有机磷酸酯类中毒及解救实验指导
【精品】药理学实验6有机磷酸酯类中毒及其解救
【精品】药理学实验6有机磷酸酯类中毒及其解救实验目的：1、了解有机磷酸酯类农药的性质和毒理学特点；2、掌握有机磷酸酯类中毒的临床表现和救治方法；3、通过实验操作，学会有机磷酸酯类中毒的处理方法。
实验原理：有机磷酸酯类是一种广泛应用于农业、家庭、工业等领域的杀虫剂和杀草剂，具有广谱、高效、低毒和易降解等优点。
其主要作用机制是抑制胆碱酯酶的活性，导致神经递质乙酰胆碱的积累，产生一系列中毒反应。
有机磷酸酯类中毒主要表现为神经系统症状，如头痛、眩晕、恶心、呕吐、腹泻、瞳孔缩小、流泪、流汗、唾液分泌增多、肢体抽搐、嗜睡、意识模糊、昏迷等。
严重者可引起呼吸肌麻痹和心脏麻痹，危及生命。
解救方法主要是用抗胆碱酯酶药物逆转胆碱能兴奋作用以达到解救效果，如阿托品、呋喃妥因等，同时积极实施对症治疗和支持疗法，如维持呼吸道通畅、氧气吸入、补足液体和电解质等。
实验材料：酶促颜色反应试剂盒、有机磷酸酯类农药样品、不同浓度的阿托品溶液、呋喃妥因溶液、原苏联BUK外科医疗袋、活体鼠。
实验步骤：1、使用试剂盒测定不同浓度有机磷酸酯类农药的含量，并记录其毒性分类、稳定性和半衰期等参数。
2、依据所选有机磷酸酯类农药的理化性质和毒性特点，选用适当的剂量注射到实验动物体内，观察其中毒症状和表现。
3、根据中毒程度和临床表现，及时采取不同救治措施，如给予阿托品或呋喃妥因进行解救，或进行其他支持治疗。
4、观察动物的恢复情况和疗效，并做好护理和康复工作。
实验注意事项：1、有机磷酸酯类农药具有剧毒性，操作时应佩戴防护手套、口罩等。
2、操作时要注意安全，如避免皮肤接触、误吸或误食等。
如果发生中毒反应应立即采取相应措施。
3、在动物实验过程中要遵守相关伦理规范，确保实验的科学性、安全性和可靠性。
实验结果及分析：通过实验操作，我们可以了解有机磷酸酯类中毒的临床表现和救治方法，掌握有机磷酸酯类中毒的处理方法。
同时，我们还可以对不同浓度和种类的有机磷酸酯类农药进行测定，了解其含量和毒性。
有机磷酸酯类中毒及解救实验报告
实验编号：一实验题目：有机磷酸酯类中毒及解救实验者：实验日期：2024年9月29日实验对象：家兔试验器材与药品：器材：测瞳尺、注射器(1mL、5mL、20mL)、头皮静脉针、移液器(1mL、200 uL)、离心管(5mL、50mL)、EP管(1.5mL)、离心机、37℃恒温箱/水浴锅、紫外分光光度计、比色皿、擦镜纸药品：肝素、10%敌百虫溶液、0.2%硫酸阿托品溶液、2.5%解磷定溶液、双蒸水、试剂一、8μmol/ml乙酰胆碱应用液、试剂二、试剂三、试剂四、试剂五、试剂六实验目的：1.掌握有机磷农药中毒的临床表现2.熟悉有机磷农药中毒及阿托品和解磷定的解毒原理3.了解抗胆碱酯酶药的相关知识实验步骤：1.取家免一只，称重得重2.31 kg观察记录家兔状态，耳缘静脉注射肝素2.3ml，使用1ml注射器取血0.3-0.5ml，转移至使用肝素润洗过的离心管中，待用；耳缘静脉注射10%敌百虫 3.5ml，中毒明显后取血，待用，耳缘静脉注射0.2%硫酸阿托品溶液2.3ml，M样症状消失后取血，待用；耳缘静脉注射2.5%解磷定溶液4.6ml, N样作用消失后取血，待用；家兔症状完全缓解，取血，待用4.对五组样品进行处理：轻轻颠倒肝素抗凝全血使之均匀后取0.1ml，再加入0.4ml 双蒸水，充分混匀 1 分钟，静置15 分钟，制备的5 倍溶血液对光观察澄清透亮待测。
