HE染色
he染色流程(一)
he染色流程(一)he染色简介•什么是he染色?•为什么需要he染色?流程1. 样本制备•获取组织样本(如组织切片)•将样本固定在载玻片上•进行脱水和透明化处理2. 血液片制备•获取新鲜血液样本•密度离心分离白细胞•将细胞悬液涂布在载玻片上•进行干燥和固定处理3. 染色液制备•准备hematoxylin溶液和eosin溶液•根据需要进行稀释4. he染色•将载玻片浸入hematoxylin溶液中，染色一段固定时间•洗去多余溶液•将载玻片浸入eosin溶液中，染色一段固定时间•再次洗去多余溶液•干燥载玻片5. 倒置显微镜观察•将he染色载玻片放置在倒置显微镜上•调整镜头和光照条件以观察染色效果•进行细胞组织结构的分析和判定结论•he染色是一种常用的细胞和组织染色方法•它可以用于观察细胞和组织的形态结构•he染色广泛应用于病理学和组织学领域，有助于疾病的诊断和治疗参考文献•[论文/reference]•[书籍/reference]注意：此处所提供的流程仅为示例，实际操作中可能存在差异。
请严格按照实验室标准操作，并遵循相关实验室安全规定。
he染色简介•什么是he染色?–he染色是一种常用的细胞和组织染色方法，用于观察细胞和组织的形态结构。
•为什么需要he染色?–he染色可以帮助病理学家和研究人员观察细胞和组织的结构，对疾病的诊断和治疗起到重要的作用。
流程1. 样本制备•获取组织样本(如组织切片)。
•将样本固定在载玻片上，保持其原始形态。
•进行脱水和透明化处理，以去除组织中的水分，便于染色。
2. 血液片制备•获取新鲜血液样本。
•密度离心分离白细胞，得到富含白细胞的细胞悬液。
•将细胞悬液涂布在载玻片上，形成血液片。
•进行干燥和固定处理，以保持细胞形态。
3. 染色液制备•准备hematoxylin溶液和eosin溶液，用于染色。
•根据需要进行稀释，以调整染色液的浓度。
4. he染色•将载玻片浸入hematoxylin溶液中，染色一段固定时间。
HE染色——精选推荐
HE染⾊HE染⾊实验步骤及常见问题解析⼀、HE染⾊HE染⾊全名为苏⽊精(hematoxylin)和伊红(eosin)染⾊⽅法，是最基本的也是最重要的病理学染⾊技术。
⼀张质上乘的HE切⽚是病理医⽣得以做出正确诊断的关键。
HE染⾊是⽬前国内外病理诊断上⼴泛采⽤的常规染⾊⽅法。
切⽚质量的好坏，可直接影响疾病诊断的及时与准确性。
因此，能制作出⼀张⾼质量的HE染⾊切⽚，是必须掌握的技术之⼀。
⼆、染⾊原理1.细胞核染⾊原理：苏⽊精为碱性天然染料，可使细胞核着⾊。
细胞核内染⾊质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏⽊精碱性燃料以离⼦键或氢键结合⽽被染⾊。
苏⽊精在碱性溶液中呈蓝⾊，所以细胞核被染成蓝⾊。
2.细胞浆染⾊原理：细胞浆内主要成分是蛋⽩质，为两性化合物、细胞浆的染⾊与pH值有密切关系，当pH调到蛋⽩质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染⾊。
当pH调到6.7-6.8时，⼤于蛋⽩质的等电点pH值，表现酸性电离，⽽带负电荷的阴离⼦，可被带正电荷的染料染⾊，现时胞核也被染⾊，核和胞浆难以区分。
因此必须把pH调⾄胞浆等电点以下，在染液中加⼊醋酸使胞浆带正电荷（阳离⼦），就可被带负电荷（阴离⼦）的染料染⾊。
伊红Y是⼀种化学合成的酸性染料，在⽔中离解成带负电荷的阴离⼦，与蛋⽩质的氨基正电荷（阳离⼦）结合⽽使细胞浆染⾊，细胞浆、红细胞、肌⾁、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红⾊或粉红⾊，与蓝⾊的细胞核形成鲜明的对⽐。
3.分化作⽤：染⾊后，⽤某些特定的溶液将组织过多结合的染⾊剂脱去，这个过程称为分化作⽤，所⽤的溶液称为分化液。
在HE染⾊中⽤0.5%盐酸⼄醇作为分化液，因酸能破坏苏⽊精的醌型结构，使组织与⾊素分离⽽褪⾊。
