高效液相色谱法分析(三聚氰胺)原始记录1
高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺
高效液相色谱法检测乳制品中的三聚氰胺三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。
三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。
本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。
1 实验部分1.1 仪器与试剂LC1600高效液相色谱仪（含UV1600紫外-可见检测器1台，P1600高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；AT-330色谱柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；FA2004分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16G-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。
1.2 标准品溶液配制精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。
根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。
1.3 样品前处理称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。
取提取液250ul，加入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC 测定溶液。
1.4 色谱条件：色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm)流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）流速：1.0ml/min波长：240nm温度：40℃进样量：20μl2 实验结果2.1 精密度实验取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。
高效液相色谱测定牛奶中的三聚氰胺
高效液相色谱测定牛奶中的三聚氰胺的成功案例
摘要：建立了浊点萃取法（CPE）对牛奶样品进行净化和浓缩后用高效液相色谱（HPLC）检测的方法。
本实验采用酸（CCl3COOH）结合非离子型表面活性剂Triton X-100对牛奶进行破乳，以非离子表面活性剂聚乙二醇600（PEG 600）作为萃取剂，研究牛奶中三聚氰胺的萃取行为。
实验确定的破乳方法和CPE方法的优化条件：Triton X-100的浓度为 2 %（W/V），CCl3COOH的浓度为2 %（W/V），100 ℃水浴加热10 min；PEG 600的浓度为13 %（W/V），Na2CO3和Na2SO4的浓度分别为0.5 %（W/V）和26 %（W/V），平衡温度70 ℃，平衡时间30 min。
在上述实验条件下，牛奶样品的加标回收率80 %以上，相对标准偏差为2.1 % ，定量限为0.9 μg/kg，小于国家规定的定量限(2.5 μg/kg)。
该方法简便、快速、灵敏度高、污染少。
关键词：三聚氰胺；浊点萃取；表面活性剂；高效液相色谱
1.仪器配置
2.色谱图
1三聚氰胺的标准色谱图
2加标牛奶样品色谱图
3.方法使用范围
南京科捷分析仪器应用研究所研发本方法——高效液相色谱法，主要用于乳制品中三聚氰胺的检测，具有灵敏度高，操做简单等特点。
此方法显示图谱清晰明了，结果准确，可广泛用于对乳制品的质量监控等领域。
高效液相色谱法检测奶制品中的三聚氰胺
高效液相色谱法检测奶制品中的三聚氰胺一、实验目的1、掌握反相离子对色谱法测定奶制品中三聚氰胺的原理和方法。
2、了解复杂样品进行色谱分析时前处理的方法和必要性。
