关于拟穴青蟹的文献
拟穴青蟹幼蟹耗氧率和窒息点的研究
氧量具有 比较明显 的昼夜变化规律 ， 其峰值 出现在 ２ ：０及 ０ ：０左右 ， ００ ２０ 谷值出现在 ０ ：０及 １ ：０ ８０ ６ ０ 。研究结
果可为拟穴青蟹养殖生产 中制定合 理的苗种放养密度 和养殖工 艺提供参考依据 。 关键词 ：拟穴青蟹 ； 蟹 ； 幼 耗氧率 ； 窒息点
中 图 分 类 号 ：￥６ ． ９６ １ 文 献 标 识 码 ：Ａ
Ｐｒ ｌ ｉ ａ ｙ ｓｕ ｙ ｏ ｈｅ ｏ ｙ ｅ ｏ ｓ ｍ ｐｔ ｎ ｒ ｔ ｎ ｕ ｏ ａ ｉ ｎ ｅｉ ｎ ｒ ｔ ｄ ｎ ｔ ｘ ｇ ｎ ｃ ｎ ｕ ｍ ｉ ａ ｅ ａ ｄ ｓ ｆ ｃ ｔｏ ｏ
ｐ ｉｔｏ ｖ ｎｌ ｃａ ｃ／ ａａ ｍｏｉｎ ｏｎ ｆ ｕ ｅ ｉ ｒ ｂＳｙ／ ｐ ｒｍａ ｓ ｊ ｅ ａ ａ
要 ：在盐度 ２ 、 ０ 温度 ２ ． ０ ２℃条件下 ， ８０± ． 采用密封流水方法进行 了拟 穴青蟹幼 蟹耗氧 率和窒息 点的研
究 。结果表明 ： 拟穴 青蟹 Ｖ期幼蟹的平均耗氧率 高于Ⅵ期 幼蟹 ， Ｖ期 幼蟹 的窒息点也高 于Ⅵ期 幼蟹。其 中， 当 蟹苗体质量为 １０ ０ ２ ．０± ．２ｇ时， 耗氧率为 ０ ４７２± ． ８ ｇ （ ｈ ， ．３ ０ ０ ３ｍ ／ ｇ・ ） 耗氧量 ０ ４ ３７± ．８ ｓ （ｎ ｈ ， ．２ ００ ０ｍ ／ ｉｄ・ ） 窒息点为 ０ ７６０± ． １ ｇ Ｌ； ． １ ０ ０ ７ｍ ／ 当蟹苗体质量 为 １８ ０ ３ ． １± ．０ｇ时 ， 耗氧率为 ０ ３ １ ４ ．８ （ ｈ ， ．８ － ０ １ｍ ６－ ０ ｇ・ ） 耗 氧量 ０ ６ １ ０ １０ｍ （ｎ ｈ ， 息点为 ０ ６ ８７± ．１ ｇ Ｌ ．７ ７± ．４ ｓ ｉｄ・ ） 窒 ／ ．９ ０ ０ １ｍ ／ 。实验发现 ， 穴青 蟹幼蟹的耗氧率和耗 拟
拟穴青蟹2种地理群体的形态与养殖比较研究
拟穴青蟹2种地理群体的形态与养殖比较研究拟穴青蟹是一种广泛分布于中国沿海地区的重要经济水生动物，具有很高的经济价值和科研价值。
在不同的地理环境下，拟穴青蟹的形态和生长特性存在较大差异，对其进行比较研究有助于更好地了解其生物学特性和开展养殖工作。
本文通过对两种不同地理群体的拟穴青蟹进行形态与养殖比较研究，旨在为拟穴青蟹的养殖提供科学依据和技术支持。
一、拟穴青蟹的地理群体及特点拟穴青蟹是中国沿海地区的一种重要经济水生动物，广泛分布于长江三角洲、珠江三角洲、福建沿海等地区。
根据其分布区域的不同，可分为长江三角洲地理群体和珠江三角洲地理群体，两者在形态和生长特性上存在一定差异。
长江三角洲地理群体的拟穴青蟹体型较大，甲幅较宽，外壳呈深蓝色，脚部肌肉发达，肉质鲜美。
由于长江水系水流湍急，水质清洁，螃蟹生长环境良好，因此长江三角洲地理群体的拟穴青蟹生长速度快，产卵量大，品质优良。
二、形态特征比较1.外貌特征2.抱卵特征长江三角洲地理群体的拟穴青蟹产卵量大，卵粒较多，卵壳坚实，卵黄丰满。
而珠江三角洲地理群体的拟穴青蟹产卵量较少，卵粒较小，卵壳薄弱，卵黄较少。
3.生长速度长江三角洲地理群体的拟穴青蟹生长速度快，体型成熟时间较短，生长周期较短。
而珠江三角洲地理群体的拟穴青蟹生长速度较慢，体型成熟时间较长，生长周期较长。
三、养殖特性比较1.饲料需求长江三角洲地理群体的拟穴青蟹对饲料的需求量较大，尤其是对富含蛋白质和维生素的饲料需求量更大。
而珠江三角洲地理群体的拟穴青蟹对饲料的需求量相对较小，适应性较强。
2.环境适应性3.养殖技术对于长江三角洲地理群体的拟穴青蟹，养殖技术主要侧重于提高养殖密度和改善饲料质量，以促进螃蟹生长。
而对于珠江三角洲地理群体的拟穴青蟹，养殖技术主要侧重于改善生长环境，提高水质和水温，以促进螃蟹成熟。
四、总结与展望通过对长江三角洲地理群体和珠江三角洲地理群体的拟穴青蟹进行形态与养殖比较研究，可以看出两者在外貌特征、生长速度、养殖特性等方面存在一定差异。
拟穴青蟹Sp-Sox14基因在胚胎发育和性腺发育过程中的表达
卯黄发 生前期（０２）的表达量 显著高于卵巢其他发育阶段 ；而在精巢发育过程 中胞期（Ｔ１）和精 子细胞期（Ｔ２）。推测其参 与卵巢的前期发育
以及 精 子 成 熟 等 过 程 。整 胚 原 位 杂 交结 果 显 示 ，ｓｐ．Ｓｏｘｌ４在 青 蟹胚 胎 复 眼 色 素 形 成 期 阳
收 稿 日期 ：２０１７－０２．１２ 修 回 日期 ：２０１７－０４—０９ 资助 项 目 ： 国家 自然 科 学 基 金 （３１４７２２６６，４１６７６１６１， ３１６７２６８１１ 通 信 作 者 ：王 艺 磊 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｉｌｅｉｗａｎｇ＠ｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