经苏⽊精染⾊后，必须⽤0.5%盐酸⼄醇分化，使细胞核过多结合的苏⽊精染料和细胞浆吸附的苏⽊精染料脱去，在进⾏伊红染⾊，才能保证细胞核与细胞浆染⾊的分明。
HE染色实验步骤
HE染色实验步骤染色实验是生物学中常用的染色技术，用于观察细胞结构、细胞器和染色体等生物学特征。
在这个实验中，我们将使用HE染色法来染色细胞和组织切片。
HE染色法是最常用的组织染色方法之一，用于观察组织结构和组织细胞的形态。
以下是HE染色实验的步骤：1.准备组织标本在进行染色实验之前，首先需要准备好需要染色的组织标本。
组织标本可以是新鲜的组织样本，也可以是已固定和包埋的组织切片。
在准备组织标本时，需要确保组织标本的质量和完整性，以保证染色结果的准确性。
2.制备切片将组织标本切割成薄片，通常厚度在5-10微米之间。
为了获得更好的染色效果，切片应该尽可能薄且均匀。
切片可以使用切片刀或者切片机进行切割。
切片完成后，将切片放在载玻片上，待干燥。
3.脱脂和脱水将切片放入甲醇中脱脂，去除切片中的脂肪物质。
脱脂时间一般为1-2分钟。
脱脂完成后，将切片依次浸入95%乙醇、70%乙醇和蒸馏水中进行脱水处理，时间每次均为1-2分钟。
脱水处理的目的是去除切片中的水分，以便后续染色。
4.染色处理将脱水后的切片依次浸入hematoxylin染料、蒸馏水、酸性洗涤剂和eosin染料中进行染色处理。
hematoxylin染料用于染色细胞核，eosin染料用于染色胞质。
染色时间根据实验需要，通常为1-10分钟。
染色完成后，将切片洗净并进行脱水处理。
5.脱水和封片将染色后的切片依次浸入70%乙醇、95%乙醇和透明剂中进行脱水处理。
脱水完成后，将切片放入透明剂中进行透明化处理，以使组织切片更加透明。
最后，将切片放入显微镜载玻片上，加入透明胶封片，并静置干燥。
6.观察和记录将封片好的切片放入显微镜中，用适当的倍数镜头观察组织结构和细胞形态。
观察时，可以记录下细胞核的形态、胞质的颜色和组织结构等信息。
通过观察和记录，可以得到关于组织和细胞的详细信息，为后续研究和分析提供参考。
7.结果分析根据观察和记录的结果，对染色切片进行分析和比较。
he染色分化、反蓝的步骤
he染色分化、反蓝的步骤
HE染色分化、反蓝的步骤如下：
1. 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ
10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-95%酒精5min-90%酒精
5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。
2. 苏木素染细胞核：切片入Harris苏木素染3-8min，自来水洗，1%的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，0.6%氨水返蓝，流水冲洗。
3. 伊红染细胞质：切片入伊红染液中染色1-3min。
4. 脱水封片：将切片依次放入95%酒精Ⅰ5min -95%酒精Ⅱ5min-无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min，二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。
具体的染色步骤和时间可能会因组织类型、染色方法和实验室条件等因素而有所不同，建议在进行染色实验前仔细阅读相关实验指导或咨询专业人士。
HE染色
H-E染色概述苏木精（Hematoxylin）-伊红（Eosin）染色也称普通染色，简称为H-E染色。
