Hela细胞传代培养
Hela细胞转染实验报告
Hela细胞的传代培养及生长周期观察HE染色观察高学敏生36 2013012322一、实验背景（一）关于Hela细胞Hela细胞是源自美国妇女Henrietta Lacks的子宫颈癌细胞，取于1951年，属于增殖型表皮癌细胞。
在体外培养条件下，经过筛选，目前实验使用的Hela 细胞为无限细胞系，在适宜条件下可以无限分裂，不会衰退，可以连续传代。
经过六十多年，Hela细胞已经被培养出多个细胞系，它几乎成为细胞生物学中的一种“模式生物”。
似癌细胞的特征，其核型已非二倍体型，而是非整数倍体（aneuploid）。
2013年Andrew Adey等人在Nature发表的研究表明，Hela细胞的基因组相当稳定，可将不同细胞系区分开的点突变和基因拷贝数改变相当少1，这是Hela细胞的一大特点。
（二）原代培养、传代培养、衰退进行细胞体外培养前，最初需要从活体中获得细胞。
从体内获得细胞进行的首次培养为原代培养。
当原代培养细胞增殖达到一定密度后，需要做继代培养，被称为传代培养。
细胞在体外培养过程中的群体生存状况与在完整机体内的生存与衰老死亡基本一致；本次所做的Hela细胞实验为Hela细胞传代实验，即将已长到相当密度的原培养皿中的Hela细胞转移至新培养皿中培养。
在原代培养期，细胞增殖能力弱，第一次传代后，部分细胞可以重新贴壁，此时细胞增殖能力增强；另外亦是为了获得更多的细胞，因此进行传代操作。
培养的组织细胞在体外可以反复传代十几次左右，若传代十几次后细胞进入衰退阶段并死亡，则该细胞系称为有限细胞系；若在衰退阶段，部分细胞的遗传特性发生改变，可以无限传代，则该部分细胞将发展为无限细胞系。
Hela 细胞系即为无限细胞系，已历经六十多年的传代培养。
（三）贴附型细胞与悬浮型细胞在体外培养时，根据细胞能否贴附于支持物上分为贴附型细胞和悬浮型细胞两类。
大多数细胞系属于贴附型细胞，血液中的白细胞和某些癌细胞属于悬浮型细胞。
Hela细胞属于贴附型细胞，它需要贴附于支持物上才可能存活并增殖。
细胞传代培养实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞传代培养的基本操作流程。
2. 熟悉细胞传代培养过程中的注意事项。
3. 了解细胞传代培养在生物科学研究中的应用。
二、实验原理细胞传代培养是指将已经生长到一定阶段的细胞，通过特定的方法进行分离、洗涤、消化、计数和稀释等步骤，将细胞转移到新的培养容器中继续培养的过程。
细胞传代培养是维持细胞生长、扩大细胞数量和保持细胞特性的重要手段。
三、实验材料1. 细胞：HeLa细胞2. 培养基：DMEM/F12培养基（含10%胎牛血清）3. 试剂：0.25%胰蛋白酶、10%FBS、PBS缓冲液、酒精4. 仪器：超净工作台、倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、移液枪、培养瓶/皿、吸管等四、实验步骤1. 准备阶段（1）将HeLa细胞从培养瓶中取出，用PBS缓冲液轻轻洗涤一次，去除残留的培养基。
（2）准备胰蛋白酶工作液，将其置于37℃水浴中预热。
（3）准备含有10%FBS的培养基，将其置于37℃水浴中预热。
2. 分离细胞（1）用移液枪吸取适量胰蛋白酶工作液，滴加到细胞培养皿中的细胞层上。
（2）将培养皿置于37℃、5%CO2的培养箱中消化2-3分钟。
（3）倒置显微镜下观察细胞，当大部分细胞变圆且亮时，加入等体积含有10%FBS的培养基终止消化。
（4）用移液枪轻轻吹打细胞，使其成为细胞悬液。
3. 计数（1）取适量细胞悬液，使用细胞计数仪或显微镜配合琼脂滴定法计数。
（2）根据计数结果，调整细胞密度至所需的浓度，一般为每毫升105-106个细胞。
4. 传代（1）向含有预热的培养基的离心管中加入细胞悬液，并轻轻混匀。
（2）离心管离心，在1500 rpm速度下离心3-5分钟，以沉淀细胞。
（3）弃去上清液，保留沉淀的细胞。
（4）加入适量的新鲜培养基，将细胞重新悬浮。
（5）将细胞悬液转移到新的培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
五、实验结果1. 成功完成细胞传代培养，观察到细胞在新的培养瓶中继续生长。
2. 细胞生长状态良好，细胞密度符合预期。
细胞培养(hela, 293,239T等细胞的培养)
Hela细胞传代培养操作步骤1．观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。
观察时拧紧盖子。
2．加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。
3．打开超净台（先开风机，后开照明），用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。
