无菌室标准化规程与验收规范
无菌检验标准操作规程(SOP)
目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。
范围：本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。
责任者：质管部、化验室主任、QC检验员内容：1、标准依据：《中国药典》2015年版二部附录XI H。
2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。
检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查。
若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。
3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。
其全过程必须严格遵守无菌操作。
防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。
操作前环境洁净度应经验证。
日常检验需对试验环境进行监控。
5、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。
4、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。
6、检验数量及检验量：6.1、接种每种培养基所需的最少检验数量:2%或10个（取较少者），供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。
6.2、每支供试品接入每种培养基的最少量:半量（100ml≤V≤200ml），采用薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
7、细菌培养温度为30～35℃，真菌培养温度为23～28℃。
8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、一次性使用集菌培养器。
9、消毒剂配制：9.1、75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。
9.2、0.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。
9.3、2％来苏尔溶液（配制消毒棉球用）。
10、试剂及培养基的配制：10.1、0.1％蛋白胨水溶液：取蛋白胨1.0g，加水1000ml,微温使溶解，滤清，调节PH值至7.1±0.2，分装，灭菌。
JY-2.5-13无菌室操作规程
无菌室操作规程1 目的为确保微生物检验中匀样、取样和接种等操作是在无菌条件下进行，以保证检验结果准确可靠。
2 范围适用于本企业化验室微生物检验的操作和检验质量监控。
3 无菌室的一般要求3.1 无菌室是食品微生物检验的重地，检验、接种必须在一个无杂菌的环境中进行严格的无菌操作。
无菌室室内环境的无菌程度决定着检验结果的准确性。
应严格遵守《食品安全管理手册:实验室管理制度》的规定，无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，严格无菌操作，防止微生物污染：3.2 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物、与检验不相关的和多余的物品，以防污染。
3.3 无菌室在使用前，必须对室内进行灭菌，包括缓冲室及工作服、帽、鞋。
灭菌操作见4。
3.4 无菌室的无菌程度，应每半月检测一次，若无菌室内的细菌总数超过4个（见3无菌程度评价操作规程），则应进行彻底灭菌处理，以保证检验数据的准确性。
3.5 无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。
3.6 进入实验室必须穿工作服，进入无菌室须在缓冲室中穿（换）上白色的无菌工作服、帽、鞋，戴好口罩。
非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。
3.7 实验完毕，脱（换）下无菌工作服、帽挂于缓冲室墙上，鞋留于缓冲室。
口罩带出无菌室，清洗消毒后才可再用。
如工作服、帽、鞋，一般1个星期清洗、消毒一次。
4 无菌室的日常灭菌操作4.1 在开始工作前，开启紫外灯30 min 以上，关灯后再等30 min ，检验人员方可进入无菌室进行检验操作。
一般连续工作（不多于）4 h 后，需重新开启紫外灯进行灭菌消毒。
4.2 每天工作结束，应按微检室洁净要求及时清理无菌室，然后离开无菌室关闭各门，再开启紫外灯30 min 以上灭菌，关灯，保持。
4.3 注意：4.3.1 无菌室的紫外灯开关，应安装在无菌室外。
4.3.2检验员须确认关灯后方可进入无菌室，否则会损害人身健康。
5 无菌室的彻底灭菌处理操作5.1 甲醛和高锰酸钾混合熏蒸法5.1.1 用甲醛和高锰酸钾混合熏蒸：一般每立方米需36～40％甲醛10毫升，高锰酸钾8毫升，进行熏蒸。
无菌室使用规程
文件制修订记录
1.0目的
用于规范无菌室的使用，保证无菌效果及无菌操作的可靠性。
2.0范围
本标准适用于公司无菌室的使用。
3.0定义
无
4.0细则
4.1初次使用前要用紫外线灭菌灯灭菌，每次灭菌1－3个小时，灭菌过程中要悬挂“灭菌中”标示，灭菌后要悬挂“已灭菌”标示。
4.2工作服每周清洗一次，拖鞋每周清洗一遍。
并用紫外线灭菌灯灭菌。
4.3每周使用臭氧杀菌一次，臭氧发生器的时间不得少于30分钟。
4.4接种操作前，用75％的酒精棉球擦手。
进行无菌操作时，要严格认真，动作轻捷，尽量减少空气流动。
4.5接种操作后要对玻璃、地面、洁净操作台、均质器等全面进行打扫清洁。
废弃物及时处理。
4.6每个月对无菌室的灭菌效果验证一次。
验证方法：以通琼脂平皿放置无菌室洁净操作台上，开盖暴露10分钟，在37±1℃培养24小时后，检验暴露平板的细菌总数。
