T3_植物组织培养、DNA技术及植物有效成分的提取
人教版高中生物选修3知识点整理及重点题型梳理植物细胞工程植物克隆技术
精品文档用心整理人教版高中生物选修三知识点梳理重点题型（常考知识点）巩固练习常考知识点植物细胞工程（植物克隆技术）【学习目标】1、简述植物组织培养和植物体细胞杂交技术。
2、体验植物组织培养技术。
3、列举植物细胞工程的实际应用。
【要点梳理】要点一：克隆——无性繁殖系【植物细胞工程（植物克隆技术）369167 克隆】1.分子水平的克隆:DNA 复制上很多碱基序列相同的DNA2.细胞水平的克隆细胞细胞分裂很多遗传物质相同的细胞3.个体水平的克隆组织、器官细胞分裂遗传背景相同的新个体要点二：植物细胞工程的基本技术1.细胞的全能性（1）遗传基础生物体细胞一般都是由受精卵经有丝分裂形成的，因而都含有生物体的一整套遗传物质，都具有发育成完整个体的潜能。
（2）不能表现的原因在生物体上不能表现出其全能性，只能通过细胞分化形成不同的组织、器官，这是因为在特定的环境、激素等的影响下基因选择性表达的结果。
2.植物细胞表现其全能性的条件（1）脱离母体。
（2）植物组织培养时，培养基中除含有一定的水分、无机盐外，还要添加一定的植物激素（如生长素、细胞分裂素），这有助于愈伤组织分化为不同组织和器官。
（3）在植物组织培养的前期对光照无需求，在后期需要光照条件，这有利于细胞生长、分化。
3．植物组织培养（1）过程：在无菌条件下，将植物体的器官或组织片段（如芽、根尖或花药）切下来，放在适当的人工培养基上进行离体培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。
这种组织的细胞排列疏松而无规则，是一团无定形的薄壁细胞——愈伤组织。
原来已经分化，并且具有一定功能的体细胞（或性细胞），丧失了原有的结构和功能，又重新恢复了分裂功能，叫做细胞的脱分化。
将处于脱分化状态的愈伤组织，移植到合适的培养基上继续培养（在适当的光照、温度等条件下）愈伤组织就会重新进行分化，产生出植物的各种组织和器官（如根、茎、叶等），进而发育成一棵完整的植株，这个过程叫做植物细胞的再分化。
2020年高考生物精选考点专项突破17：植物组织培养技术及有效成分提取
专题17植物组织培养技术及有效成分提取1．对胡萝卜素的提取过程的分析正确的是A．把新鲜的胡萝卜切成米粒大小的颗粒，置于烘箱中烘干时，温度越高、干燥时间越长，烘干效果越好B．在萃取过程中在瓶口安装冷凝回流装置，是为了防止加热时有机溶剂的挥发C．在萃取后，没有必要进行过滤D．将滤液用蒸馏装置进行蒸馏，要收集蒸发出去的液体，蒸发出去的是胡萝卜素，留下的是有机溶剂【答案】B【解析】把新鲜的胡萝卜切成米粒大小的颗粒，置于烘箱中烘干时，温度太高、干燥时间太长，会导致胡萝卜素分解，A错误；在萃取过程中在瓶口安装冷凝回流装置，是为了防止加热时有机溶剂的挥发，B正确；在萃取后，过滤的目的是除去固体残渣，C错误；将滤液用蒸馏装置进行蒸馏，要收集蒸发出去的液体，蒸发出去的是有机溶液，留下的是胡萝卜素，D错误。
2．在玫瑰精油和橘皮精油提取过程中，正确的是A．玫瑰精油和橘皮精油都可用蒸馏、压榨和萃取的方法提取B．分离出的玫瑰精油油层还会含有一定的水分，可加入无水Na2SO4吸水C．新鲜的橘皮中含有大量的果蜡、果胶等，为了提高出油率，需用CaCO3水溶液浸泡D．用于提炼玫瑰精油的玫瑰花应避免在花开的盛期采收，因为此时花朵含油量较低【答案】B【解析】橘皮易焦糊适宜用压榨法提取，不能用蒸馏法提取，这是因为橘皮精油的有效成分在用水蒸汽蒸馏时会发生部分水解，使用水中蒸馏又会产生原料焦糊的问题，A错误；分离出的玫瑰精油油层还会含有一定的水分，可加入无水Na2SO4吸水，放置过夜，再过滤除去固体Na2SO4就可以得到玫瑰油了，B正确；新鲜的橘皮中含有大量的果蜡、果胶等，为了提高出油率，需用Ca（OH）2溶液浸泡，能够破坏细胞结构，分解果胶，防止橘皮压榨时滑脱，提高出油率，C错误；用于提炼玫瑰精油的玫瑰花应在花开的盛期采收，因为此时花朵含油量较高，D错误。
3．如图是利用水中蒸馏法提取玫瑰精油的装置。
下列有关该装置的描述，错误的是()A．该装置在安装时需要先固定热源酒精灯，再固定蒸馏瓶，并要注意蒸馏瓶与热源的距离B．在安装蒸馏头时，要使蒸馏头的横截面与铁架台平行C．图中冷凝管的进水口、出水口接错，进水口应在下，出水口应在上D．将温度计固定在蒸馏头上，固定的位置如图所示，使温度计水银球略高于液面【答案】D【解析】该装置在安装时需要先固定热源，再固定蒸馏瓶，并要注意蒸馏瓶离热源的距离，A正确；安装蒸馏头时，要使蒸馏头的横截面与铁架台平行，B正确；图中冷凝管进水口、出水口接反，应该与水蒸气流向相反，即进水口应在下，出水口应在上，C正确；图中温度计位置过低，温度计的液泡应与蒸馏烧瓶的支管口下沿保持水平，D错误。
