无菌检查标准操作规程
GMP-无菌检查操作规程
1.目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。
2.范围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。
3.责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。
4.定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。
5.内容：5.1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。
5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。
在缓冲间内应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。
缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。
5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。
在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小时。
5.1.3无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数。
取直径90mm双碟，在接种室内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板：在35-37℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。
无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100 级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。
5.1.4无菌室内应准备好盛有消毒用5％甲酚的玻璃缸、酒精灯、火柴、镊子、75％酒精棉及拖鞋等。
5.2仪器、用具：5.2.1真空泵、恒温培养箱、生物显微镜、托盘天平（精度0.1g）、抽滤瓶（500ml）、三角瓶（100、500 ml）、移液管（1、10ml）、注射器（要求规格）、试管、双碟（9cm）、注射针、镊子、剪刀、白金耳、橡皮管、纱布、棉花（原棉）、不锈钢吸管筒、接种环、微孔滤膜（直径约5cm），孔径应在0.45±0.02μm )载玻片、洒精灯、取样勺、吸耳球、喷雾瓶。
sop无菌检查操作规程
sop无菌检查操作规程SOP无菌检查操作规程1. 目的本操作规程的目的是确保无菌检查操作的标准化和正确性，以保证无菌产品的质量和安全性。
2. 适用范围本操作规程适用于无菌产品的生产和质检过程中的无菌检查。
3. 责任与义务(1) 生产人员应确保在无菌检查操作中遵守本操作规程，并按照要求进行操作。
(2) 质检人员应按照本操作规程进行无菌检查，并确保检查准确性和可靠性。
(3) 监督人员应对生产和质检过程中的无菌检查进行监督，并及时发现和纠正操作不规范的情况。
4. 设备和试剂(1) 无菌工作台：具备净化和无菌过滤功能的工作台。
(2) 紫外线灯：用于灭菌工作台和无菌操作区域的紫外线照射。
(3) 无菌检查培养基：用于培养和检测无菌产品中的微生物。
(4) 无菌接种环：用于取样和转移样品至培养基。
5. 操作步骤5.1 环境准备(1) 打开无菌工作台并等待净化系统启动，确保工作台内部洁净无菌。
(2) 打开紫外线灯，照射工作台和操作区域20分钟，杀灭空气和表面的细菌。
(3) 把无菌检查培养基准备好，摆放在无菌工作台上。
5.2 样品准备(1) 取无菌接种环，焰烧消毒后待其冷却。
(2) 打开无菌产品包装，取出样品。
(3) 用消过毒的剪刀将样品切取一小块，果皮向内。
5.3 样品接种(1) 将取好的样品迅速转移到无菌工作台上的无菌检查培养基上。
(2) 将样品放在培养基的中央，轻轻压一下以确保样品与培养基接触。
(3) 焚烧消毒无菌接种环，接种环冷却后用它切取一部分培养基上样品。
5.4 培养(1) 将接种好的无菌检查培养基盖好，记录好样品的相关信息。
(2) 将培养基培养在恒温培养箱中，温度设置为适宜的培养温度。
(3) 根据培养基的类型，进行适当的培养时间。
5.5 结果判断(1) 在培养时间到达后，观察培养基上是否有细菌生长。
(2) 如果培养基上有细菌生长，表示样品不符合无菌要求。
(3) 如果培养基上没有细菌生长，表示样品符合无菌要求。
无菌检查操作规程
无菌检查操作规程无菌检查操作规程无菌检查是医疗卫生机构的重要工作之一，是确保手术操作和医疗器械的安全有效性的必要操作。
本文将详细介绍无菌检查的操作规程。
一、无菌检查前准备1.收集必要的无菌检查器具，如指套、无菌钳、口罩等。
2.穿戴严密的无菌工作服和手术帽，要求紧贴身体，无污染。