2个平板的平均值不得大于10cfu。
如果大于10cfu，停止使用，重新熏蒸灭菌。
验证合格后，方可使用。
4.7物品、样品只能从物流通道放进。
不得从人流通道带入。
4.8认真填写无菌室的清洁、灭菌、使用等记录，如有不正常现象发生，上报实验室负责人。
5.0记录
无菌室清洁灭菌记录
无菌室使用记录
6.0相关文件
出口罐头卫生注册规范。
无菌室操作规程范文
无菌室操作规程范文无菌室是进行微生物学研究和生物制品生产等工作的特殊实验室，其操作对卫生环境的要求相对较高。
为了确保无菌室的正常运行和操作人员的安全，有必要制定相关的操作规程。
以下是一份无菌室操作规程的示例，共计1200字以上：一、无菌室基本规定1.所有进入无菌室的人员必须佩戴干净的无菌手套、无菌口罩和无菌防护服。
进入无菌室前应先进行全身洗净，并在无菌手套外部涂覆无菌消毒剂。
2.无菌室内禁止吸烟、喝食和进食，以及在台面上放置任何非实验用品。
3.进出无菌室时，要轻柔开启或关闭门，避免产生气流。
4.每天工作结束后，应对无菌室内进行全面清洁和消毒。
二、准备工作1.将工作所需的实验器材、试剂和培养基置于无菌室内的专用台面上，台面应提前进行清洁和消毒。
2.检查无菌室内的各项设备是否正常运行，如高效空气净化器、紫外线灯等。
3.检查工作台面和设备的消毒状态，如有异常应及时处理并报告主管。
三、操作规范1.进行不同实验任务时，尽量避免同时进行多项不相关操作，以降低交叉污染的风险。
2.在操作前，必须将所需的仪器和试剂按照需要排列整齐，避免频繁开启和关闭柜门和蚊虫门，以减小细菌进入的可能性。
3.注意无菌室内的操作时间，每次操作时间不宜过长，以免引起不必要的微生物扩散。
4.操作过程中要避免产生气流，尽量减少对工作台面的移动，以减少细菌扩散的可能性。
5.完成每项操作后，应将所使用的仪器、试剂和耗材等进行妥善清理和处理，并记录相关数据。
6.对于有潜在感染风险的实验操作，应穿戴好相应的个人防护设备，并在规定的时间内进行彻底消毒。
四、消毒规定1.所有进入无菌室的人员必须经过全身消毒，包括洗手、洗脸和使用消毒剂进行泡脚。
2.工作台面、仪器和试剂在使用前和使用后必须进行彻底的消毒处理。
3.无菌室内定期进行全面消毒，包括台面、墙壁、地板和各种设备等。
4.建议每天在无菌室关闭后，对无菌室内空气进行紫外线辐射消毒，确保内外干净。
五、使用实验台面规则1.实验台面必须保持干净，避免残留物的积累，以免形成隐患。
无菌实验室操作规范及要求
无菌实验室操作规范及要求一、实验前的准备工作1.实验员应接受相关的培训并具备基本的微生物学知识。
2.进入实验室前，必须穿戴干净、合适的实验服，并戴上手套、口罩、帽子和鞋套等个人防护装备。
3.实验室必须保持整洁，定期进行消毒和清洁工作。
4.无菌实验室必须具备必要的设备和材料，如灭菌器、培养箱、无菌液体培养基等。
二、无菌操作的基本要求1.在无菌台上进行无菌操作，无菌台有玻璃罩和紫外线灯，必须保持室内无菌状态。
2.实验员在操作前，必须经过消毒处理，戴上手套，并用70%酒精消毒手部。
3.所用的培养皿、试管、移液器等实验器材，必须经过高温高压灭菌处理。
4.不同实验物品如培养基、细菌液体等必须分装于不同的容器中，杜绝交叉污染。
5.在操作过程中，要注意手部、试管等接触物品的时间要最短，以减少微生物的污染。
6.操作过程中，要保持无风状态，最好不要与他人交谈，避免口液飞溅。
三、无菌培养基的制备及使用1.无菌培养基的制备必须在无菌条件下进行，实验员在制备前必须对无菌培养基进行灭菌处理。
2.制备过程中要注意避免培养基的接触物表面，以免污染培养基。
3.无菌培养基的使用要遵循严格的操作要求，防止细菌的污染。
四、无菌实验器具的处理1.实验结束后，实验员必须清洁无菌台及其他实验设备，对使用过的器材必须进行彻底的清洗和消毒。
2.实验受污染的实验器材必须经过高温高压灭菌处理，以杀灭可能存在的细菌。
3.废弃物如细菌培养物、液体培养基等必须采取合适的处理方式，避免二次污染。
五、必要的应急措施1.实验中如发生溅洒、翻倒等意外事故，应立即进行灭菌处理，并及时向实验室管理者报告。
2.如发现个人或他人出现感染症状，应立即采取相应的医疗措施，并及时报告。
六、实验记录和数据分析1.实验过程中，应及时记录实验操作、观察结果和数据，确保实验结果的准确性。
2.实验数据的处理和分析应遵循科学与公正原则，不得随意篡改或捏造数据。
以上为无菌实验室操作规范及要求，只是基本要求，实践中可能还有更为具体和细致的操作规范，实验员应按照实验室要求进行操作，并随时学习和更新相关知识，提高无菌操作的技能和水平。
无菌技术操作规程及评分标准
无菌技术操作规程【评估】无菌技术操作条件（环境、物品）【准备】护士：着装整洁，剪短指甲、取手表、卷袖过肘、洗手并擦手，戴口罩。
物品：治疗车、治疗盘2个，无菌持物钳包、手消液、无菌注射器、无菌巾包，无菌溶液、安尔碘、无菌棉签、无菌有盖缸内盛纱布、无菌治疗碗包、号码合适的无菌手套一副、橡皮筋、标签纸、书写笔、污物缸、抹布、锐器盒。
环境：清洁、干燥。
【方法】擦桌面→治疗盘→手消。
无菌持物钳的使用：检查无菌包→开无菌持物钳容器包→取出无菌持物缸→取下包外3M消毒条书写开启时间及责任者贴于无菌缸外壁。
铺无菌盘法（单层铺巾法）：检查无菌包→打开无菌包→用无菌持物钳夹取一块治疗盘内→未污染的剩余治疗巾按原折痕包好→捏住治疗巾上层两角外面打开→双折铺于盘上→扇形折叠打开→放无菌物品→双手捏翻折治疗巾两个角的外面向下覆盖，覆盖时将各边缘对整齐→将开口处向上折两次→两侧边缘分别向下折一次→露处治疗盘边缘→治疗盘即备好待用→注明开包→铺盘时间及责任者。
无菌碗的使用法：检查无菌包→打开包（外层用手，内层用手或无菌持物钳均可，原则不污染）→扭转放无菌碗于治疗盘内→整理包布。
取用无菌溶液法：核对瓶签，检查溶液→拉开输液瓶拉环盖→注射器抽取溶液→将溶液推入无菌碗内→消毒瓶口并贴瓶口贴或用无菌纱布盖好→注明开瓶时间及责任者（已打开的溶液24小时内有效）。
