ABO、Rh血型血清学
1例ABO血型系统抗体合并Rh血型系统抗体所致新生儿溶血病的试验诊断
1例ABO血型系统抗体合并Rh血型系统抗体所致新生儿溶血病的试验诊断目的对出生30min出现黄疸并伴有贫血症状的新生儿进行血型血清学试验，为临床进一步的诊断、治疗提供依据。
方法对患儿血液标本进行ABO、Rh血型鉴定，红细胞直接抗人球蛋白试验，血清游离抗体鉴定，红细胞抗体放散试验；对患儿母亲血液标本进行ABO、Rh血型鉴定，血清抗体特异性鉴定。
结果患儿ABO血型为A型，Rh表型为DccEE，红细胞直接抗人球蛋白试验阳性，血清和红细胞放散液中均检出IgG抗-E抗体和IgG抗-A抗体；母亲ABO 血型为O型，Rh表型为DCCee，血清中检出IgG抗-E抗体和IgG抗-A抗体。
结论该患儿血清及红细胞放散液中均检出IgG抗-E和IgG抗-A抗体，与母亲血清中检出的抗体相同，故可确诊为免疫性抗-E 抗体合并抗-A抗体引起的新生儿溶血病。
标签：HDN；ABO血型；Rh血型；免疫性抗体新生儿溶血病（hemolytic disease of the newborn，HDN）是因母婴红细胞血型不合，母体的免疫系统被胎儿红细胞致敏而产生IgG类抗体，这种抗体通过胎盘进入胎儿血液循环，引起同种免疫性新生儿（胎儿）红细胞破坏增加导致贫血，是儿科最常见的急性溶血性疾病之一，严重者可危及患儿生命或合并核黄疸等后遗症。
既往报道的HDN多数为ABO或Rh血型系统抗体引发所致[1-5]。
近日，我们发现1例由ABO血型系统抗体合并Rh血型系统抗体导致的HDN，报道如下。
1 资料与方法1.1 病例资料患儿母亲，35岁，汉族，无输血史，孕4产2，第1胎正常，第2、3胎都是在孕12周左右发生不明原因流产，第4胎足月顺产。
患儿出生后30min皮肤出现黄染，且呈进行性加重。
血样检查：总胆红素305.3μmol/L，间接胆红素198.7μmol/L，Hb102g/L。
为明确诊断，本研究对患儿及母亲血样进行了一系列血型血清学检测。
1.2 试剂与仪器抗-A、抗-B、抗-D、抗-E、抗-C、抗-c、抗-e、木瓜酶、抗人球蛋白试剂、谱细胞（上海血液生物医药有限责任公司）；聚凝胺试剂盒（珠海贝索生物技术有限公司）；ABO反定型红细胞由笔者自制。
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程(一)检验目的检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG 抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性，为新生儿溶血病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。
(二)检验原理新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。
新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A ／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD 血型鉴定试验、新生儿标本三项试验，为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。
(三)适用范围适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验。
(四)设备性能参数参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Or-tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头。
2.试剂DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO ／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制)。
(六)标本要求1.夫妇标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。
2.患儿标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无明显乳糜。
检验科ABO及RH血型标准操作规程
检验科ABO及RH血型标准操作规程1.【目的】确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。
1.25%A、B及O型试剂红细胞悬液。
1.3受检者血清。
1.4受检者5%红细胞盐水悬液。
2.RH 2.1IgG型抗D标准血清。
2.25%D阳性红细胞生理悬液。
2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。
4.【测定原理】ABO血型鉴定：生理盐水凝集法一试管法常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。
常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。
②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。
结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。
RH鉴定：红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。
虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。
Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。
5.【操作步骤】ABO鉴定步骤：1.试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。
2.标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。
3.分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。
4.取出试管后用手指轻弹试管底，若沉淀物成团漂起，表示发生凝聚现象；若试管内沉淀物恢复悬液状态，表示无凝集现象。
试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程
试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程一、目的为规范ABO和RhD血型鉴定的技术操作，保证鉴定结果准确及临床输血安全有效。
二、适用范围适用于试管法进行ABO和RhD血型鉴定。
三、原理1、单克隆抗-A、抗-B试剂与受检者红细胞反应作为正定型，A、B、O型试剂红细胞与受检者血清（血浆）反应作为反定型，以检测受检者红细胞上的A、B抗原及血清（血浆）中抗-A、抗-B。
根据受检者红细胞表达的A、B抗原及血清（血浆）中抗-A、抗-B情况判断ABO血型。
2、单克隆抗-D试剂与受检者红细胞反应，检测受检者红细胞是否表达D抗原，根据结果判断RhD血型。
四、设备与试剂设备：普通离心机，血型血清学专用离心机，显微镜试剂：单克隆抗A抗B抗D试剂，3%-5%的A、B、O红细胞五、环境条件室温控制在18-27℃，湿度保持在30%-70%。
六、步骤和方法1、将受检者血标本离心分离血清（血浆）及压积红细胞，取压积红细胞30—50微升加生理盐水1毫升稀释成3%—5%红细胞悬液。
2、取干净试管6支，正定型分别标记为抗-A、抗-B，反定型分别标记Ac、Bc、Oc另标记抗-D，在标记为抗-A、抗-B、抗-D的3支试管中分别加入相应的单克隆试剂2滴约100微升，再各加入受检者3%—5%红细胞悬液1滴约50微升；在标记为Ac、Bc、Oc的3支试管中各加入受检者血清（血浆）2滴约100微升，再分别加入相应的A、B、O型试剂红细胞1滴约50微升，轻摇使试管内反应物混匀。
用血型血清学专用离心机120g离心1 min后观察结果。
3、首先观察有无溶血现象，然后轻轻转动试管，边转动边观察有无凝集，使沉于管底的红细胞全部悬浮。
如肉眼观察不能确定有无凝集时须在显微镜下观察确定。
4、结果判断4.2 ABO血型鉴定结果判定规则，如下表：4.3 RhD血型判定：红细胞与单克隆-D试剂凝集为RhD阳性，无凝集为RhD阴性。
七、质量控制单克隆抗-A、抗-B、抗-D试剂在有效期内使用，每批次在使用前应检测特异性和效价。
ABO＼RhD血型3种鉴定方法的比较
ABO＼RhD血型3种鉴定方法的比较目的:探讨进行ABO、RhD正反定型手工微柱法在血型鉴定中的应用。
方法:对门诊送检血样同时采用手工微柱凝胶法及手工盐水试管和玻片法进行ABO、RhD正反对比定型鉴定。
结果:一次性正确率,手工微柱凝胶法正定型为100%、反定型为99.92%;试管法分别达到99.92%、99.83%;玻片法正定型率正确率为98.91%。
结论:手工微柱凝胶法操作简单、快速,易于观察。
其灵敏度高于试管法与玻片法。
血型标本便于保存,利于事后复查,值得在二甲以上医院推广。
标签：微柱凝胶法;试管法;玻片法在做ABO血型鉴定时,临床广泛应用的玻片法虽操作简单、方便快捷,但在临床实际工作中却时有发生血型鉴定错误现象,而且往往是在患者需要输血治疗申请配血时被发现错定血型,导致临床科室对检验科产生不良印象,认为检验质量差,检验结果不准确、不可靠。
对检验科工作会产生很大的负面影响。
试管法是传统经典的ABO、RhD血型鉴定方法,其结果准确可靠,但与微柱凝胶法相比,敏感性较差,操作难以规范化、自动化、检测结果不易保存,而微柱凝胶法用于ABO、RhD血型鉴定易于自动化、标准化、结果准确可靠,特异性强等优点被许多大医院所采用。
笔者在湘雅三院输血科进修学习期间,对于门诊每天送检血型鉴定标本同时采用手工微柱凝胶法鉴定ABO、RhD血型结果与试管和玻片法进行ABO、RhD血型鉴定结果进行比较。
1材料与方法1.1材料湖南省湘雅三院输血科2009年1月~2009年6月门诊血型鉴定1 193例,抽取静脉血1 ml用EDTA-K2抗凝,年龄1 d～90岁。
1.2试剂ABO、RhD血型定型微柱凝胶试剂卡(单克隆抗体)(长春博迅生物技术有限责任公司提供)反定型用的A型标准试剂细胞、B型标准试剂细胞由本实验室自制2%~5%试剂红细胞,按第一版《临床输血手册》[1]操作。
1.3设备TD-3A型血型血清学专用离心机(长春博研科学仪器有限责任公司生产)1.4 方法对门诊送检血样同时采用手工微柱凝胶法及手工盐水试管法进行ABO、RhD正反定型鉴定。
什么是ABO血型系统和Rh血型系统
什么是ABO血型系统和Rh血型系统
ABO血型系统是根据红细胞表面所含有的抗原类型将血液分为A型、B型、AB型和O型。
红细胞上仅有抗原A者为A型血，只有抗原B者为B型血，若同时存在A和B抗原则为AB型血，这两种抗原俱无者为O型血。
ABO血型系统是临床上使用最为广泛的血型系统，输血时需要鉴定和区分ABO血型系统内的供血者和受血者的血型，以防止发生溶血反应。
Rh血型系统是根据红细胞表面是否存在D抗原来规定的，含有D抗原的是Rh阳性，不含有D抗原的是Rh阴性。
Rh阳性人群占全球大部分人口，Rh阴性人群则相对较少。
由于Rh阴性血型在汉族人口中仅占3‰左右，因此又被称为“熊猫血”。
ABO血型系统和Rh血型系统是两种主要的血型系统，它们的存在和应用对于确保输血安全和拯救生命具有重要意义。
ABO血型及Rh血型
多为IgM