是生物组织学、病理学及细胞学工作必不可少的最常用的染色方法，故又称常规染色H-E染色应该是红蓝相映，层次浓淡均为分明稳恒定优质各种固定、包埋方法所制作的组织切片和冰冻切片等，均可用采用常规染色H-E染色原理组织细胞的不同成分对苏木精染料的亲合力不同，经苏木精染色的组织切片，再利用酸乙醇的分化作用，可使细胞核等酸性成分着色清晰，而其它成分脱色再经伊红染细胞质等碱性成分，则各种组织与病变的一般形态结构均可显示出来一张优质的染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据再根据此染色切片所见，分别进行不同的特殊染色到目前为止人类所积累的病理组织学知识，绝大部分是从观察苏木精-伊红染色标本所得来的第一节染液及溶液的配制一、明矾苏木精染液的配制苏木精染液的配法很多，普通、常规染色多用明矾苏木精，常用的有哈瑞（Harris）、埃利希（Ehrlich）、德拉菲而德（Delafield）及迈耶（Mayer）等明矾苏木精染液用钾明矾或铵明矾中的铝离子作为苏木精的媒染剂利用氧化汞等氧化剂进行人工氧化或通过自然氧化成熟的方法，使苏木精具有较强的染色效果还需用冰醋酸作为促染剂，以增强染色能力（一）哈瑞斯（Harris）苏木精染液1．配方（1）甲液苏木精1g无水乙醇10ml（2）乙液钾明矾（硫酸铝钾）20g蒸馏水200ml（3）其他氧化汞0.5～1g冰醋酸0.5～1ml2．配制法分别配制甲、乙液，将乙液（加温并搅拌），待全部溶解后，再加入甲液，混合后煮沸1～2分钟，然后改用小火加温，慢慢加入氧化汞，同时不停地摇荡或搅拌使其充分氧化，当液体变为深紫蓝色时，即迅速将容器放入入冷水中使之迅速冷却，室温静置数小时至一夜。
第二天过滤，每100毫升滤液内加0.5～1毫升冰醋酸，以增强其染色力染色时间为3～15分钟此液为人工氧化剂，配制方便，配后第二天即可应用，且染色时间较短，为临床病理常用之方法，保存时间不能太长，经2～6个月后染色作用渐弱，故现用现配为好，一次不宜配制过多，应按需要量随用随配钾明矾为媒剂，氧化汞为氧化剂，冰醋酸为促染剂二、伊红染液的配制为砖红色粉末状或酱红色结晶，是最常用的胞浆染料伊红有水溶性和醇溶性，黄光（Y）与蓝光（B）之分病理组织学常规染色一般多用水溶性伊红Y伊红染液的一般浓度为0.25％～1％。
HE染色步骤[推荐]
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HE染色步骤[推荐]
染色是加入染料将细胞或组织着色的过程。
HE染色是指使用
血红蛋白染成红色，细胞核染成蓝色的染色方法。
HE染色步骤如下：
1. 取制好的玻片（细胞或组织已固定在玻片上），用甲醇或乙醇进行脱水，使细胞或组织变得透明。
2. 将玻片放入染料盒中，加入苏丹三液（血红蛋白染料）浸泡。
时间通常为5-10分钟。
洗净玻片以去除多余的染料。
3. 将玻片放入氧化性酸液中（酸性洗涤液或稍微含有酒精的酸性水溶液），将苏丹三液中的铁离子还原成溶于水的亚铁离子。
时间通常为1-2分钟。
4. 接下来，将玻片放入碱性染色液中（含有甲苯重组溶液和酸性洗涤液的甲苯重组溶液），染色液中的亚铁离子被氧化成沉淀（血红蛋白）。
5. 最后，将玻片漂洗并脱水，然后用透明介质将玻片封闭，使其防止氧化。
通过HE染色，可以使细胞核染成蓝色，血红蛋白染成红色，
从而在显微镜下清晰地观察细胞或组织的结构和特征。
这是一种常用的组织学染色方法。
HE染色操作流程
HE染色操作流程HE染色（Hematoxylin and Eosin Staining）是一种常用的组织学染色方法，用于观察和诊断组织学切片。
HE染色通过染色剂HE染料的组合，使细胞核染成紫色，胞质染成粉红色，从而揭示组织的结构与形态。
HE染色的操作流程一般包括标本处理、脱水、透明化、分解蜡和染色五个步骤。
下面将详细介绍每个步骤的具体操作。
1.标本处理：首先，将切割好的组织标本放入10%中性缓冲福尔马林进行固定，一般固定时间为24-48小时。
固定后，将组织标本转移到70%乙醇中进行离子交换，使组织中的水分逐渐去除。
