细胞培养考试重点整理
植物细胞工程考试重点资料
植物细胞工程一、名词解释1、离体生殖：是指人工操纵的无菌条件下，使植物在人工培养基上生殖的技术。
2、外植体:取至生物体用于组织培养的活的生物细胞或组织切段、或用于继代培养的组织培养物均称之为外植体。
3、悬浮培养：是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。
4、互不选择：两个具有不同生理或遗传特性的亲本，在形成杂种细胞时能产生互补作用，依据这一特性进行杂种细胞选择的方法称互补选择。
5、极性：是指植物的器官、组织、甚至单个细胞在不同的轴向上存在的某种形态结构以及生理生化上的梯度差异。
它是植物细胞分化中的一个全然现象。
6、体细胞胚：离体培养下没有通过受精过程，但通过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物。
7、TE细胞：植物在系统发育中，由根和芽的原形成层或次生形成层细胞分化形成的管状细胞，它在维管系统的形成中具有中心作用。
在离体培养条件下，TE细胞由愈伤组织薄壁细胞分化形成，这也是愈伤组织细胞分化器官的前提。
8、人工种子：又称合成种子或体细胞种子，任何一种在离体培养条件下产生的生殖体，不管是在涂膜胶囊中包裹的、裸露的或通过枯燥的，只要能够发育成完整的植株。
均称之为人工种子。
9、器官发生：植物的离体器官发生是指培养条件下的组织或细胞团〔愈伤组织〕分化形成不定根、不定芽等器官的过程。
10、脱分化：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态中的过程。
11、生长素感应：生物细胞由生长素受体感受生长素信号与其结合，进而使生长素受体被活化的过程。
12、转分化：在培养条件下，具有一定分化程度的植物细胞在不通过分裂，但通过类似脱分化过程和再分化过程而转变为另一类分化细胞的过程。
13、体细胞无性系：有任何形式的细胞培养所产生的植株。
14、玻璃化冻存：是指在超低温保留生物细胞中，通过一定程序使细胞质液体转变为非晶体〔玻璃化〕的固化过程。
15、早熟萌发：幼胚接种后，离体胚不接着胚性生长，而是在培养基上迅速萌发呈幼苗，通常称之为早熟萌发。
(完整版)细胞培养技术练习题.doc
细胞培养技术练习题选择题 1.接种工具灭菌常采用（A） A. 灼烧 B. 高压 C.过滤 D.熏蒸2.具有促进愈伤组织生产的物质是（ B ） A. 维生素 PP B. 维生素 B1 C.维生素 B6 D. 甘氨酸3.微量元素母液的配制浓度（ B ） A.10 倍 B.100 倍 C.1mg/ml D.10mg/ml4.配制 10 倍大量元素母液，所需硝酸铵（ C ） mg A.9000 B.3700 C.16500 D.44005.配制 100 倍有机物母液时，所需维生素B1 ( B )mg A.0.4 B.10 C.100 D.0.16.下列哪种不是组织培养常用的维生素（ A ） A. 维生素 B 2 B. 维生素 B 1 C.维生素 B6 D.维生素 C7.下列哪种激素不属于生长素类（ C ） A.IAA B.IBA C.6-BA D.NAA8.下面哪种是MS 培养基大量元素所用药剂（A） A.硫酸镁 B.硫酸亚铁 C. 硫酸锌 D.硫酸铜填空： 1、组织块的分离方法有机械分散法、剪切分离法、消化分离法。
2、目前，较常用的消化试剂有胰蛋白酶、胶原酶、EDTA 消化液。
3、接种培养瓶的细胞数量一般为5× 105-1× 106/ml。
4、培养细胞的污染一般包括微生物污染、细胞交叉污染、化学物质的污染。
5、细胞冻存时DMSO 常用的浓度为10%的浓度。
1. 体外培养的动物细胞其生长方式主要贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁型细胞和悬浮型细胞。
体外培养的动物细胞其生长方式以贴附生长为主。
2. 贴壁生长的体外培养动物细胞，按形态来分，大体分为成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形细胞型四种类型，最常见的为前两种。
