苏教版生物选修1第二节制备和应用固定化酶
选修一：考点4：制备和应用酶的固定化技术【学习目标】1．说出固定化酶概念和方法(A) 2．制备固定化酵母细胞(B)【知识梳理】（一）课题背景酶：优点：催化效率高，低耗能、低污染，大规模地应用于食品、化工等各个领域。
实际问题：对环境条件敏感，易失活；溶液中的酶很难回收，不能再次利用，提高了生产成本；反应后的酶会混合在产物中，如不除去，会影响产品质量。
设想：能否有一种方法使酶发挥它的优点，而没有这些缺点？固定化酶：优点：容易与水溶性反应物和生成物分离，可被反复使用实际问题：一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都是通过一系列的酶促反应才能得到的设想：细胞中有多种酶，能否用固定化酶类似的技术来处理细胞？固定化细胞：优点：成本低，操作更容易（二）、固定化酶的应用实例高果糖浆是指果糖含量为42%的糖浆能将葡萄糖转化为果糖的酶是葡萄糖异构酶。
使用固定化酶技术，将这种酶固定在一种颗粒状的载体上，再将这些酶颗粒装到一个反应柱内，柱子底端装上分布着许多小孔的筛板。
酶颗粒无法通过筛板的小孔，而反应溶液却可以自由出入。
生产过程中，将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入，使葡萄糖溶液流过反应柱，与接触，转化成果糖，从反应柱的下端流出。
反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本，提高了果糖的产量和质量。
（三）、固定化细胞技术固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。
一般来说，酶更适合采用化学结合法和物理吸附法固定，而细胞多采用包埋法固定化。
这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的难以被化学结合或吸附，而个小的酶容易从包埋料中漏出。
包埋法固定化细胞即将微生物细胞均匀包埋在不溶于水的多孔性载体中。
常用的载体有明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。
〖思考1〗对固定酶的作用影响较小的固定方法是什么？吸附法〖思考2〗将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸的发酵过程变为连续的酶反应，应当固定（细胞）；若将蛋白质变成氨基酸，应当固定（酶）。
（四）、实验操作(1)制备固定化酵母细胞制备固定化酵母细胞需要的材料是干酵母、CaCl2和海藻酸钠溶液1.酵母菌的活化活化就是处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。
2.配制物质的量尝试为0.05mol/L的Cacl2溶液3.配制海藻酸钠溶液加热溶化海藻酸钠时要注意：微火加热并不断搅拌，防止海藻酸钠焦糊4.海藻酸钠溶液与酵母菌细胞混合5.固定化酵母细胞以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，并浸泡30分钟(2)用固定化酵母细胞发酵1.将固定好的酵母细胞用无菌水冲洗2-3次。
2.发酵时的温度就为25℃，时间24h 。
〖思考4〗加热溶化海藻酸钠时微火加热并不断搅拌的目的是什么？防止海藻酸钠焦糊〖思考5〗为什么要海藻酸钠溶液冷却后才能加入酵母细胞？防止高温杀死酵母细胞〖思考6〗发酵过程中锥形瓶为什么要密封？酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件〖思考7〗锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？酵母菌进行无氧呼吸产生的〖思考8〗在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，需要无菌操作码？需要（五）、结果分析与评价1.观察凝胶珠的颜色和形状如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。