2.脱水：将固定的组织标本依次转移到浓度逐渐提高的乙醇溶液中，如80%乙醇、95%乙醇和绝对乙醇，每个乙醇浓度保持15-30分钟。
这个过程称为脱水，目的是逐渐去除组织中的水分，使组织内的乙醇浓度逐渐升高。
3.透明化：将脱水后的组织标本依次转移到透明剂中，如苯并三氮唑、次氯酸、二氯甲烷等。
每种透明剂浓度和时间要根据实验需求进行调整，这个步骤的目标是使组织中的乙醇慢慢溶解，透明度增强。
4.分解蜡：将透明后的组织标本转移到蜡纸中，加热到60-65°C的融点，使固定的组织标本逐渐融化。
蜡纸是由石蜡和植物油混合而成，有助于固定和保护组织的形态。
5.染色：将脱蜡的组织标本依次转移到碱性染料（如血红素）溶液中，染10-15分钟，然后洗净；接着将组织标本转移到酸性染料（如紫杉醇）溶液中，染5-10分钟，然后洗净。
紫杉醇染料使细胞核染色成紫色，血红素染料使细胞胞质染色成粉红色。
最后用安全过滤垫将组织标本封装在玻片上，去除水分，然后用覆盖玻片进行固定。
he染色实验报告
he染色实验报告引言：HE染色实验是一种广泛应用于组织学研究和病理学诊断的染色技术。
HE染色是指同时使用血红素染剂（eosin）和碱性染料（hematoxylin）对组织切片进行染色的方法。
该实验旨在观察和分辨组织中细胞核和胞浆的微观结构和染色效果，为后续的组织学和病理学分析提供基础。
材料与方法：1. 组织样本：我们选取了一块经过固定处理的动物组织切片作为实验样本。
2. 实验设备：显微镜、玻片、盖玻片、染色槽、组织石蜡、梳子、PAP笔等。
3. 染色操作：a. 切片上蜡：将组织切片浸入组织石蜡中，使其具有坚硬性和刚性，便于后续的取样和染色操作。
b. 制片：将蜡块切割成薄片，并将其贴在玻片上。
c. 然后将玻片放入稳定器中，加热至60摄氏度以上，以去除蜡质。
d. 染色操作：将石蜡切片浸入hematoxylin染料中，使细胞核染色；随后，将其置于eosin染料中，使细胞质染色。
e. 脱水：使用酒精的递减浓度进行脱水处理，以将多余的染料和水分去除。
f. 覆盖玻片：在切片上覆盖盖玻片，使用PAP笔在盖玻片上写上标本信息。
结果与讨论：经过HE染色实验，我们成功地观察和分辨了组织切片中的细胞核和胞浆。
在显微镜下，组织中的细胞核呈现出暗紫色或蓝色的染色，而胞浆则呈现出粉红色的染色。
这种对比使得细胞核能够清晰地与胞质区分开来，为进一步的组织学研究和病理学诊断提供了基础。
通过观察HE染色后的组织切片，我们可以获得以下信息：1. 细胞核形态和结构：通过染色后的细胞核可以观察到其形态、大小和核仁的存在与否。
这些信息对于细胞分类和诊断不同的细胞疾病具有重要意义。
2. 细胞质组织结构：染色后的细胞质颜色鲜艳，可以观察到细胞内各种细胞器的分布和数量，如线粒体、内质网、高尔基体等。
3. 细胞排列与组织结构：HE染色能够显示细胞的连接方式和组织结构，如上皮细胞的排列方式、腺体的呈腔性结构等。
在病理学领域，HE染色被广泛应用于肿瘤的诊断。
HE染色
对策：适当稀释伊红染色液，减
少伊红染色时间，或者使切片在 乙醇脱水等步骤时，停留时间相 对均匀。同样， 也要检查切片的 厚度是否合适。
封片：
在显微镜下呈现大量水珠或 云雾状改变
原因：切片经梯度乙醇处理后没
染色：
（1）苏木素染色
苏木素染色太浅，细胞核 与细胞质颜色对比度差。
原因：染色时间短；苏木 素过度氧化，失去染色能 力；分化时间过长。
对策：切片重新染色。
原因：与图2相反，染色液
时间过长、切片太厚、分化 步骤时间太短。
细胞核过染， 核膜、核仁等不清晰， 细胞质( 尤其是皮肤上皮细胞) 含有大量的 细胞核染色液苏木精， 导致细胞核与细胞 质比例失调。
几种常见的染色问题
脱蜡：
切片中白色的区域脱蜡不彻底，染色液由 于石蜡斑点的残留而不能渗透着色。
原因：①烤( 烘) 片温度
太低，脱蜡前没有充分烤 ( 烘) 干。 ②二甲苯脱蜡时 间不足， 或二甲苯使用过 久，造成脱蜡不尽。
对策：①用无水乙醇去