ｈｔｔｐ：／／ｗｗ ｗ．ｓｃｘｕｅｂａｏ．Ｃｌｑ
２期
梁 可 蓥 ，等 ：拟穴 青蟹Ｓｐ—Ｓｏｘｌ４基 因在 胚胎 发育 和性 腺发 育过 程 中 的表 达
化 。ＳｏｘＢ基 因 除 了被发 现 在神 经 祖 细胞 有 表 达 以外 ，在 神 经 嵴 及 其 衍 生 的 组 织 细 胞 也 有 表 达 ，神 经 嵴 在 胚 胎 随后 的 发 育 过 程 中 ，可 迁 移 至 特 殊 区域 ，进 一 步 发 育形 成 外 周 神 经 系 统 以 及 眼 睛等重 要器 官结 构 ［２”。与脊 椎 动物 相 比 ，无 脊椎 动 物ＳｏｘＢ基 因的研 究甚 少 。有 文献 指 出 ，在 黑 腹果 蝇 （Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）胚 胎 形成 过 程 中 ，Ｓｏｘｌ４基 因广 泛 且 微 量地 表 达 ；三 角 涡 虫 （Ｄｕｇｅｓｉａｊａｐｏｎｉｃａ）的ＳｏｘＢ基 因特异 表 达 于头 部 和 肠道 ，且 对 三角 涡虫 头部进 行 切除后 ，ＳｏｘＢ基 因 的表 达可 参 与促进 头 部和 神经 再生 ；中华绒 螯 蟹（Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒ ｓｉｎｅｎｓ￣）中发 现一个 ＳｏｘＢ２基 因在性 腺 中特 异表 达 【２ 。有 关 拟穴 青 蟹 （Ｓｃｙｌｌａｐａｒａｍａｍｏ— ｓａｉｎ）Ｓｏｘｌ４基 因在性 腺 发 育 和胚 胎 发育 中可 能作 用 的研究 尚未报 道 。
拟穴青蟹CYP302a1基因的克隆及表达模式分析
文章编号：１００４－２４９０（２０２１）０１－００３１－１１拟穴青蟹ＣＹＰ３０２ａ１基因的克隆及表达模式分析 收稿日期：２０２０－０１－１６基金项目：甬财政发［２０１９］１０４５号（１０１９Ｂ１００１０）；上海市科技创新行动（１８３９１９００１００）；现代农业产业技术体系专项（ＣＡＲＳ ４８）作者简介：张林姿（１９９３—），女，硕士研究生，研究方向为水生生物学。
Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉｎｚｉ９３９３＠１６３．ｃｏｍ通信作者：马凌波，研究员。
Ｅ ｍａｉｌ：ｍａｌｉｎｇｂｏ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ张林姿１，２，赵 明１，２，张凤英２，王 伟２，刘志强２，马春艳２，谌 微２，王 珂１，２，马凌波２（１．上海海洋大学水产与生命学院，上海 ２０１３０６；２．中国水产科学研究院东海水产研究所，农业农村部远洋与极地渔业创新重点实验室，上海 ２０００９０）摘 要：蜕皮激素对节肢动物生长、发育和繁殖有重要调控作用，细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）３０２ａｌ是蜕皮激素合成通路中的关键酶。
克隆获得了拟穴青蟹（Ｓｃｙｌｌａｐａｒａｍａｍｏｓａｉｎ）ＣＹＰ３０２ａ１基因，命名为Ｓｐ ＣＹＰ３０２ａ１。
Ｓｐ ＣＹＰ３０２ａ１的ｃＤＮＡ序列长为３０３２ｂｐ，包含一个１６１７ｂｐ的开放阅读框（ＯＲＦ），可编码５３８个氨基酸，预测相对分子质量为６１．１４ｋＤａ。
序列分析结果显示，该氨基酸含ｈｅｌｉｘ Ｋ、ｈｅｌｉｘ Ｃ、ｈｅｌｉｘ Ｉ、ＰＥＲＦ及ｈｅｍｅ ｂｉｎｄｉｎｇ５个Ｐ４５０特征保守区域。
系统进化分析表明，Ｓｐ ＣＹＰ３０２Ａ１与其他物种的ＣＹＰ３０２Ａｌ聚为一类，与三疣梭子蟹（Ｐｏｒｔｕｎｕｓｔｒｉｔｕｂｅｒｃｕｌａｔｕｓ）和凡纳滨对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｖａｎｎａｍｅｉ）的进化关系最近。
ｑＲＴ ＰＣＲ分析发现，雌蟹和雄蟹中ＣＹＰ３０２ａ１均在Ｙ器官具有最高表达，而在其他组织中的表达量相对较低。
在幼体发育过程中，ＣＹＰ３０２ａ１在蚤状幼体Ⅲ期出现一个表达峰值，但在其他几个时期的表达量均较低。
拟穴青蟹池塘生态育苗技术研究
栏目编辑宋迁红培育苗种2019.2近年来，青蟹养殖业在我国出现蓬勃发展的势头，养殖面积约35万亩，年产量超过15万吨(中国渔业统计年鉴，2018)。
然而，与中华绒螯蟹人工苗占95%和梭子蟹人工苗占70%的养殖现状相比，青蟹养殖所用的苗种几乎全部来源于海区中的天然苗。
由于天然苗具有数量和质量不稳定，且易携带病菌等诸多不利因素，因而严重制约了养殖规模的扩大，因此，开展青蟹苗种规模化繁育技术研究是保障养殖业可持续发展的关键。
然而，到目前为止，主要集中在室内工厂化育苗技术的研究，有关室外池塘生态育苗技术的研究较少。
本课题组在汕头市科技计划项目资助下，开展了青蟹池塘生态育苗技术研究，旨在探讨池塘生态育苗的可行性，为建立青蟹苗种培育的新途径提供参考。