人教版高中生物选修一提分教程 专题6 植物有效成分的提取 课题1 含答案
课题1植物芳香油的提取[学习目标] 1.知道植物芳香油的来源与提取方法。
2.了解提取玫瑰精油和橘皮精油的实验流程。
知识点一植物芳香油的来源和提取方法知识梳理1.植物芳香油的来源(1)天然香料的主要来源是□01动物和□02植物，微生物中的□03真菌。
①动物香料主要来源于□04麝、□05灵猫、海狸和抹香鲸等；②植物香料可以从大约50多个科的植物中提取，如玫瑰花用于提取玫瑰油，樟树树干用于提取□06樟油。
(2)特点：具有较强的挥发性，易溶于有机溶剂。
(3)组成：主要包括□07萜类化合物及其衍生物。
2．植物芳香油的提取方法植物芳香油的提取方法有□01蒸馏、□02压榨和□03萃取等。
(1)水蒸气蒸馏法①原理：利用□04水蒸气将挥发性□05较强的植物芳香油携带出来，形成□06油水混合物，冷却后，混合物又会重新分出□07油层和□08水层。
②分类：根据蒸馏过程中原料放置的位置，可将水蒸气蒸馏法划分为□09水中蒸馏、□10水上蒸馏和□11水气蒸馏。
③步骤：水蒸气蒸馏→分离油层→除水过滤。
④适用：适用于□12玫瑰油、□13薄荷油等挥发性较强的芳香油。
⑤缺点：水中蒸馏会导致某些原料□14焦糊和有效成分□15水解等问题。
(2)萃取法①概念：萃取法是将□16粉碎、□17干燥的植物原料用□18有机溶剂浸泡，使芳香油溶解在□19有机溶剂中的方法。
②原理：植物芳香油不仅挥发性□20强，而且易溶于□21有机溶剂。
③方法：芳香油溶解于□22有机溶剂后，只需蒸发出□23有机溶剂，就可以获得纯净的植物芳香油了。
④步骤：粉碎、干燥→萃取、过滤→浓缩。
⑤适用范围：适用范围广，要求原料颗粒尽可能□24小，能充分浸泡在有机溶剂中，如茉莉油的提取等。
⑥缺点：用于萃取的有机溶剂必须事先□25精制，除去□26杂质，否则会影响芳香油的质量。
(3)压榨法：主要为冷压榨。
①原理：通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油。
②步骤：□27石灰水浸泡漂洗→压榨过滤、□28静置→再次过滤。
高中生物校本课程教案
高中生物校本课程教案【篇一：生物与生活校本课程教案】生物与生活校本课程教案目录一.传统发酵技术的应用课题1.果酒和果醋的制作课题2.腐乳的制作课题3.制作泡菜并检测亚硝酸盐含量二.微生物的培养与应用课题1.微生物的实验室培养三.植物的组织培养技术课题1.菊花的组织培养课题2.月季的花药培养四.酶的应用课题1.果胶酶在果汁生产中的作用课题2.探讨加酶洗衣粉的洗涤效果五.dna和蛋白质技术课题1.dna的粗提取与鉴定课题2.血红蛋白的提取和分离六.植物有效成分的提取课题2.胡萝卜素的提取七.生态环境与生活课题1.环境保护课题2.低碳生活一．传统发酵技术的应用课题1 果酒和果醋制作教学目标1、知识目标：理解果酒、果醋制作的原理。
2、能力目标：①学生根据果酒制作的原理设计果酒制作过程，体验制果酒的实践操作②在对果酒制作结果进行分析与评价环节，培养学生实验分析能力和严谨的思维能力。
3、情感目标：通过果酒酿制历史的追述，培养学生的民族自豪感，同时渗透sts 教育。
教学重点：①说明果酒和果醋的制作原理②设计制作装置制作果酒和果醋教学难点：制作过程中发酵条件的控制教学过程引言：在中华民族悠久的历史长河中，很多事物都走在世界前列，酒也一样，有着它本身的光辉篇章。
在酒的记载中，有许多关于酒的有趣传说。
猿猴酿酒说——猿猴的主要食物就是含糖水果，猿猴在水果成熟的季节收贮大量的水果在“石洼”中，一段时间后，就有特殊香味的液体流出，这就是最早的果酒。
在国内市场上，近几年出现了越来越多的果酒，如枸杞酒、青梅酒等。
果酒与生活——果酒中虽然含有酒精，但含量与白酒、啤酒和葡萄酒比起来非常低，一般为5到10度，最高的也只有14度。
因此，被很多成年人当作饭后或睡前的软饮料来喝。
果酒简单来说就是汲取了水果中的全部营养而做成的酒，其中含有丰富的维生素和人体所需的氨基酸。
有时候即使生吃水果也不能吸收的营养，通过果酒却可以吸收，因为营养成分已经完全溶解在果酒里了。
植物组织细胞培养技术生产此生代谢产物
植物组织细胞培养技术生产次生代谢产物的应用摘要：植物组织细胞培养是现代生物技术应用最重要的一个方面，它是一个应用广泛和快速发展的技术。
植物组织细胞培养技术已应用于植物次生代谢产物的生产，并取得很大成效。
本文讲述组织细胞培养技术在药物、食品、化妆品等方面的次生代谢产物生产的一些应用，以及总结了现在主要植物组织培养技术、植物组织培养技术在实践中的应用。
