实验四、基因组DNA的提取和检测(阳成伟)
dna提取与鉴定实验报告
dna提取与鉴定实验报告《DNA提取与鉴定实验报告》DNA提取与鉴定是一项重要的实验技术，它在生物学、医学、犯罪学等领域都有着广泛的应用。
本实验报告将介绍DNA提取与鉴定的实验过程以及结果分析。
首先，我们需要准备实验所需的样本。
在本次实验中，我们选择了番茄作为实验样本。
番茄的细胞中含有丰富的DNA，是进行DNA提取的理想材料。
我们先将番茄样本切碎并加入提取液中，通过离心等步骤将DNA从细胞中分离出来。
经过提取过程，我们成功地获得了番茄DNA的提取物。
接下来，我们对提取得到的DNA进行鉴定。
通过PCR扩增和电泳分析，我们成功地对番茄DNA进行了鉴定。
PCR扩增是一种常用的DNA复制技术，它可以将DNA扩增成大量的复制物，从而方便后续的分析。
电泳分析则是通过电场作用将DNA分子按大小进行分离，从而得到DNA的特征条带。
通过PCR扩增和电泳分析，我们确认了提取得到的DNA样本的纯度和完整性。
最后，我们对实验结果进行了分析。
通过实验，我们成功地提取并鉴定了番茄DNA，证明了提取与鉴定实验的可行性。
这项实验为我们提供了一个重要的技术平台，可以在日后的研究中应用到DNA提取与鉴定的相关领域，为生物学、医学和犯罪学等领域的研究工作提供了重要的技术支持。
总的来说，DNA提取与鉴定实验是一项重要的实验技术，它在生物学、医学、犯罪学等领域都有着广泛的应用前景。
通过本次实验，我们对DNA提取与鉴定的实验过程有了更深入的了解，为今后的研究工作提供了重要的技术支持。
希望通过我们的努力，可以为相关领域的研究工作做出更大的贡献。
基因组DNA的提取及电泳鉴定
1) 破碎细胞； 2) 去除蛋白质，糖类等等生物大分子；由于 真核细胞基因组较大，在纯化出的ＤＮＡ的操 作中应注意动作轻柔，且在低温下进行，以最 大限度地减少机械和化学作用对ＤＮＡ的剪切， 从而获得相对完整的ＤＮＡ 3) 沉淀核酸
12
SDS裂解 蛋白酶K消化
酚氯仿抽提
琼脂糖电泳 PCR
乙醇沉淀
25
二、 常用试剂
上样液成份： 1．0.25%溴酚蓝或/和0.25%二甲苯青（样品指示剂） 2．40%蔗糖 或 30% 甘油（增加样品比重），利于加样。 电泳缓冲液： TAE 为例 T: Tris碱 A: 冰醋酸 E: EDTA 提供有一定缓冲能力的pH值(8.0), EDTA可抑制DNase 的作用。 致癌剂 溴化乙锭（EB）：染色剂 一种荧光染料，分子呈扁平型，可嵌入到DNA或RNA 的碱基之间。在紫外光激发下能发出红色的荧光。
24
取下硝酸纤维素膜
实验第四部分、 DNA质量检测 －－－琼脂糖电泳
一、 原理
DNA分子在 pH 8.0 的电泳环境中，带负电 荷，在一定强度电场力的作用下，从负极向正极 迁移。 电泳样品载体琼脂糖是一种线性多糖聚合物， 煮沸冷却后形成网格样结构，电泳中起分子筛作 用。通常情况下，分子量大的 DNA 电泳过程中由 于受到的阻力较大，泳动速率较慢，反之，分子 量较小的DNA片段跑在前面。
55抬起加样器抬起加样器估计体积是否正确估计体积是否正确将外壁液体用容器口引流回去将外壁液体用容器口引流回去6吸头内有液体时不能将加样器倒置或平放以防液体倒流损吸头内有液体时不能将加样器倒置或平放以防液体倒流损贴容器内壁将液体贴容器内壁将液体匀速匀速打出加样器推到打出加样器推到第二挡第二挡
分子生物学实验
注意事项：
DNA提取与测序实验报告
DNA提取与测序实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取 DNA 的基本原理和方法。
2、熟悉 DNA 测序的操作流程和数据分析。
二、实验原理DNA 提取原理DNA 在细胞中以与蛋白质结合的形式存在。
提取 DNA 的基本原理是利用化学试剂和物理方法，破坏细胞膜和核膜，使蛋白质变性，从而将 DNA 从细胞中释放出来，然后通过离心等方法将 DNA 与其他杂质分离。
DNA 测序原理DNA 测序是指测定 DNA 分子中核苷酸的排列顺序。
目前常用的测序方法是 Sanger 双脱氧链终止法。
