基因组DNA提取步骤
简述基因组dna提取的一般流程
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全血基因组DNA提取试剂盒使用说明
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明一、试剂盒组成及存储条件：1.试剂盒包括蛋白酶K、缓冲液、洗涤缓冲液、脱水溶液等。
2.试剂盒应存放在4℃以下避光干燥处，避免冻结。
二、实验前准备：1.准备所需的实验耗材和设备，如离心管、恒温振荡器、离心机等。
2.取出全血样品，可以是新鲜全血或已离心制备的全血细胞。
三、DNA提取步骤：1.取出全血样品，用洗涤液洗涤细胞沉淀并离心收集，去除红细胞。
2.加入蛋白酶K将细胞裂解，释放DNA。
3.加入缓冲液和脱水溶液，沉淀DNA并洗涤。
4.最终稀释DNA并保存在适当的条件下。
四、实验注意事项：1.操作过程中需注意无菌操作，避免污染。
2.加入蛋白酶K的量应准确控制，不要过多或过少。
3.混合溶液时需轻轻摇匀，避免气泡的产生。
4.稀释保存DNA时，需使用无核酸酶的载体溶液，如TE缓冲液。
五、质控及结果分析：1.可以通过琼脂糖凝胶电泳或比色法检测提取的DNA质量。
2.检测DNA浓度和纯度，确保提取的DNA适用于后续实验。
3.可以保存提取好的DNA样品，以备后续实验使用。
六、应用领域：1.该试剂盒适用于从全血样品中提取DNA，可用于基因分析、疾病诊断、遗传研究等领域。
2.可以用于个体基因检测、种群遗传学研究、药物反应性研究等。
总结：全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样品中提取DNA的重要工具，操作简便、提取效率高。
在实验中需注意操作规范，保证提取的DNA质量和纯度。
该试剂盒广泛应用于科研领域，为基因研究和临床诊断提供了有力支持。
希望上述使用说明能够帮助用户正确、高效地使用全血基因组DNA提取试剂盒。
植物基因组DNA的提取及分析
植物基因组DNA的提取及分析一、植物基因组DNA提取的步骤：1.样本的准备：从植物中选择健康和新鲜的组织样本，如叶片、茎、根等。
样本选择要避免含有大量的绒毛、叶色不正常等因素的部位。
2.细胞破碎：将样本放入液氮中迅速冷冻，然后用研钵和研钉对样本进行研磨，直至样本完全破碎。
3.细胞裂解：将研磨的样本加入裂解缓冲液，边振荡边研磨使样本均匀混合。
4.蛋白质去除：使用酚/氯仿提取法去除蛋白质。
加入等体积的酚/氯仿/异丙醇混合液，轻轻混合，然后离心离心管以分离上清和下层。
5.DNA沉淀：将上清转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇进行DNA沉淀。
静置一段时间后，离心离心管以沉淀DNA。
6.DNA洗涤：将DNA沉淀物用70%乙醇洗涤一至两次，去除残留的盐和其他杂质。
7.DNA溶解：用适量的稳定缓冲液溶解DNA，使其达到一定浓度并避免降解。
二、植物基因组DNA分析的方法：1.PCR扩增：PCR技术可以通过放大DNA片段来研究特定基因或DNA 序列。
首先选择适当的引物，然后将DNA样本与引物、核酸酶、dNTPs等反应液混合，进行多次循环的变温扩增反应。
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳：将PCR扩增的产物与DNA分子量标记物置于聚丙烯酰胺凝胶中，然后进行电泳。
电泳结束后，通过紫外线照射或染色剂染色，观察电泳图谱，可以得到DNA片段的大小和数量。
3.酶切电泳：使用限制性内切酶切割DNA片段，然后将切割后的DNA 片段进行电泳分析。
根据DNA片段的大小和相对迁移速度，可以进行DNA 的分析和比较。
4.南方杂交：将DNA样本与标记了放射性同位素或荧光染料的DNA探针进行杂交反应。
通过探针与目标DNA片段的互补配对，可以检测目标DNA的存在和数量。
5.DNA测序：通过测序技术获得DNA序列信息，可以揭示基因组的结构和功能。
通过以上方法，我们可以提取和分析植物基因组DNA，更好地了解植物基因组的组成和功能，为植物的遗传改良和研究提供重要的信息。
SRY基因检测-人类基因组DNA的提取操作步骤
SRY基因检测及在性别鉴定中的应用基因组DNA的提取原理细胞裂解液破坏细胞膜、核模，并变性蛋白，蛋白酶K将所有蛋白质降解，使DNA分子被释放出来。
分离出来的DNA分子经高盐沉淀蛋白质，最后可获得纯净的DNA。
人类基因组DNA的提取操作步骤：1.取1ml全血（2%EDTA,1/10体积抗凝）于5ml离心管中；2.加入3ml裂解液，充分混匀，0～4℃，30min;3.台式离心机离心，4000rpm（约3000g，下同），10min;4.弃上清，加2 ml裂解液，充分混匀，再次离心4000rpm，10min；5.弃上清，分别加入0.3ml核裂解液、20ul蛋白酶K溶液、15ul的20%SDS，混匀；6.37℃水浴过夜，或56℃水浴2h；7.加入6mol/l NaCl 0.1ml，剧烈震荡2min；8.离心4000rpm，10min；9.取上清液到一离心管中，再离心4000rpm，10min；10.取上清液，加入2倍体积预冷的无水乙醇（—20℃），缓慢混匀，可见DNA沉淀；11.将DNA沉淀靠管壁上，去除乙醇，70%乙醇洗涤二次；12.控干乙醇，沉淀用300ul TE缓冲液溶解。
