pEASY-Blunt Cloning Kit使用说明书
蛋白快速银染试剂盒操作步骤及注意事项
蛋白快速银染试剂盒操作步骤及注意事项蛋白快速银染试剂盒操作步骤及注意事项货号：G0180规格：20T有效期：6个月有效。
产品内容：试剂(A):Silver Stain Sensitizer(500×)2×1ml RT试剂(B):Silver Stain(100×)10ml RT避光试剂(C):Silver Stain Developer(5×)2×100ml RT避光试剂(D):Silver Stain Stop Buffer(10×)100ml RT产品说明：蛋白快速银染试剂盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一种快速的可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒，该试剂盒含有增敏步骤，可明显降低背景。
其优点还在于：1、操作简单、快速；2、可用于2D凝胶的银染，并可进行后续的质谱检测；3、目的条带清晰；4、不含甲醇。
Protein Fast Silver Stain Kit与Protein Silver Stain Kit 相比，前者操作速度更快，当检测灵敏度可能低于后者，尤其是在检测小分子量蛋白质的时候。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料：1、水平摇床或侧摆摇床2、去离子水(超纯)3、乙醇、冰乙酸操作步骤(仅供参考)：1、准备工作：以下操作以8.5×5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，一般用量是25ml，对于凝胶体积较大的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。
整个银染过程应在摇床上进行，摇床转速控制在60～70rpm。
提前配制固定液，即按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=5:1:4的比例配制。
提前配制洗涤液，即按无水乙醇:去离子水=1:4的比例配制。
2、水洗：电泳结束后，取凝胶放入去离子水中清洗2次，每次5min。
3、固定：取凝胶放入50～100ml固定液中，在摇床上室温摇动15～20min，重复固定步骤1次。
普利莱调亡细胞染色试剂盒说明书
北京普利莱基因技术有限公司 电话：************,62027915 Email:*****************.cnApplygen Technologies Inc. DocRev: 201308 Page 1 of 1凋亡细胞核和调亡小体染色试剂盒 C1100描述：凋亡中晚期细胞的形态学特征是细胞核固缩，核内染色质在局部区域凝集，致密浓染，继而核碎裂出现凋亡小体。
普利莱公司的调亡细胞染色试剂盒以Hoechst 染料为基础，其独特的添加成分和系统优化条件使该试剂盒具有以下几个卓越的特征：(1). 适用于调亡细胞核及调亡小体的染色；(2). 应用范围宽广: 活体细胞和固定的贴壁或悬浮培养细胞，石蜡或冰冻组织切片；(3). 快速，30分钟完成细胞凋亡染色。
组成：可用于检测100个样品。
1. 100×染色浓缩液 0.5ml ；2. 抗荧光淬灭封片剂。
储存：染色浓缩液需4℃避光保存，六个月内有效。
自备试剂：固定液(4%多聚甲醛), PBS 缓冲液或0.9%NaCl 。
贴壁细胞染色操作说明：以生长在24孔板内的贴壁细胞为例(或在盖玻片上贴壁生长的细胞）1. 吸去培养液，用PBS 洗涤两次。
2. 加入0.5ml 固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
3. 吸去固定液，用PBS 或0.9%NaCl 洗涤一次，吸尽液体。
4. 取5μl 100X 浓缩染液与0.5ml PBS 缓冲液混合，加入到培养皿中, 室温孵育10分钟。
5. 吸去染液，PBS 洗涤一次，吸去多余液体后用抗荧光淬灭封片剂封片。
悬浮细胞或消化后的细胞染色操作说明：1. 悬浮细胞或消化后的细胞，用PBS 洗涤，1000g 低速离心收集细胞样品于1.5ml 离心管。
2. 加入0.5ml 固定液重悬细胞沉淀，固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
3. 1000g 低速离心，吸去固定液，用PBS 或0.9%NaCl 洗涤一次，离心，吸尽液体。
拜科奇产品手册
目录
.1 . . . . . .1 .1.1 .1. .1. .1. .1. . ..1 .. .1 . . . . . . . 10 11
拜科奇的产品特性 ......................................................................................................... 质量保证........................................................................................................................ 产品纯度........................................................................................................................ 耐受性和安全性的临床前证据 ....................................................................................... 临床前免疫原性模型...................................................................................................... 临床前疗效研究............................................................................................................. 拜科奇临床前研究小结 .................................................................................................. 临床研究........................................................................................................................ 