2.观察发酵的葡萄糖溶液利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多气泡，同时会闻到酒香。
反馈练习一、选择题1、酶的固定化常用的方式不包括（）A．吸附B．包埋C．连接D．将酶加工成固体2．海藻酸钠在水中溶解的速度较慢，需要通过加热促进其溶解，采用的最好的加热方法是（）A．快速加热 B．持续高温加热C．小火间断加热D．灼烧加热3．高果糖浆生产需要的酶是（）A．葡萄糖异构酶B．蔗糖酶C．麦芽糖酶D．果糖酶4．研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的，如将大肠杆菌得到的三酯磷酸酶固定到尼龙膜上制成制剂，可用于降解残留在土壤中的有机磷农药，于微生物降解相比，其作用不需要适宜的（）A．温度B．酸碱度C．水分D．营养5．将酵母菌的培养液由富氧状态变为缺氧状态，下面加快的一项是（）A．CO2的释放B．丙酮酸的氧化C．葡萄糖的利用D．ATP的形成6．固定化酶的优点是（）A．有利于增加酶的活性B．有利于产物的纯化C．有利于提高反应速度D．有利于酶发挥作用7．下列不是用于包埋法固定化细胞的载体是（）A．琼脂糖B．醋酸纤维素C．聚丙烯酰胺D．聚乙烯树脂8.下列对固定化酶和固定化细胞的说法错误的是（）A、固定化酶和固定化细胞是利用物理或者化学方法将酶或者细胞固定在一定空间内的技术B、固定化酶和固定化细胞技术包括包埋法、化学结合法和物理吸附法C、一般来说，酶更适合采用包埋法固定化，而细胞多采用化学结合和物理吸附法固定化D、包埋法常用的载体有明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等9．试分析下图中，哪一处与用海藻酸钠作载体制备的固定化酵母细胞相似（）10.酵母细胞的活化是指（）A．让酵母细胞恢复运动状态B．让酵母细胞在缺水状态下更容易休眠C．让酵母细胞内酶活性加倍D．让处于休眠状态的酵母细胞重新恢复正常的生活状态11.关于固定化酶和一般酶制剂在应用效果上的说法错误的是（）A、固定化酶活性强，可长久使用B、一般酶制剂应用后和产物混合在一起，产物纯度不高C、一般酶制剂使用后不能重复利用D、固定化酶可以反复利用，降低生产成本，提高产量和质量12.使用固定化细胞的优点是 ( )A.能催化大分子物质的水解B．可催化一系列化学反应C．与反应物易接近 D．有利于酶在细胞外发挥作用13.酶的固定方法不包括 ( )A.将酶吸附在固体表面上 B．将酶相互连接起来C．将酶包埋在细微网格里D．将酶制成固体酶制剂，如加酶洗衣粉中的酶14.下列关于酶制剂的叙述错误的是 ( )A．酶制剂是包含酶的制品 B．包内酶和包外酶均可用于制成酶制品C．酶制品的生产包括酶的生产、提取、分离纯化和固定化等D．固定化细胞不属于酶制剂15.如果反应物是大分子物质，采用那种方法催化受限制 ( )A．直接使用酶 B．使用化学方法结合的酶C．使用固定化细胞 D．使用物理吸附法固定的酶16.下列关于酶和细胞的固定叙述不正确的是 ( )A．酶分子很小，易采用包埋法B．酶分子很小，易采用化学结合或物理吸附法固定的酶C．细胞个大，难被吸附或结合 D．细胞易采用包埋法固定17. 关于固定化酶的叙述不正确的是 ( )。