关键词：次生代谢产物细胞培养代谢产物植物的次生代谢产生的活性物质成分已被人类广泛应用，主要集中在研究制药(如如抗癌药物紫杉醇、疗伤药物紫草宁、保健药物人参皂甙等)、食品添加剂(如生姜、香子兰等)、调味剂(如胡椒、留兰香等)、食用色素(如花青素等)、油料(如如豆寇油、春黄菊油等)、饮料(如咖啡、可可等)、树胶(如阿拉伯胶等)、化妆品、生物杀虫剂和农用化学品等方面。
尽管有些植物次生代谢物质并不是很多，但它们与人类健康密切相关，已成为当前生物领域研究关注的重点。
因此许多植物代谢产物以组织细胞培养技术的方法开发利用，进行大规模生产，使植物次生代谢物质产量和活性提高。
1 植物组织培养技术在实践中的应用[1]21世纪是生物技术迅速发展的世纪，而植物组织培养技术是生物技术中的重要内容，可以用于：植物育种已被越来越广泛的用于扦插难生根植物、引种材料少的植物。
除常规的用器官进行培养，也可以用花药进行花粉单倍体植株育种，这种方法技术简单，对一些植物种来说易于诱导未成熟花粉的分裂，可以进行大群体研究，可以迅速而大量的产生单倍体，具有迅速纯合、选择效率高、排除杂种优势干扰、突变体筛选、消除致死基因等优点。
用于脱毒和离体快繁获得脱除病毒的材料和用于植物材料快速繁殖这方面是目前植物细胞组织培养应用最多最有效的一方面. 世界上受病毒危害的植物很多，而园艺植物受病毒危害更为严重，当植物被病毒侵染后，常常造成生长迟缓、品质变劣、产量大幅度降低等危害，目前，已经在马铃薯、甘薯、草莓、大蒜、苹果、香蕉等多种作物上大规模应用;离体培养的优点就是快速，而且材料来源单一，遗传背景一致，不受季节和地区的限制，重复性好，所以离体快速繁殖已经广泛应用于果树，中药材等的栽培。
高中生物高考一轮总复习讲义 选修1 专题4 植物的组织培养技术
(2)使用顺序不同，结果不同 使用顺序 先使用生长素， 后使用细胞分裂素 先使用细胞分裂素， 后使用生长素 同时使用 实验结果 有利于细胞分裂， 但细胞用量与细胞分裂素用量的比例不同，结果也 不同。 ①高：利于根的分化、抑制芽的形成； ②低：利于芽的分化、抑制根的形成； ③适中：促进愈伤组织的形成。 2．植物组织培养与花药培养的比较
2．产生花粉植株的两条途径[填空]
3．影响花药培养的因素[填空] (1)主要因素：________和________。 (2)月季花药培养一般选择________期，细胞核由中央 移向细胞一侧的时期。
4．实验操作[判断正误] (1)确定花粉发育时期的方法有醋酸洋红法和焙花青— 铬矾法。( )
(2)在剥离花药时，不要损伤花药，否则接种后不能脱 分化形成愈伤组织。( )
(3)与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形 成。( ) )
(4)月季花药培养得到的都是单倍体植株。(
三、DNA的粗提取与鉴定[判断正误] (1)DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。( )
(2)DNA不溶于冷酒精，可用酒精进一步提取DNA。 ( ) (3)DNA与二苯胺溶液反应生成紫色物质。( )
误区剖析 实验操作中易错的几个问题 (1)材料的选取：菊花的组织培养实验中，应选择未开 花植株的茎上部新萌生的侧枝；月季花药的培养实验中， 应选择花粉发育过程中的单核靠边期的花粉进行培养。
(2)外植体消毒：所用消毒剂为体积分数为70%的酒精 和质量分数为0.1%的氯化汞溶液，所使用的清洗液是无菌 水。 (3)培养过程：在初期，菊花的组织培养需光照，月季 花药的培养不需光照；而在后期均需光照。
无菌水 试
植物组织培养的内生细菌污染问题
植物组织培养的内生细菌污染问题【摘要】植物组织培养是一种重要的生物学技术，但内生细菌污染已成为制约其应用的一大难题。
本文探讨了内生细菌污染的来源，包括空气、工具和培养基等，并分析了内生细菌对植物组织培养的影响，如降低成活率和增加病原性。
提出了预防和控制内生细菌污染的方法，例如消毒操作和无菌技术的应用。
介绍了常见的内生细菌种类和检测方法，以帮助科研人员及时发现及处理污染问题。
强调了内生细菌污染对植物组织培养的重要性，并提出了未来研究方向和应对策略，以期为解决这一难题提供参考。
【关键词】植物组织培养、内生细菌、污染、来源、影响、预防、控制、常见种类、检测方法、重要性、未来研究方向、应对策略1. 引言1.1 植物组织培养的内生细菌污染问题植物组织培养是一种在无菌条件下进行的组织细胞培养技术，旨在研究细胞、细胞器和生物大分子的生长、分化和发育规律。
在植物组织培养过程中，常常会受到内生细菌的污染，对研究结果的准确性和研究对象的生长发育造成不利影响。
内生细菌污染的来源可以包括试管、培养基、空气及研究者等。
试管和培养基的污染是由未经有效消毒或灭菌的实验器皿及培养基引入外源性细菌，而空气中的微生物也可能通过飘浮微粒或空气循环传播到培养环境中。