对既往接受过治疗的患者（PTPs）的研究.................................................................... 0 药代动力学 .................................................................................................................... 0 疗效............................................................................................................................... 临床免疫原性 ................................................................................................................ 外科手术中的应用 ......................................................................................................... 安全性 ........................................................................................................................... 对既往未接受过治疗（PUPs）或仅接受过最低限度治疗（MTPs）的患者的研究 ....... 拜科奇用于治疗PUPs/MTPs的安全性及疗效 ................................................................ PUPs/MTPs中抑制物的产生率...................................................................................... 重组人凝血因子VIII抑制物的形成.................................................................................. 1 抑制物形成的潜在标志物 .............................................................................................. 1 抑制物形成的发生率...................................................................................................... 抑制物分子 ................................................................................................................... 抑制物的特异性............................................................................................................. 对PTPs的临床免疫原性研究 ......................................................................................... PUPs/MTPs中抑制物发生率的比较 ............................................................................. 抑制物产生的累积风险 .................................................................................................. 0 小结：拜科奇与凝血因子VIII抑制物 .............................................................................. 1 免疫耐受诱导 (ITI) ........................................................................................................ 长期预防........................................................................................................................ 产品亮点总结 ................................................................................................................ 0 参考文献........................................................................................................................
普利莱基因技术软骨染色液说明书
软骨染色液（甲苯胺蓝法）B1104（Toluidine blue Staining Solution）货号产品名称规格价格B1104软骨染色液（甲苯胺蓝法）100ml240元描述：甲苯胺蓝，英文名称为Toluidine blue，CAS号为92-31-9，分子式为C28H20N2O10S2·2Na，分子量为305.8256。
甲苯胺蓝属于常用的人工合成的醌亚胺染料类的一种，是具有两个发色团和两个助色团的碱性染料。
甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用。
软骨基质中含有大量的多糖类（硫酸软骨素或硫酸角质素）阴离子基团，具有嗜碱性；组织细胞的细胞核、神经元的尼氏体、肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等酸性物质的特殊颗粒等的酸性物质与甲苯胺蓝中的阳离子相结合而被染色，呈现发光色团的颜色，蓝色。
本品适用于软骨组织、细胞核、尼氏体、肥大细胞的特殊颗粒的染色。
本产品用于软骨染色，可以间接反应软骨基质中蛋白多糖的含量和分布，当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，导致染色减弱或不着色，用于软骨组织损伤和粘多糖代谢的研究。
