溶液的吸光度-浓度曲线，得到苯酚的摩尔吸光系数。
3. 测定水样中苯酚的吸光度，根据吸光度-浓度曲线计算苯酚的浓度。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外可见分光光度计、石英比色皿、移液管、容量瓶、烧杯、玻璃棒等。
2. 试剂：苯酚标准溶液（浓度为 1.00mg/mL）、蒸馏水、无水碳酸钠、氢氧化钠、硫酸、盐酸等。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）取6个50mL容量瓶，分别加入0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL苯酚标准溶液，用蒸馏水定容至刻度线。
（2）将标准溶液置于石英比色皿中，在270-295nm波长范围内，每隔10nm测定一次吸光度。
（3）以苯酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸光度-浓度曲线。
2. 样品测定（1）取适量水样于50mL容量瓶中，加入适量无水碳酸钠和氢氧化钠，使水样pH 值调节至碱性。
（2）加入适量硫酸，使水样pH值调节至酸性。
（3）加入适量盐酸，使水样pH值调节至中性。
（4）按照标准曲线绘制步骤，测定水样中苯酚的吸光度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的绘制以苯酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸光度-浓度曲线，得到苯酚的摩尔吸光系数为ε = 1.85×10^4 L·mol^-1·cm^-1。
2. 样品测定测定水样中苯酚的吸光度为0.576，根据吸光度-浓度曲线计算得到苯酚浓度为0.012mg/L。
(整理)紫外光度计测苯酚含量方案2
用紫外可见分光光度计测废水中的苯酚含量项目实施方案学校：绵阳职业技术学院指导老师：石建屏组长：高晓宇组员：刘世樑、汤效飞刘彦汝、齐丽君胡楚卿、邓素容目录一、仪器工作原理二、仪器结构1、光源2、分光系统3、吸收池4、检测显示系统三、仪器使用方法四、工作曲线法测苯酚含量（一）溶液的制备1、容器的洗涤2、溶液的配制（二）样品的测定1、绘制吸收光谱曲线，确定最大吸收波长2、绘制苯酚溶液工作曲线，计算未知样品浓度3、实验完毕五、结果记录及实验数据处理一、仪器工作原理含有苯环和共轭双键的有机化合物在紫外区有特征吸收。
物质结构不同对紫外及可见光的吸收具有选择性。
其中，最大吸收波长λ、摩尔吸收系数ε及吸收曲线的形状不同是进行物质定性分析的依据。
由于在λmax处吸光度A有最大值，在此波长下A随浓度的变化最为明显，方法的灵敏度最大，故在紫外分光光度计上作苯酚水溶液（试液）的吸收光谱曲线，再由曲线上找出λmax，据此对物质进行定量分析。
用紫外分光光度计进行定量分析时，若被分析物质浓度太低或太高，可使透光率的读数扩展10倍或缩小10倍，有利于低浓度或高浓度的分析，其方法原理是依据朗伯-比耳定律：A=εbc。
二、仪器组成紫外分光光度计由光源、分光系统、吸收池、检测显示系统等四大部分组成，其组成框图见下图。
1、光源光源的作用是提供符合要求的入射光。
分光光度计对光源的要求是：在使用波长范围内提供连续的光谱，光强应足够大，有良好的稳定性，使用寿命长。
紫外光光源多为气体放电光源，如氢，氘，氙放电灯等。
其中应用最多的是氢气灯及同位素氘灯，其使用波长范围为185～357nm。
为了保证发光强度稳定，也要用稳压电源供电。
氘灯的光谱分布与氢灯相同，但光强比同功率氢灯大3～5倍，寿命比氢灯长。
2、分光系统分光系统是紫外可见分光光度计的核心部分。
它主要由入射狭缝、准直镜、光栅、物镜和出射狭缝组成。
入射狭缝起着限制杂散光进入的作用, 它一般处在准直镜的焦点上；准直镜将从入射狭缝射进来的复合光变成平行光；光栅用来分光。
紫外分光光度法测定水中总酚的含量
紫外分光光度法测定水中总酚的含量苯酚是工业废水中一种有害物质，如果流入江河，会使水质受到污染，因此在检验饮用水的卫生质量时，需对水中酚含量进行测定。
一、实验目的1．掌握紫外分光光度法测定酚的原理和方法。