研究者操作不当或不洁净也会成为细菌污染的潜在来源。
内生细菌对植物组织培养的影响主要体现在：1.影响植物组织的生长和发育，导致细胞分裂和分化受阻；2.产生有害代谢产物，影响培养基的成分和PH值；3.引起细胞凋亡和死亡。
为预防和控制内生细菌污染，研究者应采取有效的消毒和灭菌措施，定期清洁工作区域，并严格遵守操作规程。
特定的生长调节剂和抗生素也可应用于培养基中，以抑制细菌的生长。
常见的内生细菌种类包括：大肠杆菌、普通大肠菌群、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌等。
内生细菌污染的检测方法主要有：培养法、PCR法和荧光染色法等。
内生细菌污染对植物组织培养的影响不容忽视，预防和控制内生细菌污染的重要性愈发凸显。
实验6植物基因组DNA的提取
实验6 转基因植物PCR检测一、植物DNA的提取技术(CT AB法)一、实验目的1.掌握用CTAB法提取植物总DNA的方法和基本原理。
2.学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。
二、原理CTAB法[十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)]是一种快速简便的提取植物总DNA的方法。
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，然后加入CTAB，CTAB是离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使核酸(DNA、RNA)得以游离出来。
再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。
上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。
三、实验材料大豆幼苗[材料的采集与保存对提取DNA的产量和质量有很大影响。
通常应尽可能采集新鲜、幼嫩的组织材料，采集过程中应尽可能保持组织材料所含的水分。
通常的做法是取样时立即用浸湿的纱布包裹采集到的组织材料，放置在带有冷藏功能的采集箱中，这样通常使组织材料在3-5d内仍然保持新鲜。
野外远距离采集样本时，在可能的条件下应冷冻保存（如放置于液氮中）；当不具备冷冻条件时，最好用盛有无水CaSO4的瓶子分别保存，使其迅速干燥，这种方法可将材料保存数月，返回后应尽快进行DNA的提取工作。
那些具有大量次生代谢产物（如单宁、酚类、醌类等）的植物材料，应尽可能采集幼嫩组织。
]四、试剂4.1 CTAB提取缓冲液：100 mmol/L Tris-HCl （pH8.0），20 mmol/L EDTA-Na2，1.4mol/L NaCl（如表1），2% CTAB，使用前加入0.1%（V/V）的β-巯基乙醇。
表1 CTAB提取缓冲液配制试剂*名称M.W. 配制1 000mL 配制100mLTris 121.14 12.114g 1.2114gEDTA-Na2372.24 7.4448g 0.74448gNaCl 58.44 81.816g 8.1816g* 用HCl调pH值。
《植物生物技术》教学大纲
《植物生物技术》教学大纲一、课堂教学大纲1、教学目的该课程系统地论述了植物生物技术的理论和方法，既介绍了基本知识，也反映了该领域的最新研究进展。
全课程共分三大部分：植物组织培养、植物基因工程和植物分子标记及应用。
要求学生全面系统地了解植物生物技术的发展过程和发展趋势；理解各部分的基本理论、原理和概念；融会贯通三大部分的内容，并能运用所学技术解决生产中的实际问题。
通过学习，使学生学习掌握现代生物技术知识的技能和方法，尤其要求学生具有将植物生物技术与传统方法相结合改良植物、培育新品种、设计高新技术产业的能力，提高学生综合分析问题，系统利用专业知识的综合素质。
2、教学内容第一章绪论（2学时）•生物技术的产生与发展•植物生物技术与农业革命•植物生物技术在未来农业生产中所起的作用第二章植物细胞培养实验室建设与操作技术（2学时）本章重点、难点：植物组织培养所涉及的基本概念；培养基的组成、特点和用途；植物组织培养实验室建设；无菌操作的原理与技术等。
•植物组织培养实验室建设•实验室的设置•主要仪器设备、用途和使用方法•无菌操作器械•培养基及其制备•培养基的成分组成•常用培养基及其特点•培养基的改良与效应分析•培养基的制备•植物组织培养离体操作技术•培养用品的清洗与洗涤液的使用•灭菌与消毒•无菌操作技术•无菌操作中应注意的事项第三章胚胎培养（2学时）本章重点、难点：胚培养、胚珠培养和胚乳培养的意义，在育种工作中的实用价值。