3.清洁工作台面和清理无菌区的地面，准确地摆放器具，以使工作区面积最大化。
4.设定无菌检测计时器和偏光镜。
5.检查仪器是否器具过期，并做好记录。
二、无菌检查程序1.无菌检查前要先洗手，并在手部戴上0级无菌手套，以保证手部不会对无菌操作产生污染。
2.按照有关技术操作要求，用户在操作过程中应遵循严格的操作程序，按规定时间和密闭条件完成无菌操作。
3.使用特制口罩，以减少口腔的细菌排放。
4.无菌操作过程中，必须避免与外界发生接触。
如果需要进行人员进出等活动，必须在无菌状态下进行。
5.在完成无菌操作后，对已安装的无菌器具进行检查。
如发现污染或异常，必须及时更换或处理。
6.对于发现无法执行无菌操作原则的器具需要及时进行处理、保留记录，不得进入无菌资料保存范围内。
7.无菌操作完成后，器具必须储存在有关的储存库中，做好记号，并严格实行发放原则。
三、无菌检查后处理1.除去手套并脱穿手术服之后都要再次手洗。
2.检查各种登记单、记录表格的更新，并原样归档。
3.及时整理无菌工作区，对无菌区域内的物品进行清洗和整理。
4.定时地进行系统、设备、器具的清理和维护，并进行记录以便复查。
4.做好无菌器具、设备的外观和功能的检查，有问题及时报告或处置。
5.在每次结束无菌检查操作之后，要对检查器具和环境进行检查，检查是否符合无微量、无孔度和微生物数量的要求，确保工作质量。
结论无菌检查是医学工作中重要的环节之一，必须严格按照规定程序执行，保障手术操作和医疗器械的安全有效性。
同时，也需前后准备工作、归档整理和对设备的维护以做好应急处理。
操作人员必须具有清洁消毒、设备保障、清洁管理等基本知识，以确保医疗卫生的质量和安全。
无菌检查法标准操作规程
无菌检查法标准操作规程目的：建立无菌检查的基本操作，为无菌检查人员提供正确的操作规程。
2.依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
3.范围：本标准适用于QC无菌检查的操作。
4. 职责：QC无菌检查人员对本标准的实施负责。
5.程序：5.1. 定义：无菌检查法：系指检查药品、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它品种是否无菌的一种方法。
5.2. 无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控（18~26）℃及除湿装置，操作室或工作台应保持空气正压。
5.2.1. 无菌室的清洁与消毒应符合QC洁净室清洁、消毒规程（SOP ZL0014）。
5.2.1.无菌室无菌程度的检查应符合规定：见沉降菌监测规程（SOP ZL0006）、悬浮粒子监测规程（SOP ZL0005）。
实验设备及用具：5.3.1.电热干燥箱、电热手提式压力蒸汽灭菌器、电热恒温培养箱、试管、注射器、针头、试管架、刻度吸管、手术剪、手术镊、砂轮、注射器盒、搪瓷托盘、双碟、75%酒精棉球、无菌工作服（衣、裤、帽、口罩等）。
5.3.2.微孔滤膜：直径50mm、孔径0.45μm，应符合规定。
5.3.3.除菌滤器：除菌滤器采用的是HTY-2000型全封闭式薄膜过滤器。
5.3.4. 所有进入无菌室的物品必须经过消毒或灭菌，应严格按照进入QC无菌室物品清洁、消毒、灭菌规程（SOP ZL0015）进行操作。
5.4. 稀释剂：灭菌注射用水。
5.5. 培养基：5.5.1.需气菌、厌气菌培养基（流体硫乙醇酸盐培养基）；真菌培养基。
5.5.2. 培养基的使用，配制、管理及灵敏度检查应按照培养基管理规程（SMP ZL0036）、培养基灵敏度检查规程（SOP ZL0019）、培养基配制规程（SOP ZL0016）进行操作。
5.6. 对照用菌液：5.6.1. 金黄色葡萄球菌（Staphyoccus sureus）菌液：取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30~35℃培养16~18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。
无菌检查操作规程
无菌检查操作规程1、目的建立无菌检查标准操作规程，规范无菌检查操作过程，确保检查结果的准确性。
2、范围本规程适用于广州赛哲生物科技股份有限公司无菌检查操作过程。
3、职责相关操作人员负责本规程的具体实施，质检部负责对本规程的实施过程进行监督。
4、工作程序4.1培养基的制备及培养条件培养基可按以下给出的处方制备，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光环境下，三周内使用。
4.1.1硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养。