依照操作表分别加入定量待测样本、双蒸水、8μmol/ml乙酰胆碱应用液和试剂一，混匀后37℃水浴20分钟6.而后依照操作表依次加入定量试剂三、试剂四、试剂五、试剂六和待测样本7.混匀，3500转/分离心10分钟，取上清，520nm，1cm光径，空白管调零，测各管吸光值实验结果：实验结果分析讨论：1、描述现象家兔注射敌百虫前，状态活跃，呼吸平稳顺畅，瞳孔大小正常，唾液分泌正常，无大小便失禁现象，无肌张力及肌震颤，全血CHE活力为9.211U/ml家兔注射敌百虫后,状态萎靡，,呼吸加快，出现瞳孔缩小，唾液分泌增多,肌震颤现象，大便失禁产出粪便二十余粒;，全血CHE活力为0.518U/ml注射阿托品后,家兔活动状态稍有恢复，呼吸稍有变缓，但仍然较快，瞳孔基本恢复正常,唾液分泌减少,肌震颤仍存在，无大小便失禁现象;，全血CHE活力为1.453U/ml注射解磷定后,家免活动状态基本恢复正常，呼吸基本平稳顺畅，瞳孔大小完全恢复,唾液分泌恢复正常,肌震颤消失，无大小便失禁现象，全血CHE活力为7.214U/ml一段时间后，家兔状态恢复完全，呼吸恢复平稳顺畅，瞳孔大小完全恢复,唾液分泌恢复正常,肌震颤消失，无大小便失禁现象，全血CHE活力为8.784U/ml2、解释药效家兔未做处理前状态活跃，呼吸平稳顺畅，瞳孔大小正常，唾液分泌正常，无大小便失禁现象，无肌张力及肌震颤，全血CHE活性正常，为9.211U/ml有机磷酸酯类物质敌百虫进入家兔体内后,其亲电子性的磷原子与乙酰胆碱酯酶的酯解部位丝氨酸羟基上具有亲核性的氧原子形成共价键结合,生成难以水解的磷酰化胆碱酯酶,使胆碱酯酶失去水解乙酰胆碱的能力,导致乙酰胆碱在体内堆积。
有机磷酸酯类农药中毒及解救实验报告
有机磷酸酯类农药中毒及解救实验报告一、1.1 有机磷酸酯类农药简介有机磷酸酯类农药是一类广泛应用于农业生产的化学农药，具有杀虫、杀菌、除草等多种作用。
这类农药在使用过程中也存在一定的安全隐患，如误食、接触等，可能导致中毒事故的发生。
因此，研究有机磷酸酯类农药中毒的原因、症状和解救方法具有重要的理论和实践意义。
二、1.2 实验目的与方法本实验的目的是通过对有机磷酸酯类农药中毒的小鼠进行实验，了解其中毒症状和解救方法，为实际应用提供理论依据。
实验方法主要包括：建立有机磷酸酯类农药中毒小鼠模型、观察小鼠中毒症状、探讨解救措施等。
三、2.1 有机磷酸酯类农药中毒小鼠模型建立为了模拟有机磷酸酯类农药中毒的小鼠模型，我们首先选取了一批健康的雄性小白鼠，然后通过注射有机磷酸酯类农药，使其出现中毒症状。
在实验过程中，我们严格控制了注射剂量、时间等因素，以保证实验的准确性和可靠性。