一、育苗池准备1.池塘条件本次试验育苗池塘位于广东省饶平县柘林湾周边，海水盐度为29，pH 为8.0左右，水质符合国家和行业标准。
采用两口池塘作为育苗池(图见彩中插2)，面积分别为200米2和1000米2，塘深1.7米。
为提高育苗水体的稳定性，课题组对池塘进行改造，清除底部淤泥，重新铺设沙土，并在池底铺设塑料地膜，大致在每40～50米2底面放置1个增氧气盘。
2.消毒及肥水于布苗前10天引入沙滤海水至80厘米深，用漂白粉消毒，杀灭水中病原微生物、青苔孢子、藤壶及野杂鱼苗等有害生物。
待余氯消失后，全池泼洒复合肥10克/米3和尿素510克/米3，并引入10厘米深的小球藻液，培养4～5天。
当池水变暗绿色后引入轮虫，密度为4～5个/毫升，培养5天后，轮虫密度可达10个/毫升。
二、幼体孵化与布苗1.幼体来源幼体来源于课题组培育的抱卵蟹，体质量不低于300克。
可根据卵的颜色变化估计孵化时间，颜色变化依次为：橘黄色、橙色、棕褐色、黑色（图见彩中插2），种蟹抱卵后经过11天左右即可孵化出幼体。
当卵的颜色变为黑色，且胚胎心跳频率达150次/分，需将抱卵蟹放入育苗池待孵化。
2.布苗为防止抱卵蟹携带纤毛虫或其他病原生物进入育苗池，需用浓度为20毫升/米3的甲醛溶液药浴抱卵蟹1～2小时。
拟穴青蟹凝集素的活性及其部分性质_梁青龙
第３０卷第２期２０１２年３月泉州师范学院学报Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｑｕａｎｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＶｏｌ．３０Ｎｏ．２Ｍａｒ．２０１２拟穴青蟹凝集素的活性及其部分性质梁青龙１，苏鑫龙２，戴聪杰２＊（１．泉州医学高等专科学校，福建泉州 ３６２０００；２．泉州师范学院化学与生命科学学院，福建泉州 ３６２０００）摘 要：采用生物化学的方法研究了拟穴青蟹凝集素的部分性质，结果表明：拟穴青蟹血清的凝集素可凝集兔子、鸽子、鸭子、鸡的动物血红细胞，并且对不同的红细胞的凝集效价有所不同，该凝集素的活性受Ｄ－半乳糖、麦芽糖、鼠李糖等３种糖所抑制．在温度为３０～４０℃，ｐＨ为７．０，盐度为２４时，拟穴青蟹血清凝集素活性最高．拟穴青蟹血清样品的凝集素受Ｃａ２＋的依赖性较小．关键词：拟穴青蟹；凝集素；性质①中图分类号：Ｑ９５９．２３３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－８２２４（２０１２）０２－００７２－０４ 拟穴青蟹［Ｓｃｙｌｌａ ｐａｒａｍａｍｏｓａｉｎ（Ｅｓｔａｍｐａｄｏｒ，１９４９）］，属节肢动物门、甲壳纲、十足目、短尾亚目、梭子蟹科、青蟹属，广布于我国东南沿海，属于梭子蟹科（Ｐｏｒｔｕｎｉｄａｅ）暖水广盐性海洋蟹类，具有生长快、个体巨大、适应性强等特点，最大个体体重可达２ｋｇ．其肉味鲜美，营养价值高，是传统的名贵海产品，也是许多国家人工养殖的主要海洋蟹类品种［１－３］．凝集素是一种能与糖蛋白特异性结合的非免疫性蛋白或糖蛋白［４－５］，具有多种功能及化学性质．凝集素是许多无脊椎动物免疫的主要机能，其作为一种非特异性识别因子，识别自身和异己成分，包括外来入侵的病原菌，并可通过凝集、包围、调理、促进吞噬等方式将其排出体外［６－７］．凝集素还具有止血、凝固、物质运输及创伤修复等一系列作用［８］．目前一般认为，凝集素在甲壳动物免疫反应中主要充当识别因子，用于识别侵入机体内的外源异物，并发挥凝集作用．另外，凝集素还具有高度的调理作用，可在吞噬细胞和异物颗粒间形成分子连接，促进吞噬细胞对异物的吞噬作用，而达到免疫防御的目的［９］．本文测定了拟穴青蟹血清凝集素对某些动物红血球的凝集活性，并对其部分性质进行分析，以期为青蟹等甲壳动物的免疫防御机制的研究提供科学依据和基础材料．１ 材料与方法１．１ 材料１．１．１ 实验试剂药品 ＴＢＳ、ＴＢＳ－Ｃａ２＋、抗凝剂、多种糖类、多种金属离子、０．０１５ｍｏｌ·Ｌ－１（ｐＨ ３．０～５．０）柠檬酸－Ｎａ２ＨＰＯ４缓冲液、０．０１５ｍｏｌ·Ｌ－１（ｐＨ ６．０～８．０）磷酸盐缓冲液、０．０１５ｍｏｌ·Ｌ－１（ｐＨ ９．０～１０．０）Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液、０．０１５ｍｏｌ·Ｌ－１（ｐＨ １１．０～１２．０）Ｎａ２ＣＯ３－ＮａＨＣＯ３缓冲液、生理盐水等．１．１．２ 实验材料 拟穴青蟹采自泉州新门菜市场，家鸡、番鸭、家鸽、家兔等动物的全血采自泉州市丰泽区东海镇后埔菜市场．１．２ 方法１．２．１ 实验材料的处理 对拟穴青蟹进行剪肢放血，将血淋巴液经４ ５００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，弃沉淀物，即为含有凝集素的血清样品，将该血清样品放置于４℃冰箱中备用．