二、实验原理三聚氰胺是一种常见的化工原料，有毒，若人体大量摄入，将引起泌尿系统结石等疾病。
2008年9月，三鹿奶粉事件发生后，三聚氰胺的危害被深入广泛的认识，同时食品安全问题也更加受到重视与关注。
反相高效液相色谱（RP-HPLC ）具有分离效率高，分析速度快，灵敏度高等优点，而且仪器较简单、工作条件要求较低，在有机物的分离与测定中有极为广泛的应用。
但三聚氰胺是强极性物质，在反相色谱柱上保留能力很弱，难以达到分离的目的。
三聚氰胺具有弱碱性，在酸性溶液中能形成阳离子。
若在流动相中加入与具有两亲作用的阴离子，则可与三聚氰胺形成具有疏水作用的离子对，从而使保留能力明显增强，达到与干扰组分分离的目的，这就称作离子对色谱。
测定阳离子一般采用烷基磺酸盐作为离子对试剂，测定阴离子一般采用烷基胺类作为离子对试剂。
奶制品的组成较复杂，一般含有大量的蛋白质和脂肪类物质，若不经过预先的分离处理，不仅干扰三聚氰胺的检出，还会对色谱柱造成一定的损伤，因此对待测样进行分离，纯化等预处理是十分重要的。
加入重金属离子可使蛋白质变性、凝聚，从而沉淀分离。
脂类和高级脂肪酸可在酸性条件下通过乙酸乙酯、乙醚、氯仿等的萃取除去。
反相离子对色谱测定三聚氰胺的定量下限约为0.1mg·L -1。
对于更低浓度的试样，需要使用灵敏度更高的色谱-质谱联用技术。
但由于仪器昂贵，维护较复杂，色谱-质谱联用技术的应用受到了限制。
通过阳离子交换树脂可使溶液中的三聚氰胺得到富集，从而有效的改善检出限。
近年来发展的固相微萃取技术将净化除杂和分离富集等步骤简化合并，使色谱分析试样前处理的效率有了显著的提高。
三、试剂与仪器试剂：PbAc （AR ） 0.2 mol·L -1（乙酸酸化），乙酸乙酯（AR ），乙酸（AR ），甲醇（AR ），氨水（AR ），732型强酸性离子交换树脂（40~60日）色谱流动相：A 、乙腈（色谱纯）；B 、KH 2PO 4（GR ） 0.05 mol·L -1；C 、H 3PO 4（GR ） 0.5 mol·L -1；D 、十二烷基磺酸钠（AR ） 0.2 mol·L -1仪器：P230型高效液相色谱仪，配UV 检测器；ODS C-18 色谱柱标样：三聚氰胺（纯度大于99.5%），用水配制成1.001g L -⋅标准储备液，4℃保存。
固相萃取-高效液相色谱法测定牛奶中的三聚氰胺
用 高效 液 相 色谱 法 测 定 ． 结 果 表 明 ， 三 聚 氰 胺 的标 准 曲 线 为 ｙ － ４ ４ ７ ７ １ ． ２ ｘ ＋ ４ ５ ６ ３ ． ８ ，相 关 系数 ｒ － － ０ ． ９ ９ ９ ５ ，检 测 限 为 ０ ． ０ ５ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ 。 回收率 ） ０ ９ ７ ． ６ ％ 一１ ０ ０ ． ４ ％。该 方法操 作 简单 ，精 密度和 回收率 高，可 满足 奶粉 中三聚氰胺 的准确 定性和 定量
１ ． ５ 样 品的制备
称取新 鲜牛 乳５ ｇ ，加 入２ ０ ｍ１ ０ ． １ ％三氯
乙酸提 取液 ，充 分 混匀 ，加入 ５ ｍ１ ２ ％乙酸铅 溶液 ，均质 ｆ ２ ｍｉ ｎ ） 或超声２ ０ ｍｉ ｎ ，Ｉ Ｏ ０ ０ ０ ｒ ｐ ｍ／ ｍｉ ｎ 离心 １ ０ ｍｉ ｎ ，取上清液 ５ ｍｌ 过混合 型 阳离子 交换 小柱 （ Ｐ Ｃ Ｘ ） 。待样 液完全 流 出后 分 别用３ ｍｌ 甲醇 和３ ｍｌ 水活 化 固相萃取 柱 ，取 上述 提取液 ５ ｍｌ 过 固相萃 取柱 ，使提 取液 以不低 于 １ ｍｌ ／ ｍｉ ｎ 的流速通
（ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ） ［ 、液相色谱 一质谱法（ ＨＰ Ｌ Ｃ． ＭＳ ） ｔ 、气相 色谱 一
质谱法（ ＧＣ ． ＭＳ ） ｔ 】 、毛 细管 电泳法 （ ｃ Ｅ ） 、胶体 金免 疫层 析法 和酶 联免 疫法 等 。２ ０ ０ ８年 １ ０月 ， 国 家 标 准
液 并将小柱抽干 。用５ ｍ １ ５ ％氨化 甲醇（ ｖ ／ ｖ ，５ ｍ ｌ 氨水＋ ９ ５ ｍ ｌ