2．熟悉紫外分光光度计的基本操作技术。
二、方法原理具有苯环结构的化合物在紫外光区均有较强的特征吸收峰，在苯环上的第一类取代基(致活基团)使吸收更强，而苯酚在270nm处有特征吸收峰，其吸收程度与苯酚的含量成正比，因此可用紫外分光光度法，根据Lambert—Beer定律直接测定水中总酚的含量。
三、仪器与试剂1．紫外分光光度计；2．苯酚标准溶液，250mg/L：准确称0.0250g苯酚于250 mL烧杯中，加去离子水20 mL使之溶解，移入100mL容量瓶，用去离子水稀释至刻度，摇匀。
四、内容与步骤1、标准系列溶液的配置取5支25ml比色管，分别加入1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mL苯酚标准溶液，用去离子水稀释至刻度摇匀待测。
2．吸收曲线的测量取上述标推系列溶液中任一溶液，用1cm石英比色皿，以溶剂空白作参比，在220～350 nm波长范围内，每5nm测量一次吸光度。
3．标准曲线的测量在苯酚的最大吸收波长(λmax)下, 用1cm石英比色皿，以溶剂空白作参比，测量标准系列溶液的吸光度。
4．水样的测定与测量标准系列溶液的相同条件下，测量水样的吸光度五、数据记录与处理1．列表记录不同波长下同一标准溶液的吸光度值，以吸光度为纵坐标，波长为横坐标绘制吸收曲线，找出λmax，计算其 max。
2．列表记录标冶系列溶液与水样的吸光度，以吸光度为纵坐标，标准系列溶液浓度为纵坐标，绘制标推曲线；根据水样的吸光度查找出其相当的标准溶液的浓度并算出水样中苯酚的含量(g／L)。
六、问题与讨论1．紫外分光光度法与可见分光光度法有何异同?部件有何异同?。
紫外吸收光谱法测定苯酚含量
紫外吸收光谱法测定苯酚含量一、实验目的1、了解紫外可见分光光度计的结构、性能及使用方法2、熟悉定性、定量测定的方法二、实验原理紫外分光光度法，又称紫外吸收光谱法，它是研究分子吸收200.0~800.0nm波长范围内的吸收光谱。
紫外吸收光谱主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，是研究物质电子光谱的分析方法。
通过测定分子对紫外光的吸收，可以对大量的无机物和有机物进行定性和定量测定。
苯酚已经被列入有机污染物的黑名单。
但在一些药品、食品添加剂、消毒液等产品中均含有一定量的苯酚。
如果其含量超标，就会产生很大的毒害作用。
苯酚在紫外光区的最大吸收波长λmax=270nm。
对苯酚溶液进行扫描时，在270nm处有较强的吸收峰。
定性分析时，可在相同的条件下，对标准样品和未知样品进行波长扫描，通过比较未知样品和标准样品的光谱图对未知样进行鉴定。
在没有标准样品的情况下，可根据标准谱图或有关的电子光谱数据表进行比较。
定量分析是在270nm处测定不同浓度苯酚的标准样品的吸光值，并绘制标准曲线。
再在相同的条件下测定未知样品的吸光度值，根据标准曲线可得出未知样中苯酚的含量。
三、仪器与试剂1．紫外可见分光光度计2．容量瓶（1000ml、250ml、50ml）3．吸量管（5ml、10ml）4．苯酚（AR）于5支50ml的容量瓶中，用吸量管分别加入0.5 ml、2ml、5ml、10ml、20ml的10ug/ml苯酚标准溶液，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。
四、最大吸收波长的选择在标准系列溶液中任取一种，以水为参比，分别在波长200~300nm之间以10为间隔测定其吸光度，在吸光度最大值附近以间隔2nm为单位测定，直至找到最大吸收波长。
五、数据记录及结果分析(1)、标准表(2)、苯酚的吸收曲线图（根据上表任意组标准溶液数据作图）(3)、标准曲线图C phenol （mg/L）标准曲线方程：Y =0 .055+ 0.1515 * X相关系数r=0.9979六、苯酚浓度的测定在相同情况下，直接测定未知样品的吸光度。
【清华】实验二 紫外-可见分光光度法测定废水中微量苯酚
紫外－可见分光光度法测定废水中微量苯酚班级:化01 实验时间:2013-9-17组员:常宽(2010011839) 郭雅容(2010011822)肖雅博(2010011824) 孙悦(2010011825)一、实验目的1.学会使用UV-2100型紫外-可见分光光度计；2.掌握分光光度法测定废水中微量苯酚的方法。