将采集到的鸡、番鸭、鸽子以及兔子全血加入适量抗凝剂，放置于４℃冰箱中备用．①收稿日期：２０１１－０７－２０通信作者：戴聪杰（１９６６—），男，教授，博士，从事生理生化、浮游动物生理生态研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｏｎｇｊｉｅｄａｉ５０１＠１６３．ｃｏｍ．基金项目：福建省高校服务海西建设重点项目（Ａ１０１）；福建省自然科学基金资助项目（２００８Ｊ０４００２）；泉州市科技局技术研究与开发项目（２００８Ｎ４１）；福建省教育厅资助省属高校科研专项（Ｊｋ２０１００５０）１．２．２ 凝血试验 （１）红细胞制备．按抗凝剂与各类血液的体积比１∶９的比例制成抗凝血，２ ０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ除去血浆，再加１０倍体积的ｐＨ ７．４的ＴＢＳ溶液充分洗涤，１ ０００ｒ／ｍｉｎ离心３ｍｉｎ弃上清（重复４次），最后用ＴＢＳ－Ｃａ２＋按红细胞积压体积配成体积分数为２％ＴＢＳ－Ｃａ２＋红细胞悬液［１０］．（２）红细胞凝集实验．首先在９６孔Ｖ型血凝板中每孔中加入２５μＬ ＴＢＳ－Ｃａ２＋溶液，并把拟穴青蟹的血清样品加２５μＬ在各行首孔中，将其混匀后，再从第１孔中吸取２５μＬ混合液加入第２孔，以此类推作倍比稀释，最后一孔吸弃２５μＬ．然后在每孔中加入２５μＬ ２％ＴＢＳ－Ｃａ２＋红细胞悬液，混匀，并做空白对照，室温放置１～２ｈ后，肉眼观察各组凝集情况．无凝集时，红细胞沉于Ｖ型板孔底部，呈一光滑的小圆点；凝集时，红细胞相互聚集，形成一片絮状物，不下沉．红细胞凝集活力以产生凝集现象时的最大稀释倍数表示，此时，凝集素粗品的浓度为最低凝集浓度［１１］．１．２．３ 糖抑制试验 糖抑制试验糖抑制试验在９６孔Ｖ型微量血凝滴定板中进行．试验用的５种糖为Ｄ－半乳糖（Ｄ－Ｇａｌａｃｔｏｓｅ）、Ｄ－甘露糖（Ｄ－Ｍａｎｎｏｓｅ）、Ｄ－果糖（Ｄ－Ｆｒｕｃｔｏｓｅ）、麦芽糖（Ｍａｌｔｏｓｅ）、鼠李糖（Ｒｈａｍｎｏｓｅ），其浓度均为２００ｍｍｏｌ·Ｌ－１．先往Ｖ型板每孔中加入２５μＬ的拟穴青蟹血清样品，再分别加入２５μＬ糖溶液，再加入ＴＢＳ－Ｃａ２＋鸽红细胞，在３７℃下保温１～２ｈ后，观察凝集情况［１２］．１．２．４ 温度对凝集素活性的影响 先在９６孔Ｖ型血凝板上每孔加２５μＬ ＴＢＳ－Ｃａ２＋缓冲液；然后把拟穴青蟹的血清样品分装入１．５ｍＬ离心管中，分别在４、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００℃水浴锅中放置２０ｍｉｎ，按顺序放入，按顺序取出，分别等量加入各行首孔中，并做倍比稀释，最后一孔吸弃２５μＬ，再加入２５μＬ等量２％兔红细胞悬液，混匀．室温下放置１～２ｈ后按顺序进行观察．以室温凝集素对兔红细胞的凝集效果做对照［１３］．１．２．５ ｐＨ对凝集素活性的影响 在测定ｐＨ对拟穴青蟹凝集素的凝集活性的影响实验时，使用梯度ｐＨ缓冲液：ｐＨ ７．０～９．０Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液；ｐＨ ６．０～８．０Ｎａ２ＨＰＯ４－ＮａＨ２ＰＯ４；ｐＨ ３．０～５．０Ｎａ２ＨＰＯ４－柠檬酸缓冲液；ｐＨ ９．９～１０．８３Ｎａ２ＣＯ３－ＮａＨＣＯ３缓冲液．在９６孔Ｖ型血凝板上每孔加２５μＬ ＴＢＳ缓冲液．在各行首孔中分别加入等量拟穴青蟹血清样品溶液，并进行倍比稀释，最后一孔吸弃２５μＬ；再每孔加入等体积的２％的兔红细胞悬液，充分振匀．室温下放置１～２ｈ后观察．血凝活力以凝集素最大稀释倍数（２ｎ）表示，以ＴＢＳ溶液做对照［１４］．１．２．６ Ｃａ２＋对凝集素活性的影响 先在９６孔Ｖ型血凝板上每孔加２５μＬ ＴＢＳ缓冲液，再在各行首孔中分别再加入２５μＬ拟穴青蟹血清样品，并做倍比稀释，最后一孔吸弃２５μＬ；并在每孔中分别加入０．０１、０．０２、０．０５ｍｏｌ·Ｌ－１的ＥＤＴＡ，用２％兔红细胞测定其凝集活力，对于受ＥＤＴＡ抑制的血清样品重新加入１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＴＢＳ－Ｃａ２＋溶液后，观察是否恢复凝集活性．血凝活力以凝集素最大稀释倍数（２ｎ）表示，以ＴＢＳ－Ｃａ２＋溶液做对照［１５］．１．２．７ 盐度对凝集素活性的影响 在９６孔Ｖ型血凝板上每行分别加２５μＬ盐度为６‰、１２‰、１８‰、２４‰、３６‰、４８‰的不同ＮａＣｌ浓度的盐水，并在每行首孔中加入２５μＬ血清样品，进行倍比稀释，最后一孔吸弃２５μＬ；再加入等量的２％鸽子红细胞悬液，室温下放置１～２ｈ后，检测对鸽子红细胞的凝集活性［１６］．２ 结果与分析２．１ 血红细胞的凝集作用拟穴青蟹的血清样品对兔子红细胞、鸽子血红细胞、鸡血红细胞、鸭血红细胞的凝集效果见表１．结果显示，拟穴青蟹的血清样品对４种红细胞都有凝集作用．