无菌容器使用法：检查无菌容器→打开容器，盖的内面朝上→持无菌容器时手指不可触及容器的边缘及内面→用无菌持物钳取出无菌物品→将容器盖严。
戴无菌手套法：戴手套：检查手套的号码、有效使用期及包装袋有无潮湿、破损→打开手套袋→两手同时掀开手套开口处，分别捏住两只手套翻折部分，取出手套→将两手套五指对准→先戴一只手，再以戴好的手指插入另一只手套的翻折面内，同法戴好→调整手套位置。
脱手套：一手捏住另一手的手套口外面翻转脱下→已脱手套的手伸入另一只手套内将其脱下→将手套的里面翻套在外面→将用过的手套放医用垃圾袋内备处理。
无菌室标准化规程及验收规范
化并冷却至约 ４ ￣ 的营养琼脂培养基约 １ｍｌ 至凝 固后 ， ５Ｃ ５ ，放
３ 安 全 注意 事项
严格 无菌操作 ， 防止微 生物污 染 ： 操作 人员 进入 无菌室 应先关掉紫外灯 。
倒置 于 ３ ～ ５ ０ ３ ℃培养箱培养 ４ ８小 时 ， 明无菌后 ， 证 取平板 ３ ～ ５个 ， 分别放置工作位置 的左 中右等处 ． 开盖暴露 ３ ０分 钟后 ， 倒置 于 ３ ～ ５Ｃ ０ ３ ￣培养箱培养 ４ ８小时 ， 出检查 。０ 取 １０级洁净区
Ｓ ｉｎ ｅ ＆ Ｔｅ ｈ ｏｏ ｙＶｉ ｏ ｃｅ ｃ ｃ ｎ ｌｇ ｓ ｎ ｉ
２１ ０２年 Ｏ ３月第 ０ ７期
科 技 视 界
科教前哨
无菌室标准化规程及验收规范
陈 雨
（ 哈药 集 团制药 总厂 １ ３车 间 黑龙江 ０
哈尔 滨
１０ ８ ） ５ ０ ６
１ 目的
本 规程 旨在为 无菌操 作及无 菌室 的保 护提供 ～个标 准
染 。检查前 ， ７ ％的酒精棉球 消毒外表面 。 用 ５ ４９ 每次操作过 程中 ， ． 均应做 阴性对 照 ， 以检查 无菌操作 的 可靠性
和缓 冲间都必 须密 闭。室 内装备 的换 气设备必须有 空气过滤
装置 。无菌室 内的地 面 、 墙壁 必须 平整 ， 易藏污纳垢 ， 不 便于 清洗。工作台的台面应该处于水平状态 。无 （ 下转第 １ ７页 ） ３
平板杂菌数平 均不得 超过 １ 菌落 ，０ ０ 个 １００级洁净 室平 均不
４ 建造 规 程
４１ 生产 区域 的洁净 级别按 照 ＩＯ ４ ４ ． Ｓ １６ ４标准划分 原则 ． 设 置为 ＡＢＣＤ 四个级 别 。无 菌操作 间洁净 度应 达到 Ａ级 、 ／／／ Ｂ 级， 分装 时应 在 Ａ级环境下操作。 室内温度保持在 １～ ６Ｃ， ８２￣ 湿度 保持 在 ３ ～ ５ ０ ６ ％，不 同等 级 洁净 区之 间 的压差 不 低 于
无菌室管理使用规程
无菌室管理使用规程
1 目的建立无菌室管理使用规程，保证操作者正确使用。
2 范围适用于无菌室操作。
3 责任者操作人员、无菌室管理人员。
4 内容
4．1无菌室应严禁放置杂物，无关人员严禁入内。
4．2 无菌室应严格保持整洁，防止污染，定期用甲醛熏蒸消毒（每月一次），使用前用0.1%新洁尔灭控式消毒净化工作台。
4．3 实验人员进入无菌室，必须更换无菌衣、帽、鞋等，操作前用0.1%新洁尔灭菌或75%酒精进行手消毒。
4．4 使用前开启紫外灯照射60分钟，同时打开吹风净化工作台，操作完毕及时清理，再开紫外灯照射30分钟。
4．5检验过程严格按照无菌操作规程操作，爱惜室内用具，使用完毕，整理检品及各种用具并清洁工作台面。
4．6 接种环在每次使用前后，必须通过火焰灭菌冷却后方可接种培养物。
4．7 所有带菌实验用品，须经有效的消毒灭菌处理后再洗刷。
严禁污染下水道。
4．8 无菌室定期进行洁净度测试检查沉降菌（在室内打开肉汤琼脂平皿30分钟，经37℃培养48h），100级平均菌落数不得过1个/皿，如超过应进行清洁消毒。
4．9 无菌室进出程序如下：
无菌室进出程序
虚线为出室程序。
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无菌室标准化规程与验收规范(《洁净室沉降菌测试标准操作规程》)(《洁净室沉降菌测试标准操作规程》)无菌室标准化规程与验收规范洁净室沉降菌测试标准操作规程》 (含《洁净室沉降菌测试标准操作规程》)1.目的本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。
2.适用范围生测实验室3.责任者 QC 主管生测员4.定义无5.安全注意事项严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。
6.规程6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到 10000 级，室内温度保持在 20-24℃，湿度保持在 45-60%。
超净台洁净度应达到 100 级。
6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。
6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。
6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如 5％的甲酚溶液，70％的酒精， 0.1％的新洁尔灭溶液，等等。
6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。
6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。
6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用 70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。
6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌 30 分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。