在测序反应中，DNA 聚合酶在模板的引导下，将脱氧核苷酸（dNTP）逐个加到引物的3’OH 末端，合成新的 DNA 链。
当加入双脱氧核苷酸（ddNTP）时，由于其3’位置没有羟基，不能继续延伸，导致 DNA 链合成终止。
通过在不同的反应管中分别加入不同的 ddNTP，产生一系列长度不同的 DNA 片段。
这些片段经过电泳分离和检测，根据片段的长度和末端碱基，就可以确定 DNA 的序列。
三、实验材料与设备实验材料1、新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）或植物组织（如叶片、幼嫩茎尖等）。
2、蛋白酶 K、RNase A、TrisHCl、EDTA、NaCl、SDS、酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇、70%乙醇等。
实验设备1、高速冷冻离心机2、移液器3、恒温水浴锅4、电泳仪5、凝胶成像系统6、 DNA 测序仪四、实验步骤DNA 提取1、样品处理取适量的新鲜动物或植物组织，放入液氮中迅速冷冻，然后用研钵研磨成粉末。
将粉末转移至离心管中，加入适量的裂解缓冲液（含蛋白酶 K），在 55℃水浴中孵育 1-3 小时，直至组织完全裂解。
2、去除蛋白质和 RNA加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25:24:1），轻轻颠倒离心管混合均匀，然后在高速冷冻离心机中以 12000 rpm 离心 10 分钟。
吸取上清液至新的离心管中，加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1），再次颠倒混合均匀，以 12000 rpm 离心 10 分钟。
dna提取及测定实验报告
dna提取及测定实验报告DNA 提取及测定实验报告一、实验目的本次实验的主要目的是掌握从生物样本中提取 DNA 的方法，并对提取的 DNA 进行浓度和纯度的测定，以了解样本中 DNA 的质量和数量。
二、实验原理DNA 是遗传信息的携带者，存在于细胞核和线粒体等细胞器中。
在提取 DNA 的过程中，需要破碎细胞，使 DNA 释放出来，然后通过一系列的化学和物理方法去除蛋白质、RNA 等杂质，从而获得纯净的DNA 。
DNA 在 260nm 处有特征性的吸收峰，其吸收值与 DNA 的浓度成正比。
同时，通过测定 260nm 和 280nm 处的吸光度比值（A260/A280），可以评估 DNA 的纯度。
纯 DNA 的 A260/A280 比值约为 18。
三、实验材料和仪器1、实验材料新鲜的动物肝脏组织裂解液（包含 TrisHCl、EDTA、NaCl 等）蛋白酶 K无水乙醇氯仿：异戊醇（24:1）RNA 酶TE 缓冲液（TrisHCl、EDTA）2、实验仪器高速冷冻离心机移液器恒温水浴锅紫外分光光度计微量移液器离心管玻璃棒四、实验步骤1、样本处理称取约 05g 新鲜的动物肝脏组织，用剪刀剪碎后放入匀浆器中，加入适量的裂解液，充分匀浆。
2、消化蛋白质将匀浆液转移至离心管中，加入蛋白酶 K 至终浓度为100μg/ml，在 55℃水浴锅中孵育 1-2 小时，期间不时轻轻搅拌，以充分消化蛋白质。
3、去除蛋白质和 RNA加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），轻轻颠倒离心管充分混匀，然后在 4℃下以 12000rpm 离心 15 分钟。
吸取上清液至新的离心管中，加入 2 倍体积的无水乙醇，轻轻颠倒离心管，可见白色的 DNA 沉淀出现。
4、洗涤 DNA将沉淀用 70%的乙醇洗涤 2 次，每次在 4℃下以 12000rpm 离心 5 分钟，去除上清液。
5、溶解 DNA待乙醇挥发干净后，加入适量的 TE 缓冲液溶解 DNA ，置于 4℃冰箱保存备用。
植物基因组DNA的提取与检测
生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日题目：植物基因组DNA的提取与检测一．实验目的:1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理；2.掌握基因组DNA提取的方法和步骤。