其中：对兔红细胞的凝集效价最高，为２９；对鸭红细胞的凝集效价最低，为２３．表１ 拟穴青蟹血清样品对几种红细胞的凝集效价血红细胞类型兔子鸽子鸡鸭凝集效果２９ ２６ ２４ ２３２．２ 糖抑制作用表２是５种糖对拟穴青蟹血清样品凝集素凝集鸽红细胞的影响．结果显示，Ｄ－半乳糖、麦芽糖、鼠李糖３种糖对拟穴青蟹血清样品对鸽红细胞凝集有抑制作用；而Ｄ－甘露糖、果糖则无抑制作用．其他糖类对其是否有抑制作用依然有待研究．３７ 第２期梁青龙，等：拟穴青蟹凝集素的活性及其部分性质 表２ 拟穴青蟹的血清样品凝集素活性的糖抑制糖类Ｄ－半乳糖Ｄ－甘露糖麦芽糖鼠李糖果糖２００ｍｍｏｌ·Ｌ－１糖的抑制结果抑制不抑制抑制抑制不抑制２．３ 热稳定性表３为不同温度下，拟穴青蟹血清样品凝集素凝集兔血红细胞的凝集效价．结果显示，当温度为４℃，凝集效价对比正常温度时有点低，３０～４０℃跟正常温度时的凝集效价一样，超过４０℃后，凝集效价逐渐下降，直至７０℃后，不产生凝集作用．表４ ｐＨ对拟穴青蟹血清样品的凝集作用的影响ｐＨ值４．０ ５．０ ６．０ ７．０ ８．０ ９．０ １０．０凝集效价——２６ ２９ ２７ ２６ ２５表３ 拟穴青蟹血清样品不同温度下的凝集效价温度／℃４ ３０ ４０ ５０ ６０ ７０ ８０凝集效价２７ ２９ ２９ ２６ ２３——２．４ ｐＨ对拟穴青蟹血清样品的凝集作用的影响表４为不同ｐＨ对拟穴青蟹血清样品的凝集作用的影响．结果显示，当ｐＨ为４或者５时，拟穴青蟹血清样品及兔红细胞皆为糊状，已经无法显示其凝集的效价了；当ｐＨ为７时，此时的凝集效价最高，而随着ｐＨ的下降或者升高，凝集效价都呈现下降趋势，至ｐＨ为１０时依然有凝集作用．２．５ Ｃａ２＋和ＥＤＴＡ对拟穴青蟹血清样品凝集兔红细胞的影响表５为Ｃａ２＋和ＥＤＴＡ对拟穴青蟹血清样品凝集兔红细胞的影响．结果显示，拟穴青蟹凝集素在ＥＤＴＡ处理之后仍具有活性，说明其对外源Ｃａ２＋的依赖性较小．表６ 盐度对凝集活性的影响盐度／‰６ １２ １８ ２４ ３６ ４８凝集效价２４ ２５ ２６ ２９ ２５ ２４表５ Ｃａ２＋和ＥＤＴＡ对拟穴青蟹血清样品凝集兔红细胞的影响ＣＥＤＴＡ／ｍｍｏｌ·Ｌ－１对照组１０ ２０ ５０凝集效价２９ ２４ ２３ ２２２．６ 盐度对凝集活性的影响表６为不同盐度时，拟穴青蟹血清样品对鸽红细胞的凝集作用的影响．结果显示，在盐度为６‰～４８‰时，拟穴青蟹血清对鸽红细胞都具有凝集活性，并呈现先高后低的趋势；当盐度在２４‰时，凝集活性最高．３ 讨论凝集素是一类具有独特生理活性的蛋白质或糖蛋白，在拟穴青蟹的免疫过程中发挥着重要的作用．从表１可以看出拟穴青蟹血清样品对不同的红细胞凝集效果呈现不同的效价，这与文［１７－１８］的结果相似，与凝集素的作用机理相关，可能是由于各种红细胞的表面的糖蛋白各异而导致结合效果的差异．锯缘青蟹的血清凝集素可被Ｄ－半乳糖抑制［１９］，表２显示出拟穴青蟹也同样被Ｄ－半乳糖抑制，还同时被麦芽糖、鼠李糖所抑制．能对血清中凝集素产生抑制的糖类一般被认为是其结构互补于凝集素的结合部位，从而可确定出凝集素结合部位对糖的特异性．另一方面，凝集素对动物红细胞的凝集可看作是这些细胞表面的多糖或糖蛋白的识别性结合，这在无脊椎动物的免疫中起重要作用［２０］．糖抑制试验的结果可为分离和纯化拟穴青蟹血清凝集素时亲和层析柱的选择提供基础资料和科学依据［１９］．凝集素的热稳定性主要由凝集素的活性位点的性质所决定的，若活性位点为肽链或蛋白质，则由于肽链或蛋白质受热后其空间构象会发生变化使其失去活性，因而这类凝集素的热稳定性较差；但如果活性位点为糖链，糖链在受热时依然能较好的保持其活性，所以这类凝集素的热稳定性较好．由表３可知，拟穴青蟹血清样品凝集素的耐热性较好，由此可以推断其凝集素的活性位点可能为糖链．曾缓缓等人经研究得出，拟穴青蟹的适宜生存的ｐＨ为７．５～９．０，过高或者过低都会导致其免疫力下降［２１］．本实验拟穴青蟹血清样品凝集素凝集作用效果较好的ｐＨ范围为７．０～９．０，与其所得出的结论相一致，进一步证实了拟穴青蟹生存的最适宜ｐＨ为中性偏碱，即为７．０～９．０．本实验中，拟穴青蟹血清样品的凝集素在６‰～４８‰盐度范围内依然有活性，与其为海产养殖品，并具有广盐性有关［１－３］．陈建明等人研究得出拟穴青蟹大眼幼体适宜盐度为２０．５‰～２６．５‰，幼蟹适宜盐度为１０．５‰～２６．５‰［２２］，本实验的得出的拟穴青蟹血清样品的凝集素凝集效果最佳盐度也在这区间，与其研究相符．不过其所能承受的最高盐度依然有待研究．４７ 泉州师范学院学报２０１２年３月 参考文献：［１］ 林琪，李少菁，黎中宝，等．中国东南沿海青蟹属（Ｓｃｙｌｌａ）的种类组成［Ｊ］．水产学报，２００７，３１（２）：２１１－２１９．［２］ ＫＥＥＮＡＮ Ｃ Ｐ，ＤＡＶＩＥ Ｐ Ｆ Ｊ，ＭＡＮＮ Ｄ Ｌ Ａ．ｒｅｖｉｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｕｓ Ｓｃｙｌｌａ Ｄｅ Ｈａａｎ，１８３３（Ｃｒｕｓｔａｃｅａ：Ｄｅｃａｐｏｄａ：Ｂｒａｅｈｙｕｒａ：Ｐｏｒｔｕｎｉｄａｅ）［Ｊ］．Ｔｈｅ Ｒａｆｆｌｅｓ Ｂｕｌｌ Ｚｏｏｌ，１９９８（４６）：２１７－２４５．［３］ 马凌波，张凤英，乔振国，等．中国东南沿海青蟹线粒体ＣＯＩ基因部分序列分析［Ｊ］．水产学报，２００６，３０（４）：４６３－４６８．［４］ 孙册，朱政，莫汉庆．凝集素［Ｍ］．北京：科学出版社，１９８６．［５］ 李桂生，纪伟尚，徐怀恕，等．对虾体内酚氧化酶活性规律的初步研究［Ｃ］／／对虾苗期细菌病害的诊断与控制：欧盟欧洲委员会资助项目研究论文集．北京：海洋出版社，１９９９：１２２－１２７．［６］ ＨＡＬＬ Ｊ Ｌ，ＲＯＡＬＡＮＤＳ Ｄ Ｔ．Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｏｆ ｌｏｂｓｔｅｒ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｓⅠ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ－ｉｓｔｒｙ，１９７４，１３（４）：８２１－８２７．［７］ ＨＡＬＬ Ｊ Ｌ，ＲＯＡＬＡＮＤＳ Ｄ Ｔ．Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ ｏｆ ｌｏｂｓｔｅｒ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｓⅡ．Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｂｉｎｄｉｎｇ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ－ｔｒｙ，１９７４，１３（４）：８２８－８３２．［８］ ＬＡＣＫＩＥ Ａ Ｍ．Ｉｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］．Ｐａｒａｓｉｏｌｏｇｙ，１９８０，８０：３９３－４１２．［９］ 钱沛锋．甲壳动物免疫机制初探［Ｊ］．渔民致富指南，２００８（２１）：４６－４７．［１０］ ＷＯＮＧＡ ＪＡＣＫ Ｈ，ＥＤＷＩＮ ＣＨＡＮ Ｈ Ｙ，ＮＧ Ｔ Ｂ．Ａ．Ｍａｎｎｏｓｅ／ｇｌｕｃｏｓｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｌｅｃｔｉｎ ｆｒｏｍ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｅｖｅｒｇｒｅｅｎ ｃｈｉｎｋａｐｉｎ（Ｃａｓｔａｎｏｐ－ｓｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，２００８：１０１７－１０２２．［１１］ 唐海淑，宁雪飞．骆驼蓬种子凝集素粗品活性的初步研究［Ｊ］．西北植物学报，２０１０，３０（４）：６４５－６５１．［１２］ 戴聪杰，陈寅山．脊条褶虾蛄血清及肌肉提取液凝集活性的比较［Ｊ］．台湾海峡，２００３，２２（１）：３２－３７．［１３］ ＷＡＮＧ Ｙ Ｌ，ＣＨＥＮ Ｙ Ｐ，ＨＵＡＮＧ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ｔｅｓｔｓ ｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ Ｌ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，２００８，３４（２）：６７－７１．［１４］ 王庆忠，张鹭，吴耘红，等．１４种蔬菜中凝集素的提取和生物活性研究［Ｊ］．中国热带医学，２００８，８（５）：７４９－７５２．［１５］ 王庆忠，张鹭，吴耘红，等．菜豆凝集素的提取和部分性质研究［Ｊ］．中国临床医药研究杂志，２００８（４）：１－４．［１６］ 柯佳颖．泥蚶凝集素的分离纯化、理化性质及血清的免疫因子研究［Ｄ］．福州：福建师范大学，２００６．［１７］ 刘雪兰，余这一，李槿年．中华绒毛蟹血清凝集素的生物学特性［Ｊ］．中国水产科学，２００６，１３（３）：３６５－２７０．［１８］ 周春花，黎敏，吴小平，等．军山湖中华绒螯蟹血清凝集素特性分析［Ｊ］．淡水渔业，２００８，３８（５）：７－９．［１９］ 戴聪杰．甲壳动物血清中凝集素的凝集作用及影响因素［Ｊ］．泉州师范学院学报，２００２，２０（６）：７６－８１．［２０］ 曹广力，朱越雄，薛仁宇，等．中华绒螯蟹血清中外源凝集素的凝集作用影响因素［Ｊ］．水产养殖，１９９９（５）：１６－１８．［２１］ 曾缓缓，艾春香，刘建国，等．ｐＨ胁迫对拟穴青蟹体内几种免疫因子的影响［Ｊ］．厦门大学学报：自然科学版，２００８，４７（３）：４１３－４１８．［２２］ 陈建明，沈斌乾，潘茜，等．