四、2.2 观察小鼠中毒症状在建立了有机磷酸酯类农药中毒小鼠模型后，我们开始观察小鼠的中毒症状。
通过观察发现，受试小鼠在摄入有机磷酸酯类农药后，出现了一系列异常行为和生理反应，如行动迟缓、攻击性强、呼吸困难等。
这些症状表明，受试小鼠已经发生了有机磷酸酯类农药中毒。
五、2.3 探讨解救措施针对有机磷酸酯类农药中毒的小鼠，我们需要采取一定的解救措施。
应尽快将受害小鼠从有机磷酸酯类农药环境中转移出来，避免进一步接触和吸入。
对中毒小鼠进行对症治疗，如使用解毒剂、抗生素等药物，以减轻中毒症状。
对中毒小鼠进行密切观察，确保其病情得到及时改善。
六、3.1 结论通过本次实验，我们成功建立了有机磷酸酯类农药中毒小鼠模型，并观察到了其典型的中毒症状。
我们还探讨了解救措施，为实际应用提供了理论依据。
本实验仍存在一定的局限性，如实验样本数量较少、实验时间较短等。
因此，我们建议在今后的研究中，进一步完善实验设计，扩大实验样本数量，延长实验时间，以提高实验结果的准确性和可靠性。
有机磷酸酯类中毒及解救1
实验结果
编 号
药物和用量 瞳孔 大小 用药前 M样症状 呼吸 频率 唾液 分泌 大小 便 N样症状 肌肉颤 动 活动情况
甲 兔
5%敌百虫2.5ml/Kg
0.1%阿托品1ml/Kg 2.5%解磷定2ml/Kg 用药前 5%敌百虫2.5ml/Kg 2.5%解磷定2ml/Kg 0.1%阿托品1ml/Kg
有机磷酸酯类中毒及解救
实验目的
1.练习家兔耳缘静脉注射。 2.观察有机磷酸酯类药中毒症状，并比较 阿托品与解磷定对有机磷农药中毒的解救效 果。
实验对象
家兔
实验器材和药品 注射器（5ml，10ml) 量瞳尺 棉球 5%敌百虫溶液 2.5%解磷定溶液 0.1%硫酸阿托品溶液
乙 兔
思考题：解救有机磷酸脂类中、重度重度为什么阿托品必须与解磷定合 用？
实验原理
有机磷酸酯类
+
胆碱酯酶
胆碱酯酶失活 ACh↑
Hale Waihona Puke M样症状瞳 孔 收 缩 呼 吸 困 难 大 小 便 失 禁 流 涎 流 泪 流 汗 心 率 血 压 下 降
N样症状
神 经 节 兴 奋 肌 震 颤 肌 无 力
中枢神经 系统症状
实验步骤
1、取家兔两只，称其体重并编号。分别观察 并记录呼吸频率、瞳孔大小、唾液分泌、大小 便及有无肌颤等。 2、两兔均背部皮下注射5%敌百虫2.5ml/Kg严 密观察上述指标的变化情况。 3、待中毒症状明显出现后，甲兔从耳缘静脉 注射0.1%阿托品1ml/Kg，乙兔注射2.5%解磷 定2ml/Kg，观察比较两药对家兔的解救效果。 4、观察完解救效果后，两兔分别注射另外一 种药物。观察并比较甲、乙兔解救后各项观察 指标的变化情况，将观察结果记录下来。
有机磷酸酯类农药中毒及解救实验报告
有机磷酸酯类农药中毒及解救实验报告一、实验目的1、观察有机磷酸酯类农药中毒的症状表现。
2、验证阿托品和解磷定对有机磷酸酯类农药中毒的解救作用。
3、熟悉有机磷酸酯类农药中毒及解救的机制。
二、实验原理有机磷酸酯类农药能与胆碱酯酶（ChE）牢固结合，形成难以水解的磷酰化胆碱酯酶，使 ChE 失去水解乙酰胆碱（ACh）的能力，导致ACh 在体内大量积聚，引起一系列中毒症状。