•胚培养•胚培养的意义和用途•胚培养的方法•影响胚培养效果的因素•培养条件下的胚发育•胚珠培养•胚珠培养的意义•胚珠培养操作技术•胚乳培养•胚乳培养的意义•影响胚乳培养效果的因素•植株再生•离体授精第四章植物愈伤组织的诱导与分化培养（2学时）本章重点、难点：愈伤组织诱导、继代、培养与分化的基本术语和概念；器官发生；体细胞胚胎发生与植株再生；促进细胞分化的方法手段。
•愈伤组织的诱导与继代培养•脱分化、再分化的概念•愈伤组织的诱导、时期划分，各时期愈伤组织的特征特性•继代培养及继代培养的意义•悬浮培养及其用途•愈伤组织分化与植株再生•器官发生与植株再生•体细胞胚胎发生与植株再生•体细胞胚胎发生过程•体细胞胚的概念与内涵•体细胞胚胎发生与器官发生的区别•影响体细胞胚胎发生的外部因素•影响体细胞胚胎发生的外部因素•影响体细胞胚胎发生的内在因素•试管苗的移栽与护理•试管苗与自然苗的生理区别•试管苗移栽时应注意的事项第五章体细胞无性系变异与植物改良（2学时）本章重点、难点：体细胞克隆变异产生的遗传基础；体细胞克隆变异的育种应用。
植物内生菌DNA提取方法
在提取植物内生菌之前,植物需要表面灭菌,其具体操作为将植物浸泡在添加了0.02%的Tween-20的质量分数为1%的次氯酸钠溶液中1min,再将植物浸泡在70%酒精中1min,然后用硫代硫酸盐/Ringer’s林格氏液清洗3次,每.次1min;根和茎土表面以上1cm处都要灭菌处理,将根茎切成片状;为了更好地分析细菌的位置,灭菌后茎表皮撕下,茎内部按照之前的方法灭菌;表皮组织和根最后一次淋洗液中的细胞都用来提取D N A;植物不同组织的内生菌群落DNA提取通过直接研磨植物组织,步骤为溶解、提取和纯化步骤方案一,或者在DNA提取前从片状植物组织中淋洗出细胞方案二;东南景天表面灭菌方法：整株植物用自来水冲洗30min,用蒸馏水洗3次,每次3min;用吸水纸吸去植物表面水分,用无菌剪刀在根基部将根系剪下,与植物地上部分开;将根系用70%酒精浸泡2min,无菌水洗3次,3%NaClO浸泡2次,每次1min,然后用无菌水冲洗3次,每次2min,最后一次清洗液涂LB平板;1.将2g左右消毒后植物组织于无菌研钵中,加5mL磷酸钠缓冲液19.9gNa2HPO4·H2O,1.27gNaH2PO4·2H2O,H2O定容到1L研磨至匀浆;2.将植物匀浆转移至50mL无菌离心管中,摇床200rpm振荡1-2h,使细菌细胞尽可能的从植物组织中释放出来;3.取4mL悬液于新的无菌离心管中,12000×g离心10min收集菌体细胞;4.弃上清,将收集的菌体细胞重新溶于550μL1×TEbuffer Tris-EDTA；pH8中加入10mgmL-1溶菌酶10μL,37℃水浴1-4h;5.加入50μL20%SDS和8μL20mgmL-1蛋白酶K,混匀,65℃水浴3h,期间轻轻上下颠倒混匀数次;6.加入200μL5MNaCl,涡旋振荡15s,12000×g离心10min;7．取上清液,并向上清液中加入等体积的氯仿-异戊醇24:1,彻底混匀,12000×g离心10min;8.上清液转移至新的无菌离心管中,重复步骤7一次;9.上清液转移至新的无菌离心管中,加入0.6倍体积0.6vol的冰冷的异丙醇,4℃放置1h;10.4℃,12000×g离心10min,弃上清;11.沉淀用70%冰乙醇清洗,离心,弃上清;12.DNA沉淀室温风干后,用无菌超纯水溶解;13.DNA纯化采用TIANquickMidiPurificationKit;微生物16SrRNA基因V5-V6-V7区域扩增引物：799F2：GATGGCCATTACGGCCNNNNNN1193R：ACGCATCCCCACCTTCCTC用含10%SDS提取缓冲液NaP缓冲液重新悬浮细胞团块;用直径0.11mm的玻璃珠珠打操作50s,以溶解细胞;用苯酚-Tris pH8溶液和氯仿/异戊醇提取,用0.6vol的异丙醇和0.5mol/LNaCl通过沉淀再次获得DNA;用70%的乙醇洗涤细胞团块,真空干燥,再溶解在50μl的超纯水中;原始DNA提取物用Glassmilkpurificationkit Bio101,LaJolla,CA进一步纯化;所需试剂：Na2HPO4·H2O,NaH2PO4·2H2O,10%SDS十二烷基硫酸钠,Tris饱和酚,氯仿/异戊醇体积比24:1混合,异丙醇,0.5mol/LNaCl,70%乙醇;苯酚、氯仿、异戊醇在DNA提取时的作用抽提DNA去除蛋白质时,怎样使用酚与氯仿较好酚与氯仿是非极性分子,水是极性分子,当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时,蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去,使蛋白失去水合状态而变性;经过离心,变性蛋白质的密度比水的密度为大,因而与水相分离