配方如下：除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节p H 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH,使灭菌后在25℃的pH值为7.1土0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色)不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100°C水浴加热至粉红色消失（不释过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30〜35℃培养。
4.1.2胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。
配方如下：除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH使灭菌后在25℃的pH 值为7.3±0.2，加入葡萄糖，分装，灭菌。
胰酪大豆胨液体培养基置20〜25℃培养。
4.1.3胰酪大豆胨琼脂培养基配制方法如下：除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH使灭菌后在25℃的pH值为7.3±0.2，加人琼脂，加热溶化后，摇匀，分装，灭菌。
4.1.4沙氏葡萄糖琼脂培养基用于黑曲霉的培养。
培养如下：除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH使灭菌后在25℃的pH 值为5.6士0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。
细胞无菌检查标准操作规程
细胞无菌检查标准操作规程标准操作规程：细胞无菌检查1. 引言细胞无菌检查是实验室进行细胞培养和实验的关键步骤。
细胞环境的无菌性是保证实验结果准确性和细胞生长的重要因素。
本标准操作规程旨在规范细胞无菌检查的操作，以确保实验结果的可靠性。
2. 器材准备2.1 离心机：用于离心培养物，以分离细胞和培养液。
2.2 高温消毒器：用于消毒培养器具和试剂。
2.3 紫外线灯：用于消毒培养箱和操作台面。
2.4 细胞培养箱：用于细胞培养的环境，保持恒定的温度和湿度。
2.5 无菌离心管和移液器：用于处理无菌液体和细胞移植。
2.6 片玻片和培养皿：用于制备细胞标本。
2.7 无菌培养物：用于细胞培养和细胞无菌检查。
2.8 无菌培养基：用于培养细胞。
2.9 无菌生理盐水：用于洗涤细胞。
3. 操作步骤3.1 消毒操作台面和培养箱：使用紫外线灯对操作台面和培养箱进行紫外线照射消毒，确保无菌环境。
3.2 滴漏法消毒培养器具和试剂：将培养器具和试剂放入高温消毒器中，设置合适的温度和时间进行高温消毒。
3.3 细胞无菌接种：将需要无菌检查的细胞接种到无菌培养基中，按照实验要求进行培养，保持适宜的温度和湿度。
3.4 细胞收获和处理：在培养达到一定密度后，使用离心机将培养物离心，收集上清液。
将上清液转移至无菌离心管中，并进行离心，去除细胞沉淀。
3.5 细胞标本制备：将细胞沉淀转移至无菌离心管中，加入适量的无菌生理盐水悬浮细胞，然后将悬浮细胞制备成片玻片或涂布于无菌培养皿上。
3.6 烘干和固定：将制备好的片玻片或培养皿放入培养箱中，保持适宜的温度和湿度进行烘干固定，使细胞附着于玻片或培养皿上。
3.7 染色和观察：使用适当的染色方法对细胞进行染色，并通过显微镜观察细胞状态和无菌性。
3.8 结果判断：根据染色结果和观察到的细胞状态判断细胞是否具有无菌性。
4. 注意事项4.1 操作时需佩戴无菌手套，避免污染试剂和培养器具。
4.2 使用无菌移液器和管道处理液体，避免交叉污染。
无菌检验标准操作规程(最全)
无菌检验标准操作规程一、目的无菌检验是指检查经灭菌方法处理后的医疗器械(具)、植入物品、敷料等是否达到无菌标准的一种方法。
临床部门不应常规进行无菌检验，如有需要，可联系当地疾病预防控制中心派专人来采样检测。
二、试验前准备1．无菌检验应在洁净度为100级以上的洁净实验室内实施，并证实该实验室各项指标符合GB50073—2001《洁净厂房设计规范》、GB／T16292～16294—1996《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》等相关要求，且在有效期范围之内。
2．按卫生部《消毒技术规范》(2002年版)制备无菌检验用洗脱液、需氧一厌氧培养基与真菌培养基(见附)。
3．在无菌检验前三日，分别在需氧一厌氧培养基与真菌培养基内各接种1ml洗脱液，分别置30～35℃与20～25℃：培养72h，应无菌生长。
4．阳性对照管菌液制备：(1)在检验前一天取金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种一环至需氧一厌氧培养基内，在30～35℃培养16～18h 后，用0．9％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml(可通过比浊法或稀释后用1m1接种平板来确认)。