A．既能与反应物接触，又能与反应物分离B．固定在载体上的酶可被反复利用C．可催化一系列反应 D．酶的活性和稳定性受到限制18.固定化细胞对酶的活性影响最小，根本原因是 ( )A．避免了细胞破碎、酶的提取纯化过程B．固定化细胞在多种酶促反应中连续发挥作用C．促化反应结束后，能被吸收和重复利用D．细胞结构保证了各种酶在细胞内化学反应中有效的发挥作用19.关于酵母细胞活化的说法，不正确的是 ( )A ．酵母细胞活化就是由无氧呼吸变成有氧呼吸B ．活化就是让处于休眠状态的细胞恢复生活状态C ．酵母细胞活化所需要的时间较短D ．酵母细胞活化后体积增20.下列关于酶的叙述中正确的是 ( )A ． 酶都提取于动植物细胞B ．酶制剂能够重复利用C ．果酒和果汁能够用酶制剂澄清D ．酶固定后称为酶制剂21.对配制海藻酸钠溶液的叙述不准确的是 ( )A ．加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环B.海藻酸钠的浓度涉及固定化细胞的质量C ．海藻酸钠的浓度过高，易形成凝胶珠D ．海藻酸钠的浓度过低，形成凝胶珠内包埋细胞过少22．关于酵母菌的叙述，正确的是（多选）（ ）A ．酵母菌在营养物质充足时、环境适宜时，依靠有性生殖进行繁殖B ．酵母菌的代谢类型时异养兼性厌氧型C ．酵母菌的生物膜系统包括细胞膜、核膜、各种的细胞器膜等膜D ．用酵母菌酿酒时，应先密封后通气二、非选择题11A ．化学合成 B 动物体内 C 植物体内 D 微生物体内12.下图为固定化酶的反应柱示意图，请据图回答：(1)请请在横线上填出各标号名称.①________ ②_________ ③_________。
(2) 与一般酶制剂相比，固定化酶的突出优点是_____________和_____________,固定化细胞的优点是___________________。
(3)③的作用是_______________。
（4）制作固定葡萄糖异构酶所用的方式有__________或_______________。
（5）据图说出反应柱的作用原理13.下图是制备固定化酵母细胞实验步骤图解，请据图回答：酵母细胞活化→配制CaCl 2溶液→配置海藻酸钠溶液→海藻酸钠溶液与酵母细胞混合→固定化酵母细胞(1) 在_______________状态下，微生物处于休眠状态。
活化就是让处于休眠状态的微生物恢复_________状态。
活化前应选择足够大的容器，因为酵母细胞活化时_________。
(2) 影响实验成败的关键步骤是 _______ 。
(3) 如果海藻酸钠浓度过低，形成凝胶珠包埋酵母细胞数目______。
（4）观察形成凝胶珠的颜色和形状，如果颜色过浅，说明如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，说明 。
（5）制备固定化酶不宜用包埋法，为什么？①② ③ ① ② ③酶固定化技术参考答案一、选择题1－5.DCADC 6-10.BDCDD 11-15.ABDDC 16-20.ACDAC 21.C 22.BC23、（1）反应柱；固定化酶；分布着小孔的筛板（2）既能与反应物接触，又能与反应物分离；能被反复利用，成本更低，操作更容易（3）酶颗粒无法通过筛板上的小孔，反应溶液可自由出入。
（4）将酶相互连接起来；将酶吸附在载体表面上（5）反应物溶液从反应柱上端注入，使反应物溶液流过反应柱，与固定化酶接触，得到产物，从反应柱下端流出。
24、（1）缺水；正常生活状态；体积增大（2）配制海藻酸钠溶液； (3)少（4）固定化酵母细胞数目较少；海藻酸钠浓度偏高，制作失败（5）因为酶分子很小，容易从包埋材料中露出。
高中生物 第三章 酶的应用技术实践 第二节 制备和应用固定化酶教案 苏教版选修1
制备和应用固定化酶【教学目标】1、知道从酶到固定化酶技术，再到固定化细胞技术的发展过程以及生产中遇到的问题及固定化技术带来的巨大效益；2、知道常用的固定化技术及适用范围，明确固定化技术的的应用原理，理解固定化细胞的具体步骤、会解释各种现象。
【教学重点、难点】固定化酶与固定化细胞的制备方法及优缺点【教学方法】教师启发、引导，学生自主阅读、思考，讨论、交流学习成果。
【教学手段】多媒体【课时安排】1课时【教学过程】温故知新，引出课题：（1）说一说：酶的概念、特性、影响酶活性的因素、应用（2）加酶洗衣粉中常用的酶制剂有哪些？这些酶能直接加入洗衣粉么？（3）在食品、化工、轻纺、医药等领域大规模使用酶制剂，请你归纳使用酶制剂的优点？（4）酶制剂的使用有哪些缺陷？师生归纳，小结：酶制剂应用的缺陷：（1）通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活；（2）溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本；（3）反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量。