❖ O型人——除具有抗A，抗B外，还有抗AB，为 IgG，IgM或IgA混合物，IgG型抗A或抗B可通过
胎盘。
4. 特殊血型-亚型
❖ 弱A亚型：A3，Ax，Aend，Am，Ay，Ael ❖ 弱B亚型：B3，Bx，Bm，Bel
▪ 鉴定技术 1. 用抗A，抗AB，抗H做正定型 2. 反定型，检测有无抗A1 3. 吸收放散实验 4. 唾液分泌型物质的检测 ❖ 判断:凝集强度
Rh（D）血型鉴定及临床输 血策略
1.Rh血型
❖ “Rh”是根据恒河猴英语单词（Rhesus）的前 两位字母而由来
❖ 我们现在通常把红细胞上含有D抗原的称为RH 阳性，而不含有D抗原的称为RH阴性
❖RH系统还有RhC、c 、E 、e 四种抗原， RhAG系统等
❖ RH阴性的个体在亚洲汉族人当中很稀有，比率 为0.3%左右。
3. 方法
玻片法
试管法
微柱凝集法
纸片法、U型板 法、金标法等
2. ABO血型鉴定
IgM抗体
2，或有少量IgG，IgA
❖ 天然抗体：没有明显抗原刺激而产生的抗体。
❖ 免疫抗体：通过输血、妊娠等免疫刺激获得的 抗体
❖ A型人——抗B
❖ B型人——抗A
❖现今的称谓：D Variant（D变异型）
3.RhD阴性确认
盐水介质检测
PCR-SSP
阳性
阴性
测序
抗人球蛋白介质
阳性 加做直抗实验
阴性 吸收放散实验
阳性 放散实验 再次定型
阴性 Weak D/Partial D
阳性 Del
阴性
4.RHD血型输血策略
❖ （ 一 ） 弱 D 患 者 要 看 作 Rh （ D ） 阴 性 尽 量 输 Rh（D）阴性血（供者为弱D要当Rh（D）阳 性血用）
ABO、Rh-血型鉴定
2021/4/27
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盐水法操作程序： 1、取小试管2支，标明主、次侧。主侧：受血者血清2滴
加供血者3～5%生理盐水红细胞悬液1滴；次侧：供血 者血清2滴加受血者3～5%生理盐水红细胞悬液1滴。 2、混匀，以1000r/min，离心1min，取出，先目测上层液 体是否溶血，再轻轻摇动试管，检查红细胞是否凝集。
2021/4/27
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Rh(D)血型定型
目的：鉴定红细胞表面是否含有D抗原。 适用范围：受血者、献血者Rh(D)血型鉴定 使用器材和材料：Rh抗(-D)标准血清、吸管、玻片等
2021/4/27
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方法：玻片法
原理：根据抗D抗体与对应红细胞抗原的凝集 反应，区分Rh(D)阳性和Rh(D)阴性。
2021/4/27
结果判断：与盐水法相同。
2021/4/27
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注意事项：
1、用EDTA抗凝血浆代替血清配血，但不能用肝 素抗凝血配血，因为肝素对聚凝胺有中和作用。
2、病人使用肝素后要加双倍量聚凝胺。 3、聚凝胺试剂使用前应恢复至室温。 4、和试剂比例要恰当，增加血清（浆）和红细胞
量时，LISS及聚凝胺、重悬液的量也要增加，否 则，灵敏度会降低4～8倍。
2021/4/27
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血型凝集示意图
抗-
抗-A
抗（-D）
B
抗-
抗-A
抗（-D）
B
抗-
抗-A
抗（-D）
B
2021/4/27抗-
抗-A
抗（-D）
血型：AB型 Rh(D)：阳性
血型：B型 Rh(D)：阴性
血型：A型 Rh(D)：阳性
血型：O型 Rh(D)：阳性
9
反定法（试管法）
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ABO、Rh血型血清学检测
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主要内容◆
ABO血型检测
•ABO血型血清学特点
•ABO亚型的特点
•ABO血型鉴定
◆
Rh血型检测
•Rh血型血清学特点
•Rh血型鉴定
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ABO血型系统
•ABO血型是1900年由Karl Landsteiner(1868-1963年)首先发现
Landsteiner发现ABO血型的试验（棋盘法）
血清型红细胞来源
来源
Dr.St. Dr.Plecn. Dr.Sturl. Dr.Erdh. Zar. Landst.
Dr.St. C - + + + + -
Dr.Plecn. A - - + + - -
Dr.Sturl. B - + - - + -
Dr.Erdh. B - + - - + -
Zar. A - - + + - -
Landst. C - + + + + -
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ABO血型系统
•1901年，Landsteiner正式发表了试验结果，当时发现了A、B、C（即O型）三种血型
•1902年，他又和学生们共同发现了第4种ABO血型：D型（即AB型）
•国际输血协会（ISBT）红细胞抗原命名委员会：“ABO血型系统，编号：001，基因名：ABO”
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ABO血型的血清学特点•ABO血型系统主要的抗原、抗体：
血型抗原抗体
A A 抗B
B B 抗A
O - 抗A，抗B
AB A，B -
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