,沉淀在水相下面,从而与溶解在水相中的DNA分开;而酚与氯仿有机溶剂比重更大,保留在最下层;作为表面变性的酚与氯仿,在去除蛋白质的作用中,各有利弊,酚的变性作用大,但酚与水相有一定程度的互溶,大约10％～15％的水溶解在酚相中,因而损失了这部分水相中的DNA,而氯仿的变性作用不如酚效果好,但氯仿与水不相混溶,不会带走DNA;所以在抽提过程中,混合使用酚与氯仿效果最好;经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚,由于酚与氯仿是互溶的,可用氯仿第二次变性蛋白质,此时一起将酚带走;也可以在第二次抽提时,将酚与氯仿混合1:1使用;为什么用酚与氯仿抽提DNA时,还要加少量的异戊酵在抽提DNA时,为了混合均匀,必须剧烈振荡容器数次,这时在混合液内易产生气泡,气泡会阻止相互间的充分作用;加入异戊醇能降低分子表面张力,所以能减少抽提过程中的泡沫产生;一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比;也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24:1不必先配制,可在临用前把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成,同时异戊醇有助于分相,使离心后的上层水相,中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定Tris平衡苯酚的配制方法1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重便可用于分子生物学实验;但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用;同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等;因此,苯酚的质量对DNA、RNA 的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验;2.操作注意：苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等;所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇;3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下：①液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态;从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃中使苯酚充分溶解;②加入羟基喹啉8-Quinolinol至终浓度0.1％;该化合物是一种还原剂、RNA 酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色;有助于方便识别有机相;③加入等体积的1M -HClpH8.0,使用磁力搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相;④重复操作步骤③;⑤加入等体积的0.1M -HClpH8.0,使用磁力搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相;⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相;⑦使用pH确认有机相的pH值大于7.8;⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存唐琳的引物：F357GC5’-CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGCCTACGGGAGGCAGC AG-3’R5185’-ATTACCGCGGCTGCTGG-3’。
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植物组织培养、DNA技术及植物有效成分的提取
结束
2．判断有关 DNA 粗提取与鉴定叙述的正误 (1)进行 DNA 粗提取和鉴定实验时，加入洗涤剂后用力进行 快速、充分的研磨 (×)
(2)洗涤剂能瓦解细胞膜并增加 DNA 在 NaCl 溶液中的溶解 度 (× )
(3)在 DNA 的粗提取与鉴定实验中， 将丝状物溶解在 2 mol/L NaCl 溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色 (× )