适用范围：适用于鉴定细胞或基质内酸性物质的存在，主要用于软骨、细胞核、尼氏体、肥大细胞颗粒的染色。
储存：室温下保存3个月，4℃保存6个月。
染色步骤：1.组织切片入蒸馏水（石蜡切片需脱蜡至水）。
2.入甲苯胺蓝染液染色30分钟左右。
（镜下观察，适当调整染色时间）3.自来水冲洗2分钟去掉浮色，滤纸吸干水分。
4.丙酮或醋酸分化液分化，至软骨细胞呈清晰的紫蓝色为止。
（可省）5.常规酒精脱水、透明后中性树胶封片或蒸馏水洗后冷风吹干，甘油明胶封片。
染色结果：软骨细胞、成骨细胞呈紫红色，基质呈淡蓝色。
说明：1.第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验，确定合适的染色时间。
2.固定、脱水、透明所需的试剂需要另购置。
本公司有甘油明胶封片液。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
pEASY-Blunt Cloning Kit使用说明书
● 快速克隆基因，仅需要5分钟反应时间。
● 提供氨苄青霉素和卡那霉素两种筛选标记。
● 对照插入片段克隆效率可达85% 以上。
● 包含LacZ 基因，在含有IPTG，X-gal 的平板培养基
上，可进行蓝白斑筛选。
PCR 产物的制备
(1) 引物要求：引物不能磷酸化。
(2) 酶的选择： Pfu系列的DNA 聚合酶。
M13F (10 μM)，M13R (10 μM)，Trans1-T1 Phage
Resistant Chemically Competent Cell。Expected PCR
product size： 700 bp。 产品说明 pEASY®- Blunt Cloning Vector 适用于平端克隆。
to 50 μl
Final Concentration as required 0.2 μM 1× 0.2 mM 2.5 units
Not applicable
PCR
94℃ 94℃ 50-60℃ 72℃ 72℃
2-5 min 30 sec 30 sec 1kb/min 10 min
30 cycles
本产品仅供研究，不用于临床诊断。
目录号：CB101 保存:Trans1-T1 Phage Resistant Chemically Competent
Cell-70℃保存六个月，其它-20℃保存六个月。 试剂盒组成 pEASY®- Blunt Cloning Vector (10 ng/μl)，Control
Template (5 ng/μl)，Control Primers (10 μM)，
EcoR V
BstX I
Not I
Xho I
M5 pBLUE-T Simple Cloning Kit 使用说明书
M5pBLUE-T Simple Cloning Kit使用说明书产品名称单位货号M5pBLUE-T Simple Cloning Kit20T MF134-01M5pBLUE-T Simple Cloning Kit4×20T MF134-04【储存条件】长期保存，请置于-20˚C，有效期6个月。
使用后请及时放入-20˚C保存以保证酶的活性。
【产品简介】pBLUE-T Simple Vector是一种高效克隆PCR产物(TA Cloning)的专用载体。
这种载体是由pBlueScript II SK(+)质粒改建而成，和传统T载体ECOR V切开后加T方法不同，pSURE-T Simple通过改造pBlueScript II SK(+)，在原pBlueScript II SK(+)多克隆位点引入Xcm I酶切后使其原多克隆位点两侧的3’末端直接产生未配对的T碱基，因此有更高的重组效率。
同时它消除了pBlueScript II SK(+)载体上的多克隆酶切位点，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。
此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时，酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆成功率。
此外，本公司载体连接体系还有背景低（蓝斑小于10%），重组率高（白斑中超过90%有插入片段），可快速连接等特点。
本说明书末列出了pBLUE-T Simple载体相关的技术资料，其全序列可参照pBlueScript II SK(+)序列，只是其多克隆酶切位点处序列稍有不同。
测序推荐采用M13通用测序引物和T3启动子引物（见后面图谱）。
【产品组份】20T4×20TpBLUE-T Simple Vector(30ng/µl)20µl80µl1000bp Control（30ng/µl）5µl5µl10x PEG Enhancer50µl200µl10x Ligation Buffer40µl160µl2x Quick Ligation Buffer100µl400µlT4DNA Ligase,5U/ul20µl80µl【操作步骤】1.连接反应的准备：PCR产物是否要进行纯化取决于扩增产物的质量。
蛋白质尼罗红染色试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS30007 v.A GENMED蛋白质尼罗红染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED蛋白质尼罗红染色试剂是一种旨在使用一种荧光染料尼罗红直接在聚丙烯酰胺凝胶上进行染色，数分钟内在清晰背景上产生灵敏度10纳克以下蛋白质，通过紫外光激发显示红色条带的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于单向或双向变性或天然蛋白电泳的检测。
产品即到即用，性能稳定，一步操作，敏感度高，显色清晰，重复性好，建立标准化体系。
技术背景尼罗红染色剂（9-diethylamino-5H-benzo[alpha]-phenoxazine-5-one；Nile red）是一种水溶性的荧光染料。
与蛋白质结合后，在紫外光的激发下，显示红色。
无需固着处理。
可以用于考马斯亮蓝染色后的再染色。
可与质谱分析兼容。
SDS将显著增强染色效果。