二．实验原理1.液氮研磨：液氮能迅速将植物组织温度降到零度以下，使组织细胞变得脆而易碎，此时对植物组织进行研磨，能大大提高研磨的效率，植物组织迅速变为粉末状，增大表面积，提高提取植物DNA的效率。
2.SDS等离子型表面活性剂处理：SDS等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使DNA游离出来，且使DNA保持溶解溶液状态，易于分离3.苯酚和氯仿处理：苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；4.异丙醇处理：上清液中加入异丙醇使DNA沉淀，离心后DNA沉淀于离心管底部，便于移去提取液。
而后将沉淀DNA溶于TE缓冲液中，即得植物基因组DNA溶液；5.DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。
DNA的琼脂糖凝胶电泳可以分离长度为200bp至近50kb的DNA分子。
DNA的迁移率（U）的对数与凝胶浓度（T）之间存在反平行线性关系。
因此，要有效地分离不同大小的DNA片生命科学学院专业生物技术 2016级生技班666组姓名余梓棋同实验者黄剑宇黄少凯 2018年 5 月 8日段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是非常重要的。
三．实验材料及设备1.实验材料：新鲜的植物幼嫩叶片2.实验仪器：（1）研磨皿，10、100、1000μL取液器各一支，台式高速离心机，漩涡器；（2）电泳仪，电泳槽，样品槽模板（梳子），有机玻璃内槽，水平仪，取液器，微波炉，凝胶成像系统。
3.实验试剂：（1）植物DNA提取a.细胞提取液：100mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 5mmol/L EDTA,500mmol/L NaCl, 1.25% SDS，1%β-巯基乙醇（去除酚类）；b.氯仿:异戊醇（24:1）；c.其它试剂：液氮、无水乙醇、 TE缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液；作用：氯仿可使蛋白质变性，有助于液相与有机相的分离。
DNA提取与测序实验报告
DNA提取与测序实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取 DNA 的基本原理和方法。
2、熟悉 DNA 测序的基本流程和操作要点。
3、学会对 DNA 提取和测序结果进行分析和评估。
二、实验原理DNA 提取原理DNA 在细胞中以与蛋白质结合的状态存在。
提取 DNA 的基本思路是通过裂解细胞，使细胞膜和核膜破裂，释放出 DNA，然后去除蛋白质、RNA 等杂质，得到纯净的 DNA。
常用的裂解方法包括物理方法（如研磨、超声破碎）、化学方法（如使用去污剂）和酶解法（如使用蛋白酶K）。
去除杂质的方法则包括使用酚/氯仿抽提、乙醇沉淀等。
DNA 测序原理目前常用的 DNA 测序技术是 Sanger 测序法。
其基本原理是在DNA 合成过程中，通过掺入特定的双脱氧核苷酸（ddNTP）来终止DNA 链的延伸。
由于 ddNTP 缺少3’OH 基团，一旦掺入到 DNA 链中，链的延伸就会终止。
通过在多个反应中分别加入不同的 ddNTP，可以得到一系列不同长度的 DNA 片段。
这些片段经过电泳分离，根据条带的位置可以读取 DNA 的碱基序列。
三、实验材料与设备实验材料1、新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）或植物组织（如叶片）。
2、细胞培养物（如细菌、酵母）。
实验试剂1、细胞裂解液（包含去污剂、蛋白酶 K 等）。
2、酚/氯仿/异戊醇混合液（25:24:1）。
3、无水乙醇、70%乙醇。