二、实验原理苯酚是一种剧毒物质，可以致癌，已经被列入有机污染物的黑名单。
但在一些药品、食品添加剂、消毒液等产品中均含有一定量的苯酚。
如果其含量超标，就会产生很大的毒害作用。
苯酚的中性溶液在紫外光区的最大吸收波长λmax=270nm。
对苯酚中性溶液进行扫描时，在270nm处有较强的吸收峰。
定量分析是基于Lambert-beer定律，在270nm处测定不同浓度苯酚的标准样品的吸光值，并自动绘制标准曲线。
再在相同的条件下测定未知样品的吸光度值，根据标准曲线可得出未知样中苯酚的含量。
三、仪器和试剂岛津UV-2100型紫外可见分光光度计，容量瓶（1000ml1个，50ml6个），苯酚储备液体（0.3g/L），废水四、实验内容及步骤1.以去离子水作为参比，先后测绘苯酚标准溶液和废水的吸收光谱，确定最大吸收波长，并粗略估计废水中苯酚的浓度；2.根据废水中苯酚的浓度和工作曲线的要求，配制标准系列溶液，测定标准系列的吸光度，绘制标准曲线；3.测定废水中苯酚的吸光度，根据标准曲线求出废水中苯酚的含量；五、数据处理1.配置标准溶液称取0.3088g苯酚定容于1000ml，苯酚标准溶液浓度c0=0.3088g/L，分别取标样2、4、6、8、10ml定容于50ml容量瓶，则各标准溶液的浓度列如下表：表1标准溶液的配制与吸光度测量标准液的体积/mL计算浓度/mg.L-1紫外吸光度00212.3520.190424.7040.384637.0560.588849.4080.7831061.7600.9782.测定标准工作曲线通过对比标样与废水样品的吸收谱图，将检测波长定为269.20nm。
紫外吸收光谱法测定苯酚含量
紫外吸收光谱法测定苯酚含量一、实验目的1、了解紫外可见分光光度计的结构、性能与使用方法2、熟悉定性、定量测定的方法二、实验原理紫外分光光度法，又称紫外吸收光谱法，它是研究分子吸收200.0~800.0nm 波长范围内的吸收光谱。
紫外吸收光谱主要产生于分子价电子在电子能级间的跃迁，是研究物质电子光谱的分析方法。
通过测定分子对紫外光的吸收，可以对大量的无机物和有机物进行定性和定量测定。
苯酚已经被列入有机污染物的黑名单。
但在一些药品、食品添加剂、消毒液等产品中均含有一定量的苯酚。
如果其含量超标，就会产生很大的毒害作用。
苯酚在紫外光区的最大吸收波长λmax=270nm。
对苯酚溶液进行扫描时，在270nm 处有较强的吸收峰。
定性分析时，可在相同的条件下，对标准样品和未知样品进行波长扫描，通过比较未知样品和标准样品的光谱图对未知样进行鉴定。
在没有标准样品的情况下，可根据标准谱图或有关的电子光谱数据表进行比较。
定量分析是在270nm处测定不同浓度苯酚的标准样品的吸光值，并绘制标准曲线。
再在相同的条件下测定未知样品的吸光度值，根据标准曲线可得出未知样中苯酚的含量。
三、仪器与试剂1．紫外可见分光光度计2．容量瓶（1000ml、250ml、50ml）3．吸量管（5ml、10ml）4．苯酚（AR）于5支50ml的容量瓶中，用吸量管分别加入0.5 ml、2ml、5ml、10ml、20ml的10ug/ml苯酚标准溶液，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。
四、最大吸收波长的选择在标准系列溶液中任取一种，以水为参比，分别在波长200~300nm之间以10为间隔测定其吸光度，在吸光度最大值附近以间隔2nm为单位测定，直至找到最大吸收波长。
五、数据记录与结果分析(1)、标准表(2)、苯酚的吸收曲线图（根据上表任意组标准溶液数据作图）(3)、标准曲线图C phenol （mg/L）标准曲线方程：Y =0 .055+ 0.1515 * X相关系数r=0.9979六、苯酚浓度的测定在相同情况下，直接测定未知样品的吸光度。
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实验二紫外-可见分光光度法测定水中苯酚含量
苯酚是工业废水中一种有害污染物质，需对水中酚含量控制。
苯酚在270-295nm波长处有特征吸收峰，其吸光度与苯酚的含量成正比，应用Lambert－Beer定律可直接测定水中总酚的含量。