操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌 20 分钟。
6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。
检查前，用 70％的酒精棉球消毒外表面。
6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。
6 .11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。
6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。
6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有 5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24 小时后取出冲洗。
6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用 5%石碳酸溶液或 3％的来苏尔倾覆在被污染处至少 30 分钟，再做处理。
工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。
6.15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。
6.16.无菌室应每月检查菌落数。
在超净工作台开启的状态下，取内径 90mm 的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于 30～35℃培养箱培养 48 小时，证明无菌后，取平板3～5 个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露 30 分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养 48 小时，取出检查。
100 级洁净区平板杂菌数平均不得超过 1 个菌落，10000 级洁净室平均不得超过 3 个菌落。
如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。
7.参照参照《药品卫生检验方法》《中国药品检验标准操作规范》中 (无菌检查法)章节中华人民共和国医药行业标准 YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》8.分发部门质量管理部无菌室技术指导说明在获得了无菌环境和无菌材料后，我们还要保持无菌状态，才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很容易混入。
外界不相干的微生物混入的现象，在微生物学中我们叫做污染杂菌。
防止污染是微生物学工作中十分关键的技术。
一方面是彻底灭菌，另一方面防止污染，是无菌技术的两个方面。
另外，我们还要防止所研究的微生物，特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们的实验容器中逃逸到外界环境中去。
为了这些目的，在微生物学中，有许多措施。
无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢，便于清洗。
工作台的台面应该处于水平状态。
无菌室和缓冲间都装有紫外线灯，无菌室的紫外线灯距离工作台面 1 米。
工作人员进入无菌室应穿灭过菌的服装，戴帽子。
当前无菌室多存在于微生物工厂，一般实验室则使用超净台。
超净台其主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃。
通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。
而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入。
在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台。
无菌箱结构简单，便于移动，箱正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去。
正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种等。
应用无菌操作技术当前不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，而且在许多生物技术中也被广泛应用。
例如转基因技术、单克隆抗体技术等。
《洁净室沉降菌测试标准操作规程》洁净室沉降菌测试标准操作规程》目的：建立洁净室中沉降菌的测试标准操作规程，1 目的：建立洁净室中沉降菌的测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。
2 范围：洁净室的沉降菌的监测。
3 依据：国家标准 GB/T 16294-1996。
4 职责：QA 洁净度监测人员、微生物检验人员对本制度的实施负责。
5 内容5.1 洁净室：对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。
5.2 洁净工作台：一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净罩、水平层流罩、够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流洁净罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。
水平层流洁净工作台、自净器等。
5.3 洁净度：洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径悬浮粒子的允许统计数。