4、 TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）。
5、 DNA 测序试剂盒（包含引物、dNTP、ddNTP、DNA 聚合酶等）。
实验设备1、离心机。
2、移液器。
3、恒温水浴锅。
4、电泳仪。
5、凝胶成像系统。
6、 DNA 测序仪。
四、实验步骤DNA 提取步骤1、样本处理对于动物组织，将其剪碎后加入适量的裂解液，在匀浆器中匀浆。
对于植物组织，先在液氮中研磨成粉末，然后加入裂解液。
对于细胞培养物，离心收集细胞，加入裂解液重悬。
提取和分析DNA实验报告
提取和分析DNA实验报告DNA提取是生物学实验中的重要步骤，有助于从各种生物组织中分离出DNA并进行后续分析。
本实验旨在提取DNA样本，并通过凝胶电泳等方法对提取得到的DNA进行分析，以验证提取的DNA质量和纯度。
1. 实验材料与仪器实验所需材料包括DNA提取试剂盒、离心管、显微管、琼脂糖凝胶、电泳槽等。
实验仪器包括显微镜、电泳仪等。
2. 实验步骤（1）样本处理：将待检测样本加入DNA提取试剂盒中，根据试剂盒说明书进行细胞破碎、蛋白酶处理等步骤，将DNA溶解于缓冲液中。
（2）DNA沉淀与收集：通过离心加速DNA沉淀的过程，最终在离心管底部形成DNA沉淀。
（3）洗涤与溶解：分离DNA沉淀后，进行多次洗涤，并最终将DNA溶解于适量缓冲液中。
（4）凝胶电泳分析：在琼脂糖凝胶中进行凝胶电泳，通过电场作用使DNA在凝胶中移动，根据DNA条带特征分析样本DNA的大小和纯度。
3. 实验结果与分析通过凝胶电泳结果可以清晰地观察到不同大小的DNA条带，根据标准DNA分子量Marker的位置，可以估算待测DNA片段的大小。
如果实验操作正确，提取得到的DNA应具有良好的纯度和完整性，且无附加杂质。
若实验存在操作失误或污染等问题，则可能导致DNA提取不完整或DNA受损，影响到后续结果的准确性。
4. 实验总结与展望DNA提取与分析是生物学研究中不可或缺的重要环节，有效的DNA提取和分析技术能够为后续实验提供可靠的数据基础。
在今后的实验中，我们将进一步完善实验操作技巧，提高DNA提取的效率和准确性，以应对更复杂的研究需求。
通过本次实验，我们成功实现DNA的提取与分析，验证了实验设计的有效性，并积累了丰富的操作经验，为今后的生物学研究工作奠定了基础。
DNA提取实验的重要性在于为科研和临床诊断提供了坚实的理论支持和实验数据，为生命科学领域的发展和进步发挥着重要作用。
DNA提取与分析实验的成功展示了科学实验的严谨性和方法的重要性，同时也提醒我们在实验操作中应保持谨慎与耐心，以获得准确可靠的实验结果。
生化 实验四 植物DNA的提取和鉴定
实验四 植物DNA的提取与鉴定
实验原理
真核生物的DNA与组蛋白结合，以 DNA核蛋白的形式存在于细胞核内。
在提取DNA时，通过研磨破坏细胞壁 和细胞膜，释放出DNA核蛋白。
实验原理
在1.4 mol/L NaCl中，DNA核蛋白 的溶解度大，RNA核蛋白的溶解度 小。
在0.14 mol/L NaCl中，DNA核蛋白 溶解度小，RNA核蛋白溶解度大。
液氮：研磨 氯仿-异戊醇：蛋白质变性 异丙醇：沉淀DNA 70%乙醇：脱盐
TE缓冲液
10 mmol/L Tris-HCl （pH7.4） 维持弱碱性
1.0 mmol/L EDTA 抑制DNA酶活性
思考题
本实验中CTAB、EDTA、巯基乙醇 各有什么作用？ 吸取样品、抽提时应注意什么？为 什么？ 在提取DNA时，有哪些方法可以除 去蛋白质？
试剂
CTAB提取液
2.0% CTAB （十六烷基三甲基溴化 铵） 1.4 mol/L NaCl 20 mmol/L EDTA 100 mmol/L Tris-HCL（pH8.0） 0.2% 巯基乙醇
CTAB
CTAB是阳离子去污剂,能使蛋白质变 性，还能与核酸形成特异的核酸CTAB复合物。
核酸-CTAB复合物可溶于≥0.7 mol/L NaCl的高盐缓冲液。
③酶的作用：DNA酶降解DNA分子。
紫外光吸收法鉴定DNA纯度和浓度