不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。
取小离心管一个，置于架子上。
4．取尖吸管、吸量管各一支，放置在专用的架上。
放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。
5．取待传代的细胞。
打开versene，用酒精灯外焰烧。
烧吸管时距离酒精灯心远些，不要把渣滓带进去。
把试剂拿入台子的时候，尽量平稳，不要让试剂碰到瓶口。
6．用吸量管吸取旧的培养基，置离心管中，吸量管加入versene，然后将versene瓶收起来。
（加versene 主要是为了将旧培养基洗去）。
在离心管中间部分将液体加入。
吸液体和加液体时都不要对着细胞。
7．打开胰酶，然后将versene弃掉。
换新管，用尖吸管吸取适量胰酶加入。
加胰酶后，尽快放平，使细胞消化时间一致。
8．将细胞放入37度孵箱。
放孵箱2min, 收胰酶，打开PBS. 之后拿出来镜下随时观察。
使用二次消化法，去除容器中残余的细胞。
别忘了用旧培养基中和。
9．取细胞，镜下观察消化情况。
消化程度合适之后（细胞变圆，但不漂起），用尖吸管弃去胰酶，取离心管中的培养基加入细胞，吹打，至所有细胞从培养皿底部脱落下来。
用PBS洗细胞，versene对细胞有毒性，且不能被血清中和。
然后吸取至离心管中，800 rpm离心5分钟。
10．吸量管吸取适量培养基加入新的培养皿中。
11．细胞离心毕，用吸新培养基的管弃去上清，先把泡沫吸走。
换吸量管吸取培养皿中培养基适量，加入离心管，小体积混匀，将细胞重悬，尖吸管吹匀。
12．擦计数板，用枪吸10ul的液体，计数。
不要把枪伸到离心管内。
13．吸量管吸取细胞悬液，加入新的培养皿中。
《Hela细胞传代培养》课件
细胞数过低
细胞数量太少，可能是由于接 种量太少、营养不足或培养时 间太长等原因导致。可以通过 增加细胞数或更改营养物质来 解决此问题。
将细胞冻存存储，需要在恰当的时机进行复苏。
2 细胞的染色体分析技术
可以使用荧光原位杂交法、karyotyping和CGH等技术来分析细胞的染色体。
3 病毒感染实验技巧
可用于研究病毒的生物学特性、宿主针对病毒的反应等多个方面。
Hela细胞传代培养的应用领域
癌症研究
• 研究癌细胞 • 开发新的抗癌药物 • 探究癌症的发病机制
基因工程
• 研究基因功能 • 进行基因编辑实验 • 疾病的基因诊断和治疗
药物筛选
• 筛选对癌症具有杀伤 力的药物
• 筛选开发新药物的唯 一模型
• 提高药物筛选效率
总结和展望
总结
Hela细胞作为医学研究中最常见的细胞类型 之一，被广泛应用于生命科学领域。
展望
随着技术水平的不断提高，Hela细胞在人类 疾病研究、药物开发等领域的应用前景将广 阔且具有无限潜力。
《Hela细胞传代培养》 PPT课件
欢迎来听我的《Hela细胞传代培养》课程。本课程将会涵盖Hela细胞的来源 和特点，以及传代培养过程、应用领域、实验技巧和常见问题等。
Hela细胞的来源和特点
来源
Hela细胞是从美国Henrietta Lacks的宫颈癌细胞中分离出来的。这些细胞于1951年首次分 离出来，并被广泛应用于医学领域。
特点
Hela细胞具有很高的无限分裂能力和稳定的染色体组成，是许多细胞与分子生物学研究的 理想材料。
应用
这些细胞在癌症、病毒学、基因工程、药物筛选等领域都得到了广泛的应用。
《2024年HeLa细胞长期传代过程中基因组突变动态变化》范文
《HeLa细胞长期传代过程中基因组突变动态变化》篇一一、引言HeLa细胞，作为一种人类宫颈癌细胞系，因其易于培养、繁殖迅速和遗传稳定性等特点，在生物学、医学和遗传学等领域得到了广泛的应用。
然而，随着传代次数的增加，HeLa细胞的基因组会发生突变，这对其生物学特性和应用价值产生了深远的影响。
本文旨在探讨HeLa细胞在长期传代过程中基因组突变的动态变化。
二、材料与方法1. 细胞系与传代本实验采用HeLa细胞系，在标准实验室条件下进行长期传代。
每次传代均严格按照细胞培养的规范操作。
2. 基因组突变检测采用全基因组测序技术，对不同传代次数的HeLa细胞进行基因组突变检测。
3. 数据处理与分析将测序数据导入生物信息学软件，进行数据清洗、比对和突变分析。
三、结果1. 基因组突变类型与数量随着传代次数的增加，HeLa细胞的基因组突变类型和数量均有所增加。
其中，点突变、插入/删除突变和染色体结构变异是主要的突变类型。
2. 突变动态变化在长期传代过程中，HeLa细胞的基因组突变呈现出动态变化的特点。
早期传代时，突变数量较少，类型单一；随着传代次数的增加，突变数量逐渐增多，类型也变得更加复杂。
3. 关键基因突变部分关键基因在传代过程中发生了突变，如肿瘤相关基因、细胞周期调控基因和DNA修复基因等。
这些突变可能影响了HeLa细胞的生物学特性和行为。