阿托品为 M 胆碱受体拮抗剂，能迅速解除 M 样症状，但对 N 样症状无效。
解磷定能使被有机磷酸酯类抑制的 ChE 恢复活性，从而解除有机磷酸酯类农药中毒。
三、实验材料1、动物：健康成年家兔，体重 20 25 kg，雌雄不限。
2、药品：5%敌百虫溶液、05%硫酸阿托品注射液、25%碘解磷定注射液。
3、器材：兔固定箱、5 ml 注射器、1 ml 注射器、瞳孔测量尺、听诊器。
四、实验方法1、家兔称重后，放入兔固定箱中固定。
2、观察并记录家兔正常的活动情况、呼吸频率、瞳孔大小、唾液分泌、大小便情况及肌张力等。
3、于耳缘静脉缓慢注射 5%敌百虫溶液 2 ml/kg，密切观察家兔中毒症状的出现。
中毒症状表现为：流涎、流泪、瞳孔缩小、大小便失禁、呼吸困难、肌肉震颤等。
4、当家兔出现明显中毒症状后，立即耳缘静脉注射 05%硫酸阿托品注射液 2 ml/kg，观察中毒症状的缓解情况。
5、 15 分钟后，耳缘静脉注射 25%碘解磷定注射液 20 mg/kg，继续观察家兔中毒症状的变化。
五、实验结果1、注射敌百虫溶液后，家兔在约 5 10 分钟内逐渐出现中毒症状。
首先表现为流涎、流泪增多，随后瞳孔明显缩小，呼吸频率加快，伴有大小便失禁。
约 15 分钟后，出现肌肉震颤，呼吸困难加重。
2、注射阿托品后，家兔的流涎、流泪现象迅速减少，瞳孔较前扩大，呼吸困难有所缓解，但肌肉震颤仍存在。
3、注射碘解磷定后，家兔的肌肉震颤逐渐减轻，呼吸恢复平稳，大小便失禁情况改善，最终基本恢复正常。
有机磷酸酯类农药中毒及解救实验报告
有机磷酸酯类农药中毒及解救实验报告一、1.1 实验背景与目的随着农业的发展，农药的使用越来越广泛。
有机磷酸酯类农药作为一类常用的农药，其毒性也不容忽视。
有机磷酸酯类农药中毒的发生率逐年上升，给人们的生命安全带来了极大的威胁。
因此，研究有机磷酸酯类农药中毒的机制和解救方法具有重要的理论和实践意义。
本实验旨在通过模拟有机磷酸酯类农药中毒的临床症状，探讨其中毒机制，并提出相应的解救措施，为实际应用提供理论依据。
二、2.1 实验材料与方法2.1.1 实验材料1. 有机磷酸酯类农药：如甲胺磷、敌敌畏等。
2. 动物模型：豚鼠。
3. 试剂：如解毒剂、生理盐水等。
4. 仪器设备：如多功能生理仪、心电图机等。
2.1.2 实验方法1. 将豚鼠随机分为两组，一组作为实验组，另一组作为对照组。
2. 实验组豚鼠给予有机磷酸酯类农药中毒剂量，对照组给予等量生理盐水。
3. 在中毒后的不同时间点，观察豚鼠的行为、生命体征变化，记录实验数据。
4. 通过对比实验组和对照组的数据，探讨有机磷酸酯类农药中毒的机制。
5. 根据实验结果，提出有机磷酸酯类农药中毒的解救措施。
三、3.1 实验结果分析3.1.1 行为变化实验组豚鼠在给予有机磷酸酯类农药后，出现明显的异常行为，如惊厥、昏迷、呼吸困难等；而对照组豚鼠则无明显异常表现。
这说明有机磷酸酯类农药对豚鼠的神经系统产生了毒性作用。