3. 细胞在体外生长时具有一些特点，其中主要是贴附生长、接触抑制和密度依赖性。
4. 培养细胞生命期可分为原代培养期、传代培养期、衰退期三个阶段。
名词解释1、原代培养：原代培养也叫初代培养，是从供体进行细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。
4细胞工程(安利国)第四章考试重点
第四章细胞培养1、培养细胞分为：贴壁型和悬浮型。
2、细胞培养培养基可分为天然培养基和合成培养基。
3、细胞培养包括原代培养和传代培养。
4、原代培养：指细胞或组织离开有机体之后的首次培养。
5、传代培养：培养细胞生长到一定密度后就需要更换新的培养液，这就是细胞的传代培养。
细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的过程称之为传代或再培养。
6、细胞培养的基本方法有：悬滴培养法、培养瓶培养法、旋转管培养法。
7、常用培养技术有：二倍体培养、克隆培养、同步化培养、大规模培养。
8、原代培养的细胞一经传代就称之为细胞系，是一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。
细胞系经过进一步的克隆化，便得到由单一细胞组成的细胞群体称之为细胞株。
9、动物的细胞与组织培养是从动物体内取出组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、适温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术。
10、1907年Harrison采用淋巴液做培养基，培养蛙胚神经组织生活了数周，并观察到神经细胞突起的生长过程，创立了在体外观察和研究活组织的方法。
1912年Carrel发现鸡胚胎抽取液有促进细胞生长的作用。
11、贴附包括细胞与细胞之间的相互接触和细胞与细胞外基质之间的相互接触两种方式。
12、根据体外培养细胞在支持物上贴附生长时的形态，大致分为如下四种类型：上皮细胞型、成纤维细胞型、游走细胞型、多形型细胞。
13、培养细胞的生长特点：贴附、接触抑制（由细胞接触而抑制细胞运动的现象，是区别正常细胞与癌细胞标志之一）密度抑制。
14、细胞周期：指一个母细胞分裂结束后形成的细胞至下一次再分裂结束形成两个子细胞的时期，可分为G1期、S期、G2期和M期。
15、细胞系生长阶段包括：原代培养期（指从体内取出组织接种培养到第一次传代的阶段）、传代期（将原代细胞分开至多个新的培养瓶中，这个过程叫传代）、衰退期（转化的标志之一是细胞获得永久性增殖能力，成为连续细胞系）16、每代细胞一般要经过三个生长阶段：（1）潜伏期、（2）指数生长期、（3）停止期。
细胞工程考试总结
细胞工程考试总结细胞工程是近年来兴起的一个研究领域，其涉及分子生物学、细胞生物学、生物化工等多个学科的交叉与融合。
细胞工程在医药、食品、能源等领域有着广泛的应用。
考试是检验学习成果的一个重要方式，通过总结细胞工程考试可以更好地发现自己的不足，提高学习水平。
一、考试形式细胞工程考试通常采用笔试形式，试卷包括选择题、填空题和简答题。
选择题占比较大，通常是单选题和多选题，试题涵盖了细胞工程的基本概念、实验技术和应用等方面。
填空题考察对实验数据的分析和理解能力，而简答题则需要考生掌握基本理论知识并能够结合实际进行分析和解决问题。
二、考试知识点1. 细胞基础知识：细胞生物学基础知识、细胞培养、细胞的生理和代谢等方面。
2. 分子生物学：DNA结构与功能、基因调控、基因克隆等。
3. 技术与方法：基因工程、PCR、蛋白质纯化、细胞流式分析等。
4. 细胞工程应用：生物药物、生物制品、生物能源等。
三、注意事项1. 模拟考试：在考试前可以进行模拟考试，模拟考试可以让我们更好地感受到考试的难度，同时也可以预测自己的得分情况，对知识掌握情况有一个比较清晰的了解。
2. 补充知识：细胞工程的内容比较广泛，考试可能会涉及到一些我们没学过或者没有掌握的知识，那么考试之前需要对一些基础知识进行巩固，同时也可以通过阅读相关的文献、视频或者向老师请教等方式来补充知识。
