微生物学整理--苛养菌
5苛养菌与人兽共患病原菌
二、细菌特性
1. 形态染色 革兰阴性短小杆菌，球杆 状，单个或成双排列，无芽 胞，新分离的光滑型菌株有 荚膜，支气管败血鲍特菌和 鸟鲍特菌有鞭毛。
2.培养特性
专性需氧，营养要求高，生长 较慢。
鲍-金（B-G）培养基 菌落细小、 光滑、凸起、半透明、灰白色带 珠光的水银滴样，周围有狭窄溶 血环。
3. 生化反应
二、细菌特性
1.形态染色 革兰阴性小球杆菌，无鞭毛、无
芽胞，光滑型菌落有微荚膜。
2.培养特性 专性需氧，初次分离培养需5％～
10％CO2。 营养要求较高，在普通培养基上
生长缓慢，加硫胺、烟酸和生 物素等可促进生长。
最适生长温度为35℃～37℃ ，最 适pH为6.7。
3.生化试验
巴斯德菌属
Pasteurella
苛养菌
成都医学院 临床微生物学教研室
苛养菌是一大类对生长环境、营养要求较苛刻的
细菌，在普通环境内不能或难以生长。
常见苛养菌有嗜血杆菌属、鲍特菌属、肺炎链球
菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌等。
嗜血杆菌属
Haemophilus
一、分类
嗜血杆菌属根据对X因子V因子的需求不同，分为16 个种。对人类有致病性的主要有8个菌种：
能感染动物的细菌中，有少数也能感染人类，称为 人兽共患病原菌。人兽共患病原菌的种类较多，包括 鼠疫耶尔森菌、炭疽芽胞杆菌、布鲁菌属、巴斯德菌 属和弗朗西斯菌属等。
布鲁菌属
Brucella
一、分类
布鲁菌属只有一个种，但包括6个生物变种：
羊布鲁菌 B. melitensis 致病力最强 牛布鲁菌 B. abortus 猪布鲁菌 B. suvis 犬布鲁菌 B. canis 绵羊布鲁菌 B. ovis 森林鼠布鲁菌 B. neotomaes
5-苛养菌的分离与鉴定
肺炎链球菌很少产生外毒素，主要靠荚
膜侵袭力致病。肺炎链球菌主要引起人 类大叶性肺炎，肺炎后可继发胸膜炎、 脓胸，也可引起中耳炎、乳突炎、副鼻 窦炎、支气管炎、心内膜炎、腹膜炎、 关节炎、脑膜炎和败血症等。
细菌学检验不仅对疾病的病原学诊断有
重要价值，同时对临床治疗的药物选择 也具有十分重要意义。
（一）生物学性状
（1）试管法:
取新鲜培养物分装于两支试管内（每支 1ml），其中一支加入10%的去氧胆酸钠溶液 0.1ml或纯牛胆汁0.2ml，另一支加入无菌盐水 两滴（对照），15min后，阳性者细菌被溶解， 试管内液体呈透明状，阴性者无变化。
（2）平皿法:
加一滴10%的去氧胆酸钠溶液或纯牛胆汁 于被检菌菌苔上，15min后，阳性者细菌菌苔 被溶解，阴性者无变化。试验应有已知肺炎链 球菌作阳性对照。
4.乳胶凝集试验
• 结果准确、快速、特异性高。
5. 荚膜肿胀试验
•
取一滴抗血清与一滴菌悬液混匀，加少量
美蓝液混合后加盖片，室温10~20min后，用油
镜检查，如查到菌体呈兰色，周围绕有界限明
显未染色的膨大空白圈为阳性。可用于肺炎链
3） 培养环境 5～10％CO2、35℃培养24～48h。
（3）肺炎链球菌的菌落形态
• 在营养丰富的培养基上，肺炎链球菌形 成扁平、中间有凹陷的典型菌落，少数 菌可呈粘液型菌落。
3.抗原结构
（1）种属特异性抗原：为菌体多糖抗原，存在 于肺炎链球菌的细胞壁。
（2）型特异性抗原：是存在于肺炎链球菌荚膜 中的一种多糖多聚体，可溶于水，据此抗原可 将肺炎链球菌分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……等个型，其 中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型致病性最强。
3. 胆汁溶菌试验
自溶酶是一种L-丙氨酸--N-乙酰胞壁 酰胺酶，能切断肽聚糖上L-丙氨酸与N-乙 酰胞壁酸间的连接键，从而破坏细胞壁， 使菌溶解。
苛养菌及人畜共患
第一节
苛养菌
苛养菌：对营养要求苛刻，在普通培养 基上不生长或难以生长的一类细菌。
临床常见的有：
G+球菌：肺炎链球菌
G- 球 菌 ： 卡 他 布 兰 汉 菌 、 脑 膜
炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌
G-杆菌：嗜血杆菌、鲍特菌
嗜血杆菌属
嗜血杆菌属（Haemophilus）细菌为一 类无动力、无芽孢的革兰阴性短小杆菌 常呈球杆状、丝状等多形态。
一、 鲍特菌属
（一）分类 鲍 特 菌 属 （ Bordetelle ） 包 括 百 日 咳
鲍特菌，副百日咳鲍特菌，支气管败血鲍 特菌，鸟鲍特菌，霍氏鲍特菌，欣氏鲍特 菌6种。百日咳鲍特菌是百日咳的病原菌， 副百日咳鲍特菌可引起急性呼吸道感染， 其他鲍特菌偶可引起人类致病。
（二）临床意义
百日咳鲍特菌(B.pertussis)，简称百日 咳 杆菌。是百日咳的病原菌。1906年由 Bordet和Gengou首次从百日咳患儿痰中 分离。儿童多见。
临床意义
百日咳鲍特菌产生5种毒素： 百日咳毒素（pertussis toxin,PT） 丝 状 血 细 胞 凝 集 素 (filamentous
hemagglutinin,FHA) 腺嘌呤环酶毒素(adenylcyclase toxin,ACT) 气管细胞毒素 皮肤坏死毒素
临床意义
副百日咳鲍特菌（B.parapertussis）简 称 副百日咳杆菌。可引起人类急性呼吸 道 感染，类似轻型百日咳病。
三、微生物特性
流感嗜血杆菌含有不耐热的S抗原和 耐热的R抗原。
流感嗜血杆菌根据菌落特征可分为 三种类型：粘液型（M）、光滑型（S）、 粗糙型（R）。
四、微生物检验
标本采集 根据感染部位不同采集标本，如鼻咽试 子，痰液，脑脊液，脓液等。避免干燥， 及时送检。
临床常见苛养菌的培养与鉴定
形成化脓性脑脊髓膜炎。
4. 人工培养物如不及时转种，超过48h常死亡。该菌能产生自溶酶 ，故采集时标本不宜放冰箱，应保温立即送检。 5. 根据脑膜炎奈瑟菌夹膜多糖抗原的不同， 可分为A、B、C等13 个血清群，我国主要是由A群和C群引起。
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3.2 脑膜炎奈瑟氏菌-生物学性状
1. 培养条件：5%-10%的CO2 ,培养基：血平板和巧克力。 2. 菌落形态：光滑、凸起、半透明、湿润。 3. 涂片染色：革兰阴性球菌，肾形或咖啡豆状，凹面相对、
细菌
B定型为 有毒株
生长因子 X V ＋ + ＋ ＋ + + － ＋ － ＋
荚 膜
溶 血
吲 哚
脲 酶
触 酶
鸟 AA
流感嗜血杆菌：a～f型 未定型 副流感嗜血杆菌：三个型 未定型 溶血嗜血杆菌 副溶血嗜血杆菌 杜克氏嗜血杆菌 埃及嗜血杆菌 嗜沬嗜血杆菌 副嗜沬嗜血杆菌
＋ + － － + － ＋ + + －
抑菌环直径≥14mm为敏感
抑菌环直径≥18mm 确认
甲 型 溶 血 链 球 菌
Optochin试验: 敏感 胆汁溶菌试验: 阳性 菊糖发酵试验: 阳性 荚膜肿胀试验：阳性 触酶 ：阴性 胆汁七叶甘 ：阴性
肺 炎 链 球 菌
(S)
(R)
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1.3 肺炎链球菌-检测方法
2 乳胶凝集法 3 免疫学方法
V因子 V因子 MH平板
血平板
金黄色葡 萄球菌
细菌种类
血平板
MH平板
需要因 子
流感嗜血杆菌
副流感嗜血杆菌
+
+
+
X+V
苛养菌的分离培养ppt参考课件
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3.检验方法鉴定 直接涂片检查
a.淤血斑：刺破淤血斑做血膜片，干燥固定后 革兰染色阴性双球菌呈对排列，可初诊。
b.脑脊液：取脑脊液离心后沉淀物涂片同上 分离培养
将标本直接接种于血琼脂平板、巧克力平板，
置于5-10%co2,35度培养24小时后可见圆形、 湿润小菌落，经涂片证实G-双球菌
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病源菌根据不同的生化反应可分为6个生物 型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ。致病者多为 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型。根据荚膜多糖抗原性不 同，可将有荚膜菌分为a、b、c、d、e和f6个 血清型。b型致病力最强，其次为e和f。根 据细菌外膜蛋白（OMP）又可分为不同的亚 型。有荚膜者致病力大于无荚膜者。
