植物基因组DNA提取试剂盒(北京天根)
植物基因组DNA提取试剂盒（离心柱法）
植物基因组DNA提取试剂盒（离心柱法）(Plant Genomic DNA Mini Preparation Kit） PBZ0205‐1 20次 150.00 PBZ0205‐2 50次 370.00 简介本试剂盒用于提取多种单子叶和双子叶植物或真菌类细胞基因组DNA。
该试剂盒提供的方法简单易行，通过去垢剂处理和特殊的液体系统将裂解细胞后产生的DNA结合在柱材上，避免酚仿抽提。
所获的基因组DNA具有完整性好、产量大、纯度高和稳定性好等特点。
可以满足PCR、酶切、分子杂交和文库构建等各种分子生物学实验需要。
试剂盒组成<20次>离心柱及收集管各 20个裂解液 PDL 15ml 沉淀液 PPS 5ml 缓冲液PDB 5ml蛋白清洗液PWB 12ml 洗涤液WB 20ml 洗脱液EB 15 ml需自备的试剂无水乙醇，RNase A(25mg/ml)保存条件及有效期试剂盒保存在室温（15‐30℃）。
试剂如出现混浊或结晶，可以将试剂瓶置于55℃水浴加热，溶液变清亮后再使用。
本试剂盒有效期为12个月。
操作步骤所有离心步骤皆使用台式离心机，为室温下操作。
第一次使用前请先参考试剂瓶上的标签，在缓冲液PDB和洗涤液WB中加入无水乙醇。
1.取新鲜植物组织100mg或干重组织20mg，加入液氮充分研磨，在化冻前将粉末转移到1.5ml离心管中。
2.加入450µl经65℃预热的裂解液PDL，涡旋混匀使样品完全悬浮，加入5µl RNase A（25mg/ml），65℃水浴15分钟。
温育期间可间或振荡离心管2~3次，保证裂解充分。
3.12,000rpm离心5分钟。
用宽口吸头转移上清到一个干净的1.5ml离心管中。
4.加入150µl溶液沉淀液PPS，充分振荡混匀，冰水浴5 ‐10分钟， 此时可见大量白色沉淀，12,000rpm离心10分钟。
（该步骤去掉去垢剂，大部分蛋白质和多糖类物质）5.用宽口吸头轻轻吸取大约400µl上清于一个干净的1.5ml离心管，尽量不要吸取沉淀，避免离心柱堵塞。
TAKARA植物DNA提取试剂盒说明书
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 2 M
1.0 kbp 0.5 kbp
2.0 kbp
PCR 反应液 4 μl，1％ Agarose 电泳，M：Wide-Range DNA Ladder（50～10,000 bp） 图 3 以提取的基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增的电泳图
图 1 从植物组织中提取的基因组 DNA 电泳图 -2-
表 1 从植物组织中提取的基因组 DNA 纯度*
样品名称
样品量
Sample No.