3.1.2 生命体征变化实验组豚鼠在给予有机磷酸酯类农药后，出现心率减慢、血压下降等生命体征异常；而对照组豚鼠生命体征正常。
这表明有机磷酸酯类农药对豚鼠心血管系统产生了毒性作用。
3.1.3 解毒效果在实验过程中，我们还观察了解毒剂对有机磷酸酯类农药中毒豚鼠的救治效果。
经过解毒剂治疗后，实验组豚鼠的生命体征逐渐恢复正常，行为异常也得到缓解。
这说明解毒剂对有机磷酸酯类农药中毒具有一定的救治效果。
四、4. 结论与展望本实验通过模拟有机磷酸酯类农药中毒的临床症状，探讨其中毒机制，并提出相应的解救措施。
有机磷酸酯类的中毒与解救
昆明醫科大學機能學實驗報告實驗日期：2016年10月26日星期三帶教教師：小組成員：專業班級：2014級全科一大班有機磷酸酯類的中毒與解救一、實驗目的1.觀察有機磷酸酯類農藥中毒的表現2.根據硫酸阿托品注射液、氯解磷定對有機磷農藥中毒解救的效果，分析這兩種藥的解毒原理。
二、實驗原理有機磷酸酯類與AChE結合牢固，難以裂解，AChE持久被抑制，故稱為難逆性抗膽堿酯酶藥。
此類藥物可通過皮膚、GAGGAGAGGAFFFFAFAF呼吸道、消化道吸入，進入機體后，其中親電子的磷原子與AChE的酯解部位絲氨酸羥基上具有親核性的氧原子形成共價鍵，生成難以水解的磷酰化膽堿酯酶，AChE活性被抑制，失去水解Ach的能力，膽堿能神經元末梢釋放正常釋放的遞質Ach不能被有效的水解，從而導致Ach在體內大量堆積，產生一系列中毒癥狀，M樣癥狀、N樣癥狀和中樞神經系統癥狀。
阿托品為M受體阻斷藥，對M膽堿受體有較高的選擇性，能迅速解除有機磷酸酯類中毒的M樣癥狀。
氯解磷定為膽堿酯酶復活藥，能使被有機磷酸酯類抑制的AChE恢復活性。
三、實驗儀器設備實驗器材：兔箱、注射器、測瞳尺藥品：1.25%敵敵畏溶液、0.5%硫酸阿托平注射液、2.5%氯解磷定溶液家兔：2Kg四、實驗方法與步驟1.家兔稱重2.觀察其呼吸，唾液分泌、大小便次數、瞳孔大小、肌緊張GAGGAGAGGAFFFFAFAF及震顫等情況，并做記錄。
3.建立有機磷中毒模型于耳緣靜脈注射 1.25%敵敵畏（0.5ml/kg）.觀察并記錄上述各項指標。
4.采用阿托品注射液解救待出現中毒癥狀后，立即經耳緣靜脈注射0.5%阿托品注射液（0.4ml/kg）,觀察家兔的變化。
5.給予氯解磷定解救從耳緣靜脈注射 2.5%氯解磷定（2ml/kg），觀察上述指標的改變。
五、實驗結果家兔給藥前后各項觀察指標記錄GAGGAGAGGAFFFFAFAF結果分析：實驗中沒有出現大小便失禁，可能是因為兔子本身處于饑餓狀態，胃早已排空。
有机磷酸酯类中毒及解救实验指导
有机磷酸酯类中毒及解救一、实验目的1.了解有机磷农药中毒时的症状及产生机制2.观察解磷定对有机磷酸酯类中毒的解救作用3.掌握动物给药，血样采集，和紫外分光光度计的操作要点4.学习胆碱酯酶活力的测定方法二、实验原理有机磷酸酯类为持久性抗胆碱酯酶药，中毒后导致乙酰胆碱在体内大量蓄积，导致胆碱能神经过度兴奋，产生M样症状、N样症状和CNS样症状，联合应用阿托品和解磷定类药物可缓解此类症状，其中阿托品为M受体阻断剂，可迅速解除M样症状及部分中枢神经系统症状，但由于不能使胆碱酯酶复活，故对消除肌肉震颤无效。