产品内容GENMED清理液（Reagent A）毫升GENMED染色液（Reagent B）毫升产品说明书保存方式保存在4℃冰箱里, 避免光照，有效保证2月用户自备塑料盘：用于染色的容器无离子水：用于稀释试剂的溶液平式摇荡仪：用于染色操作时的孵育实验步骤实验开始前，完成SDS-PAGE蛋白电泳的运行，取出的胶体，作好定向标记，然后进行下列操作：1．准备一个大小的染色塑料盘2．放入聚丙烯酰胺凝胶3．加入毫升GENMED清理液（Reagent A）在凝胶上，覆盖整个胶体4．小心倒掉染色盘里的GENMED清理液（Reagent A）5．加入毫升用户自备的无离子水6．加入毫升GENMED染色液（Reagent B），强烈混匀，使染色液均匀分布（注意：不要损坏胶体）7．在室温下平式摇荡仪上孵育分钟，速度为RPM，避免光照8．小心倒掉染色盘里的染色液9．加入毫升用户自备的无离子水，用手摇动秒10．小心倒掉无离子水11．重复实验步骤三次12．即刻放在UV透射仪上观察和照相：条带显示红色13．可以继续进行考马斯亮蓝染色注意事项1．本产品为20次操作2．胶体越大，用量相应增加3．建议电泳运行缓冲液中的SDS终浓度为0.05％，以降低背景噪音4．操作时须戴手套5．建议用无离子水稀释或清洗6．孵育温度为室温7．孵育后，即刻进行观察；放置时间过久，影响效果8．本公司提供系列蛋白染色试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定染色效果出色使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
SIHA 红色分离剂 peas 蔬菜保持剂说明书
Technical Data Sheet Fining / StabilizationSIHA® Pea ProteinSIHA Pea Protein fining agent is a new vegantreatment agent for fining and clarification of must,wine and fruit juices. It is made from peas and is anatural plant protein.The specific qualities of SIHA Pea Protein fining agent:-Vegan-GMO-free-Allergen-free according to regulation (EU) No1169/2011-Excellent clarifying and stabilizing propertiesApplicationSIHA Pea Protein fining agent should be rehydrated in10 times the quantity of cold water, before adding tothe beverage to be treated. Slowly pour the powderinto the cold water while stirring, in order to avoidclumping. A subsequent swelling time of approx. 4 – 6hours increases the efficacy. Excessive stirring canlead to increased foaming. Direct addition of dryproduct to the beverage is not recommended, since itcould result in premature flocculation.Ensure homogeneous distribution in the batch. Theprepared solution should be used within 24 hours.It is highly recommended to determine the requiredbentonite dosage in a preliminary test.The following quantities are recommended guidevalues, although it is advisable to carry out pre-trials(higher dosages may lead to sensory impairment of theproduct).Wine 0.83 – 2.5 (10 – 30)Flotation 0.42 – 1.67 (5 – 20)Fruit juice 0.83 – 2.5(10 – 30)Combination with bentonite improves the clarificationeffect and the stability of the clarified juice. Additionalcombination with silica sol (ratio 1:2.5 to 1:5 SIHA PeaProtein fining agent : Levasil® BF30) can improve theresult, although this should be tested in a pre-trial.The following fining sequence is recommended:1. SIHA Pea Protein fining agent2. BentoniteIf bentonite is added before SIHA Pea Protein finingagent, the clarification result can improve, although therequired dosage of SIHA Pea Protein fining agent isincreased. Silica sol should always be added last.An extended stirring time of 30 – 60 minutes after allfining agents have been added will improve the finingresult.For clarification with flotation a previous use ofpectinase e.g. SIHAZYM Flot is stronglyrecommended. The effectiveness should be checkedby a pectine test.SafetyWhen used and handled correctly, there are no knownunfavorable effects associated with this product.Further safety information can be found in the relevantMaterial Safety Data Sheet, which can be downloadedfrom our website.StorageSIHA Pea Protein fining agent is produced withextreme