提出问题：如果你是工程技术人员，你如何解决这些问题？合作探究，解决问题：资料探究1：在应用酶的过程中，人们发现了一些实际问题：酶通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很难回收，提高了生产成本；反应后的酶会混在产物中，可能影响影响产品质量。
由于酶的分离与提纯有许多技术性难题，造成酶制剂来源有限、成本高、不利于大规模使用。
因此，酶在大规模生产中，使酶能反复使用，是很有经济价值的课题。
固定化酶的使用，推动了酶在生产上的应用。
固定化酶，就是将酶分子结合在特定的支持物上且不影响酶的功能。
用于固定酶的底物有琼脂糖、丙烯酰胺、藻酸钠等。
固定化酶技术的应用，一是可循环反复使用酶制剂。
据报道，在某些情况下可使用上千次，极大地降低生产成本。
二是在生产中，可通过离心法或过滤法把酶与反应液相互分开，在大规模的生产中所需工艺设备比较简单易行。
三是稳定性能好等。
江苏省涟水县第一中学生物苏教选修一练习： 制备和应用固定化酶
第二节制备和应用固定化酶(时间：30分钟满分：50分)考查知识点及角度难度及题号基础中档稍难固定化酶的制备及应用 5 6固定化细胞技术的应用1、2、3、4、5 7、8一、选择题(共5小题，每小题4分，共20分)1．下列关于固定化细胞技术的说法中，正确的是()。
A．物理吸附法的优点是操作简单，吸附牢固B．包埋法的优点是操作复杂，条件温和，对细胞无毒性C．物理吸附法容易对酶活性产生影响D．凝胶包埋常用的凝胶种类有琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、明胶和聚丙烯酰胺等解析固定化细胞的主要方法有物理吸附法和包埋法。
它们各有利弊，物理吸附法的主要优点是酶活性不受影响，但吸附过程相当复杂，这一过程与微生物细胞的性质、载体的性质以及两者之间的相互作用等有关，且吸附力较弱吸附不牢固，细胞容易脱落。
而包埋法操作简便，条件温和，对细胞无毒性，适合于生长细胞的固定化。
凝胶包埋法常用的凝胶种类有琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、明胶和聚丙烯酰胺等。
答案 D2．在制备固定化酵母细胞的实验中，加入硼酸—氯化钙溶液的作用是()。
A．调节溶液pH B．进行离子交换C．胶体聚沉D．为酵母菌提供钙离子解析海藻酸钠胶体在CaCl2这种电解质溶液的作用下发生聚沉，形成凝胶珠，其作用机理是无机盐离子的电荷与胶体微粒电荷相互吸引，形成更大的胶体颗粒，类似于人体红细胞与凝集素之间的凝集反应。
在制备固定化酵母细胞的过程中，制备CaCl2溶液用的是无水CaCl2。
答案 C3．下面制备固定化酵母菌细胞的正确步骤是()。
①配制饱和硼酸—氯化钙溶液②制备海藻酸钠溶液③海藻酸钠溶液与酵母菌细胞混合④酵母菌细胞活化⑤固定化酵母菌细胞A．①②③④⑤B．④①③②⑤C．④⑤②①③D．④①②③⑤解析制备固定化酵母细胞应先加入蒸馏水进行酵母细胞活化，然后配制饱和硼酸-氯化钙溶液，再制备海藻酸钠—酵母细胞胶液，并将其以恒定的速度滴入预先盛有50 mL饱和硼酸—氯化钙溶液的烧杯中，同时搅拌令凝胶珠形成。
2024-2025学年高中生物第三章酶的应用技术实践第二节制备和应用固定化酶教案苏教版选修1
3. 情感态度的转变：
- 学生对生物科学产生了更浓厚的兴趣，愿意主动探索生物技术领域的新知识。
- 学生认识到生物技术在现实生活中的应用价值，增强了学习生物科学的信心和动力。
- 学生在团队合作中，学会了尊重他人、分享经验，提高了人际交往能力。
反馈作业情况：及时批改作业，给予学生反馈和指导。
- 学生活动：
