免疫学诊断
免疫学检验的方法和特点
免疫学检验的方法和特点免疫学检验是一种通过检测机体免疫系统产生的抗体或抗原来诊断疾病的方法。
它基于免疫反应的原理，利用特定的抗体和抗原之间的相互作用来检测人体内的免疫反应物质。
目前，免疫学检验已经成为临床诊断和科研领域中不可或缺的重要手段之一1.免疫层析：免疫层析是一种将待检测物质（抗体或抗原）移动到特定层析纸或凝胶柱上，通过与特异抗体或抗原的结合来检测它们的方法。
这种方法操作简单，成本较低，适用于检测体液中的抗体或抗原。
2.酶联免疫吸附实验（ELISA）：ELISA是一种利用酶的催化作用检测抗体或抗原的方法。
它包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等多种形式。
ELISA具有高灵敏度、高特异性、操作简便和成本低廉等优点，广泛应用于临床诊断和科研领域。
3.放射免疫分析（RIA）：RIA是一种利用放射性标记物来检测抗体或抗原的方法。
它的原理是将放射性同位素标记在待测抗体或抗原上，通过测量标记物的放射活性来确定待测物质的含量。
RIA具有高灵敏度和高特异性的优势，但由于放射性标记物的使用，操作相对复杂且安全性要求较高。
4.免疫荧光：免疫荧光是一种利用荧光标记的抗体或抗原来检测待检测物质的方法。
它通过检测标记物的荧光强度或光谱来确定待测物质的存在。
免疫荧光具有高灵敏度、高特异性、操作简便等优势，广泛应用于病原微生物、肿瘤标志物等的检测。
5.流式细胞术：流式细胞术是一种通过流式细胞仪检测细胞表面或细胞内的免疫分子的方法。
它通过将目标细胞与标记有特定抗体的荧光染料反应，再用流式细胞仪对标记的细胞进行激光照射并收集荧光信号来测定免疫分子的表达水平。
流式细胞术具有高灵敏度、多参数分析等优势，广泛应用于细胞免疫学研究和临床诊断。
6.免疫组化：免疫组化是一种利用特异抗体与待检测抗原结合，再通过染色等方法来检测组织或细胞中特定抗原的方法。
免疫组化具有高特异性、高灵敏度、可定量等优势，广泛应用于病理学研究和临床诊断。
病毒感染的免疫学诊断方法
病毒感染的免疫学诊断方法病毒感染是人类面临的重要健康威胁之一，因此，早期的准确诊断对于预防和控制病毒传播至关重要。
免疫学诊断方法在病毒感染检测中发挥着关键作用，通过测量和分析人体对病毒感染产生的免疫反应来判断感染状态。
本文将介绍常见的病毒感染的免疫学诊断方法，包括血清学检测、免疫组化和分子诊断。
一、血清学检测血清学检测是一种广泛应用于病毒感染诊断的方法。
它基于通过采集血液样本，检测血液中的病毒抗体或抗原以确定感染状态。
常见的血清学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光分析。
在ELISA中，以丙酮酸酯（BSA）为载体的病毒抗原被固定在微孔板上，样本中的抗体与抗原特异性结合后，通过酶标记抗体的显色反应可定量分析检测。
免疫荧光分析则利用发出荧光的标记物与病毒抗体结合的特性，通过荧光显微镜观察来判断感染状态。
二、免疫组化免疫组化是一种用于研究病毒感染机制和病理学改变的方法。
通过使用特异性的病毒抗体和荧光标记物，可以将感染的病毒或相关蛋白在组织切片中可视化。
这种方法在病毒感染损伤的病理学研究中有着重要的应用。
免疫组化方法的步骤一般包括标本固定、抗原检索、抗体孵育、荧光染色和结果观察等。
通过观察组织切片中荧光的分布情况和密度，可以定位和分析病毒在感染组织中的分布情况和病理学改变。
三、分子诊断分子诊断方法，如聚合酶链反应（PCR），是一种可靠和敏感的病毒感染诊断方法。
PCR能够检测病毒的核酸序列，从而确定感染状态。
PCR可以快速、准确地检测出病毒感染，并具有检测限度低、特异性强的优势。
PCR方法一般包括DNA或RNA提取、逆转录和扩增等步骤。
通过特定引物和酶的作用，PCR可以快速扩增病毒核酸片段，并通过凝胶电泳、测序等方法来分析和确认检测结果。
总结病毒感染的免疫学诊断方法，包括血清学检测、免疫组化和分子诊断等，各自具有不同的优势和适用范围。
血清学检测是常见的病毒感染诊断方法，通过测量血液中的抗体或抗原来判断感染状态。
免疫诊断方法的原理
免疫诊断方法的原理
免疫诊断方法的原理基于免疫学原理，利用抗原抗体之间的特异性免疫反应来测定免疫状态和检测各种疾病。