四、讨论1. 基因组突变对HeLa细胞的影响基因组突变可能导致HeLa细胞的生物学特性发生改变，如增殖能力、侵袭性和耐药性等。
这些改变可能使HeLa细胞更适合在体外环境下生长和繁殖，从而提高了其在生物学、医学和遗传学等领域的应用价值。
2. 关键基因突变的意义关键基因的突变可能对HeLa细胞的生长、分化和功能产生重要影响。
例如，肿瘤相关基因的突变可能使HeLa细胞具有更强的增殖能力和侵袭性；细胞周期调控基因的突变可能导致细胞周期失控，从而加速细胞的增殖；DNA修复基因的突变可能影响细胞的DNA修复能力，进一步促进基因组的不稳定性。
细胞生物学实验Hela细胞培养
培养基
培养基是维持体外细胞生存和生长的溶液，包括天然培养基和合成 培养基。 天然培养基有血清、血浆和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好。 缺点：来源受限，成分复杂，存在批次的差异，影响对某些实验产 物的提取和实验结果的分析，容易发生支原体污染。 合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模 拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如TC199、MEM、RPMI1640、 DMEM等。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其 它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定。成本低。 缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。
潜伏期：
此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期 一般为6～24小时。
对数生长期：
细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行 实验研究。
停止期（平台期）：
细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度依赖性
细胞生物学实验Hela细胞培养
新传代的NRK细胞（大鼠肾细胞） 传代后24小时
对数生长期的NRK细胞 传代后三天
早平台期的NRK细胞 传代后7天
细胞生物学实验Hela细胞培养
贴附生长细胞的生长过程
106
细胞数/毫升
无限细胞系
105
有限细胞系
接种培养
104
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
天
潜伏期
指数增生期
平台期
细胞生物学实验Hela细胞培养
培养细胞生长的条件
细胞生物学实验Hela细胞培养
CLASS II 细胞生物学实验Hela细胞培养
细胞培养(hela, 293,239T等细胞的培养)
Hela细胞传代培养操作步骤1．观察培养基是否正常，细胞状态如何，细胞密度如何，决定是否传代。
观察时拧紧盖子。
2．加热PBS、versene、培养基，(提前做好) 瓶子不要倒着放，不要让液体接触到瓶塞。
3．打开超净台（先开风机，后开照明），用75%乙醇清洁台面，点燃酒精灯。
不要把废液缸拿出去倒，如果废液太多，可以用其他容器先装废液。
取小离心管一个，置于架子上。
4．取尖吸管、吸量管各一支，放置在专用的架上。
放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要与架子接触。
5．取待传代的细胞。
打开versene，用酒精灯外焰烧。
烧吸管时距离酒精灯心远些，不要把渣滓带进去。
把试剂拿入台子的时候，尽量平稳，不要让试剂碰到瓶口。
6．用吸量管吸取旧的培养基，置离心管中，吸量管加入versene，然后将versene瓶收起来。
（加versene 主要是为了将旧培养基洗去）。
在离心管中间部分将液体加入。
吸液体和加液体时都不要对着细胞。
7．打开胰酶，然后将versene弃掉。
换新管，用尖吸管吸取适量胰酶加入。
加胰酶后，尽快放平，使细胞消化时间一致。
8．将细胞放入37度孵箱。
放孵箱2min, 收胰酶，打开PBS. 之后拿出来镜下随时观察。
使用二次消化法，去除容器中残余的细胞。
别忘了用旧培养基中和。
9．取细胞，镜下观察消化情况。
消化程度合适之后（细胞变圆，但不漂起），用尖吸管弃去胰酶，取离心管中的培养基加入细胞，吹打，至所有细胞从培养皿底部脱落下来。
用PBS洗细胞，versene对细胞有毒性，且不能被血清中和。
然后吸取至离心管中，800 rpm离心5分钟。
10．吸量管吸取适量培养基加入新的培养皿中。
11．细胞离心毕，用吸新培养基的管弃去上清，先把泡沫吸走。
换吸量管吸取培养皿中培养基适量，加入离心管，小体积混匀，将细胞重悬，尖吸管吹匀。
12．擦计数板，用枪吸10ul的液体，计数。