(2)取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厌氧菌培养基新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于30～35℃培养18～24h后，用0.85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。
(3)取白念珠菌[CMCC(F)98001]真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于20～25℃培养24h后，用0．85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。
三、样本制备根据检样的类型与大小，以及带孔(腔)与否，可以按照以下不同的方法进行制备。
1．敷料类等非管道类样品：取2个包装内的样本，剪成约10mm×30mm 大小的样片21片，接种需氧一厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。
每培养管含培养基40m1，各接种3片样片。
无菌检查法标准操作规程
将废液和实验物品及已操作完毕的含培养基的集菌培养器等移至 传递窗并拿出，擦拭工作台面，检查电源是否关闭，是否有遗留物品 等。按照《人员进出实验室的净化更衣规程》脱掉无菌服并装入配套 的袋中，开启无菌室紫外灯半小时，将无菌服送至特定的洗衣机进行 清洗灭菌。实验完毕的样品按照《检验用样品管理规程》进行销毁处 理。 4.1.4阳性对照
关闭紫外灯10分钟后，进入缓冲间，按照《人员进出实验室的净化 更衣规程》进入，并按照此规程穿戴无菌服、口罩。
4.操作
4.1薄膜过滤法 4.1.1操作前准备
检查无菌室电源和仪器是否完好，标示状态卡是否正确，是否有前 次遗留物品及废液等，戴上无菌手套将供试品及所需物品移入无菌操作 室，开启超净工作台并擦拭工作台面。 4.1.2操作 4.1.2.1根据药液性质选用不同型号的培养器，对于普通药液选用型号
菌检查法的要求。 （2）回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。 （3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所
使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。 试验若经确认无效，应重试。重试时，必须重新取同量供试品，依
法重试，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符 合规定。
否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品 在该检验条件下未发现微生物污染。无菌检查法包括薄膜过滤法和直接 接种法。 1.2 检验数量
指一次检验所用供试品最小包装容器的数量。除另有规定外，按表 1规定的最少检验数量进行，最少检验数量不包括阳性对照试验的供试 品用量。采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量做阳性对照用； 采用直接接种法，增加每个培养基容器接种的样品量作为阳性对照用。
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无菌检查标准操作规程无菌检查法是检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。
事实上，若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。
无菌检查法有薄膜过滤法、直接接种法两种方式。
细菌培养温度32.5℃±2.5℃，真菌培养温度25.5℃±2.5℃。
1 无菌检查的环境无菌检查的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，操作环境的无菌保证程度将直接影响无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可考性，对洁净室（区）的环境质量采取合理的控制措施和评价方法是必要的。
无菌检查应在环境洁净度10000级和局部洁净度100级的单向留空气区域内或隔离系统中进行，其全过程笔削严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。
面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。
由1～2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间与缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。
在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。
墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。