SRY基因和PCR技术原理SRY基因是人类性别决定的最佳候选基因，定位于Y p11.3.PCR技术是一种体外核酸扩增系统，根据SRY的序列，合成特异引物，经PCR扩增仪的变性、退火和延伸三个步骤的多次循环，形成与模板链互补的新DNA链，产物长度300bp左右。
PCR技术操作步骤：1.在0.1ml Eppendorf 管中分别加入下列各成分（总体积20ul）：ddH2O 10ul10Xbuffer 2ul25mmol/lMgCl2 1.5ulSRY-F和SRY-R 各1uldNTP 2ul模板DNA2ul5U/ul Taq DNA聚合酶0.5ul混匀后稍加离心，使液体沉至管底，加入石蜡油封液面；2.开始循环：预变性94℃5min变性94℃ 1min退火 55℃ 1min延伸 72℃ 1min循环30次末次循环后，72℃再延伸7min；3.反应结束后，电泳鉴定。
全血基因组DNA提取步骤
全血基因组DNA提取步骤1、冷冻全血室温化开。
（如时间紧可37℃化开，反复冻融有利于细胞破裂释放核酸）。
2、取1mL全血，加400μl灭菌蒸馏水，轻缓颠倒混匀5min。
（破碎红细胞）3、10000rpm，10min，可见底部沉淀，倒掉液体。
4、加1mL水，弹起沉淀，颠倒混匀5min。
（破碎红细胞）5、10000rpm，10min，倒掉液体。
（视情况而定，可再洗一次）6、依次加入500μl STE，25μl 10%SDS，10μl 10μg/mL 蛋白酶K。
弹起，颠倒混匀。
7、50℃水浴过夜，可加摇床。
（蛋白酶K的最适温度为55℃，资料上为3h，考虑到过夜时间较长，故降低温度）8、从水浴锅中取出，待降至室温。
9、加500μl Tris饱和酚，颠倒混匀10min。
10、12000rpm，10min。
从离心机取出时注意不要摇动离心管。
仔细将上清移入另一离心管，注意不要吸到中间蛋白层。
11、上清液中加500μl Tris饱和酚，颠倒混匀10min。
12000rpm，10min，取上清。
12、上清液中加500μl 酚/氯仿/异戊醇（25:24:1），颠倒混匀10min。
12000rpm，10min，取上清。
13、上清液中加500μl 氯仿/异戊醇（24:1），颠倒混匀10min。
12000rpm，10min，取上清。
14、加1mL冰冻无水乙醇，轻轻颠倒，可见白色絮状沉淀，用枪头挑入另一离心管。
若只见白色浑浊液体（无絮状沉淀），可加20μl 醋酸铵，轻轻颠倒混匀，液体可变清亮。
8000rpm，5min。
倒去液体。
15、加1mL 70%冰冻乙醇洗涤沉淀，8000rpm，5min。
倒去液体。
16、将离心管倒扣在滤纸上，晾干（需1h以上）。
17、加100μl TE，弹起，置4℃过夜溶解。
次日0.8%琼脂糖凝胶电泳检测。
基因组DNA提取
基因组DNA的提取一、从哺乳动物组织提取基因组DNA实验材料：液氮、消化缓冲液、PBS（冰冷）、25:24:1酚/氯仿/异戊醇、7.5M乙酸铵、无水乙醇及70%乙醇、0.1%SDS、RNA酶、TE缓冲液（pH8.0）、离心管、研钵、冷冻离心机。
实验步骤：1.取新鲜或冰冻动物组织块，剪成小块。
置于液氮中冻结。
2.将500mg的组织用预冷的研钵和研杵研碎，或用小锤子将其捣为细粉末，每100mg组织用1.2 mL消化缓冲液悬浮。
3.将6ml样品在盖紧的离心管中于50℃摇荡下温育12～18 h。
4.用6ml酚/氯仿/异戊醇抽提样品，1700g离心10 min。
如果样品溶解得不好，再加6ml不含蛋白酶K的消化缓冲液，并重复离心。
如果在界面上有一层厚的白色物质，重复有机抽提，将上层(水溶液)转移至一个新管中。
5.加入6ml 7.5M乙酸铵和24ml 100%乙醇，1700g离心2 min。
6.用70%乙醇洗涤，晾干，沉淀用TE缓冲液重新溶解，使终浓度在约1mg/mL左右。
7.加入0.1%的SDS和1pg/mL无DNA酶的RNA酶，37℃温育1h,以除去残留的RNA.重复步骤 4～5。
二、从植物组织提取基因组DNA实验材料：液氮/干冰、2-巯基乙醇(2-ME)、 CTAB抽提液、CTAB/NaCl溶液、24:1(v/v)氯仿/异戊醇、CTAB沉淀液、高盐TE缓冲液、80%乙醇、TE缓冲液、抗有机溶剂的试管和烧杯、研钵和研杵、粉碎器/匀浆器、捣碎机、恒温金属浴、冷冻离心机。
实验步骤：1.取1g的鲜叶组织，在3.2ml CTAB抽提液中加入0.8ml 2-巯基乙醇，使终浓度达2%(v/v)。
将此溶液及1ml CTAB/NaCl溶液加热至65℃。
2.用液氮(-196℃)或干冰(一78℃)冷却粉碎器/匀浆器，将植物组织粉碎成为细粉，然后将冷冻的组织转移到一个抗有机溶剂的试管或烧杯中。
3.往粉碎的组织中加入预热的2-ME/CTAB,混合使之充分湿润，65℃温育10～60min,不时混匀：4.用4ml的24:1氯仿/异戊醇抽提匀浆液，颠倒使充分混合，于4℃, 7500g离心5 min(对于小样品，在离心机上以10000 r/min离心),回收上(水)相。
基因组dna提取流程
基因组DNA提取的流程
1. 样本选择：选择适合提取基因组DNA的样本类型，如细胞、组织或血液。
确保样本保存在合适的条件下，以保持DNA的完整性。
2. 细胞破碎：对于细胞样本，首先需要将细胞破碎以释放DNA。
可以使用物理方法，如机械剪切或超声波处理，或者使用化学方法，如洗涤溶解和细胞裂解酶处理。
3. DNA溶解：将细胞裂解提取物加入DNA溶解缓冲液中，以彻底溶解DNA。
4. 去除杂质：通过离心、过滤或沉淀等方法去除蛋白质、RNA 等杂质。