diligence. It should be stored in a cool, dryand odor-free place. Once opened, packs should beused up quickly.Delivery InformationSIHA Pea Protein fining agent is sold under article no.97.111 and is available in the following package size: 11.02 lb (5 kg) bucket44.08 lb (20 kg) sack Certified QualitySIHA Pea Protein fining agent is monitored regularly during the production process to ensure consistently high quality.Strict controls are also carried out immediately before and during final packing.North America44 Apple StreetTinton Falls, NJ 07724Toll Free: 800 656-3344(North America only)Tel: +1 732 212-4700Europe/Africa/Middle EastAuf der Heide 253947 Nettersheim, Germany Tel: +49 2486 809-0Friedensstraße 4168804 Altlußheim, Germany Tel: +49 6205 2094-0An den Nahewiesen 2455450 Langenlonsheim, Germany Tel: +49 6704 204-0 ChinaNo. 3, Lane 280,Linhong RoadChangning District, 200335Shanghai, P.R. ChinaTel: +86 21 5200-0099Singapore4 Loyang Lane #04-01/02Singapore 508914Tel: +65 6825-1668BrazilRua Clark, 2061 - Macuco13279-400 - Valinhos, BrazilTel: +55 11 3616-8400For more information, pleaseemail us at ********************or visit /filtration© 2016 Eaton. All rights reserved. All trademarks andregistered trademarks are the property of their respectiveowners. All information and recommendations appearing inthis brochure concerning the use of products describedherein are based on tests believed to be reliable. However,it is the user’s responsibility to determine the suitability forhis own use of such products. Since the actual use byothers is beyond our control, no guarantee, expressed orimplied, is made by Eaton as to the effects of such use orthe results to be obtained. Eaton assumes no liabilityarising out of the use by others of such products. Nor is theinformation herein to be construed as absolutely complete,since additional information may be necessary or desirablewhen particular or exceptional conditions or circumstancesexist or because of applicable laws or governmentregulations.EN1 B 4.2.712-2016。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
失活核酸酶），94℃变性30 秒，55℃退火30 秒， 72℃延伸（ 根据片段的大小确定延伸时间）30 个循环，72℃后延伸10 分钟。确认包含重组子 的克隆，扩大培养，用M13 F，M13 R 引物测序。 (4) 若载体自连，通用引物扩增，自连带大小为200 bp。 限制性酶切分析阳性重组子 挑选白色克隆接种于LB/Amp+ 或 LB/Kan+ 的液体培养基 中，过夜培养。碱裂解法或用试剂盒小量提取质粒，选
4、最佳反应时间
① 片段大小为0.1-1 Kb（含1 Kb）：5-10 min
② 片段大小为 1-2 Kb（含2 Kb）： 10-15 min
③ 片段大小为 2-3 Kb（含3 Kb）： 15-20 min
*片段为胶回收产物，反应时间取最大值。 5、最佳反应温度：25℃
*若片段是高GC结构，可以37℃反应。 （推荐用PCR 仪控温） 转化 (1) 加连接产物于50 μl Trans1-T1感受态细胞中（在
（3）重组克隆呈现淡蓝色或“fish eye” 插入片段没有影响lacZ 基因读码框，或插入片段太小， 这种情况下菌落呈现淡蓝色,可以进行下游实验。
pEASY ®-Blunt （3929 bp）
LacZα fragment: bases 1-548
Multiple cloning site: bases 234-358 M13 reverse priming site: bases 205-221 T7 promoter priming site: bases 362-381 M13 forward priming site: bases 388-404 f1 origin: bases 546-983 Kanamycin resistance ORF: bases 1317-2111 Ampicillin resistance ORF: bases 2129-2989 pUC origin: bases 3134-3807