蛋白质，每１ ０ ０ ｇ 牛奶中添加Ｏ ． １ ｇ 三聚氰胺 ，就能提 高０ ． ４ ％ 蛋白质 ，因此三聚氰胺 也被 人称为” 蛋 白精” 。 三 聚氰胺 被摄 入人 体 内遇到 胃酸 时会 溶解 ，但 是排 到尿 中会 再次结 合形 成结 晶 ，可能堵 塞 肾小 管 ，随着结 晶在 体 内含量 的增 多，如 果不 能排 除 ，积累 到一 定的程 度 后形成 结石 ，给肾功 能 带来极 大 的损害 甚 至肾衰竭 而 死亡 。蛋 白精给奶制 品业带来 了巨大 的冲击 。卫生部等 ５ 部 门关于三聚氰 胺在食 品中 的限量值 的公 告（ 卫 生部公 告
高效液相色谱法测定饲料及食品中三聚氰胺的研究
高效液相色谱法测定饲料及食品中三聚氰胺的研究目的:建立用高效液相色谱-二极管阵列法(HPLC-DAD)测定饲料及食品中三聚氰胺残留量的方法。
方法:样品经提取分离后,用HPLC-DAD法测定,外标法定量。
色谱条件:C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-辛烷磺酸钠溶液(柠檬酸调节pH至 3.0,10∶90),流速为 1.0 ml/min;进样量为20 μl;柱温为35℃;190~400 nm波段扫描,检测波长为236 nm。
结果:三聚氰胺在0.5～10.0 μg/ml 范围内线性关系良好,相关系数R=0.999 98。
最低检测浓度为0.05 μg/ml,回收率在89.28%～96.89%范围内,RSD<3.5%。
结论:该方法简便、快速,能满足饲料及食品中三聚氰胺残留量的检验工作需要。
[Abstract] Objective: To establish a method for the determination of melamine residue in feed and food using high performance liquid chromatography-diode array detection (HPLC-DAD). Methods: After the sample was extracted and cleaned, melamine was analyzed by HPLC-DAD. Using C18 column (150 mm×4.6 mm, 5 μm), acetonitrile and 10 mmol/L sodium octanoate solution (adjusted pH to 3.0 with acetic acid, 10∶90) were used for this method. The flow rate was 1.0 ml/min and DAD detection at 236 nm. The temperature of the column was 35℃. Results: The linear range was 0.5-10.0 μg/ml, and the correlation coefficient was 0.999 98. The limit of melamine ranged from 89.28%-96.89% with relative standard deviation (RSD) less than 3.5%. Conclusion: The results indicate that this method is simple and quick, and can meet the requirement for determination of melamine in feed and food.[Key words] Melamine; Diary products; Feed; Egg; HPLC三聚氰胺是一种重要的含氮杂环有机化工原料,为尿素后加工产物,主要用途是作为生产三聚氰胺甲醛樹脂(NF)的原料,而且还能用作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂。
饲料及食品添加剂中三聚氰胺的高效液相色谱-质谱法检测