A260/A280
A260/A230
20 mg
1
拟南芥幼芽
2
3
50 mg
4
2.2
1.4
2.2
1.4
2.1
1.7
2.1
1.7
20 mg
5
6
西红柿幼芽
7
50 mg
8
图 5 以提取的基因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增的电泳图
注：长时间存放可能会有夹杂物沉淀，尽量迅速进入 下一步操作。
12. 12,000 rpm 4℃离心 10 分钟。 13. 弃上清，注意不要吸取沉淀。
注：沉淀有时肉眼看不见。
14. 加入 1 ml 70％乙醇，清洗沉淀。 15. 12,000 rpm 4℃离心 3 分钟。 16. 弃上清，注意不要吸取沉淀。 17. 沉淀干燥，加入适量 TE Buffer（约 20 μl）溶解沉
2. 取出冻结的植物组织于室温放置 5 分钟左右，使其融解。 3. 轻微离心，将植物组织收集在 Microtube 底部。 4. 使用 Pipet Tip 尖端将植物组织按压 Microtube 底部 10 次左右，进行物理破碎。 5. 加入 400 μl 的 Extraction Solution 1，剧烈振荡 5 秒钟。如果植物组织仍滞留于 Microtube 底部，
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒使用说明书
◆新型植物基因组DNA快速提取试剂盒◆目录号DN15◆使用手册◆实验室使用，仅用于体外新型植物基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN15目录编号包装单位DN1501 50次DN1502 100次DN1503 200次适用范围：适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次RNaseA(10mg/ml)-20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
天根 快速定点突变试剂盒说明书
KM101 （20 rxn）
30 μl 200 μl 20 μl 40 μl 80 μl 20×50 μl
储存条件
收到本产品后， 请立即将FDM competent cells置于-70℃条件下保存，试剂盒其他组分 置于-20℃条件下保存。感受态细胞可在-70℃条件下保存3个月，试剂盒其他组分可在-20℃ 条件下保存1年。
50 μl 体系 2 μl 4 μl 10 μl 1.5 μl
至50 μl
终浓度 0.2 ng/μl 400 nM
1× 0.075 U/μl
－
4、将实验组及对照组按照如下PCR反应程序进行PCR反应。
PCR反应程序： 注：下表中PCR程序按照对照组实验条件设置，客户可根据自身实验进行相应调整。
阶段 预变性
■ PCR、RT-PCR系列 ■ 核酸DNA、RNA分离纯化系列 ■ DNA分子量标准 ■ 克隆载体、感受态细胞 ■ 细胞生物学产品 ■ 蛋白分子量标准 ■ 蛋白质染色、检测及定量相关产品
版本号: KM131204
Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD
PCR反应
补充延伸
循环 1×
18×
1×
温度 95℃ 94℃ 55℃ 68℃ 68℃
时间 2 min 20 sec 10 sec 2.5 min 5 min
二、质粒模板的消化
1、按照下表所述配制酶切体系： 组成成分
PCR产物 Dpn I restriction enzyme （20 U/μl） Total Volume 2、充分混匀后，将上述酶切体系于37℃条件下消化1 h。
植物基因组DNA提取试剂盒(北京天根)
植物基因组DNA提取试剂盒1 取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约30 mg，加入液氮充分研磨。
2 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μL 65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
3 加入700 μL氯仿，充分混匀，12,000 rpm（~13,400×g）离心5 min。
注：若提取富含多酚或淀粉的植物组织，可在第3步前，用酚：氯仿/1:1进行等体积抽提。
4 小心的将上一步所得水层上相转入一个新的离心管中，加入700 μL缓冲液GP2，充分混匀。
5 将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，弃掉废液。
（吸附柱容积为700μL左右，可分次加入离心。
）6 向吸附柱CB3中加入500 μL缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7 向吸附柱CB3中加入600 μL漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8 重复操作步骤7。
9 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，倒掉废液。
将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中的乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，将溶液收集到离心管中。
转基因作物中常见Bt基因PCR检测方法的建立
转基因作物中常见Bt基因PCR检测方法的建立邵改革;闫伟;夏蔚;李葱葱;龙丽坤;李飞武【摘要】建立基于常见外源基因的转基因成分检测方法是开展转基因生物监测与检测活动的技术支撑,Bt基因作为目前商业化应用最广泛的一类外源基因,已成为转基因产品筛选检测的重要靶标.依据转基因作物中常见的6种Bt基因(cry1F、cry1C、cry1Ie、cry34Ab、cry35Ab、vip3A)的核苷酸序列设计特异性PCR引物,并经过特异性、灵敏度等一系列测试,建立上述6种Bt基因的定性PCR检测方法.结果显示,应用这些方法均可从含有相应Bt基因的样品中正确检测出预期转基因成分,方法的灵敏度可达0.10%.上述方法具有特异性强、灵敏度高等特点,适用于转基因作物中常见Bt基因的筛选检测.【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2017(045)012【总页数】4页(P31-34)【关键词】转基因作物;Bt基因;定性PCR方法【作者】邵改革;闫伟;夏蔚;李葱葱;龙丽坤;李飞武【作者单位】吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春130033;吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春 130033;吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春 130033;吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春 130033;吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春 130033;吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,吉林长春 130033【正文语种】中文【中图分类】Q785与全球转基因作物商业化蓬勃发展相对应的是人们对于转基因技术产品的安全性越来越重视。
加强转基因产品监管，已成为世界各国管理转基因技术的一贯做法，开发行之有效的检测技术则成了转基因监管技术支撑机构的一项重要工作[1]。
PCR 技术兼具特异性强、灵敏度高、结果稳定可靠等优点，在转基因产品检测方法研究中被广泛应用，根据检测靶标功能的不同，又分为筛选PCR检测、基因特异性PCR检测、构建特异性PCR检测、转化体特异性PCR检测4类，其中基因特异性PCR检测方法以转基因作物中的外源目的基因为检测靶标，是一类常见的转基因产品成分检测方法[2]。
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒
4.