3. 做好笔记：在学习过程中，应尽可能的记录下自己的笔记，对于一些重要的知识点、公式、实验名称等也要做好标注，这有助于我们在考试时快速找到相关知识点，减少遗漏。
4. 做好时间规划：在考试时，应该根据试卷题目难易程度、所占分值大小、自己的掌握程度来做好时间规划，尽可能地把握好答题时间，并避免在最后没有时间答题的情况出现。
总之，细胞工程考试虽然难度较大，但只要我们掌握好基本知识并紧密结合实践，认真备考，制定好合理的考试策略，突破自我，就可以取得优良的成绩。
细胞组织培养重点
体外培养包括组织培养、细胞培养、器官培养Tissue culture:从体内取出组织摹拟体内的生理环境，在无菌、适当温度、和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。
细胞培养：培养物是单个细胞或细胞群。
细胞在培养时都要生活在人工环境中，由于环境的改变，细胞的移动或受一些其他因素的影响，培养时间加长，传代导致细胞出现单一化型。
器官培养：与组织培养条件相似，培养的是器官的原基，器官的一部分或整个器官，以便能够在体外生存、生长和保持一定功能的方法体内外细胞分化的差异：“反祖”（Atavism)现象：细胞失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱或不显；表现为细胞趋于单一化，或获得永生性，或变成具有恶性性状的细胞群。
不适应（deadaption) 细胞在原体内时所拥有的分化特征减弱或不显。
（培养的肝细胞酪氨酸转移酶特性丧失）。
生存条件改变使分化阻抑。
脱分化或去分化：细胞失掉发生分化的能力（培养的肝细胞失掉产生精氨酸酶、氨基转移酶等特性后，则失去储存肝糖原能力）。
是基因突变所致培养细胞在体外生存时间与其分化能力呈反向关系。
细胞分化的关键在于是否存在有诱导细胞发生分化的因子原代培养（primary Culture) 从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段。
细胞群是异质的，细胞相互依赖性强。
细胞独立生存性差。
传代培养：当细胞增殖达到一定密度后，需要分离出一部分细胞和更新培养液，继续接种进行培养。
这一过程称为传代。
否则将影响细胞的继续生存。
组织培养细胞生命期：原代培养期传代期衰退期细胞系（cell line)：初代培养细胞一经传代后，称做细胞系。
无限细胞系：细胞获永久性增殖能力。
核型大多变成异倍体。
克隆形成率（Cloning Efficiency)：细胞被稀释分散成单个细胞进行培养时，形成细胞小群（克隆）的百分数。
克隆细胞株:从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群冻存配方：向培养液中加入DMSO或甘油，封与安瓶，存于温度达-196℃液氮中长期储存连续细胞系：获得持久性增殖能力的细胞群体。
细胞培养技术题库
细胞培养技术题库细胞培养技术准备⼯作常⽤设备准备室的设备：单蒸馏⽔蒸馏器、双蒸馏⽔蒸馏器、酸缸、烤箱、⾼压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭⼒天平和电⼦天平（称量药品）、PH计（测量培养⽤液PH值）、磁⼒搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、⽇光灯和紫外灯、空⽓净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、⼆氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在⽆菌间的设备：离⼼机（收集细胞）、超净⼯作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、⽔浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养⽤液）。