完成作业：认真完成案例分析作业，巩固课堂所学。
拓展学习：利用拓展资源，深化对固定化酶应用的理解。
反思总结：对自己的学习过程进行反思，提出改进建议。
- 教学方法/手段/资源：
自主学习法：鼓励学生自主完成作业和拓展学习。
反思总结法：指导学生进行自我反思和总结。
- 对于实验操作中的材料选择、条件控制等细节，学生可能缺乏实际经验，需要教师在教学中予以引导和补充。
2. 能力层面：
- 学生具备基本的实验操作能力，但在固定化酶的制备过程中，可能面临技术难点，如操作精准度、实验条件的控制等。
- 学生具备一定的观察、分析和解决问题的能力，但在面对实际问题时，可能缺乏独立思考和灵活运用的能力。
- 学生能够准确描述固定化酶的概念、特点及分类。
- 学生能够阐述固定化酶的制备方法，如吸附法、交联法、包埋法等，并了解各种方法的优缺点。
- 学生掌握了固定化酶活性测定的原理及操作方法，能够独立完成实验。
2. 技能的提升：
- 学生在实验操作中，能够熟练使用相关仪器设备，掌握实验操作技巧。
- 学生能够运用所学知识，设计并实施固定化酶实验方案，分析实验结果。
针对上述学情分析，教师在教学过程中应采取以下策略：
1. 强化基础知识，通过案例分析、实际操作等方式，帮助学生深入理解固定化酶的原理和操作方法。
2017-2018学年高中生物苏教版选修1课件：第三章 第二节 固定化酶的制备和应用
稳定性 更高。 ③对于活细胞来说，保持了酶的原始状态，酶的_______
④细胞生长停滞时间短， 反应快 等。 (3)缺点： ①固定化细胞只能用于生产 细胞外酶 和其他能够分泌到细胞 外的产物。
载体 的影响， ②由于_____ 营养物质和产物的扩散受到一定的限制。
③在 好氧性 发酵中，溶解氧的传递和输送成为关键的限制因 素。
1．固定化酶和固定化细胞一般采用什么方法？为什么？
提示：固定化酶常用化学结合法或物理吸附法。因酶分子 小，易从包埋材料中漏出，故一般不用包埋法进行固定。固定 化细胞常用包埋法，因个大的细胞难以被吸附或结合。
2． (1)你认为固定化酶技术与固定化细胞技术哪一种方法对 酶活性的影响更小？ (2)如果想将微生物的发酵过程变成连续的酶反应，应该选择 哪种方法？ 提示：(1)固定化细胞由于保证了细胞的完整性，酶的环境改
2． 为什么麦芽汁可以被质量分数为 10%的葡萄糖溶液替代？
提示：酵母菌也可以利用葡萄糖作为营养物质。
3．为什么说海藻酸钠适用于多种细胞的固定化？
提示：用海藻酸钠凝胶包埋法制备固定化细胞，除对细胞无 毒性外，还具有操作简便、条件温和等特性。通过改变海藻酸钠 的浓度可以改变凝胶的孔径，适合于多种细胞的固定化。
固定化酶和固定化细胞技术
1．制备固定化酶的方法 (1)固定化酶：指用 物理学 或 化学 的方法将酶与 固相载
体 结合在一起形成的仍具有 酶活性 的酶复合物。 ___
(2)制备固定化酶的方法： 种类 制备方法
物理吸 将酶吸附在_______ 纤维素 、琼脂糖 等多糖类或多孔玻璃、 附法 化学结 合法 离子交换树脂等载体上 利用 多功能试剂 进行酶与载体之间的交联， 在酶和
(4)将溶化后的聚乙烯醇海藻酸钠溶液先冷却至 45 ℃，再与 预热至 35 ℃的酵母菌培养液混合，避免高温杀死酵母菌细胞。 (5)固定化酵母菌细胞时，应将酵母菌聚乙烯醇海藻酸钠胶 液用注射器以恒定速度缓慢滴入饱和硼酸氯化钙溶液中， 而不是 注射，以免影响凝胶珠的形成。 (6)海藻酸钠胶体在 CaCl2 这种电解质的作用下，发生聚沉， 形成凝胶珠，需稳定 30 min 左右。
高中生物第三章酶的应用技术实践第二节固定化酶的制备和应用学案苏教版选修1
⾼中⽣物第三章酶的应⽤技术实践第⼆节固定化酶的制备和应⽤学案苏教版选修1第⼆节固定化酶的制备和应⽤学习导航明⽬标、知重点难点固定化酶和固定化细胞的应⽤。
(重点)固定化酶与固定化细胞的制备⽅法。
(难点)[学⽣⽤书P43]⼀、阅读教材P63分析固定化酶1．概念：是指⽤物理学或化学的⽅法将酶与固相载体结合在⼀起形成的仍具有酶活性的酶复合物。