掉玻璃片上的水分，重新 二甲苯脱去石蜡。 ②切 片需退回到脱蜡步骤，延 长脱蜡时间，或跟换二甲 苯，驼色、漂白、重新染 色。
原因：盖玻片上可能有封固切
片的封固剂。
对策：移去盖玻片， 重新用干
净的盖玻片封片。
盖玻片上有封固剂所致切片组织模糊不清
封片后镜下则会出现类似色素的 点状结晶或类似“裸核”样的改变
原因：切片封片前放置在
空气中时间太长， 以至于 二甲苯挥发切片干燥所致。
对策：移去组织切片上的
盖玻片和封固剂， 重新处 理。将切片水洗数分钟，然 后重新脱水、透明、封固。 封片过程中要保持组织切片 的轻度湿润，尽量不要让其 干燥。
HE染色(石蜡切片)
20X
40X
一般要浸蜡3次，第一次时间30min，第二次 时间2h(或者过夜) ，第三次1-2h(具体时间自己 摸索)
将浸蜡彻底的组织用石蜡包埋成规
整的长方形块状物体，便于在切片机上切 片。包埋时应注意包埋面，包埋好的组织 块进行修整，把整块的组织面修出来。注 意往模中倒蜡包埋时，浸蜡的组织块尽量 在熔化状态，从而使蜡跟浸蜡的组织块形 成一个整体。
（4）脱水与透明：染色后，再进行脱水与透 明，用浓度递增的酒精脱水： 70%→85%→95%→无水酒精（各级2~3分 钟，在95%以下浓度的酒精中伊红易脱色， 应适当缩短时间），之后用二甲苯透明 （10min2次）。
（5）封片：二甲苯透明后，将多余二甲苯擦 拭去，滴加树胶封片。封片要及时，掌握 好树胶的量。尽量做到树胶滴而不流，盖 片满而不溢，无气泡。
组织经固定后含有许多水由于水跟石蜡不能互相溶解因此不能直接进行石蜡包埋还需经过脱水这一过程逐步用某些试剂将组织中的水分置换出常用的脱水剂是酒精脱水的目的是将固定了的组织内的水分去除以便使切片时的支撑物石蜡充分进入组织内水跟石蜡不能相互溶解
HE染色(石蜡切片)
一．取材与组织的固定 二．组织固定后处理及石蜡切片 三．HE染色
将石蜡包埋块置于切片机切片，厚度5um。 经过修整的石蜡包埋块，在切片之前进行冷冻 （0~-10摄氏度），在夏季高温的情况下冷冻时 间相对要长。在切片过程中，组织面完全暴露， 整张切片必须完整，切片刀要锋利，切片机各 螺丝要旋紧（不切片时切片机要关上保险，防 止被刀片割伤）。
苏木精是一种碱性染料，将嗜碱性的细胞核
为了减少组织块过度收缩，往往在无水酒精 之后，先经过酒精二甲苯的混合液，然后再浸入 二甲苯中。无水酒精：二甲苯=1：1，15min一次； 二甲苯，15min两次。（具体时间自己摸索）
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操作方法及步骤：
①取材，未能固定的组织取材，不能太大太厚，厚者冰冻费时，大者难以切完整，最好为24×24×2mm。
②取出组织支承器，放平摆好组织，周边滴上包埋剂，速放于冷冻台上，冰冻。
小组织的应先取一支承器，滴上包埋剂让其冷冻，形成一个小台后，再放上细小组织，滴上包埋剂。
③将冷冻好的组织块，夹紧于切片机持承器上，启动粗进退键，转动旋钮，将组织修平。
④调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细胞密集的薄切，纤维多细胞稀的可稍为厚切，一般在5～10um间。
⑤调好防卷板。
制作冰冻切片，关键在于防卷板的调节上，这就要求操作者要细心，准确地将其调较好，调校至适当的位置。
切片时，切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间
的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。
这时便可掀起防卷板，取一载玻片，将其附贴上即可。
⑥应视不同的组织选择不同的冷冻度。
冷冻箱中冷冻度的高低，主要根据不同的组织而定，不能一概而论。
如：切未经固定的脑组织，肝组织和淋巴结时，冷冻箱中的温度不能调太低，在-10-