⽆菌操作⽆菌室的灭菌：1.定期打扫⽆菌室：每周打扫⼀次，先⽤⾃来⽔拖地、擦桌⼦、超净⼯作台等，然后⽤3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧⼄酸擦拭。
2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先⽤3‰新洁尔灭擦拭，然后⽤75％酒精擦拭或者0.5％过氧⼄酸，再⽤紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空⽓净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：⽤75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验⼈员的⽆菌准备：1.肥皂洗⼿。
2.穿好隔离⾐、带好隔离帽、⼝罩、放好拖鞋3.⽤75％酒精棉球擦净双⼿。
⽆菌操作的演⽰：1.凡是带⼊超净⼯作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋⽩酶的瓶⼦均要⽤75％酒精擦拭瓶⼦的外表⾯2.靠近酒精灯⽕焰操作。
3.器⽫使⽤前必须过⽕灭菌4.继续使⽤的器⽫（如瓶盖、滴管）要放在⾼处，使⽤时仍要过⽕。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使⽤液时要注意更换吸管，防⽌交叉污染。
器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：⼀、新的玻璃器⽫的洗消：1.⾃来⽔刷洗，除去灰尘。
2.烘⼲、泡盐酸：烤箱中烘⼲，然后再浸⼊5％稀盐酸中12⼩时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘⼲：12⼩时后⽴即⽤⾃来⽔冲洗，再⽤洗涤剂刷洗，⾃来⽔冲⼲净后⽤烤箱烘⼲。
细胞培养重点
4细胞培养研究的内容
⑴ 细胞内的活动：例如，能量的代谢、DNA转录、凋亡、蛋白质合成等。
⑵细胞内部与细胞外界之间的作用：例如， 细胞对外界刺激的反应、药物对细胞的作用、细胞内产物的分泌等
⑶细胞与细胞之间的相互作用：例如，形态的改变、细胞与细胞之间的粘着作用、接触抑制、密度抑制等。
1体外培养（in vitro culture）：是将活体结构成分或活的个体从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。
体外培养的三个层次：细胞培养，组织培养，器官培养
2细胞培养(Cell Culture)：是指从活体中取出小块组织分离出细胞，在一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、增殖的一种方法。
（2）培养室和超净工作台的消毒
（3）洗手和着装：原则上须彻底洗手并按外科手术要求着装
（4）无菌培养操作
18无菌室的消毒：①紫外线照射1-2h /日（使用前）；
②甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸2h / 周；
③新洁尔灭擦拭地面和墙壁1次 / 月。
实际工作中，要根据无菌室建筑材料的差异来选择合适的消毒方法。
（2) 成纤维细胞型：细胞的形态类似于在体内生长的成纤维细胞。
A, 来源 ：凡由中胚层的组织细胞，如纤维结缔组织、心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。
B,细胞形态：成纤维细胞形态为，具有长短不等的数个细胞突起，因而多成梭形、不规则三角形或扇形，核为卵圆形位于靠近胞质的中央。
C，细胞生长特点：细胞一般并不紧靠相连成片，而是排列为旋涡状、放射状或似栅栏状。
⑶无菌操作间 — 专用于无菌操作、细胞培养
①大小要适当，其顶部不宜过高（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌效果；②墙壁光滑无死角以便清洁和消毒；
细胞培养考试重点整理 南方医科大学
