植物基因组DNA提取试剂盒(北京天根)培训资料
《植物DNA的提取》课件
CTAB法
优点: 适用于多种植物样品，提取的DNA纯度高。 缺点: 步骤繁琐，耗时较长。
琼脂糖法
优点: 简单快捷，适用于大批量样品。缺点: DNA 纯度较低，可能受到琼脂糖的干扰。
质量检测与保存方法
质量检测方法
通过电泳、比色法等进行DNA纯度和浓度的检测。
DNA保存方法
选择合适的冷冻保存方式，如-20°C或液氮保存， 以保证DNA的稳定性。
提取步骤
样品采集和预处理
选择适当的植物组织进行采集，并进行适当 的处理以保证DNA的完整性和纯度。
DNA裂解
利用酶或高温等方法，将DNA分解成更小的 片段。
细胞破碎
通过机械或化学手段破坏细胞壁，释放细胞 内的DNA。
DNA纯化
通过柱子层析、溶液沉淀等方法，去除杂质， 提取纯净的DNA。
Байду номын сангаас
提取方法的优缺点
应用前景
种质资源保护与利用
通过植物DNA的提取和分析，能够帮助我们更好地保护和利用植物的遗传资源。
基因组研究
植物DNA的提取是进行基因组研究的前提，有助于揭示植物的基因组结构和功能。
总结
DNA提取的意义和重要性
植物DNA的提取是深入研究植物遗传特性和进化历程的重要途径。
提取方法的优缺点
不同的提取方法各有优劣，选择合适的方法可以提高DNA提取效果。
应用前景和发展趋势
植物DNA的提取在农业、生物学等领域有着广阔的应用前景，并随着研究的深入不断发展。
参考文献
1. 张三, 李四. 植物DNA提取方法的优化与比较[J]. 生物工程学报, 2020, 36(4): 503-510.
2. Wang J, et al. Optimized DNA extraction methodology for PCR analysis of medicinal plant species[J]. Plant Molecular Biology Reporter, 2019, 37: 361-369.
实验一植物基因组DNA提取
DNA的紫外分光光度计检测
原理：核酸在260nm处有最大吸收峰 蛋白质在280nm处有最大吸收峰 盐和小分子在230nm处有最大吸收峰
OD260/OD280>1.7 OD260/OD230>2.0 1OD260=50 μg/mL DNA
思考题:
1. 如何检测和保证DNA的质量？ 2. 基因组提取过程中注意事项有哪些？
植物基因组DNA的提取
பைடு நூலகம் 一、实验目的： 1. 了解真核生物基因组DNA提取的一般 原理。 2. 掌握DNA提取的方法和步骤。
二、一般原理
提取DNA的一般原理，是将分散好 的真核生物组织细胞在含SDS和蛋白酶K 的溶液中消化分解蛋白质，再用酚：氯仿： 异戊醇抽提的方法去除蛋白质，得到的 DNA经乙醇沉淀方法进一步纯化。
三、材料
玉米叶片
四、设备
移液器，冷冻高速离心机，台式高速离 心机，水浴锅，陶瓷研钵，1.5 mL 离心管。
五、试剂
1. 提取缓冲液： 100mmol/L Tris·Cl，20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5% SDS。
2. 氯仿：异戊醇：乙醇（80：4：16）。 3. TE缓冲液：10mmol/L Tris·Cl（pH8.0），
7.室温下12000rpm离心5 min。
8.吸取600ul上清液加入等体积的异丙醇，上下颠倒充 分混匀，观察絮状沉淀，后12000rpm离心5min。
9.倒去上清后用70%的乙醇清洗两次，每次在 12000rpm下离心1min。空气中干燥，后加入30ul 的TE（或ddH2O）缓冲液，充分溶解。
10.DNA用于后续实验研究或放于-20 ℃保存备用。
1mmol/L EDTA（pH8.0）。 4. 其他试剂：液氮，异丙醇，无水乙醇，70%乙醇，
TAKARA植物DNA提取试剂盒说明书
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 2 M
1.0 kbp 0.5 kbp
2.0 kbp
PCR 反应液 4 μl，1％ Agarose 电泳，M：Wide-Range DNA Ladder（50～10,000 bp） 图 3 以提取的基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增的电泳图
图 1 从植物组织中提取的基因组 DNA 电泳图 -2-
表 1 从植物组织中提取的基因组 DNA 纯度*
样品名称
样品量
Sample No.