普通蛋白质含氮量只有16%，但三聚氰胺含氮量可达66.7%，为提高饲料中蛋白质的含氮量，部分非法分子将三聚氰胺添加到饲料和食品中。
动物长期摄入含三聚氰胺的饲料，会产生很大的毒性作用。
动物会不仅出现肾衰竭而死亡，而且会危害人体健康。
我国明令禁止在任何饲料中添加以三聚氰胺等为原料的“蛋白精”。
检测三聚氰酸的常用方法有GC-MS/MS 法、LC-MS/MS法、HPLC法等。
目前只有农业行业有对饲料中三聚氰胺残留的标准，国家标准尚没有。
GC-MS法、HPLC法是农业行业标准中的规定方法。
GC-MS 法的前处理比较繁琐，需衍生化。
饲料及食品添加剂中有复杂的基质成分，存在许多干扰因素，影响检测结果。
本文优化质谱条件，应用高效液相色谱-质谱法（HPLC-MS），为从源头控制饲料及食品安全提供保障。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂 三聚氰胺分析纯，不低于99.5%的纯度。
称取10 mg三聚氰胺，使用10 mL容量瓶，设置三聚氰胺标准溶液，作为标准储备液，用流动相定容。
分析纯为甲酸、乙醇。
使用仪器为安捷伦1100LC-Trap-XCT系统。
1.2 处理样品 在批发市场购买饲料与食品样品。
粉碎样品，将5 g样品放入具塞锥形瓶中。
加入20 mL体积比1∶1的水-乙醇溶液，含体积分数0.1%的甲酸。
10 min超声波振荡，然后过滤，使用20 mL上述提取液再次提取残渣。
过滤，合并滤液。
定容至 5 mL。
使用氮吹仪上浓缩，使用滤膜0.45μm过滤。
1.3 检测条件 质谱条件：扫描范围为m/ z44-150。
4.0×105Pa的雾化器压力，97.4 V的毛细管出口电压，3909 V的毛细管电压，正离子化模式的电喷雾电离，9 L/min的干燥气流量，0.5 V的碎裂电压，350℃的干燥气温度。
色谱条件：体积比5∶95，流动相为乙腈-0.1%甲酸。
色谱柱Kromasil-C18柱，5μm，4.6 mm×250 mm，进样量5μL，0.4 mL/min的流速。
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量一、引言三聚氰胺是一种无机化合物，常用于工业制造和农业生产中，然而高浓度的三聚氰胺会对人体造成严重危害，特别是对婴儿和幼儿的影响更为严重。
由于近年来液态奶中三聚氰胺事件的频繁发生，因此对液态奶中三聚氰胺含量的检测显得尤为重要。
固相萃取一高效液相色谱法是目前常用的一种高效、准确的检测方法。
本文将介绍使用固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的方法和结果。
二、实验材料和仪器1. 实验材料：液态奶样品、甲醇、乙腈、乙酸、二氯甲烷、硅胶2. 仪器：高效液相色谱仪、固相萃取柱、离心机、显微天平、pH计、紫外可见分光光度计等三、实验方法1. 样品处理：首先将液态奶样品样瓶放在冰箱中冷藏，取出一定量的样品后使用显微天平称取出适量样品，并将其加入样品离心管内。
然后加入适量的甲醇，进行振荡混合，最后使用离心机离心沉淀，得到混合物的过滤液。
2. 固相萃取：将得到的过滤液加入到固相萃取柱中，使用甲醇等洗脱混合物，得到固相萃取柱的萃取液。
3. 色谱分析：将获取到的固相萃取液置于高效液相色谱仪中进行色谱分析，根据三聚氰胺的特征峰进行定性和定量分析。
四、实验结果经过实验验证，使用固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量的结果显示，样品中三聚氰胺的含量为xmg/kg，达到了食品卫生安全标准。
五、实验结论通过该实验结果可以得出结论：固相萃取一高效液相色谱法是一种准确可靠的测定液态奶中三聚氰胺含量的方法。
该方法操作简便，结果准确，可以满足食品安全检测的需求。
六、实验改进尽管该方法已经得到了实验结果的验证，但在实际操作中还是存在一些可以改进的地方。
例如固相萃取柱的选择、色谱分析条件的优化等方面可以进行进一步的改进，以提高该方法的灵敏度和稳定性。
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量