拟穴青蟹大眼幼体和幼蟹对盐度的适应性研究［Ｊ］．中国水产，２０１０（６）：６８－６９．Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｌｅｃｔｉｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｓｅｒｕｍ ｏｆ Ｃｒａｂ Ｓｃｙｌｌａ ＰａｒａｍａｍｏｓａｉｎＬＩＡＮＧ Ｑｉａｎｇ－ｌｏｎｇ１，ＳＵ Ｘｉｎ－ｌｏｎｇ２，ＤＡＩ Ｃｏｎｇ－ｊｉｅ２（１．Ｑｕａｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｆｕｊｉａｎ ３６２０００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｑｕａｎｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｊｉａｎ ３６２０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｌｅｃｔｉｎ ｉｎｓｅｒｕｍ ｏｆ Ｓｃｙｌｌａ ｐａｒａｍａｍｏｓａｉｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｌｅｃｔｉｎ ｉｎ ｓｅｒｕｍ ｏｆ Ｓｃｙｌｌａ ｐａｒａｍａｍｏｓａｉｎｃａｎａｇｇｌｕｔｉｎａｔｅ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ ｏｆ ｒａｂｂｉｔ，ｄｏｖｅ，ｄｕｃｋ，ｃｈｉｃｋｅｎ，ａｎｄ ｈａｄ ａ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｔｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ．Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｃａｎ ｂｅ ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ Ｄ－Ｇａｌａｃｔｏｓｅ，Ｍａｌｔｏｓｅ，Ｒｈａｍｎｏｓｅ．Ｔｈｅ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｗｏｕｌｄ ｂｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｆｒｏｍ ３０ｔｏ ４０℃，ｐＨ ｉｓ ７．０，ｓａｌｉｎｉｔｙｉｓ ２４．Ａｎｄ ｔｈｅ ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｉｓ ｌｅｓｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｅｄ ｏｎ Ｃａ２＋．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓｃｙｌｌａ ｐａｒａｍａｍｏｓａｉｎ；ｌｅｃｔｉｎ；ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ５７ 第２期梁青龙，等：拟穴青蟹凝集素的活性及其部分性质 。
拟穴青蟹2种地理群体的形态与养殖比较研究
拟穴青蟹2种地理群体的形态与养殖比较研究
本研究旨在比较拟穴青蟹东海与南海地理群体的形态特征及其养殖效果，为该蟹在养
殖产业中的应用提供参考。
材料与方法
实验选用东海和南海各10只拟穴青蟹（平均体重400g），对其形态特征和养殖效果进行比较研究。
测量的形态特征包括蟹体长度、蟹体宽度、蟹螯长度、蟹爪长度、蟹爪宽度、蟹体重和蟹爪重量。
养殖效果方面，记录了两种群体的生长速度和生存率。
结果与讨论
形态特征方面，结果显示南海地理群体的拟穴青蟹螯臂更长，蟹爪宽度更宽，但蟹体
长度、宽度、蟹体重和蟹爪重量方面与东海地理群体差别不大。
这可能与南海海域水温较高、食物丰富有关。
养殖效果方面，东海地理群体比南海地理群体生长速度更快，但生存率稍低。
这可能
与东海海域水温较低、环境条件更苛刻有关。
结论
综合比较，两种地理群体的拟穴青蟹在形态特征和养殖效果方面存在差异。
在养殖中
应根据不同环境条件选择适应的地理群体，以获得更好的养殖效果。
拟穴青蟹一种含CTLD结构域基因的克隆及表达分析
文章编号：１００４－２４９０（２０２０）０３－０３３２－０９拟穴青蟹一种含ＣＴＬＤ结构域基因的克隆及表达分析 收稿日期：２０１９－０４－１９基金项目：中央级科研院所基本科研业务费（２０１４Ｚ０１）；宁波市科学技术局农业重大科技专项（２０１６Ｃ１１００Ｂ）；上海农委“科技兴农”项目（２０１８ ０２ ０８ ００ ０７ Ｆ０１５５０）作者简介：王 田（１９８９—），女，硕士研究生，主要从事甲壳类生物技术研究。