一、实验目的
1．学会使用Cary50型紫外-可见分光光度计
2．掌握紫外-可见分光光度计的定量分析方法
二、原理简介
紫外-可见吸收光谱是由分子外层电子能级跃迁产生，同时伴随着分子的振动能级和转动能级的跃迁，因此吸收光谱具有带宽。
紫外-可见吸收光谱的定量分析采用朗伯-比尔定律，被测物质的紫外吸收的峰强与其浓度成正比，即：
其中A是吸光度，I、分别为透过样品后光的强度和测试光的强度，为摩尔吸光系数，b为样品厚度。
由于苯酚在酸、碱溶液中吸收波长不一致（见下式），实验选择在碱性中测试，选择测试的波长为288nm左右，取紫外-可见光谱仪波长扫描后的最大吸收波长。
Cary50是瓦里安公司的单光束紫外-可见分光光度计。
仪器原理是光源发出光谱，经单色器分光，然后单色光通过样品池，达到检测器，把光信号转变成电信号，再经过信号放大、模/数转换，数据传输给计算机，由计算机软件处理。
三、仪器与溶液准备
1、Cary50型紫外-可见分光光度计
2、1cm石英比色皿一套
3、25 ml容量瓶5只，100 ml容量瓶1只，10ml移液管二支
配置250 mg/L苯酚的标准溶液：准确称取0.0250 g苯酚于250 mL烧杯中，加入去离子水20 mL使之溶解，加入0.1M NaOH 2mL，混合均匀，移入100 mL容量瓶，用去离子水稀释至刻度，摇匀。
取5只25 mL容量瓶，分别加入1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL苯酚标准溶液，用去离子水稀释至刻度摇匀，作为标准溶液系列。
将溶剂，标准溶液，待测水样依此装入石英比色皿。
按测试程序的提示，依次放入样品室中进行测试。
四、测试过程
1、确认样品室内无样品
2、开电脑进入Window 系统
3、点击进入Cary50 主菜单
4、双击Cary-WinUV图标
5、在Win-UV 主显示窗口下，双击所选图标“SCAN”以扫描测定吸收曲线：取上述标准系列任一溶液装进1cm石英比色皿至4/5，以装有蒸馏水的1cm石英比色皿作为空白参比，设定在220－350 nm波长范围内扫描，获得波长-吸收曲线，读取最大吸收的波长数据。
6、在Win-UV 主显示窗口下，双击图标“Concentration”进入定量分析主菜单
7、设定测试分析步骤:
（l）单击Setup功能键，进入参数设置页面。
在Wavelength处填入由步骤5获取的波长数据。
（2）按Cary Control 、Standards、Options、Samples、Reports、Auto store顺序，分别设置好菜单中每页的参数。
按OK回到“Concentration”界面主菜单。
（3）单击View莱单，选择需要显示的内容。
例如基本选项Toolbar，buttons，Graphics，Report。
（4）单击Zero，提示“Load blank press OK to read” (放空白按OK读)，放入空白蒸馏水到样品室内，按OK测试，测完取出样品。
（5）单击Start, 出现标准／样品选择页。
选Selected for Analysis（选择分析的标准和样品）。
此框的内容为准备分析的标准和样品。
（6）按OK进行分析测试。
依Presentstdl的提示：放入标准1然后按OK键进行读数。
放标准2按OK进行读数。
直到全部标准读完。
（7）出现“Present Samplel Press OK to read”提示框，根据提示，放入样品1按OK开始读样品，直到样品测完。
（8）可点击Save Method AS保存此方法，以后可以从Open Method调用此方法。
从标准曲线读出水样中苯酚的含量（g／L），测试数据采用点击Save Data AS 保存。
五、实验数据处理
打印报告，读取待测样品的苯酚含量。
六、问题与讨论
1、为什么紫外-可见光谱定量分析的准确度比红外光谱高？
2、为获得准确数据，在使用分光光度计时，哪些操作必不可少？
参考文献
1、陈培榕,邓勃. 现代仪器分析实验与技术, 清华大学出版社，1999.12
2、CARY 50/100/300操作手册，美国瓦里安中国有限公司分析仪器服务部，2003。