2．优点：在催化反应中，它以固相状态作⽤于底物，反应完成后容易与⽔溶性反应物和产物分离，可被反复使⽤，且保持了酶的催化性能，可实现酶促反应的连续化和⾃动化。
3．制备固定化酶的常⽤⽅法⽬前，制备固定化酶的⽅法主要有物理吸附法、化学结合法、包埋法等。
⼆、阅读教材P64～65分析固定化细胞技术的应⽤1．应⽤：固定化细胞可以取代游离的细胞进⾏发酵，⽣产各种物质。
2．优点(1)固定化细胞技术⽆须进⾏酶的分离和纯化，减少了酶的活⼒损失，同时⼤⼤降低了⽣产成本。
(2)固定化细胞不仅可以作为单⼀的酶发挥作⽤，⽽且可以利⽤细胞中所含的复合酶系完成⼀系列的催化反应。
(3)对于活细胞来说，保持了酶的原始状态，酶的稳定性更⾼。
(4)细胞⽣长停滞时间短，反应快等。
3．缺点(1)固定化细胞只能⽤于⽣产细胞外酶和其他能够分泌到细胞外的产物。
(2)由于载体的影响，营养物质和产物的扩散受到⼀定限制。
(3)在好氧性发酵中，溶解氧的传递和输送成为关键的限制因素。
4．酵母菌细胞的固定化技术的主要流程准备各种实验药品和器材↓制备麦芽汁↓活化酵母菌细胞↓配制物质的量浓度为0.05 mol/L的氯化钙溶液↓制备固定化细胞↓浸泡凝胶珠，⽤蒸馏⽔洗涤↓发酵麦芽汁判⼀判(1)酶在催化时会发⽣变化，不可反复利⽤。
(×)(2)某种固定化酶的优势在于能催化⼀系列⽣化反应。
(×)(3)固定化细胞所固定的酶都在细胞外起作⽤。
(×)(4)制备固定化细胞的⽅法主要有包埋法、化学结合法和物理吸附法。
(×)连⼀连固定化酶技术[学⽣⽤书P44]由于酶的分离与提纯有许多技术性难题，造成酶制剂来源有限、成本⾼、不利于⼤规模使⽤。
2019_2020学年高中生物第3章酶的应用技术实践第2节固定化酶的制备和应用学案苏教版选修1
第二节固定化酶的制备和应用[学习目标] 1.掌握制备固定化酶的常用方法。
(重点) 2.掌握酵母菌细胞的固定化技术。
(重难点)知识点一| 固定化酶技术1．固定化酶固定化酶是指用物理学或化学的方法将酶与固相载体结合在一起形成的仍具有酶活性的酶复合物。
2．制备固定化酶的方法(1)物理吸附法的显著特点是工艺简便且条件温和，在生产实践中应用广泛。
(2)化学结合法是利用多功能试剂进行酶与载体之间的交联，在酶和多功能试剂之间形成共价键，从而得到三维的交联网架结构。
(3)包埋法是将酶包埋在能固化的载体中。
3．固定化酶的优点：在催化反应中，它以固相状态作用于底物，反应完成后容易与水溶性反应物和产物分离，可被反复使用。
[合作探讨]探讨1：对固定化酶的作用影响最小的固定方法是哪一种？提示：物理吸附法。
探讨2：为什么固定化酶不适合采用包埋法？提示：由于酶分子较小，容易在包埋材料中漏出，所以不适合采用包埋法固定化。
探讨3：如果反应物是大分子物质，应该采用哪种方法？提示：因为大分子物质不容易进入细胞内，应采用固定化酶技术。
[思维升华]1．制备固定化酶的常用方法可用下图所示2．常用的制备固定化酶的方法1．关于固定化酶中酶的说法，正确的是( )A．酶的种类多样，可催化一系列的酶促反应B．酶被固定在不溶于水的载体上，可反复利用C．酶作为催化剂，反应前后结构不改变，所以固定化酶可永远利用下去D．固定化酶由于被固定在载体上，所以丧失了酶的高效性和专一性特点B [固定化酶不能催化一系列酶促反应的进行；固定化酶被固定在不溶于水的载体上，可以反复利用，但是随着利用次数的增加，受到外界因素的影响，其活性会逐渐降低；固定化酶具有高效性和专一性的特点。
]2．下列属于固定化酶应用特点的是( )①可以被反复利用②有利于酶与产物分离③能自由出入载体④一种固定化酶只催化一种酶促反应⑤酶多用包埋法固定化A．①②③B．③⑤C．①②④ D．①②⑤C [酶被固定化后可与产物分离，故可反复使用，但不能自由出入依附的载体。
苏教版高中生物选修1-3.2 固定化酶的制备和应用-学案设计无答案
固定化酶的制备和应用【学习目标】1．尝试制备和应用固定化酶、固定化细胞。
2．固定化酶、固定化细胞制备的优缺点和在生产中的应用。