核酸的紫外吸收260 nm,蛋白质280 nm DNA的A260/A280约1.8，RNA的约2.0 50 ug/mL DNA溶液，A260 = 1.0 40 ug/mL RNA溶液，A260 = 1.0
实验步骤
10 mL CTAB提取缓冲液加入50 mL 离心管 中，65℃水浴中预热。 50-60 g植物叶片，置于预冷的研钵中，倒入 液氮，充分研磨10 分钟。（全班共用） 每组取约2 g叶片粉末，加入预热的CTAB提 取缓冲液中，轻轻混匀，65℃保温30分钟。 加10 mL氯仿-异戊醇，振荡2-3分钟。 5000 rpm离心5分钟。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
7. 将DNA溶液置于37 ℃ 培养箱或水浴中30min（降解残留的 RNA） ；
大家好
9
上样2ul M 1 2 34 56
上样8ul M 1 2 34 56
注：1-6序号分别与表中对应。
大家好
10
核酸的贮存——DNA保存
大家好
11
无水乙醇沉淀 沉淀前往往加入NaCl等盐离子，作用是中和核酸分子表 面的负电荷，减少分子间的排斥力，有助于分子之间的聚 集。 无水乙醇可以吸收分子之间的水，使DNA沉淀析出，
• CTAB溶液中含有1.4mol/LNaCl，有助于溶解释放出 来的DNA （ DNA在2mol/LNaCl中DNA具有较高的溶 解度）；
• 加入无水乙醇，可以使DNA从溶液中沉淀出来。
大家好
5
实验步骤（常温操作，2人一组）
1. 取适量(300-500mg)植物组织，加入2ml CTAB抽提缓冲 液，充分匀浆2-3min，然后每人转移700ul的匀浆液至一 支1.5ml离心管中，65℃水浴45min（中间摇动2-3次）（ 裂解细胞，释放核酸和蛋白）；
实验四、基因组DNA的提取
准备：一次性手套、 65℃水浴锅、氯仿、无水乙 醇、1.5离心管、菜花
大家好
1
实验目的：
1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理。 2.了解基因组DNA的实验用途。 3. 掌握基因组DNA提取的方法和步骤。
大家好
2
• 材料：花椰菜/昆虫组织
• 设备：移液器，高速离心机，水浴锅，培养箱 。
大家好
12
基因P • 基因克隆Βιβλιοθήκη PCR）大家好13
下次课程
• 质粒DNA的提取及质量检测
大家好
14
结束
大家好
15
8. -20 ℃ 保存备用。
9. 取5~10ulDNA（加适量loading buffer）电泳检测；取 2ulDNA测定浓度和OD260/280（下次课电泳检测）。
大家好
7
基因组DNA的检验（纯度）
大家好
8
基因组DNA的检验（完整性）
凝胶电泳法： 基因组DNA电泳，在电场中泳动慢，如果发 生降解，可出现电泳图谱脱尾现象。
• 试剂：
1. CTAB组织消化液 2. 氯仿 3. 无水乙醇 4. TE缓冲液
大家好
3
CTAB溶液配制
• 2%CTAB溶液：100mmol/L Tris-HCl, pH7.0 ；1.4mol/L NaCl；20mmol/L EDTA； 2%CTAB.
大家好
4
实验原理（CTAB法）
• CTAB，十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污 剂，可使细胞破裂，释放出核酸；
4. 加入1/10体积的NaAc(3mol/L,pH5.2）（40ul），上下 颠倒3-4次混匀；然后再加入2倍体积的无水乙醇（ 0.9ml)，上下颠倒3-4次混匀（如DNA量大，此时可见絮 状DNA沉淀。（如果放置于大家-好20度过夜，DNA产率会更多 6
5. 12000rpm离心5min，缓缓倒掉上清液（剩余的液体可以用 移液器吸走），管底的沉淀即DNA（无色透明胶状物！） ；
2. 加入700ul的氯仿，上下摇动2-3min (此步是萃取组织液 中的蛋白质；务必带上手套！）；
3. 12000rpm离心10min，取400ul上清液转移至一支1.5ml 离心管中（由于此时悬液已经分层，而我们需要取最上 层的溶液，所以注意千万不要使枪头触碰到中间的杂质 层，当然，更不能取吸取下层的萃取液了）；