而解磷定为胆碱酯酶复活药，可与有机磷酸酯类形成磷酰化解磷定，使胆碱酯酶复活，从而缓解M症状、N症状（包括肌肉震颤）及CNS症状。
乙酰胆碱在血液中被胆碱酯酶水解，产生乙酸和胆碱。
在一定条件下，水解乙酰胆碱的量与胆碱酯酶的活性成正比。
故在反应体系中，加入定量的乙酰胆碱使之参加反应，通过测定剩余的乙酰胆碱即可计算出水解的乙酰胆碱量，从而推算出胆碱酯酶的活性。
三、实验动物家兔两只四、实验器材、仪器与药品实验器材与仪器：试管架、食管、量筒、烧杯（采血过滤用）、移液器、注射器、直尺（测瞳用）、动脉夹、手术刀片、棉球、分光光度计、恒温水域锅实验药品：5%敌百虫、0.1%阿托品、2.5%解磷定、蒸馏水、7×10-3mol/L乙酰胆碱、1mol/L碱性羟胺、4N盐酸、3.5N氢氧化钠、0.37mol/L三氯化铁、Ph7.2磷酸盐缓冲液五、实验步骤第一部分：有机磷酸酯类中毒及解救1.取家兔两只，标记，称重，观察并记录活动情况、呼吸频率、瞳孔大小，唾液分泌，大小便，有无肌震颤等，将观察结果记录于表1。
2.采血方法：用酒精棉球轻轻擦拭家兔耳缘静脉，当其充血明显时，用刀片横断耳缘静脉，使血液0.5~1.0毫升自然流入到采血杯中，杯内预先滴入两滴肝素，自然干燥后备用，并轻轻振荡采血杯，防止凝血。
3.按步骤二所述方法取甲乙两兔耳静脉血各一份，用以测定家兔正常胆碱酯酶活性。
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有机磷酸酯类中毒及解救
一、实验目的
1.了解有机磷农药中毒时的症状及产生机制
2.观察解磷定对有机磷酸酯类中毒的解救作用
3.掌握动物给药，血样采集，和紫外分光光度计的操作要点
4.学习胆碱酯酶活力的测定方法
二、实验原理
有机磷酸酯类为持久性抗胆碱酯酶药，中毒后导致乙酰胆碱在体内大量蓄积，导致胆碱能神经过度兴奋，产生M样症状、N样症状和CNS样症状，联合应用阿托品和解磷定类药物可缓解此类症状，其中阿托品为M受体阻断剂，可迅速解除M样症状及部分中枢神经系统症状，但由于不能使胆碱酯酶复活，故对消除肌肉震颤无效。
而解磷定为胆碱酯酶复活药，可与有机磷酸酯类形成磷酰化解磷定，使胆碱酯酶复活，从而缓解M症状、N症状（包括肌肉震颤）及CNS症状。
乙酰胆碱在血液中被胆碱酯酶水解，产生乙酸和胆碱。
在一定条件下，水解乙酰胆碱的量与胆碱酯酶的活性成正比。
故在反应体系中，加入定量的乙酰胆碱使之参加反应，通过测定剩余的乙酰胆碱即可计算出水解的乙酰胆碱量，从而推算出胆碱酯酶的活性。
三、实验动物
家兔两只
四、实验器材、仪器与药品
实验器材与仪器：试管架、食管、量筒、烧杯（采血过滤用）、移液器、注射器、直尺（测瞳用）、动脉夹、手术刀片、棉球、分光光度计、恒温水域锅实验药品：5%敌百虫、0.1%阿托品、2.5%解磷定、蒸馏水、7×10-3mol/L乙酰胆碱、1mol/L碱性羟胺、4N盐酸、3.5N氢氧化钠、0.37mol/L三氯化
铁、Ph7.2磷酸盐缓冲液