【学习重难点】知识点一：固定化酶技术的应用1．固定化酶的概念：是指利用或的方法将酶与结合在一起形成的仍具有的酶复合物。
2．优点：在催化反应中，它以固相状态作用于底物反应完成后，容易与水溶性分离，可被。
3．制备固定化酶的方法主要有、、。
4．应用：广泛应用在人们的日常生活、医药、工业等方面。
如生产多种、的酶试纸。
知识点二：固定化细胞技术的应用1．固定化细胞的概念：通过各种方法将细胞与一定的结合，使细胞仍保持原有的。
2．优点：固定化细胞仍能进行正常的、和，可以像游离的细胞一样用于发酵生产等。
由于保留了细胞内原有的，这对多步催化的优势就更加明显。
3．主要方法：和两大类。
知识点三：酵母菌细胞的固定化技术【学习过程】（一）制备固定化酵母细胞制备固定化酵母细胞需要的材料是、和等。
1．制备麦芽汁：2．酵母菌的活化活化就是处于状态的微生物重新恢复正常的生活状态。
3．配制物质的量为0.05mol/L的CaCl溶液24．配制海藻酸钠溶液加热溶化海藻酸钠时要注意：。
5．海藻酸钠溶液与酵母菌细胞混合6．固定化酵母细胞以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的溶液中，并浸泡。
（二）用固定化酵母细胞发酵1．将固定好的酵母细胞用冲洗2-3次。
2．发酵时的温度为，时间24h。
（三）结果分析与评价1．观察凝胶珠的颜色和形状如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。
2．观察发酵的葡萄糖溶液利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多，同时会闻到。
合作探究1．固定化细胞技术的缺点有哪些？2．加热溶化海藻酸钠时微火加热并不断搅拌的目的是什么？【课堂检测】1．关于固定化酶技术说法正确的是（）A．固定化酶技术就是固定反应物，将酶依附着载体围绕反应物旋转的技术B．固定化酶的优势在于能催化一系列的酶促反应C．固定化酶中的酶无法重复利用D．固定化酶是将酶固定在一定空间内的技术2．研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的。
-高中生物 3.2 制备和应用固定化酶同步课件 苏教版选修1
性失活。
1．固定化酶的优点 (1)容易与水溶性反应物和产物分离； (2)可被反复使用。 2. 制备固定化酶的主要方法 (1)吸附法(如图所示) ①具体方法：利用离子键作用、物理吸附
等方法将酶固定在载体上。
②常用载体：纤维素、琼脂糖等多糖类或 多孔玻璃、离子交换树脂等。 ③显著特点：工艺简便且条件温和。
固定化细胞技术的应用
1．固定化细胞的概念 一定的载体 结合，使细胞仍保持 通过各种方法将细胞与___________ 生物活性 ，这一过程称为细胞固定化。固定化细 原有的_________ 游离的细胞 胞仍能进行正常的生长、繁殖和代谢 ________________，可以像__________ 一样用于发酵生产。
(3)应用实例
新型青霉素 的生产中具有重要作用； ①固定化酶在___________ ②在化验诊断方面，可制成测试尿糖含量的_______ _________
[思维激活1] 在固定某一种酶时为何必须选择适当的条件？ 提示 酶的催化反应依赖于其活性部位的完整性，因此在 固定某一种酶时，必须选择适当的条件，使其活性部位的 基团不受影响，如避免高温、强酸、强碱等条件以免酶变
2．细胞的固定化方法 (1)吸附法 ①动物细胞大多数具有附着特性，能够很好地附着在容器
壁、微载体和中空纤维等载体上。
②将植物细胞吸附在泡沫塑料的大孔隙或裂缝中，或将植 物细胞吸附在中空纤维的外壁上。 (2)包埋法 ①含义：将细胞包埋在多孔载体的内部而制成固定化细胞
的方法。
②凝胶包埋法是应用最广泛的细胞固定化方法，适用于微 生物、动物和植物细胞的固定化。所使用的载体主要有琼 脂、海藻酸钠凝胶、角叉菜胶、明胶等。
(4)应用固定化酶生产高果糖浆高果糖浆
的生产需要使用葡萄糖异构酶，它能将葡 萄糖转化成果糖。这种酶的稳定性好，可