不要把枪伸到离心管内。
13．吸量管吸取细胞悬液，加入新的培养皿中。
Hela细胞的传代培养
利用Hela细胞进行药物筛选和毒性测试，评估药物对肿瘤细胞的抑 制作用和安全性。
肿瘤免疫治疗研究
利用Hela细胞研究肿瘤免疫应答机制，为肿瘤免疫治疗提供新的策 略和靶点。
基因治疗与细胞治疗
利用Hela细胞作为载体或靶细胞，开展基因治疗和细胞治疗的研究， 为遗传性疾病和肿瘤等疾病的治疗提供新途径。
Hela细胞的传代培养
目录
• 引言 • Hela细胞的传代培养过程 • Hela细胞传代培养的注意事项 • Hela细胞传代培养的应用 • 未来展望
01 引言
背景介绍
01
Hela细胞，也称为海拉细胞，是 一种源自子宫颈癌的细胞系，是 医学和生物学研究中广泛使用的 细胞模型。
02
Hela细胞的传代培养是维持其生 长和活性的重要手段，对于研究 癌症、病毒、药物筛选等领域具 有重要意义。
记录细胞生长曲线
通过绘制细胞生长曲线，了解细胞的生长规律和倍增时间。
观察异常情况
如发现细胞出现死亡、变形、颜色变化等异常情况，应及时采取 措施处理。
04 Hela细胞传代培养的应用
生物学研究
细胞生物学
Hela细胞是研究细胞增殖、分化、凋亡等基本生物学过程的良好模型，有助于深入了 解细胞生命活动的机制。
细胞培养环境的维持
温度
细胞生长需要稳定的温度环境，一般维持在37°C。
湿度
湿度过高会导致细菌滋生，湿度过低则会导致细胞干燥。
气体环境
细胞培养瓶内的气体环境需保持95%空气(细胞代谢必需的)和5% 的${CO}_{2}($维持培养基的酸碱度)。
细胞的观察与记录
观察细胞的生长状态
通过显微镜观察细胞的形态、密度和生长速度，判断细胞的生长 状态。
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合成培养基
合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用 人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如 TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、 无机盐和其它一些辅助物质。
4ml
D-Hanks工作液试剂配方
D-Hanks原液 100ml 三蒸水 896ml 0.5% 酚红液 4ml
消化液：
胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞
间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。
胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限度会损伤细
胞。
胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无Ca2+、Mg2+的PBS缓冲液配
原代培养 取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长 的细胞在传代之前称为原代培养。
培养细胞的特性
贴附生长：必须贴附于支持物表面才能生 长。见于各种实体瘤细胞。
悬浮生长： 于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持
物表面。见于各种造血系统肿瘤细胞。
每代贴附生长细胞的生长过程
游离期 贴壁期 潜伏期 对数生长期 停止期（平台期）
液后再混匀传代。
直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除l／ 2一2／3，用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。
2.悬浮生长细胞传代（Hela细胞） 此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可用直接 吹打法使纫胞从瓶壁脱落下来，进行传代。
3.贴壁生长细胞传代 采用酶消化法传代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。
制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25％ 。用滤器过滤除菌。
胰蛋白酶液消化时间：2-10分钟。
用含血清培养液终止其对细胞的消化作用
培养基
培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基和 合成培养基。
天然培养基： 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限。
1 细胞的营养需要
2 细胞的生存环境
温度: 37 ℃
O2
CO2: 5%
CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCO3-
pH: 7.2-7.4
渗透压
3 无污染
4 无毒
CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5 ％CO2 。
使用CO2培养箱培养细胞时应注意 的问题：
Hela细胞传代培养
实验目的：掌握动物细胞培养的基本原理 和方法。
实验用具：离心管（2支），移液枪（每个 台面一把），枪头（每个台面一盒），吸 管（4根），培养皿（每组2个）
实验药品：0.25％胰酶，D－Hanks，1640 培养基
培养板Biblioteka 常用玻璃器皿清洗 浸泡（自来水）、刷洗（洗衣粉）、酸泡（24小时）、 流水冲洗、蒸溜水浸泡和冲洗、50℃烘干
配配 方制
剂的
细 胞 培 养 用 液
2
原 液 试
D-Hanks
蒸三酸磷化氯）酸磷化氯 水二钾 氢钠
氢二 钾钠
（
80.0g Na HPO ·2H
O 0.6g 4.0g 0.6g 1000ml
配 方
剂
工 作 液 试
D-Hanks
三 蒸 液红酚 水 液 原
D-Hanks 100ml
896ml
0.5%
一般说来．含5％小牛血清的培养基对大多数细胞可以维持细胞 不死．但支持细胞生长一般需加 10％血清．
对于血清支持细因生长的生物学效应已得到证明，但对血清中的 复杂成分至今尚未完全清楚．
血清中不仅存在促细胞生长因子，同对也存在细胞生长抑制因子 或毒性因子，因此在含血清培养基中培养的细胞所反映的生物学 特性是细胞和复杂血清因子的综合反应。
在生长因子、蛋白质工程、基因表达调控等研究领域，迫切需要 用无血清培养基培养细胞．
无血清培养基的主要研制策略：在基础培养基中补充各种必需因 子，如激素、生长因子 、结合蛋白 、贴壁和扩展因子 等。
无血清培养基由基础培养基和替代血清的补充成分组成。
1975年，Sato首次成功地用无血清培养基培养了垂体细胞株，近 20多年来已报道了几十种细胞系在无血清培养基中成功地生长和 增殖。
①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶 盖微松，以保证通气。
②保持培养箱内空气干净。定期消毒
（90 ℃ ，14 h)。
③箱内灭菌蒸馏水3000毫升蒸馏水 槽中以保持箱内湿度，避兔培养液蒸 发。
细胞传代方法
根据细胞生长的恃点，传代方法有3种 1悬浮生长细胞传代
离心法传代：离心（1000转/分）去上清，沉淀物加新培养
进口塑料培养瓶涂有生长基质（化学合成的功能基团）
潜伏期
此时细胞有生长话动，而无细胞分裂。细胞株潜伏 期一般为6～24小时。
对数生长期：
细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进 行实验研究。
停止期（平台期） 细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂 机制：接触抑制、密度依赖性
培养细胞生长的条件
游离期
细胞接种后在培养液中呈悬浮 状态．也 称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球 形。
10分钟一4小时
贴壁期
细胞附着于底物上，游离期 结束。细胞株平均在10分 钟一4小时贴壁。
血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原 等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促 贴壁因子先吸附于底物上，悬浮细胞再与吸附有促贴 壁因子的附着。
清洁液的配制
HeLa 是Henrietta Lacks的简称，Henrietta Lacks 是一位患有子宫颈癌的美国妇女的名 字，在她死后，该细胞走被广泛散发到各 研究机构，并无限次地繁殖分裂下去。
细胞培养的甚本概念
传代 细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分 开接种到新的培养器皿中。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定。 成本低
缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需 要。
人工合成培养基只能维持细胞生存， 要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量 的天然培养基（如血清）。
血清中含有：
①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子 ③激素； ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分