择适宜的限制性内切酶，酶切鉴定重组子。 测序 用M13 F，M13 R，T7 promoter 引物测序，进行序列分析。 注意事项 ● 根据PCR产物的强弱，增减PCR产物的量(0.5-4 μl)，
但是载体使用量不变。
● 反应时间绝对不能超过30分钟。 ● 总反应体积不能超过5 μl。 ● 随着克隆片段长度的增加(>3 kb)，克隆效率降低。 ● 若有引物二聚体，建议使用PCR纯化试剂盒；紫外照
对照片段（700 bp）PCR 体系
Components Control Template Control Primers (10 μM) 10×Buffer (Buffer 含Mg2+) 2.5 mM dNTPs EasyPfu DNA Polymerase ddH2O
Volume 1 μl 1 μl 5 μl 4 μl 1 μl
EcoR V
BstX I
Not I
Xho I
Nsi I Xba I
Apa I
CCC TT
AA GGG CAA TTC TGC AGA TAT CCA TCA CAC TGG CGG CCG CTC GAG CAT GCA TCT AGA GGG CCC AAT
GGG AA PCR Product TT CCC GTT AAG ACG TCT ATA GGT AGT GTG ACC GCC GGC GAG CTC GTA CGT AGA TCT CCC GGG TTA
M13F (10 μM)，M13R (10 μM)，Trans1-T1 Phage
Resistant Chemically Competent Cell。Expected PCR
product size： 700 bp。 产品说明 pEASY®- Blunt Cloning Vector 适用于平端克隆。
(3) 反应条件：为了保证扩增产物的完整性，扩增反应
需要5-10分钟后延伸。反应结束后，电泳检测PCR产物
的量和质量。
克隆反应体系的建立
在微型离心管中依次加入溶液：
PCR 产物
0.5-4 μl
（根据PCR 产物量可适当增减，最多不超过4 μl）
pEASY®- Blunt Cloning Vector
T7 Promoter
M13 Forward Primer
TCG CCC TAT AGT GAG TCG TAT TAC AAT TCA CTG GCC GTC GTT TTA CAA CGT CGT GAC TGG GAA AAC
AGC GGG ATA TCA CTC AGC ATA ATG TTA AGT GAC CTG CAG CAA AAT GTT GCA GCA CTG ACC CTT TTG
to 50 μl
Final Concentration as required 0.2 μM 1× 0.2 mM 2.5 units
Not applicable
PCR
94℃ 94℃ 50-60℃ 72℃ 72℃
2-5 min 30 sec 30 sec 1kb/min 10 min
30 cycles
a. 纯化PCR 产物。 b. 如插入片段的浓度太低，增加插入片段的量。 c. 用新鲜的PCR 产物。 d. 扩增用平端的酶，如Pfu、Vent DNA Polymerase。 （2）PCR 鉴定重组子失败 当用PCR 方法鉴定重组子，没有得到目的扩增产物， 又没有载体自连，说明PCR 反应失败。重新优化PCR 反应条件或提取质粒，以质粒作模板扩增或酶切鉴定 包含重组子的克隆。
(5) 待IPTG，X-gal 被吸收后，取200 μl 菌液铺板，培 养过夜（为得到较多克隆，4000 rpm 离心1 min， 弃掉部分上清，保留100-150 μl，轻弹悬浮菌体， 取全部菌液涂板，培养过夜）。
阳性重组子的鉴定和测序 PCR 方法鉴定阳性重组子 (1) 挑选白色克隆至10 μl 无菌水中，涡旋混合。 (2) 25 μl 反应体系中取1 μl 混合液用作PCR 反应的
TransGen Biotech
Phone: 010-51296890 Customer Service: 400-898-0321 E-mail : trans @
pEASY ®-Blunt Cloning Kit
使用前请务必仔细阅读说明书
1 μl
轻轻混合，室温 (20℃-37℃) 反应5分钟。反应结束后，
将离心管置于冰上。
注意:1：7
*可以粗略的按照“1 Kb 20 ng”的比例计算。
（如1 Kb加20 ng、1.5 Kb加30 ng等）
2、最佳载体使用量：1 μl
3、最佳反应体系
3-5 μl，体积不足时可以补充无菌水。
本产品仅供研究，不用于临床诊断。
目录号：CB101 保存:Trans1-T1 Phage Resistant Chemically Competent
Cell-70℃保存六个月，其它-20℃保存六个月。 试剂盒组成 pEASY®- Blunt Cloning Vector (10 ng/μl)，Control
Template (5 ng/μl)，Control Primers (10 μM)，
● 快速克隆基因，仅需要5分钟反应时间。
● 提供氨苄青霉素和卡那霉素两种筛选标记。
● 对照插入片段克隆效率可达85% 以上。
● 包含LacZ 基因，在含有IPTG，X-gal 的平板培养基
上，可进行蓝白斑筛选。
PCR 产物的制备
(1) 引物要求：引物不能磷酸化。
(2) 酶的选择： Pfu系列的DNA 聚合酶。
pEASY ®-Blunt
M13 Reverse Primer
Hind III
Kpn I
Sac I Bam H I Spe I
BstX I
CAG GAA ACA GCT ATG ACC ATG ATT ACG CCA AGC TTG GTA CCG AGC TCG GAT CCA CTA GTA ACG GCC GCC AGT GTG CTG GAA TTG GTC CTT TGT CGA TAC TGG TAC TAA TGC TGT TCG AAC CAT GGC TCG AGC CTA GGT GAT CAT TGC CGG CGG TCA CAC GAC CTT AAC
射不仅容易使DNA发生突变，而且影响克隆效率。
TransGen Biotech
Phone: 010-51296890 Customer Service: 400-898-0321 E-mail : trans @
克隆常见问题分析 （1）克隆效率低 影响克隆效率有许多因素，如扩增目的基因所用引 物，基因的结构，插入片段和载体的比例等。如发 现克隆效率低，尝试用下列方法提高克隆效率。
感受态细胞刚刚解冻时加入连接产物），轻弹混匀，
冰浴20-30分钟。 (2) 42℃热激30秒，立即置于冰上2分钟。 (3) 加250 μl 平衡至室温的SOC/LB，200 转，37℃孵育1小时。 (4) 取8 μl，500 mM IPTG，40 μl，20 mg/ml X-gal混合，
均匀地涂于准备好的平板上，在37℃放置30 分钟。