A260/A280
A260/A230
20 mg
1
拟南芥幼芽
2
3
50 mg
4
2.2
1.4
2.2
1.4
2.1
1.7
2.1
1.7
20 mg
5
6
西红柿幼芽
7
50 mg
8
图 5 以提取的基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增的电泳图
注：长时间存放可能会有夹杂物沉淀，尽量迅速进入 下一步操作。
12. 12,000 rpm 4℃离心 10 分钟。 13. 弃上清，注意不要吸取沉淀。
注：沉淀有时肉眼看不见。
14. 加入 1 ml 70％乙醇，清洗沉淀。 15. 12,000 rpm 4℃离心 3 分钟。 16. 弃上清，注意不要吸取沉淀。 17. 沉淀干燥，加入适量 TE Buffer（约 20 μl）溶解沉
2. 取出冻结的植物组织于室温放置 5 分钟左右，使其融解。 3. 轻微离心，将植物组织收集在 Microtube 底部。 4. 使用 Pipet Tip 尖端将植物组织按压 Microtube 底部 10 次左右，进行物理破碎。 5. 加入 400 μl 的 Extraction Solution 1，剧烈振荡 5 秒钟。如果植物组织仍滞留于 Microtube 底部，
植物基因组DNA的提取与检测
生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日题目：植物基因组DNA的提取与检测一．实验目的:1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。
二．实验原理1.液氮研磨：液氮能迅速将植物组织温度降到零度以下，使组织细胞变得脆而易碎，此时对植物组织进行研磨，能大大提高研磨的效率，植物组织迅速变为粉末状，增大表面积，提高提取植物DNA的效率。
2.SDS等离子型表面活性剂处理：SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来，且使DNA保持溶解溶液状态，易于分离3.苯酚和氯仿处理：苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；4.异丙醇处理：上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，离心后DNA沉淀于离心管底部，便于移去提取液。
而后将沉淀DNA溶于TE缓冲液中，即得植物基因组DNA溶液；5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。
DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。
DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。
因此，要有效地分离不同大小的DNA片生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。
三．实验材料及设备1.实验材料：新鲜的植物幼嫩叶片2.实验仪器：（1）研磨皿，10、100、1000μL取液器各一支，台式高速离心机，漩涡器；（2）电泳仪，电泳槽，样品槽模板（梳子），有机玻璃内槽，水平仪，取液器，微波炉，凝胶成像系统。
3.实验试剂：（1）植物DNA提取a.细胞提取液：100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl, 1.25% SDS，1%β-巯基乙醇（去除酚类）；b.氯仿:异戊醇（24:1）；c.其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液；作用：氯仿可使蛋白质变性，有助于液相与有机相的分离。
植物DNA质粒DNA的提取以及载体构建ppt课件
1、质粒不是细菌生长所必需的遗传物质，可自行丢失或 人工处理而消除；
2、携带的遗传信息能赋予宿主菌某些生物学性状，有利 于细菌在特定的环境下生存；
3、能独立于染色体之外进行复制和遗传； 4、常包含编码对宿主有利的酶的基因；
篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
6、将上清转移至干净的新离心管中，加入2/3体积的异丙醇或 2倍体积的无水乙醇，混匀，静置沉淀30min，10000r离心 10min；
7、将上清倒掉，倒置离心管使残液流尽，加入500µ75%酒精， 将沉淀摇起来放置5—10min，离心，倒掉酒精，重复一次；
8、倒置离心管使残液流尽，离心，用枪头将残液吸干，吹干， 溶于TE(10mM Tris-HCl;1mM EDTA PH=8.0)；
• DNA的紫外检测通常使用荧光染料溴化乙锭，该物质含
有一个可以嵌入DNA的堆积碱基之间的平面基团，这个 基团的固定位置及其与碱基的密切接近，导致染料与 DNA结合并呈现荧光。
• 根据Marker的量及其荧光的强弱，可大致对检测的DNA
样品进行定量。
• 使用此法还有一个突出优点，即它可令操作者直观地获
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一、植物DNA的提取
1、目的和意义 2、原理 3、试剂的准备 4、操作过程 5、DNA检测 6、注意事项 7、常见问题及解决办法
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植物基因组DNA的提取
10、紫外检测仪。
五、实验操作方法和步骤 （一） 植物基因组DNA的提取
称取植物幼嫩叶子0.5g 65℃水浴保温1hr， 其间经常轻柔摇动 离心5,000g×5min 置于预热到65℃的研体中， 加少许石英砂；加入预热到 65℃的核酸提取缓冲液3ml 迅速研成匀浆 转移到7ml带盖离心管中
在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题： （1）DNA的二级结构和双链易受多种因素（如强酸、强碱、加热、低盐浓度、 有机溶剂、酰胺类、尿素等）的影响引起双链解开，即“变性”，因此抽提时 避免使用变性的条件。 （2）抑制内外源DNase的活力。DNase就象一把刀，它能把大分子的DNA切成碎 片，所以要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：a、低温操作；b、 调节pH，使偏碱（pH8.0）；c、抽提液中加表面活性剂；d、加螯合剂（EDTA） 除去酶的铺助因子（Mg2+），使酶活性丧失。 （3）防止化学降解。如过酸或过碱以及其它化学因素，会使DNA降解，一般综 合考虑，取pH8.0左右为宜。 （4）防止物理因素降解。如温度太高或机械张力剪切等，DNA分子特别大，极 易被机械张力拉断，甚至在细管中稍急一些的流动也会使DNA断裂，所以在抽 提过程中要特别注意这一点，操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数，也 不要剧烈摇动。 （5）植物的次生代谢物（主要是胞质内的多酚类或色素类化合物）对核酸提 取有干扰作用。因此，一般尽可能选幼嫩的、代谢旺盛的新生组织作为提取 DNA的材料，这是因幼嫩的新生组织次生代谢物较少，DNA含量高，且易于破碎， 植物材料最好是新鲜的。