操作间内不应安装下水道。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18～26℃，相对湿度45%～65%。
缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。
缓冲间和操作间所设置的紫外线杀菌灯（2～2.5W/m3），应定期检查辐射强度，要求在操作面上达40μW?cm-2。
不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。
无菌室应每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1小时。
在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌半小时。
无菌室的洁净度检查无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数，以此来判断无菌室是否达到规定的洁净度，常有沉降菌和浮游菌测定方法。
沉降菌检测方法及标准：以无菌方式将3个营养琼脂平板带入无菌操作室，在操作区台面左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将碟盖盖好，置32.5℃±2.5℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数平均不超过1个。
浮游菌检测方法及标准：用专门的采样器，宜采用撞击法机理的采样器，一般采用狭缝式或离心式采样器，并配有流量计和定时器，严格按仪器说明书的要求操作并定期校验，采用器和培养皿进入被测定房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，使用的培养基为营养琼脂培养基或药典认可的其他培养基。
使用时，先开动真空泵抽气，时间不少于5分钟，调节流量、转盘、转速。
关闭真空泵，放入培养皿，盖上采样器盖子后调节缝隙高度。
置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。
全部采样结素后，将培养皿置32.5℃±2.5℃培养48小时，取出检查，浮游菌落数平均不得过5个/m3。
每批培养基应选定3只培养皿做对照培养。
无菌操作台面或超净工作台还应定期请有关部门检测其悬浮粒子，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪）检测尘埃粒径≥0.5的粒数不得超过3.5个/升，≥5μm的粒数为0，空气流速应≥0.35m/s，可根据无菌状况必要时置换过滤器。
2 仪器及用具2.1 无菌室内应准备好盛有消毒用5%甲酚或其他适宜消毒溶液的玻璃缸、乙醇灯、火柴、镊子、75%乙醇棉、碘状棉等。
2.2 恒温培养箱及生化培养箱。
2.3 离心机、生物显微镜、真空架、高压蒸汽灭菌器、标准pH比色器（0.02%酚磺酞指示液和溴麝香草酚蓝指示液）、恒温烤箱、开放或全封闭过滤系统。
2.4 玻璃器皿试管、量筒、三角瓶、移液管、刻度吸管（1、5、10ml）、注射器（2、5、10ml）、双碟等，用玻璃洗涤剂或清洁液浸泡，水洗3次。
如使用过程中与细菌接触（已污染），应先灭菌倒出内容物后再清洗，晾干。
凡无菌操作过程中所用的器皿，都应用牛皮纸包扎严密，灭菌。
移液管、刻度吸管在管内上端，塞少许原棉，以手感不松不紧为宜，然后放于吸管筒内或牛皮纸袋内，封严，灭菌待用；试管、离心管、三角瓶等在管（瓶）口塞上海棉胶（或硅胶）专用塞或纱布棉塞，塞子应塞进管口内2/3处，用牛皮纸将管口（包括塞子）包扎严，灭菌待用；将注射器、针头（9号、11号、12号）配对，检查针头是否畅通后，将注射芯、管和针头分别放在双层纱布（或布）内，包扎严密，置带盖容器（瓷盘或铝制饭盒）内，盖严，用牛皮纸包扎后，灭菌待用。
长柄取样匙，放于不锈钢长筒内，盖严，干热灭菌待用。
手术镊、手术剪洗净、擦干。
用双层纱布将1把剪刀与1把别字间隔包扎在一起，放于带盖的容器（瓷盒或铝制饭盒）内，盖严，用牛皮纸包扎，灭菌（参照附录XV 灭菌法）待用。
高压蒸汽灭菌的物品取出时切勿立即置冷却，使灭菌物品内蒸汽冷凝造成负压，易染菌，取出后应置恒温培养箱（或干燥箱）中烘干，待用。
2.5 无菌衣、裤、帽、口罩等洗净晾干，配套，用牛皮纸包严，灭菌待用或用一次性的无菌物品代替。
2.6 除菌滤器及滤膜有多种开放式及封闭式滤器用于过滤除菌。
微孔滤膜直径50mm、孔径约0.45μm。
新购入封闭式滤器或滤膜，需进行孔径大小的测试，一般有三种方法，选其中一种方法即可。
气泡法先将滤膜浸入说中，使完全湿润，然后用镊子夹住一片滤膜放于气泡点测定装置过滤膜孔径测定仪上，膜上放一块与滤膜大小相同的尼龙筛网，再加上多孔板，将螺旋补丁圈旋紧，在多孔板上加3～5mm深的水（注意排除气泡）关闭放气阀，启动空压机或氮气瓶阀，使压力缓缓上升，注意观察水面上产生第一个气泡时，记录压力表的压力，气泡点压力不应小于2.2kg/cm2（0.2MPa）。