抗原与抗体在空间结构上具有高度互补性，能够高度识别并与之高效结合。
免疫诊断中，抗原或抗体与各种能够通过放射性、光电等原理定量的物质如放射性元素、酶、吖啶酯等相结合，然后利用抗原与抗体间的高效结合对人体内的抗体或抗原进行定量测试。
免疫诊断方法被广泛应用于检测蛋白质、激素等微量物质，以及肝炎、性病、肿瘤、代谢、心血管疾病、传染病以及优生优育诊疗等方面。
此外，在医学上，免疫诊断也是确定疾病的病因和病变部位，或是确定机体免疫状态是否正常的重要方法。
以上信息仅供参考，如果您还想了解更多内容，建议查阅相关书籍或咨询专业人士。
免疫学检测与诊断的方法和应用
新型检测技术
智能化和自动化
基于纳米技术、生物传感器等新型检测技 术的免疫学检测方法将进一步提高检测的 灵敏度和特异性。
随着人工智能和机器学习技术的发展，免 疫学检测的智能化和自动化将成为可能， 提高检测效率和准确性。
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免疫复合物检测
检测血液中循环免疫复合物的含量，反映自身免疫反应的 强度，如类风湿因子（RF）等。
组织器官特异性抗体检测
针对特定组织或器官的自身抗体进行检测，如抗甲状腺球 蛋白抗体（TGAb）、抗肾小球基底膜抗体（GBM Ab）等 。
肿瘤免疫学的检测与诊断
肿瘤标志物检测
通过检测肿瘤相关抗原 或其代谢产物，辅助肿 瘤的早期诊断、治疗监 测和预后评估，如CEA 、AFP等。
免疫学检测与诊断的方法和 应用
汇报人：XX 2024-01-16
contents
目录
• 免疫学检测与诊断概述 • 免疫学检测方法 • 免疫学诊断方法 • 免疫学检测与诊断应用实例 • 免疫学检测与诊断技术发展趋势 • 免疫学检测与诊断的挑战和前景
01
免疫学检测与诊断概述
定义与原理
免疫学检测
利用免疫学技术，通过检测抗原 、抗体等免疫分子或免疫细胞的 数量、活性或结构异常，从而对 疾病进行诊断的方法。
B细胞功能检测
检测B细胞的数量、抗体分 泌功能等，反映体液免疫 的状况。
细胞毒试验
检测免疫细胞（如NK细胞 、CTL细胞）对靶细胞的 杀伤作用，评估机体的细 胞免疫应答能力。
分子免疫诊断
基因诊断
利用PCR、基因测序等技术，检测特 定基因序列或突变，用于遗传性疾病 、肿瘤等的诊断。
蛋白质组学分析
细胞因子检测
免疫学的实际应用免疫诊断Immunodiagnosis免疫预防
抗原决定簇
亚单位疫苗
❖ 百白破三联疫苗（白喉毒素、百日咳菌苗、破伤风类毒素） ❖ 流感病毒亚单位疫苗：血凝素（HA）、神经氨酸酶 (NA) ❖ 霍乱毒素B亚单位疫苗 ❖ 多糖疫苗
肺炎球菌荚膜多糖 脑膜炎球菌荚膜多糖 流感嗜血杆菌荚膜多糖 ❖ 结合疫苗：百白破三联疫苗
合成肽疫苗
减毒活疫苗---卡介苗
法国两位科学家卡默德和介兰，共同试制成功了预防结核杆菌的人工疫苗 ，又称“卡介苗”。
牛型结核杆菌 Mycobacterium bovis
在胆汁中适应性生 长，充分减毒成为 预防肺结核的疫苗
13年 230次传代
卡介苗 Bacillus Calmette-Guerin （BCG）
减毒活疫苗品种
❖ 卡介苗（牛型结核杆菌） ❖ 鼠疫活菌苗
❖脊髓灰质炎糖丸疫苗 ❖ 麻疹活疫苗 ❖ 乙型脑炎疫苗 ❖ 甲型肝炎疫苗 ❖ 风疹疫苗 ❖ 腮腺炎疫苗
Inactivated vaccine 灭活疫苗
—— 又称死疫苗，是用理化方法将具有强感染性的病 原微生物灭活制成。
特点：诱导体液免疫，维持血清抗体水平；不诱导 细胞免疫。
Radioimmunoassay RIA
酶联免疫吸附试验 ELISA
The Cancer Antigen ELISA Kits
( Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)
Western blot
二、免疫预防
自然免疫： 机体被病原体感染； 胎儿经胎盘或新生儿经初乳从母体获得抗体。
亚单位疫苗
——去除病原体中与产生保护性抗体无关的成分，
保留有效免疫原成分制成的疫苗。
特点：不能诱发细胞免疫和黏膜免疫
免疫学在疾病诊断中的应用
免疫学在疾病诊断中的应用免疫学作为一门研究免疫系统及其功能的学科，在疾病诊断中扮演着重要角色。