不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异， 一般100mg新鲜组织典型产 量可达3-25μg。
5.
洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水 洗脱， 但应该确保 pH 大于 7.5， pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA 应该 DNA 如果需要长期保存， 保存在－20℃。 可以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA， pH 8.0） ， 但是 EDTA 可能影响下游酶切反应， 使用时可以适当稀释。
� 1.
产品特点： 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小， 可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2. 3. 4.
不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷，单个样品操作一般可在 1 小时内完成。 数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度， OD260/OD280 典型的比值达 1.7～1.9，可直接用于 PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。
8. 9.
◆ ◆ ◆ ◆
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒 目录号 DN15 使用手册 实验室使用，仅用于体外
新型植物基因组 DNA 快速提取试剂盒
目录号：DN15 目录编号 01 DN15 DN1501 02 DN15 DN1502 03 DN15 DN1503 包装单位 50次 100次 200次
�
适用范围： 适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA
3. 4.
65℃水浴 10 分钟，在水浴过程中颠倒离心管 2-3 次，混合样品。 加入 130 μl 缓冲液 AP2，充分混匀，冰上放置 5 分钟， 14,000 rpm 离心 5-10 分 钟，小心吸取上清到一个新的 1.5ml 离心管，注意不要吸到界面物质。
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
新型植物基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN15目录编号包装单位DN1501 50次DN1502 100次DN1503 200次适用范围：适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次200次RNase A(10mg/ml) -20℃250 μl500 μl 1 ml 缓冲液AP1 室温25 ml 50 ml 100 ml 缓冲液AP2 室温10 ml 20 ml 40 ml缓冲液AP3/E 室温15 ml 25 ml 50 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温15 ml 25ml 50ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温15 ml 20 ml 40 ml 吸附柱AC 室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解（AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热），恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。
可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。
提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
（TSP101）植物DNA提取试剂盒
（TSP101）植物DNA提取试剂盒Trelief T M Plant Genomic DNA Kit 植物基因组DNA提取试剂盒（通用型）TSP101本试剂盒采用独特的缓冲液系统配合特异性吸附 DNA的离心柱，可以从植物的根、茎、叶、花、果实、种子等样本中简单、快速、高效地提取基因组 DNA。
获得的基因组DNA完整性好、纯度高、质量稳定，是AFLP、RAPD、SSR 等分子标记，Southern 杂交，常规PCR，文库构建以及基因组测序等分子生物学实验的最佳选择。
试剂盒组成：TSP101-50 (50次) TSP101-200 (200次)RNase A Buffer BL Buffer gP1 Buffer gP2 Buffer PW20 ~ 25℃ 20 ~ 25℃ 20 ~ 25℃ 20 ~ 25℃ 20 ~ 25℃250μ l 13 ml 21 ml 8 ml 12 ml1 ml 55 ml 85 ml 31 ml 46 ml6个月 1年 1年 1年 1年 3个月 1年 3个月 1年 1年 1年第一次使用前加指定量乙醇13 ml 25 ml × 2Wash Buffer TE Buffer Spin Columns20 ~ 25℃ 20 ~ 25℃ 20 ~ 25℃第一次使用前加指定量乙醇 5 ml 50 个 50 个 1份 20 ml 200 个200 个 1份Collection Tubes(2.0ml) 20 ~ 25℃实验操作手册产品特点:简单快速：1 h内即可获得超纯的基因组DNA。
应用广泛：适用于各种植物组织，包括富含多糖、多酚等提取困难样本。
超纯：获得的DNA纯度高、完整性好，可直接用于各种分子生物学实验。
注意事项：1. 检查Buffer gP1 及Buffer Pw是否有固体析出，如有析出，请置于37℃水浴中溶解并摇匀。
2. Buffer PW及Wash Buffer首次使用前加入指定量的无水乙醇，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
StarSpinPlantDNA...