水流量法将滤膜装于除菌滤器上，开动真空泵，压力在700mmHg（93kPa）下，抽滤已滤清的水约500ml，计算出每1min的滤速。
2005年版中国药典对滤膜的滤速未明确规定，而USP（XXⅢ）规定在700mmHg（93kPa）压力下，滤膜直径47mm；流速55～75ml/min。
细菌过滤法常用的细菌为粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens CMCC（B）41002），将该菌的新鲜营养琼脂斜面培养物，接种于营养肉汤培养基中，32.5±2.5℃，培养18～20小时，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10-3（约相当于7×105cfu/ml），取此菌液1ml加至50ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，按薄膜过滤法过滤，取该滤液5ml接种于营养肉汤培养基40ml中，32.5℃±2.5℃培养24小时，应无菌生长。
不符合规定的滤膜不得使用。
3 菌种及菌液制备菌种的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥的菌种为第0代；冷冻干燥的原始菌种开启后转种，为第一代）。
原始菌种购到后，应由专人负责，接收菌种时应检查安瓿的数量和菌种的名称及每一支安瓿的完整性。
并在相应的菌种接收登记表上记录所有关于菌种的信息。
将安瓿存于－20℃，使用时首先需要复活冻干菌种（按菌种保藏中心提供相关资料操作），一般包括以下步骤：冷冻菌种的复活清洁安瓿（可用75%的酒精或碘状）后，用砂轮在安瓿上部三分之一处划痕，用干燥的无菌纱布包裹安瓿，将安瓿掰开，用一无菌吸管吸取适量0.5～0.8ml的液体培养基（生孢梭菌用液体硫乙醇酸盐培养基；金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌用营养肉汤；白色念珠菌、黑曲霉菌用液体真菌培养基）滴加到安瓿中，轻轻旋转安瓿并吹打，使冻干菌种和液体培养基充分混和并完全溶解，再将安瓿内的菌悬液全部吸出，转移至相应的培养基试管中，根据菌种类型采用适宜的培养条件（细菌培养温度32.5℃±2.5℃，18～24小时；真菌培养温度25.5℃±2.5℃，3～5天）下培养，观察培养基是否浑浊，（如不浑浊，细菌应延长培养时间至7天以上，真菌应延长培养时间至14天以上，仍未浑浊，按相关规定灭菌处理。
）浑浊说明菌种复活生长，在应用前，还应确认菌种的纯度和特性。
菌种确认用无菌接种环取上述培养物，在相应的培养基平板上划线分离单个菌落，适宜条件下培养，培养后观察是否具有典型的菌落形态，然后挑取单一的纯菌落，进行革兰染色、镜检，观察其染色特性及菌形。
并作生化实验或使用菌种鉴定系统进一步鉴定该菌种，对已通过确认鉴定后的菌种可以使用或传代保藏。
菌种传代保藏方法很多，各单位了根据情况采用，但无论应用何种方法，都应对采用的方法进行验证，确保在相应保存条件下的菌种不会变异且性能稳定，同时也应兼顾到方法的经济和简便。
常用的有甘油冷冻管保藏法、斜面低温保藏法等，此类方法简单易行。
甘油冷冻管保藏法将待保藏菌接种平板或琼脂斜面，适宜温度下培养适宜时间后（细菌24～48小时的培养物，白色念珠菌72小时的培养物），用无菌接种环轻轻刮取菌苔，并通过接踵环与试管壁之间的轻轻摩擦使细菌充分扩散到预先装于试管中的无菌蒸馏水中，调整菌液浓度，向已制备好的菌悬液中加入等体积、浓度为20%的无菌甘油，轻轻振摇小管，使内容物充分混和，分装于无菌小管，制好的甘油冷冻管最好在－30℃贮存。
斜面低温保藏法将工作用菌种的典型菌落接种在适宜的固体斜面培养基，按规定的温度和时间培养，待菌生长充分以后，把培养好的新鲜菌种管用牛皮纸包好，转移至4℃左右冰箱保存，如菌种保藏管的塞子是橡胶塞，并采用半固体高层培养基穿刺培养，则可以保存时间较长。
铜绿假单胞菌不宜用本法保存。
3.1 菌种（1）金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26003]（2）枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501]（3）大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44102]（4）铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10104]（5）生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B)64941]（6）白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]（7）黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98003]3.2 菌液制备制备的菌液，一般当日使用。