细胞培养cell culture:从活体中取出细胞活其它建系细胞，在体外使之能继续生存﹑生长甚至增值的一种方法。
细胞融合：指两个或两个以上的细胞合并成为双核或多核细胞的过程。
细胞系cell line:原代培养物经首次传代成功后形成的。
细胞株cell strain:通过筛选或克隆化，具有特殊性质或特异标记的细胞且这些特异在以后的培养中必须持续存在。
原代培养primary culture:从机体取得材料细胞组织或器官，在培养瓶内培养到第一次传代前，即为原代培养或初代培养。
传代培养passage:将细胞从一个培养瓶容器移植到另一培养容器中培养。
贴壁依赖性：细胞培养过程中的特性，有大部分细胞在生长过程中都是贴壁生长的就是要附着在培养用的器皿上。
细胞对培养用器皿的附着能里的不同就是细胞贴壁性能代表了细胞的活力。
贴壁率seeding effifiency:在一定时间内，接种细胞贴附于培养器皿表面的百分率，但应当说明培养时的培养条件。
体外转化in vitro transformation:细胞在体外培养过程上中发生与原代细胞形态﹑抗原﹑增殖或其他特性的可遗传的变化。
细胞周期：细胞每一次增殖所经历的全过程称为细胞的增殖周期，理论上，细胞每经过一个增值周期，在数量上就增加一倍。
1.细胞冻存与复苏的原则？慢冻快融，以最大限度的保存细胞活力。
慢冻，主要是防止细胞在冷冻过程中形成冰晶，对细胞造成损害，加DMSO也是这个原理。
快融。
主要是防止DMSO在液体状态下对细胞的毒害作用，快速使细胞进入复苏和生长状态。
分别经过4度，-20度，-80度和液氮的依次过程进行冻存；经过37度水浴1分钟之内解冻细胞冻存液进行复苏。
2. 玻璃器皿的清洗（新买的和用过的）玻璃器材清洗要领有煮沸﹑刷洗﹑冲洗﹑酸泡和浸泡步骤如下a.刷洗：热水浸泡过用软毛刷带热刷洗瓶内外和盖子使用面；b.冲洗：流水振荡冲洗15-20次；c酸泡：器材50度烤干后清洁液（高锰酸钾﹑重铬酸钾﹑去离子水）酸泡24h；d.浸泡：酸泡器材冲洗沥水后用去离子水浸泡2次每次24h。
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（2）机械划除法
原代培养成功后，上皮细胞和成纤维细胞混杂生长，常常分区成片，每种细胞都以小片或区域性分布的方式生长在瓶壁上。
因此可以采用机械刮除的方法去除不需要的细胞。
（3）反复贴壁法
成纤维细胞贴壁过程快（10-30min），而上皮细胞大部分在短时间内不能附着或附着不稳定，稍加振荡即浮起，这样可以利用此差别来纯化细胞。
（4）克隆法
采用细胞克隆法将细胞分成单个细胞，使之分别生长成克隆，选择出所需要的克隆。
（5）培养及限定方法
某些细胞在生长过程中必须存在或去除某种物质，否则无法生长，可以利用这种技术来纯化细胞。
如选用不含血小板生长因子的无血清培养基可去除表皮细胞中的成纤维细胞。
（6）流式分选
⑥亦可用全皮消化法或组织块培养法培养，但表皮细胞和成纤维细胞混合生长，难以纯化。
⑦表皮细胞采用角蛋白的特异性抗体鉴定。
1．根据导入基因不同分为：
（1）染色体基因转导：利用细胞融合或显微注射法将带有目的基因的染色体或染色体片段，整合入受体细胞内的技术。
（2）基因转导：是把已克隆的基因、含有目的基因的DNA片段或序列等导入受体细胞基因组中的技术。
2.根据受体细胞不同，基因转导分为：
（1）基因转染（Gene Transfection）：
●将基因导入体外培养细胞中，观察目的基因在体外细胞中的表达。
●取出体内二倍体细胞导入基因后，再输回体内。
（2）转基因技术（Transgenic Technique）：
受体细胞是受精卵，向受精卵导入目的基因后，再置入宿主动物子宫，发育成个体；可在胚胎期检测基因表达，也可于生后再进一步观察目的基因在整体水平内的表达。
该动物称为转基因动物。
3．从基因表达的持续性上可分为；
（1）稳定表达：导入的基因整合入受体细胞基因组中，能长期表达，对这类表达的检测，需借助于筛选标记（如抗neo Gene）才能测知。
（2）瞬时表达：在基因转移后一周内即可观察到基因表达现象，但不持久，随时间推移表达逐渐减弱或消失。
（未整合？）。