StarSpin Plant DNA KitStarSpin植物基因组DNA提取试剂盒【货号及规格】D106-01，50rxn【产品概述】本产品是利用硅基质材料在一定的高盐缓冲体系下能够高效、专一地吸附DNA的原理，从新鲜或冷冻植物组织中提取基因组DNA。
该产品适用范围广，可用于多种植物基因组DNA（包括叶绿体和线粒体DNA）的快速提取，每100 mg植物组织通常可提取10~30µg DNA；提取的DNA纯度高，OD260/280=1.8~2.0，长度一般为40~50kb，可直接用于酶切、PCR、real-time PCR、multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern blot,microsatellite analysis 等各种后续分子生物学实验。
植物裂解液1（PLB1）40ml如有沉淀，65℃加热溶解沉淀后使用植物裂解液2（PLB2）20ml膜结合液（MB）50ml通用漂洗液（WB）20ml使用前请加入35ml无水乙醇通用洗脱液（EB）10ml离心吸附柱及收集管50套室温密闭干燥1.5ml无菌离心管50个室温密闭干燥产品说明书一份【保存条件】常温保存一年【使用方法】用户需自备的材料：10mg/ml RNaseA，氯仿，1.5ml离心管，塑料研钵或组织匀浆器，台式离心机，冰浴，65℃水浴1.注：此步为可选步骤，视样品的情况而定。
将150µl RNaseA溶液全部加入到植物裂解液1（PLB1）中，充分混匀。
未用完的植物裂解液（PLB1）应于4℃保存。
2.65℃预热植物裂解液（PLB1），待沉淀溶解后，充分混匀，取0.75ml加入到1.5ml离心管中并置于65℃水浴待用。
3.称取植物组织0.1~0.5g，剪成微小的碎片，加入到植物裂解液1（PLB1）中并短暂匀浆（匀浆过程中会产生大量泡沫），也可以液氮研磨后，将粉末加入到PLB1中混匀。
注意：研磨应在塑料研钵中进行，而不要使用陶瓷或玻璃研钵，以免二氧化硅吸附DNA，降低回收率。
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植物基因组DNA提取试剂盒
1 取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约30 mg，加入液氮充分研磨。
2 将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μL 65℃预热缓冲液GP1的离心管中（实验前在预热的GP1中加入巯基乙醇，使其终浓度为0.1%），迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20 min，水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
3 加入700 μL氯仿，充分混匀，12,000 rpm（~13,400×g）离心5 min。
注：若提取富含多酚或淀粉的植物组织，可在第3步前，用酚：氯仿/1:1进行等体积抽提。
4 小心的将上一步所得水层上相转入一个新的离心管中，加入700 μL缓冲液GP2，充分混匀。
5 将混匀的液体转入吸附柱CB3中，12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，弃掉废液。
（吸附柱容积为700μL左右，可分次加入离心。
）
6 向吸附柱CB3中加入500 μL缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
7 向吸附柱CB3中加入600 μL漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm（~13,400×g）离心30 s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
8 重复操作步骤7。
9 将吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，倒掉废液。
将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中的乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。
10 将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-200 μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12,000 rpm（~13,400×g）离心2 min，将溶液收集到离心管中。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于50 μL，体积过小影响回收率。
洗脱液的PH值对于洗脱效率有很大影响。
若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0会降低洗脱效率；且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。
为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CB3中，室温放置 2 min，12,000 rpm （~13,400×g）离心2 min。