5. 纯化DNA：使用吸附剂、洗涤剂或沉淀剂等方法去除剩余的杂质，得到纯化的基因组DNA。
6. 检测与定量：通过电泳、荧光光谱等技术检测提取的DNA质量和浓度，确保提取的DNA满足后续实验的要求。
以上是基因组DNA提取的一般流程，具体操作可能会因实验条件、样本类型和目标DNA的不同而有所差异。
基因组dna的提取原理
基因组dna的提取原理基因组DNA的提取原理。
基因组DNA的提取是生物学实验中的一项重要步骤，它是从生物样本中分离出DNA分子的过程。
DNA提取的目的是为了进一步的分子生物学研究，如PCR扩增、测序、重组等实验。
下面将介绍基因组DNA提取的原理及步骤。
1. 样本的准备。
在进行基因组DNA提取之前，首先需要准备样本。
样本可以是细胞、组织或血液等。
对于细胞和组织样本，通常需要将其打碎以释放细胞内的DNA。
而对于血液样本，则需要进行红细胞溶解，以获得含有DNA的白细胞。
2. 细胞裂解。
细胞裂解是DNA提取的第一步，其目的是破坏细胞膜和核膜，释放细胞内的DNA。
通常可以使用裂解酶或裂解缓冲液来实现细胞裂解。
在裂解过程中，可以加入蛋白酶来降解蛋白质，以减少对DNA的污染。
3. 蛋白质沉淀。
裂解后的细胞溶液中可能含有大量的蛋白质和其他杂质，需要进行蛋白质沉淀。
通常可以加入盐和酒精来沉淀蛋白质，然后通过离心将沉淀的蛋白质去除，留下含有DNA的上清液。
4. DNA沉淀。
为了获得纯净的DNA，需要将其从上清液中沉淀出来。
可以通过加入乙醇或异丙醇来沉淀DNA，然后通过离心将沉淀的DNA收集起来。
5. DNA纯化。
最后一步是对沉淀得到的DNA进行纯化。
可以使用乙醚或异丙醇来去除残留的盐和其他杂质，然后用适当的缓冲液溶解DNA，得到纯净的基因组DNA。
通过以上步骤，就可以从生物样本中提取出纯净的基因组DNA。
这些DNA可以用于后续的分子生物学实验，如PCR扩增、基因测序、重组等。
基因组DNA的提取原理并不复杂，但需要严格控制实验条件，以确保提取得到的DNA质量和纯度。
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基因组DNA提取步骤
1.从无水乙醇中取出少许组织（约50mg）加入干净灭菌的EP管中，
剪碎；
2.加入400ul 1％的SDS，8ul（20mg/ml）的蛋白酶K，充分浸润，
入55℃摇床（100转/分），期间振荡助溶至澄清（5-6h）；
3.取出消化液，加入6mol/L的NaCl300ul，氯仿200ul，轻柔正反
颠倒，使其充分乳化，4℃13000转/分离心30min；
4.取出上清（约400ul），加入等体积氯仿抽提一次，轻柔颠倒后，
4℃13000转/分离心10min；
5.上清加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一
般无影响，可省略该步骤）。
6.取上清加入等体积异丙醇，轻柔混匀后-20℃沉淀10min；
7.4℃13000转/分离心15min，弃上清；
8.用75％乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心2min），弃上
清；
9.冰冻无水乙醇洗涤1-2次（1000ul，11000转/分离心4min）弃上
清，自然晾干或烘干，DDW溶解，30-50ul。
基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。
利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。
加入一定量的异丙醇或乙醇，
基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。
在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。
一般来说,构建基因组文库, 初始DNA长度必须在100kb以上,否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。
而进行RFLP和PCR分析, DNA长度可短至50kb, 在该长度以上,可保证酶切后产生RFLP片段(20kb以下),并可保证包含PCR所扩增的片段(一般2kb以下)。
不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。
在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。
尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。
本实验以水稻幼苗(禾本科)、李(苹果)叶子、动物肌肉组织和大肠杆菌培养物为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。
从植物组织提取基因组DNA
一、材料
水稻幼苗或其它禾本科植物，李（苹果）幼嫩叶子。
二、设备
移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和
1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。
三、试剂
1、提取缓冲液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl,
1.5% SDS。