五、实验步骤
第一部分：有机磷酸酯类中毒及解救
1.取家兔两只，标记，称重，观察并记录活动情况、呼吸频率、瞳孔大小，唾
液分泌，大小便，有无肌震颤等，将观察结果记录于表1。
2.采血方法：用酒精棉球轻轻擦拭家兔耳缘静脉，当其充血明显时，用刀片横
断耳缘静脉，使血液0.5~1.0毫升自然流入到采血杯中，杯内预先滴入两滴肝素，自然干燥后备用，并轻轻振荡采血杯，防止凝血。
3.按步骤二所述方法取甲乙两兔耳静脉血各一份，用以测定家兔正常胆碱酯酶
活性。
4.分别给甲乙两兔耳缘静脉静脉注射5%敌百虫75mg/Kg，1.5 ml/Kg，按前述指
标观察并将结果记入表一。
5.待中毒症状明显时，按步骤二所述方法再次采血，用于测定家兔敌百虫中毒
后胆碱酯酶活性。
6.甲兔立刻静脉注射0.1%阿托品1mg/Kg，1ml/Kg。
乙兔立即静脉注射2.5%解
磷定100mg/Kg，4ml/Kg，观察甲乙两兔的中毒症状有何变化，并将结果记入表一。
7.在症状改善明显时，按步骤二所述方法第三次采血用于测定家兔应用解救药
后胆碱酯酶活性。
第二部分：胆碱酯酶活性的测定
1.加样方法，试剂，顺序及加样体积参照上表
2. 取试管12支，六个一组，分为两组，分别标记为甲1、甲2、甲3、甲4、甲5、甲6、乙1、乙2、乙3、乙4、乙5、乙6。
3. 按表在试管中加入相应体积的pH7.2磷酸缓冲液。
4. 按表在试管中加入相应体积的全血。
5. 混匀后在37±0.5℃恒温水浴中预热3~5分钟。
6. 按表在试管中加入相应体积的7×10-3mol/L 乙酰胆碱溶液。
7. 按表在试管中加入相应体积的蒸馏水。
8. 震荡混匀后于37±0.5℃水浴中反应40分钟，每隔十分钟振摇一次。
9. 配制碱性羟胺溶液：1mol/L 盐酸羟胺溶液与3.5N NaOH 溶液等容混合，并不时振荡。
10. 按表在试管中立即加入碱性羟胺溶液并充分震荡。
11. 按表在试管中立即加入4N 氯化氢溶液并充分震荡。
12. 按表在试管中立即加入0.37mol/L 三氯化铁溶液并充分震荡。
13. 上述反应液用滤纸过滤，将滤液倒入1.0ml 的比色杯中。
以530纳米的波长比色，记录光密度值A ，计算全血胆碱酯酶活性值及酶活性值的百分数
六、结果记录
1. 酶活性值的计算
全血胆碱酯酶活性值=
A1、A2、A3和As 分别为对照管1、2、3和样品管的光密度值。
A3-A1为单纯ACh 全量的光密度值，A2-A1为血液的光密度值，A3+（A2-A1）为ACh 、血液和试剂的光密度值，A3+（A2-A1）-As 为分解的ACh 的光密度值。
2. 酶活性值的百分数计算
酶活性值的百分数=（样本全血胆碱酯酶活性值）/（正常全血胆碱酯酶活性值）*100%
六、注意事项
1. 用直尺测瞳孔时，注意与瞳孔之间保持1cm 的距离
7*A1-A3As -）A1-A2（+A3
2. 测量瞳孔时，注意前后光线应一致
3. 静脉注射敌百虫时，刺激性比较大，注意按好家兔
4. 敌百虫可以从皮肤吸收，手接触后应立即用自来水冲洗，切勿用肥皂，因其在碱性环境中可转别为毒性更大的敌敌畏。