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3.致病性 链球菌广泛存在于自然界和人及动物粪便
和健康人鼻咽部，可引起人类多种疾患，A 族占90%以上，猩红热，丹毒，新生儿败血 症，脑膜炎，产引起各种化脓性炎症，褥 热以及链球菌变态反应性疾病等。
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D奈瑟氏菌
寄生的脑膜炎奈瑟氏球菌和淋病奈瑟氏球菌是 重要的致病菌，脑膜炎奈瑟氏菌是人类流行性 脑脊髓膜炎的病原菌，多数菌株在初分离时有 荚膜，一般通过呼吸道传播所引起，常在冬末 春初季节发病最为流行。淋病奈瑟氏菌可引起 急或慢性淋菌性尿道炎、阴道炎，主要通过性 接触传播。
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流感杆菌主要通过呼吸道在人与人之间传 播，也可通过孕妇产道感染。新生儿由于 有来自母体的被动免疫，故2个月内发病率 低，3个月至3岁儿童的血清抗体水平最低， 此期易产生感染
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杜克雷嗜血杆菌
杜克雷氏嗜血杆菌的形态特点是短而细小，呈短
苛养菌
❖ 培养与鉴定：
在血琼脂平板培养5-7天可形成灰色不溶血 菌落。在固体培养基上菌落为无色、半透明、 圆形、表明光滑、边缘整齐、中央稍凸起， 直径为2-3mm;有时可出现粘液样或干燥的硬 皮样菌落。液体培养基呈轻度浑浊有沉淀， 不形成菌膜。培养≥30天才能报告阴性。
❖ 生化特性：
菌种
触 氧化 酶酶
❖ 国外曾报道卡氏肺孢子虫肺炎是艾滋病患者最常见的并发症， 其中艾滋病成人患者感染率为59％，儿童患者为81％，是艾 滋病患者主要死亡原因之一。由于艾滋病的流行，全世界的
本病发病率逐年明显上升。症状为干咳、呼吸困难、紫绀、 精神不安，咳嗽几乎无痰，肺部无明显的罗音。X线显示两 肺弥漫性阴影或斑点状阴影。急性期时，血沉快，原发病加 重，如诊断不及时，2-6周内死亡。我国已有检到病原体的 病例报道。本病的发病多与淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、
糖分解
葡萄糖
半乳糖
阿拉伯 糖
精氨酸 脱羧
硝酸盐 还原
脲酶
染料的耐受
H2S产 生
硫廑（40ug）
复红(20ug)
羊布鲁菌
+
+
+
-
-
-
+
V
-
+
+
牛布鲁菌
+
+
+
+
+
-
+++-+
猪布鲁菌
+
+
+
+
+
+
+
+
(-)
+
-
森林布鲁菌
+
厌氧工作站为您介绍苛养菌是什么
厌氧工作站为您介绍苛养菌是什么
经历了百年发展的微生物学，目前已经渗透到了我们的生活中，比如有医药医学和食品安全等比较重要的领域上。
随着微生物学研究的深入，已经诞生出MALDI-TOF MS和mNGS全新的方法来帮助大家获得全面的认知。
下面厌氧工作站就为您介绍苛养菌。
然而，培养方法仍然是一套金标准，微生物的收集、运输、培养和分离仍然至关重要。
微生物的培养和分离在分析和识别中起着至关重要的作用。
一系列对生长环境和营养要求苛刻的细菌，在普通环境中不能或难以生长，我们称之为苛养菌。
包括专用厌氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌、嗜二氧化碳菌等。
一系列对气体环境和营养要求较高的微生物。
包括厌氧菌、微需氧菌、嗜二氧化碳菌等。
苛养菌广泛分布在肠道、口腔、眼睛、上呼吸道、泌尿道等自然界、人类和动物体内。
随着生物医学等技术的发展，其中一些已被人类驯化和使用，作为食品中的有益细菌，或作为药物载体进入人体；另一部分明显有害，或影响人体健康或产品质量；另一部分仍不清楚，需要研究人员进一步探索。
苛养菌这种菌类主要分布在自然界里面，比如在动物的体内。