2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇
4、RnaseA母液：配方见第一章。
5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。
四、操作步骤：
（一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取
1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ, 60℃水浴预热。
2. 水稻幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
4. 室温下5000rpm离心5分钟。
5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。
6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。
用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转
入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。
7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。
这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。
8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。
9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。
10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,DNA 形成絮状沉淀。
11. 用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。
12. 将DNA重溶解于1ml TE, -20贮存。
13. 取2μl DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。
同时取15μl稀释20倍, 测定OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。
[注意] 5g样品可保证获得500μg DNA, 足供RFLP、PCR等分析之用。
（二）. 从李(苹果)叶子提取基因组DNA
1. 取3-5克嫩叶, 液氮磨成粉状。
2. 加入提取缓冲液Ⅱ10ml, 再研磨至溶浆状。
10000rpm, 10min。
3. 去上清液,沉淀加提取液Ⅰ20ml, 混匀。
65℃, 30-60min, 常摇动。
4. 同本节（一）中步骤3-13操作。
从动物组织提取基因组DNA
一、材料
哺乳动物新鲜组织。
二、设备
移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。
三、试剂
1、分离缓冲液：10mmol/L Tris·Cl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。
2、其它试剂：10% SDS，蛋白酶K (20mg/ml或粉剂)，乙醚，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，无水乙醇及70%乙醇，5mol/L NaCl，3mol/L NaAc，TE。
四、操作步骤:
1. 切取组织5g左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越好)。
2. 倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。
3. 加1ml 10% SDS, 混匀,此时样品变得很粘稠。
4. 加50ul或1mg 蛋白酶K, 37℃保温1-2小时, 直到组织完全解体。
5. 加1ml 5mol/L NaCl, 混匀,5000rpm离心数秒钟。
6.取上清液于新离心管，用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提。
待分层后,3000rpm离心5分钟。
7. 取上层水相至干净离心管, 加2倍体积乙醚抽提(在通风情况下操作)。
8. 移去上层乙醚,保留下层水相。
9. 加1/10 体积3mol/L NaAc, 及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。
室温下静止10-20分钟，DNA沉淀形成白色絮状物。
10. 用玻棒钩出DNA沉淀,70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1ml TE中,-20℃保存。
11. 如果DNA溶液中有不溶解颗粒,可在5000rpm短暂离心,取上清; 如要除去其中的RNA,可加5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃保温30分钟, 用酚抽提后, 按步骤9-10重沉淀DNA。
细菌基因组DNA的制备
一、材料
细菌培养物。
二、设备
移液管, 高速冷冻离心机, 台式离心机，水浴锅。