免疫学的发展与进步为疾病的准确诊断提供了有力的支持，因其可对疾病相关的抗原和抗体进行检测，提供快速、敏感和特异的诊断手段。
本文将探讨免疫学在疾病诊断中的应用以及其对现代医学的意义。
一、自身免疫性疾病的诊断自身免疫性疾病是由免疫系统对自身组织和分子的异常反应引起的一类疾病，如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
免疫学通过检测抗体水平和自身抗原的存在，可以辅助诊断这些疾病。
例如，对于系统性红斑狼疮的诊断，可以通过测定患者血清中的抗核抗体，是否与典型的核抗原产生特异性反应来确认诊断。
这种特定的免疫学检测方法提高了自身免疫性疾病的准确诊断率。
二、感染性疾病的诊断免疫学在感染性疾病的诊断中有着广泛应用。
通过检测宿主体内的抗体水平，可以判断某个病原体是否感染或曾经感染过。
例如，在临床诊断流感时，可以通过测定患者血清中流感病毒抗体的存在，来确定患者是否已经感染流感病毒，从而指导临床治疗。
此外，免疫学还可用于检测疫苗接种的效果，通过血清抗体水平的测定，可以评估人体对疫苗抗原的免疫力。
三、肿瘤标记物的检测肿瘤标记物是指在肿瘤发生过程中，由于肿瘤细胞产生的特定蛋白质或其他生物分子。
通过检测这些标记物的存在和水平变化，可以辅助肿瘤的早期诊断和疾病监测。
免疫学目前是肿瘤标记物检测的主要手段之一。
例如，通过测定甲胎蛋白 (AFP)和癌胚抗原 (CEA)的水平，可以评估肝癌或结直肠癌等恶性肿瘤的疗效，并进行复发性的监测。
四、器官移植中的免疫学应用器官移植是治疗某些器官功能衰竭的有效手段，但与之伴随的问题是排斥反应。
免疫学的研究为器官移植提供了重要参考依据。
通过测定供受体之间的免疫相容性和组织相似性，可以预测移植排斥的风险及其程度。
此外，免疫学还在器官移植后的免疫抑制治疗中发挥重要作用，通过调节和抑制免疫系统，减少移植排斥反应，提高移植的成功率。
免疫学检验常用的方法
免疫学检验常用的方法
免疫学检验是临床医学中非常重要的一门学科，主要用于诊断疾病的发病机制、检测疾病的标志以及评估疾病的预后。
下面列举几种常用的免疫学检验方法: 1. 抗体检测：抗体检测是免疫学检验中最常用的方法之一。
它主要用于检测患者体内是否存在特定病原体的抗体，例如乙肝抗原抗体检测、艾滋病抗体检测等。
2. 抗原检测：抗原检测是指通过检测患者体内是否存在特定抗原来诊断疾病的方法。
例如，流感病毒抗原检测可用于诊断季节性流感。
3. 免疫荧光检测：免疫荧光检测是一种常用的免疫学检验方法。
它主要用于检测细胞内的蛋白质、抗体等分子。
例如，免疫荧光染色可用于检测宫颈鳞状细胞中 HPV 病毒的存在。
4. 聚合酶链反应 (PCR) 检测：聚合酶链反应检测是一种用于检测病原体的分子生物学方法。
它主要用于诊断病毒、细菌等病原体感染。
例如，PCR 检测可用于诊断 HIV 感染。
5. 免疫细胞检测：免疫细胞检测是一种用于评估免疫系统功能的方法。
它主要用于检测免疫细胞的数量和功能，例如，流式细胞术可用于检测免疫细胞的表型。
以上是几种常用的免疫学检验方法。
除此之外，还有免疫印迹法、生物传感器法、纳米颗粒法等先进的检测技术，这些技术不仅可以提高检测的灵敏度和特异性，还可以降低检测的成本。
免疫学诊诊断技术
胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功能, 而 不 被坏其生物活性, 可以与蛋白质等（葡萄 球菌 A蛋白、免疫球蛋白）等非共价结合, 形成胶体金标记物。
Q 色氨繁 Tryptophan
Ue SH
(a} charge (b) hydrophobic
胶体金与蛋白质的结合成功与否, 取决于pH值, 一般只
有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢固地
3 5-30分钟内观察实验结栗, 30 分钟以后观察结果无效
3.2.2结果判定圍示
条型检灞过程和结果
条型
滴液
測试
阳性
明性
累里方活
1.将试剂和待验祥本平衡至室 溫, 撕开铝箔袋, 小心取出检 測条•
2收集血濟/血浆t(X)_150ul或
3-4滴血滑在一小杯中,
3-将检测条吸收样本一端插入 小 杯内的样本中(检测条插入 样本中 的深度不可超过标志线), 同时计 时,
•体外诊断试剂分类 •胶体金技术简介 •酶联免疫 检测技术简介