-15℃左右，切甲状腺、脾、肾、肌肉等组织时，可调在-15～20℃左右，切带脂肪的组织时，应调至-25℃左右，切含大量的脂肪时，应调至-30℃。
3．冰冻切片时的注意事项：
①防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净，需经常用毛笔挑除切片残余和用柔软的纸张擦。
有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次。
因为这个地方是切片通过和附贴的地方，如果有残余的包埋剂粘于刀或板上，将会破坏甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。
②多例多块组织同时需做冰冻切片时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻台上冻起来，然后依据不同的编号，依序切片，这样做既不费时也不会乱。
③放置组织冰冻前，应视组织的形状及走势来放置，所谓“砍柴看柴势”，切片也是如此，如果胡乱放置，就不能收到很好的效果。
④组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液，在未达到固定前，更不能使用。
临床快速冰冻切片，不须要预先固定，一是为了争取时间，二是固定了的组织，反而增加了切片的难度。
如果使用未完全固定的组织做冰冻切片，就会出现冰晶。
这是因为含水的固定液在组织未经固定前，其中的水份也可渗入到组织中去，当冰冻发生时，这些水份就存留于组织中，形成了冰晶。
⑤当切片时，如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用口中哈气，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。
另者，调高冰冻点。
⑥用于附贴切片的载玻片，不能存放于冷冻处，于室温存放即可。
因为当附贴切片时，从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差，当温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时，由于两种物质间温度的差别，当它们碰撞在一起时，分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力，使切片与载玻片牢固地附贴在一起。
如果使用冷藏的载玻片来附贴切片，由于温度相同，没有发生上述的现象。
4．冰冻切片的快速染色法
冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定1分钟后即可染色。
以往，为了防止切片脱落，当切片附贴于载玻片后，即用电吹风吹干后再固定。
根据实验对比认为这种做法欠妥未经固定的切片，强热作用后，蛋白发生变性，核内含有的物质由于热的作用融合在一起，染色后镜下分辨不出核内的各种物质。
冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，这样可以使切片中细胞内各种物质都在没有任何变化的情况下被固定起来，经一年多来1000例冰冻切片的制作实践认为这样制作固定切片好，核染色质清晰，核仁明显，其他物质都完好保存。
方法：
①切片固定30秒－1分钟。
②水洗。
③染苏木素3－5分钟。
④分化。
⑤于碱水中返蓝20秒。
⑥伊红染色10－20秒。
⑦脱水，透明，中性树胶封固。
冰冻组织1－2分钟，切片1分钟，固定1分钟，染色共五分钟。
总共在10分钟内完成快速
制片过程，结果与石蜡切片不相上下。
冰冻切片的方法还有很多种，如甲醇循环的半导体冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，半导体冰冻切片法和氯乙烷冰冻切片法等，这些方法在目前来说已很少使用，因此在这里不作阐述。