5.4 菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称 CFU。
通常用个数表示。
5.5 测试方法5.5.1 方法概述：本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物。
在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，粒子于培养基平皿，经 48 小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。
5.5.2 所用的仪器和设备高压消毒锅： GZ-ZL-SOP-066- 进行操作。
5.5.2.1 高压消毒锅：使用时参照文件 GZ-ZL-SOP-066-00 进行操作。
5.5.2.2 恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。
5.5.2.3 培养皿：一般采用中90mm×15mm 硼硅酸玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌 20 分钟。
5.5.2.4 培养基：普通营养琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约 15m1。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入 30～35℃恒温培养箱中培养数小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在 2～8℃的环境中存放。
5.5.3 测试步骤5.5.3.1 采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露 0.5 小时，再将培养皿盖上盖后倒置。
5.5.3.2 培养：全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
在 30～35℃培养，时间不少于 48 小时。
每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，定 3 只培养皿作对照培养。
5.5.3.3 菌落计数：用肉眼直接计数，然后用 5～10 倍放大镜检查，有否遗漏。
若培养皿上有 2 个或 2 个以上菌落重叠，可分辨时仍以 2 个或 2 个以上的菌落计数。
5.6 注意事项5.6.1 测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
5.6.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。
5.6.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
5.6.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
必要时用显微镜鉴别。
5.6.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
5.7 测试规则5.7.1 测试状态5.7.1.1 沉降菌测试前：被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、必须控制在规定值内。
被测试洁净室（区）已消毒。
必须控制在规定值内。
5.7.1.2 测试状态有静态和动态两种，并在报告中注明测试状态。
5.7.1.3 测试人员：测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
静态测试时，室内测试人员不得多于 2 个人。
5.7.2 测试时间5.7.2.1 对单向流，如 100 级净化房间内及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于 10 分钟后开始。
5.7.2.2 对非单向流，如 10000 级、100000 级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于 30 分钟开始。
5.8 沉降菌计数5.8.1 最少采样点数目：可按表 1 确定。
在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见表 2。
表 1 最少采样点数目注：表中的面积对于单向流洁净室是指送风面积，对于非单向流洁净室是指房间面积。
表 2 最少培养皿数5.8.2 采样点的布置：工作区测试点位置离地 0.8～1.5m 左右（略高于工作面）。
在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。
5.8.3 记录：测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数据。
5.8.4 结果计算：用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
平均菌落数的计算见下式：m1+m2+……+mn 平均菌落数 m=n式中：m 为平均菌落数；m1 为 1 号培养皿菌落数；m2 为 2 号培养皿菌落数；mn 为 n 号培养皿菌落数；n 为培养皿总数。
5.8.5 结果评定：用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。
5.8.6 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准（见表 3）。
5.8.7 若某洁净室（区）的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。
主要参考文献：国家标准 GB/T 16294-1996。