-体外诊断试剂
k 1-1定义 J
体外诊断(IVD , In Vitro Diagnosis )试剂, 包 括可单独使用或与仪器、器具、设备或系统组合使 用, 在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、 健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中, 在人 体之外通过对人体的样本(如血液、体液、组织等) 进行检测而获取临床诊断倌息的产品和眼劳,包括 仪器、试剂、校准品、质控品等.原理是通过试剂 和体内物质在体外的反应强度或速度来判断体内物 质的性质和数量,通过和标准品的比较来判断人体 的生理状态。
, 切鎌
仪K参数: 进料宽度: ^100 mm 进料长度: 不限，可连续进料切割 切割宽度: mm,宽度连续可调 切割宽度设定位 数: 0.01 mm 切割精度:±0.1 mm 切割速度:230次/分钟，速度连续可调 切条计 数: 单次工作和总工作分別计数 刀片: 日本 进口，耐磨离碳钢材料 抗静电装S:建议选配 电源: 220VAC _量:20KG 尺寸: 430(L)x330(W)x260(H) mm
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一、抗原抗体结合反应的特点及影响因素 (一)抗原抗体反应的特点 1.抗原抗体反应的特异性 2.抗原抗体反应的可逆性
3.抗原抗体反应的可见性 4.抗原抗体反应的阶段性：
特异性结合阶段、肉眼可见阶段
Ag-Ab反应的可见性
Ab 过剩
Ag 过剩
比例适当，交联成网络
（二）抗原抗体反应的影响因素 1.电解质 抗原抗体（等电点pH3-5和pH5-6）
已知 待测 抗原 抗体
酶标 抗体
• 此法是测定抗体最常用的方法。
间接法
抗原或抗体的检测
双抗体夹心法: 常用于检测标本中的抗原。将已
知抗体包被在固相载体上，加入待测 标本，使其中的抗原与抗体结合，洗 去未结合的抗原，加入已知的酶标抗 体与标本中抗原结合，再洗去未结合 的酶标抗体，加入底物，底物受酶的 催化发生化学反应产生有色物质。
直接凝集反应
玻片法 试管法
1:2稀释待测血清 1:4
1:8
1:16
⑵ 间接凝集反应的应用
常用的载体颗粒：人O型血红细胞和 聚苯乙烯乳胶颗粒
应用：链球菌O抗体的检测实验; 类风湿因子的检测. Coombs试验
抗原或抗体的检测
2.沉淀反应 可溶性抗原与相应抗体结合后出现
沉淀物称沉淀反应。 ★免疫比浊法
磁性微粒子固相：直径2.8微米，粒子小，悬 液类似液相；包被面积大；磁吸引分离方便。
抗原或抗体的检测
免疫组化技术：指带显色剂（酶）标 记的特异性抗体或抗原在组织细胞原位 发生抗原抗体反应和组织化学的呈色反 应，对相应抗原或抗体进行定位、定性 、定量检测的技术。
1. 免疫组化技术
(2)免疫荧光技术 是用荧光素标记一抗或二抗，检
直接凝集 间接凝集
免疫比浊 单向免疫扩散 双向免疫扩散
免疫电泳
荧光 酶
同位素 化学发光
胶体金 免疫印迹
1.凝集反应 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应
抗体结合后形成凝集团块称凝集反应。
★直接凝集反应
★间接凝集反应
⑴直接凝集反应的作法及应用
玻片法：定性试验,主要用于细 菌与人类ABO血型的鉴定。
试管法：半定量试验.常用于检测抗 体的滴度或效价，临床诊断伤寒或 副伤寒所用的肥达氏反应和诊断布 氏菌病所用的瑞特试验
抗原或抗体的检测
3.免疫标记技术 用荧光素、酶、同位素等标记抗
体或抗原用以测定相应抗原或抗体的 技术称为免疫标记技术。 特点：敏感、特异、快速，能定性、 定量、定位。
免疫标记技术常用方法
★酶免疫测定法ELISA ★免疫荧光技术 ★放射免疫测定法 ★化学发光免疫技术 ★免疫胶体金技术
★免疫印迹法
(1)酶免疫测定法（ELISA） ： 1971年瑞典学者Engvail和Perlman-
免疫学检测技术 的基本原理
免疫学诊断
●抗原或抗体的检测 ●淋巴细胞的测定 ●免疫学检测方法的应用
目的要求
1.掌握：凝集反应、沉淀反应、免疫 标记技术的概念；凝集反应、沉淀 反应、免疫标记技术的常用方法及 实际应用.