高中苏教版选修1《固定化酶的制备和应用》学案(有答案)
《固定化酶的制备和应用》学案张建尚江苏省赣榆高级中学【情景导学】高果糖浆是指果糖含量为42%左右的糖浆。
作为蔗糖的替代品，高果糖浆不会像蔗糖那样诱发肥胖、糖尿病、心血管病，对人类健康更有益。
右图是高果糖浆生产车间示意图，高果糖浆的生产需要使用葡萄糖异构酶，但葡萄糖异构酶价格较高，且葡萄糖异构酶溶解于葡萄糖溶液后很难回收，不能再次利用，提高了生产成本。
那么，如何减少葡萄糖异构酶的使用量，降低生产成本呢？【重点和难点】固定化酶与固定化细胞的制备方法及优缺点。
【课前预习】1.固定化酶是指用①的方法将酶与②结合在一起形成的酶复合物。
其在催化反应中，以③作用于与底物，反应完成后，容易与④分离，可被⑤使用。
答案1.①物理学或化学②固相载体③固相状态④水溶性反应物和产物⑤反复2.物理吸附法是将酶固定在①等多糖类或多孔玻璃、离子交换树脂等载体上的固定方式，其显著特点是②，在生产实践中应用广泛；化学结合法是利用③进行酶与载体之间的交联，在酶和多功能试剂之间形成④，从而得到三维的交进行联网架结构；包埋法是将酶包埋在⑤中。
由于酶分子小，而细胞个体大，因此固定化酶常用⑥法，固定化细胞常采用⑦。
2.①纤维素、琼脂糖②工艺简便且条件温和③多功能试剂④共价键⑤能固化的载体⑥物理吸附法和化学结合法⑦包埋法3.固定化细胞技术无须进行酶的①，减少了酶的活力损失，同时大大降低了生产成本；利用细胞中所含的复合酶系可以完成②的催化反应；对于活细胞来说，保持了酶的原始状态，酶的③更高；细胞生长停滞④，反应快。
虽然具有许多优点，但也有缺点。
如，固定化细胞只能用于生产⑤和其他能够⑥的产物；由于载体的影响，⑦的扩散受到一定限制；尤其在好氧性发酵中，溶解氧的传递和输送成为关键的限制因素。
3.①分离和纯化②一系列③稳定性④时间短⑤细胞外酶⑥分泌到细胞外⑦营养物质和产物4.制备麦芽汁时，称取一定质量的干酵母，加入质量①倍的蒸馏水，在②℃下放置3~4h。
高中生物 3.2 固定化酶的制备和应用课件 苏教版选修1
探究点一 探究点二 探究点三
2.结果分析与评价 (1)凝胶珠的颜色和形状:如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色,说明海藻 酸钠的浓度偏低,固定的酵母细胞数目较少;如果形成的凝胶珠不是圆形或椭 圆形,则说明海藻酸钠的浓度偏高,制作失败,需要再作尝试。 (2)检验凝胶珠的质量是否合格,可以使用下列方法。一是用镊子夹起一 个凝胶珠放在实验桌上用手挤压,如果凝胶珠不容易破裂,没有液体流出,就表 明凝胶珠的制作成功。二是在实验桌上用力摔打凝胶珠,如果凝胶珠很容易 弹起,也能表明制备的凝胶珠是成功的。
提示:固定化酵母细胞包埋在海藻酸钠内,不容易与葡萄接触。可用葡 萄糖溶液代替鲜葡萄,将固定化酵母细胞加到葡萄糖溶液中发酵,葡萄糖容 易透过海藻酸钠进入到凝胶珠内部。
探究点一 探究点二 探究点三
●名师精讲●
1.实验流程的几点提醒 (1)选用的干酵母要具有较强的活性,而且物种单一。 (2)酵母菌细胞活化时体积会变大,因此活化前应选择体积足够大的容器, 防止酵母菌细胞的活化液溢出。 (3)海藻酸钠溶液的配制是固定化细胞的关键,因为如果海藻酸钠浓度过 高,将很难形成凝胶珠,如果浓度过低,形成的凝胶珠所包埋的酵母菌细胞的数 量少,也会影响实验结果。 (4)溶化海藻酸钠时要用小火或间断加热,避免海藻酸钠发生焦糊。 (5)将溶化后的聚乙烯醇—海藻酸钠溶液先冷却至 45 ℃,再与预热至 35 ℃ 的酵母菌培养液混合,避免高温杀死酵母菌细胞。要混合均匀,不要进入气泡。 (6)固定化酵母菌细胞时,应将酵母菌—聚乙烯醇—海藻酸钠胶液用注射 器以恒定速度缓慢滴入饱和硼酸—氯化钙溶液中,而不是注射,以免影响凝胶 珠的形成。 (7)细胞的固定要在严格的无菌条件下进行,如定容时要用蒸馏水,冲洗凝 胶珠要用无菌水。
固定化细胞 一系列酶 明胶、琼脂糖、海藻酸 钠、醋酸纤维素、聚丙烯 酰胺 包埋法