固相萃取一高效液相色谱法测定液态奶中三聚氰胺含量一、引言三聚氰胺是一种有机化合物，化学式为C3H6N6，是一种白色结晶性固体，可溶于水和乙醇，主要用作工业生产中的原料，如氰酸酯树脂、氰酸脂和脲醛树脂等。
但由于其高氮含量，三聚氰胺还可以在一定条件下成为一种良好的氮肥料。
三聚氰胺在奶制品中的使用引起了广泛的争议。
2008年，中国发生了因三聚氰胺被加入奶粉中而导致大量儿童发生尿路结石的事件，震惊了全国。
由于三聚氰胺过量摄入会对人体肾脏造成严重危害，因此对奶制品中三聚氰胺的含量进行准确检测和控制成为了至关重要的工作。
二、实验目的本实验旨在利用固相萃取-高效液相色谱法对液态奶中三聚氰胺进行含量测定，以确保奶制品中三聚氰胺的安全性。
三、实验原理固相萃取技术是一种分离和富集化合物的方法，其原理是利用吸附剂（固相萃取柱）对样品中的目标化合物进行富集，并通过一系列的洗脱步骤将目标化合物从吸附剂上洗脱出来。
在本实验中，我们将使用固相萃取技术将液态奶中的三聚氰胺富集到吸附剂上，并进行洗脱处理以得到纯化的三聚氰胺化合物。
高效液相色谱法是一种分离和定性化合物的方法，其原理是利用固定在色谱柱上的填料对化合物进行分离，通过流动相的作用使化合物在填料中进行逐步分离，并通过检测器对分离后的化合物进行检测和定量。
在本实验中，我们将使用高效液相色谱法对洗脱后的三聚氰胺进行检测和定量分析。
四、实验步骤1. 样品准备：将液态奶样品装入适当的容器中，以备后续的固相萃取处理。
2. 固相萃取：将样品经过预处理后注入固相萃取柱中，利用固相萃取柱对三聚氰胺进行富集。
3. 洗脱处理：使用洗脱液将固相萃取柱中富集的三聚氰胺进行洗脱处理，得到纯化的三聚氰胺化合物。
4. 高效液相色谱分析：将洗脱后的三聚氰胺样品注入高效液相色谱仪中，利用色谱仪对三聚氰胺进行检测和定量分析。
5. 数据处理：根据高效液相色谱仪得到的检测结果，计算出液态奶中三聚氰胺的含量。
五、实验结果根据实验数据分析，我们得到了液态奶中三聚氰胺的含量为x mg/L。
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试样质量
(g)
定容体积
（mL）
峰面积（A）
浓度
（μg/mL）
结果
（mg/kg）
平均值
（mg/kg）
相对
偏差（%）
备注
试验允差要求：
仪器使用情况使用前：使用后：检验人：复核人：审核人：
通常情况下计算结果保留三位有效数字；结果在0.1mg/kg-1.0mg/kg时，保留两位有效数字；结果小于0.1mg/kg时，保留一位有效数字。
质控
（自控）
情况
质控措施
样品总数
平行样个数
质控样个数
仪器使用情况使用前：使用后：
检验人：复核人：审核人：
高效液相色谱法分析（三聚氰胺）原始记录（续页）第页，共页
Y=aX+b a= b= r=
方法检测限
0.05 mg/kg
定量检测范围
0.30mg/kg~100.0mg/kg
样品空白值
计算公式：X=
式中：
X--试样中待测组分残留量（mg/kg）; A--样液中待测组分的峰面积；
c--从校正曲线得到的三聚氰胺的浓度中待测组分的浓度，（μg/mL）;
m--称取的试样质量，（g）; V--试样最终定容体积，（mL）；
高效液相色谱法分析（三聚氰胺）原始记录
受理号：第1页，共页
检测项目
三聚氰胺
检测开始时间
年月日
检测依据
GB/T 22400-2008
检测结束时间
年月日
检测方法
高效液相色谱法
温度及相对湿度
℃％
仪器名称及型号
高效液相色谱仪
仪器编号
××/××-
FA2004电子天平
××/××-074
样品处理情况
按照GB/T 22400-2008对样品进行处理。
混合标准使用液名称及浓度
三聚氰胺标准溶液及其浓度：1mg/mL
仪器
检测条件
检测器：PDA检测器
色谱柱：C18反相柱
柱温：40.0 ℃
流速：1.0 mL/min
进样量：μL
波长：240nm
流动相：磷酸盐缓冲液（PH3.0）-乙腈=70+30
标准曲线
序号
1
2
3
4
5Байду номын сангаас
混标浓度（μg/mL）
峰面积（A）
回归方程