不过随着微生物研究的深入技术的发展，其中已经有一部分能够被使用，而其他不明确的部分还需要继续研究探索。
相信在未来世界里厌氧工作站会有更深入的发现，您觉得呢？。
第14章苛养菌与人兽共患病原菌
第14章苛养菌与人兽共患病原菌一、教学大纲要求（一）苛养菌1．苛养菌概念2．嗜血杆菌属3．鲍特菌属（二）人兽共患病原菌1．人兽共患病原菌概念2．布鲁菌属3．巴斯德菌属4．弗朗西斯菌属二、教材内容精要（一）苛养菌1．苛养菌概念苛养菌是一大类对生长环境、营养要求较苛刻的细菌，在一般环境中不能或难以生长。
常见苛养菌有嗜血杆菌属、鲍特菌属、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、卡他莫拉菌等。
2．嗜血杆菌属（1）分类与人类紧密相关的嗜血杆菌有8种，见表14-1。
（2）细菌特性嗜血杆菌培育时必需供给X、V因子，新鲜血液含X、V因子，但V因子处于抑制状态，必需将其加热80℃～90℃才能释放出来，故巧克力琼脂适合于嗜血杆菌生长。
不同的嗜血杆菌对X、V因子需求有所不同。
将流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培育后，后者合成较多V因子，可增进流感嗜血杆菌生长，靠近金黄色葡萄球菌的流感嗜血杆菌菌落较大，反之，菌落较小，称之为卫星现象。
嗜血杆菌大体生物学特性见表14-1。
表14-1 几种嗜血杆菌的生物学特性及其致病性菌种培养特性生化反应特性需要X因子需要V因子溶血葡萄糖乳糖麦芽糖甘露糖蔗糖鼠李糖氧化酶触酶脲酶流感嗜血杆菌＋＋－＋－±－＋－－＋－副流感嗜血杆菌－＋－＋－－＋＋－－－－溶血嗜血杆菌＋＋＋＋－＋－－－＋＋＋副溶血嗜血杆菌－＋＋＋－＋－＋－－±＋嗜沫嗜血杆菌（＋）－－＋＋－＋＋－－－副嗜沫嗜血杆菌－＋－＋＋－＋＋＋－－埃及嗜血杆菌＋＋－＋－＋－－－－－－杜克雷嗜血杆菌＋－－－－＋－－－（＋）－－（3）临床意义嗜血杆菌常借居于正常人上呼吸道，可引发上呼吸道、泌尿生殖道感染、脑膜炎、中耳炎、心内膜炎、菌血症。
流感嗜血杆菌要紧引发原发性化脓感染和继发性感染，其荚膜b型株毒力最强。
杜克雷嗜血杆菌为软下疳病原菌。
（4）微生物查验搜集脑脊液、血液、脓液、痰液、咽拭子等标本进行检查，因苛养菌不易存活，标本宜维持湿润，及时送检。
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苛养菌嗜血杆菌属鲍特菌属军团菌
形态染色1）格兰阴性短小球杆菌，具有多形性
2）无芽孢，无鞭毛，无动力，多数菌株
有荚膜，有荚膜菌株毒力较强1）格兰阴性短小杆菌，两端浓燃，单个
或成对，短链状排列
2）无芽孢，光滑型有荚膜，支气管败血
和鸟鲍特菌有鞭毛
1）格兰阴性杆菌
2）一端鞭毛/侧生鞭毛
培养特征1）需氧或兼性厌氧
2）营养要求高，需要X或/和V因子才
能生长。
新鲜血液含X/V因子，但V因
子处于抑制状态，必须加热80~90度，故
巧克力琼脂适于生长，灰白圆形、光滑、
半透明小菌落
3）与金葡共培养，有卫星现象，阴金葡
能合成较多V因子，靠近其周围的嗜血
生长旺盛1）专性需氧，不需CO2
2）对营养要求高，血平板和巧克力琼脂
板均不生长，需要用鲍-金培养基或
CCBA琼脂平板
1）需氧菌
2）营养要求苛刻，且生长慢
3）专业培养基：F-G琼脂培养基，
CYE,BCYE
4）在F-G上：3到5天针尖大小菌落，
紫外灯照射下发黄色荧光
5）BCYE 有光泽的刻花玻璃样菌落
生化反应1）氧化酶(+/-)、触酶（+/-），葡，乳，蔗
糖（+/-）
2）根据产生吲哚、尿素酶及鸟胺脱羧酶，
不同流感、副流感可分为8个生物型触酶试验阳性，不发酵糖1）氧化酶（+/-）不分解糖类，硝酸盐还
原（-）脲酶（-）
2）液化明胶（+）多数菌产生β内酰胺
酶
抗原结构荚膜多糖抗原，又可分为6个血清型H抗原无特异性，O抗原有特异性，根据
O进行血清学分型
致病性一．致病物质：荚膜、菌毛、酶类、内毒
素
二．所致疾病：呼吸道感染、急慢性化脓
性感染、继发感染一．致病物质：菌毛、荚膜、内外毒素
二．所致疾病：百日咳
轻症：仅流感样症状
重症：以肺部感染为主，全身多器官严重
损伤。