2．实验流程
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第三讲
植物组织培养、DNA技术及植物有效成分的提取
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知识点三
植物有效成分的提取
实验流程 鲜玫瑰花＋清水―→ 水蒸气蒸馏 ―→油水 加入NaCl 加入无水 玫瑰精油 水 蒸 气 蒸 混 合 物 ――――→ 分离油层 ――――→ Na2SO4 的提取 馏法 过滤 除水 ――――→玫瑰油 _____ 橘皮精油 的提取 胡萝卜素 的提取
①过滤血细胞破裂液，得到含细胞核物质的滤液； 用纱布 ②滤取0.14 mol/L的NaCl溶液中析出的DNA(黏稠物)； 过滤3次 ③过滤溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液
①加2 mol/L的NaCl溶液，溶解提取的细胞核物质； 用NaCl ②用0.14 mol/L的NaCl溶液使DNA析出； 溶液4次 ③用2 mol/L的NaCl溶液，溶解滤取的DNA黏稠物； ④用2 mol/L的NaCl溶液，溶解丝状物用于鉴定DNA
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考点一|植物组织培养和花药离体培养
[自主排查]
1．连线生 长素和细胞分 裂素在使用顺 序及用量的比 例不同时对实 验结果的影响
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植物组织培养、DNA技术及植物有效成分的提取
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[关键点拨] 归纳拓展——植物组织培养与月季花药培养的区别
比较项目 光照条件 外植体 生殖方式
植物组织培养
花药离体培养
有的需每日用日 开始不需要光照，幼小植株
光灯照射12 h 体细胞 无性生殖 形成后需要光照 生殖细胞(花粉粒) 有性生殖 高度不育的单倍体，秋水仙 素处理后可育
第三讲
植物组织培养、DNA技术及植物有效成分的提取
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1．判断下列有关植物组织培养技术叙述的正误 (1)胚状体是外植体在培养基上脱分化形成的一团愈伤组织 (×) (2015· 江苏卷 T20A) (2)外植体消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒 剂对细胞的伤害 ( √) (2013· 重庆卷 T5A) (3)愈伤组织是一团有特定结构和功能的薄壁细胞 ( ×)
(1)图中①和②分别表示辣椒组织培养中细胞的________和 ________过程。
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(2)图中培养外植体的培养基中常用的凝固剂是 _____。培养基 中的生长素和细胞分裂素用量的比值________(填 “高” 或 “低” ) 时，有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方 法是____________________。 (3)图中外植体的消毒所需酒精的体积分数是________。 用酶解 法将愈伤组织分离成单细胞时，常用的酶是__________和纤维 素酶。 (4)提取辣椒素过程中， 萃取加热时需安装冷凝回流装置， 其目的是____________________。
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2．补充菊花组织培养的实验操作过程
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3．完善被子植物花粉发育的过程图解
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(4)提取 DNA 时，如果没有鸡血材料，可用猪血代替 (×)
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3．判断有关植物有效成分提取叙述的正误 (1)蒸馏法的实验原理是利用水将芳香油溶解下来， 再把水蒸发 掉，剩余的就是芳香油 (× )
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提示：①是使鸡血细胞吸水涨破释放出核物质；②是析出 DNA， 去除溶于酒精的杂质； ③是使 DNA 溶解在 2 mol/L NaCl 溶液中；④是稀释 NaCl 溶液使其浓度接近 0.14 mol· L－1，去 除溶于低浓度 NaCl 溶液的杂质，析出 DNA。