2.熟悉：细胞免疫检测法的基本原理 及实际应用;
3.了解：其他免疫学检测方法及其应用
(3)放射免疫测定法(RIA）：是用放射性 核素标记抗原或抗体进行的免疫测定。 将同位素的敏感性与抗原抗体结合的特 异性结合起来，具有重复性好、准确性 高等优点.
用于激素、药物等微量物质的检测， 敏感性可达到pg/ml水平。常用的放射 性核素有131I和125I等。
(3)化学发光免疫技术（CLIA）： 将化学发光（如鲁米诺）分析和
★单向免疫扩散
★双向免疫扩散 ★免疫电泳
★单向免疫扩散的应用 应用：测定血清中IgG、IgM、IgA 与补体C3的含量. 缺点:1～2天才出结果。
★双向免疫扩散的应用 应用：根据沉淀线的数目和形状可
对抗原或抗体进行定性检测、组分
分析等。
★对流免疫电泳可检测： 血液中的HBsAg和AFP
★免疫比浊法主要用于： 血清蛋白及抗体成分的分析研究
待测 抗原
酶标 抗体
抗体
底物
双抗体夹心法
BAS-ELISA:可用来检测细菌、病毒、肿 瘤细胞表面抗原等。 生物素与抗生物素 有极高的亲和力，利用抗生物素为桥梁 ，联结生物素化的抗体及生物素化过氧 化物酶，可获得极高的敏感性（多级放 大系统）。
■-Ab+待测Ag+ Ab-生物素化+抗生物素（四价）+ 生物素化—E+底物
在中性或弱碱性条件下带有负电荷， 需适当浓度的电解质（如0.85%NaCl）才 会结合； 2.温度 通常为37℃ 3.酸碱度 最适pH值在6-8之间。pH值 接近等电点时，抗原抗体多带正负电 荷相等，由于自身吸引而出现凝集，
二、抗原或抗体的体外检测方法
抗原抗体反应
凝集反应
沉淀反应
蛋白芯片技 术
免疫标记
免疫反应相结合而建立的一种新的免 疫分析技术。 特点：灵敏度高、特异性强
分离简便、自动化分析。
（4）免疫胶体金技术（ICS）： 用胶体金颗粒标记抗体或抗原，
以检测未知抗原或抗体的方法称免 疫胶体金技术。
（5）免疫印迹技术
又称WesternE）分离得到的蛋白转移到固相载 体膜上，再用标记的特异性的抗血清或 单克隆抗体对蛋白质进行定性及定量分 析的技术。敏感性为1～5ng。
测特异性抗原或抗体的方法。常用的 荧光素有异硫氰酸荧光素、藻红蛋白 等.
直接荧光法：检测不同的抗原，需要不 同的特异性荧光抗体
间接荧光法：用一抗与样本中的抗原结 合，再用荧光素标记的二抗染色。此方 法既可检测抗原又可检测抗体。若查抗 原，一抗为已知的；若查抗体，抗原是 已知的。一种荧光抗体可用于多种不同 抗原的检测
nn,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别 报道将免疫技术发展为检测体液中微量 物质的固相免疫测定方法，称为酶联免 疫吸附试验。
抗原或抗体的检测
间接法: 常用于检测血清中的抗体。将已知抗
原包被于固相载体，加入待检标本，若标 本中有相应的抗体，则可与抗原结合，再 加入酶标二抗，洗涤后加底物，底物受酶 的催化发生化学反应产生有色物质。
BAS-ELISA法：敏感性更高。用于抗原、抗 体以及DNA、RNA的检测。
卵白及某些微生物中的蛋白质
抗原或抗体的检测
微粒捕获酶免疫分析技术 常用于检测肿瘤标志物(CEA、AFP)
性激素、甲状腺素（T3、T4）、HCG等微 量可溶性抗原 。将已知抗体致敏的微粒 与生物素亲和素酶放大系统结合，最后 酶作用于荧光底物，通过检测荧光强度 来判断未知抗原的含量。