三、实验材料与试剂
1、实验材料 植物基因组DNA样品
2、实验试剂
⑴ ddH2O； ⑵ TE缓冲液（pH 8.0）。 四、实验器材与仪器 1、离心机、离心管（5ml）及离心管架； 2、微量移液器10ul、200ul、1000ul及枪头； 3、紫外分光光度计； 4、石英比色皿（0.5cm光径）或1cm光径的微量石英比色皿（50ul、100ul）。
植物基因组 DNA 提取试剂盒使用说明
植物基因组DNA提取试剂盒使用说明货号：D1500规格：50T/100T保存：室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。
试剂盒内容：50T100TRNase A1ml1ml×2β-巯基乙醇250ul500ul溶液A20ml40ml溶液B7ml14ml溶液C30ml60ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液10ml20ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品简介：本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取植物的基因组DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。
使用本试剂盒提取的植物基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤：使用前先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、植物组织预处理：取新鲜植物组织（不超过100mg）或干重组织（不超过20mg），于液氮中充分研磨至细粉状，让液氮自然挥发。
2、将研磨好的植物组织粉末迅速转移到预先装有400ul溶液A、20ul RNase A（10mg/ml）和5ulβ-巯基乙醇的离心管中，充分颠倒混匀，室温放置10min。
3、加入140ul溶液B，充分颠倒混匀，12000rpm离心10min，将上清转移至新离心管(约400-500ul)，注意不要吸入沉淀。
4、加入和上清相同体积的溶液C，充分颠倒混匀，再加入和溶液C相同体积的无水乙醇，此时若出现絮状物，将絮状物吹散后一起加入吸附柱中，12000rpm离心5min，弃废液，一次加不完可分两次加入。
注意：如果吸附柱膜呈绿色或离心时有堵塞现象，可向吸附柱中加入600ul无水乙醇，并适当延长离心时间。
实验二植物基因组DNA的提取ppt课件
5.
保存
10000 r/min 离心10分钟
注意事项
➢ 在整个实验过程中应严格执行无菌操作； ➢ 部分药品有毒，操作中应注意安全防护； ➢ 磨样时最好是加液氮，磨样速度要快，使材料处于低
温状态 。 ➢ 刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要
轻柔！ ➢ 抽提时不要有太力振动，操作也要仔细，尽量避免
实验二植物基因组DNA的提取
背景知识
植物细胞中有哪些细胞器中含有DNA？ 与动物细胞的差别？
背景知识
DNA的存在形式
背景知识
DNA的存在形式
背景知识
DNA的存在形式
核苷酸 双螺旋结构
+组蛋白 一级结构-核小体
二级机构-螺线管
三级结构-超螺旋管
四级机构-染色体
背景知识
DNA的存在形式
DNA的理化性质
实
验
离心机：3台/12管 水浴锅：65℃
仪 研钵：10个
器 移液枪（包括枪头）
实 新鲜菠菜叶片
验 材
十六烷基三甲基溴化铵(CTAB) 、三羟甲基氨基 甲烷(Tris)、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)、 氯化钠、Tris饱和酚、异丙醇、β-巯基乙醇、
料 无水乙醇、氯仿、异戊醇、液氮、聚乙烯吡咯
无水乙醇、氯仿、异戊醇、液氮、聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)
1ml酚-氯仿-异戊醇
5mol/l EDTA
8ml
1ml酚-氯仿-异戊醇
酚1m:氯l酚仿-氯:异仿戊-异醇戊=注2醇5:2意4:1：4此0ml方法会把少量RNA提取出来，故后面通称核酸的提取。
取20ml前面配制的氯仿-异戊醇+20mlTris饱和酚
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植物基因组D N A提取试剂盒(北京天根)
植物基因组DNA提取试剂盒
1 取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约30 mg，加入液氮充分研磨。
2 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μL 65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
3 加入700 μL氯仿，充分混匀，12,000 rpm（~13,400×g）离心5 min。
注：若提取富含多酚或淀粉的植物组织，可在第3步前，用酚：氯仿/1:1进行等体积抽提。
4 小心的将上一步所得水层上相转入一个新的离心管中，加入700 μL缓冲液GP2，充分混匀。
5 将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，弃掉废液。
（吸附柱容积为700μL左右，可分次加入离心。
）
6 向吸附柱CB3中加入500 μL缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7 向吸附柱CB3中加入600 μL漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8 重复操作步骤7。
9 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，倒掉废液。
将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂
洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中的乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，将溶液收集到离心管中。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μL，体积过小影响回收率。
洗脱液的PH值对于洗脱效率有很大影响。
若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置2 min，12,000 rpm （~13,400×g）离心2 min。