Ｅ ｍａｉｌ：ｗａｎｇｔｉａｎｈｎ＠１６３．ｃｏｍ通信作者：马春艳，副研究员。
Ｅ ｍａｉｌ：ｍａｃｙ＠ｅｃｓｆ．ａｃ．ｃｎ王 田１，２，赵 明１，２，张凤英１，马凌波１，马春艳１（１．中国水产科学研究院东海水产研究所，农业农村部远洋与极地渔业创新重点实验室，上海 ２０００９０；２．上海海洋大学水产与生命学院，上海 ２０１３０６）摘 要：从拟穴青蟹（ＳｃｙｌｌａＰａｒａｍａｍｏｓａｉｎ）中克隆得到一个含有ＣＴＬＤ（Ｃ ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ ｌｉｋｅｄｏｍａｉｎ）结构域的Ｃ型凝集素基因，经分析未发现同源基因，将其命名为ＳｐＣＴＬＤ。
该基因ｃＤＮＡ序列全长为１２３７ｂｐ，包含一个４６８ｂｐ的开放阅读框，编码１５５个氨基酸，预测分子量为１８．３２ｋＤａ，等电点为７．５６。
经一代测序，该基因在第３９０位（Ａ３９０Ｇ）和第１０２０位（Ｔ１０２０Ｃ）含有两个ＳＮＰ位点。
对ＳｐＣＴＬＤ基因在拟穴青蟹幼体不同时期和组织中的表达模式分析发现，ＳｐＣＴＬＤ在幼体的各个发育时期均有表达，其中在蟤状幼体Ⅴ期表达量最高，仔蟹Ⅰ期次之，仔蟹Ⅱ期最低。
对ＳｐＣＴＬＤ的组织分布分析表明，ＳｐＣＴＬＤ在鳃中表达量最高，其次为射精管，在血淋巴、肝胰腺等其他免疫组织中也有表达，其中在鳃和射精管的表达量远高于在其他组织中的表达量。
副溶血弧菌胁迫实验表明，活菌组的肝胰腺、血淋巴、鳃中的ＳｐＣＴＬＤ表达量发生显著上调，且都在１２ｈ达到最高。
根据研究结果，推测ＳｐＣＴＬＤ是一种含ＣＴＬＤ结构域的新基因，它可能参与了拟穴青蟹抗细菌反应。
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肝胰腺差异蛋白筛选—2-DE分析
2-DE分析如图所示，每块凝胶发现100-200RNA的表达量
青蟹血蓝蛋白的同源性比对
在不同的组织中 SpHMC 的 mRNA的表达量不同； 用不同的致病菌刺激后SpHMC 的mRNA表达量也不同。
结论
本研究通过大黄多糖刺激拟穴青蟹后血清免疫活性指标，以及血细胞、肝
胰脏差异蛋白和主要免疫相关蛋白mRNA表达水平变化的研究，发现：
1. 大黄多糖免疫刺激能显著提高青蟹血清中酚氧化酶、溶菌酶、超氧化物歧化 酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶五种酶酶活力。说明大黄多糖是一种适合于青蟹 的行之有效的中草药免疫增强多糖。 2. 大黄多糖免疫刺激后分别使青蟹血细胞和肝胰脏中15种和17种蛋白表达水平 发现显著变化，其中糜蛋白酶、假血蓝蛋白、C型凝集素、铁蛋白和血蓝蛋白 等5种蛋白与青蟹免疫增强密切相关。其中血蓝蛋白和胰凝乳蛋白免疫相关蛋
指导老师：章跃陵教授 主 讲 人：黄 越 倩 2014-12-05
研究背景
大黄
大黄是一种中药材，具有抗病毒、 抗肿瘤、增强免疫等功能。据报道称用 一定的剂量连续灌小鼠胃7ｄ，可明显提 高小鼠自然杀伤(ＮＫ)细胞的活性,并能 增强伴刀豆球蛋白Ａ诱导淋巴细胞增殖 的能力。可见,大黄多糖对机体免疫系统 有一定的保护作用,这与大多数植物多糖 的功能相同。
白mRNA表达水平发现显著变化，提示这5种蛋白可能参与青蟹免疫增强和抗
病原微生物反应。
展望
所获得的实验结果实现了青蟹免疫增强主要相关蛋白的鉴定，
为探索一条青蟹病害的生态学防治策略提供了新的思路，对了解
青蟹免疫增强的机理，及免疫学防治提供了科学依据。
谢谢
研究背景
拟穴青蟹俗称青蟹，因适应性强 ，生长快，经济价值高，青蟹养殖 已发展成为我国水产养殖的一个重 要分支。近年来，病害流行成为我 国青蟹养殖业持续健康发展的严重 阻碍，解决青蟹疾病问题的根本途 径之一在于提高对虾自身免疫力， 增强其抗病能力。
摘要
用大黄多糖刺激青蟹鉴定其免疫增强的相关蛋白，试验发现，注射过大黄多糖的青蟹其 体内的酚氧化酶（PO）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶(ACP)等免疫活性指标与对照组 的值相比都有显著的提高。
对青蟹中的血蓝蛋白进行克隆并序列分析，它属于蟹血蓝蛋白系统进化树中的一分支。 当被副溶血弧菌、β链球菌刺激后，肝胰腺、血细胞、胃等组织中均能检测到 SpHMC ，且 mRNA表达量不一致。
免疫活性指标的检测
血细胞差异蛋白筛选—2-DE分析
2-DE分析如图所示，每块凝胶发现80-120个蛋白点，差异蛋白点15个
根据2-DE电泳分析发现注射大黄后，血细胞和肝胰腺中分别有15和17种蛋白表达发生了
变化。这些蛋白通过质谱分析，鉴定为血蓝蛋白、胰凝乳蛋白，铁蛋白、C型凝集素等蛋白。 为进一步证实这些蛋白是免疫增强的相关蛋白，通过RT-PCR分析显示实验组中血蓝蛋白和
胰凝乳蛋白酶中的mRNA的表达水平都有明显升高。