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[演练冲关] 1．(2015· 广东高考)关于 DNA 的实验，叙述正确的是 A．用兔的成熟红细胞可提取 DNA B．PCR 的每个循环一般依次经过变性—延伸—复性三步 C．DNA 溶液与二苯胺试剂混合，沸水浴后生成蓝色产物 D．用甲基绿对人的口腔上皮细胞染色，细胞核呈绿色，细 胞质呈红色
A．①②表示脱分化而③表示再分化 B．③需要避光处理而①需要光照处理 C．①②③说明月季花粉细胞具有全能性 D．②过程仍在原培养基中进行，以促进其分化
解析
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2．(2012· 山东高考)辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保 健、医药工业等在花开的初期采取， 因为此阶段的 花含玫瑰精油最高 (3)油水混合物中加入无水硫酸钠，有利于分离油层 (4)乙醇和丙酮能够用于胡萝卜素的萃取 (5)萃取的效率主要取决于萃取时的温度和时间 (×) (×) (× ) (×)
(6)新鲜的胡萝卜含水量高， 干燥时可采用高温以节省时间( × )
解析
(
)
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2．(2014· 江苏高考)下列关于“DNA 的粗提取与鉴定”实验叙述， 错误的是 A．酵母和菜花均可作为提取 DNA 的材料 B．DNA 既溶于 2 mol/L NaCl 溶液也溶于蒸馏水 C．向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻棒上有白色絮状物 D．DNA 溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝
培养结果 正常的可育植株
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[演练冲关] 1．下图是月季花药中未成熟花粉在适宜培养基上形成完整植株的过 程。下列叙述正确的是 ( )
① ② ③ 花药中未成熟的花粉 ―→ 愈伤组织 ―→ 丛芽 ―→ 完整植株
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[关键点拨]
归纳拓展——DNA 的粗提取与鉴定中的“2、3、4”
加蒸馏 水 2次 ①加到鸡血细胞液中，使血细胞吸收水破裂； ②加到含DNA的2 mol/L的NaCl溶液中，使NaCl溶液的物质 的量浓度下降到0.14 mol/L，使DNA析出
(8)单倍体植株的形成有两种途径，两种途径主要取决于培养基中 植物激素的种类及其浓度配比 (√ )
(9)在剥离花药时，不要损伤花药，否则接种后不能脱分化形成愈 伤组织 (10)月季花药培养时得到的都是单倍体植株
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(× ) ( ×)
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[关键点拨] 归纳拓展——三种提取方法的比较
提取 方法
蒸馏法
压榨法 适用于柑橘柠 檬等易焦糊原 料的提取 生产成本低易 保持原料原有 的结构和功能
萃取法
适用于提取玫瑰 适用 油、薄荷油等挥 范围 发性强的芳香油 简单易行，便于 优点 分离
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2．完善 DNA 粗提取与鉴定的操作过程图
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第三讲
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3．据 DNA 粗提取和鉴定的相关操作回答问题 下图为“DNA 粗提取和鉴定”实验的相关操作， 请仔细 观察并分析①～④操作的目的分别是什么？
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3．月季的花药培养
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知识点二
DNA 的粗提取与鉴定
1．实验原理
提取成分 提取方法
压榨法 _______
石 灰 水 浸 泡 ―→ 漂洗 ―→ 压 榨 ―→