几种乳化设备在油佐剂疫苗生产中的应用
兽用疫苗保护剂和佐剂
兽医生物制品常用的保护剂
1．5%蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂
蔗糖（或乳糖） 5g，加脱脂乳至 100ml，充分溶解后，110~116℃高压灭菌 30~40 min。
2．明胶蔗糖保护剂
明胶 2%~3%（g/m1）、蔗糖5%（g/m1）、硫脲 1%~2%（g/m1）。先 将 12%~18%明胶液、 30%蔗糖液和 6%~12%硫脲液加热溶解， 116℃高压 灭菌30~40min；
1. 营养液： • 可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分；
• 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状，
增加溶解度 2. 赋形剂： • 防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响 • 使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度 3. 抗氧化剂： • 抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存
7．脂质分子类佐剂：脂多糖、Vit A和Vit E等脂溶性维生素
8．其他：霍乱毒素（CT）、百日咳毒素（PT）和破伤风类 毒素（TT）等；脂磷壁酸（LTA）；维生素B12等。
氢氧化铝胶 (铝胶）
合成方法:
（1）用铝粉加烧碱合成法
2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3· 18H2O
兽用疫苗冻干保护剂 和佐剂
冻干保护剂（稳定剂）
保护剂：又称稳定剂（stabilizer） ，是指一类能防止生 物活性物质在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。（指对疫 苗生产、血清制备等） 保护剂用途（不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生 物或细胞） ① 菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂 ② 细胞株保存：常用二甲基亚砜(DMSO) DMSO:二甲基亚砜，一种细胞的保护剂 ③ 疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二甲基亚 砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方） ④ 干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖
佐剂与抗原混合乳化的方法
佐剂与抗原混合乳化的方法佐剂与抗原混合乳化是一种常用的制备疫苗的方法。
本文将介绍佐剂的定义和作用，以及混合乳化的原理和操作步骤，旨在帮助读者对该方法有更深入的了解。
佐剂是指在疫苗制备过程中与抗原混合使用的辅助物质。
它能够增强疫苗的免疫原性，提高抗原的稳定性并改善免疫效果。
佐剂的使用可以提高疫苗的免疫原性，减少疫苗所需的抗原量，从而降低疫苗的制备成本。
混合乳化是将佐剂与抗原充分混合的过程。
通过乳化，可以使佐剂和抗原均匀分散，形成较为稳定的乳液。
乳化有助于佐剂与抗原的相互作用，并提高免疫原性。
在乳化过程中，还可以加入一些辅助物质，如稳定剂和调节剂，以进一步提高疫苗的稳定性和免疫效果。
混合乳化的原理主要涉及表面活性剂的作用。
表面活性剂是一种能够降低液体表面张力的物质，能够将液体分散成微小的颗粒。
在混合乳化过程中，佐剂和抗原与表面活性剂相互作用，形成乳液。
表面活性剂能够使乳液中的颗粒分散均匀，提高佐剂与抗原的接触面积，从而增强免疫原性。
混合乳化的操作步骤如下：1. 准备佐剂和抗原。
根据具体疫苗的制备要求，选择适当的佐剂和抗原。
佐剂可以是氢氧化铝凝胶、磷酸铝盐或油水乳剂等。
2. 将佐剂与抗原分别溶解或悬浮于适当的溶剂中。
溶剂的选择应考虑佐剂和抗原的特性，并确保能够充分溶解或悬浮。
3. 将佐剂和抗原按照一定比例混合。
混合时应注意避免气泡的产生，以免影响乳化效果。
4. 加入表面活性剂。
根据疫苗制备的需求，选择适当的表面活性剂，并按照一定比例加入到混合液中。
5. 使用适当的设备进行乳化。
可以使用振荡器、搅拌器或超声波处理器等设备进行乳化处理。
乳化时间和设备的选择应根据具体情况进行调整。
6. 检查乳化效果。
乳化后的混合液应均匀分散，无明显沉淀和气泡。
可以通过目测或仪器检测来评估乳化效果。
7. 进一步处理。
根据疫苗制备的要求，可以进行其他处理步骤，如灭活、过滤和分装等。
通过佐剂与抗原的混合乳化，可以获得稳定的疫苗制剂，并提高疫苗的免疫原性。
动物疫苗的乳化
动物疫苗的乳化动物疫苗的乳化是指将抗原液分散在油佐剂中所形成稳定的异源系统，注入动物体内后，能非特异性地增强动物机体对抗原的特异免疫应答，并延长免疫持续期。
由于油佐剂能将抗原物质吸附或黏着，注入动物机体后可较久地存留在体内，持续地释放出抗原物质来不断刺激机体的免疫系统，从而能持久地提高抗体效价，提高疫苗的免疫效果。
因此，人们不断研究动物疫苗的乳化效果和新型油佐剂，以便获得更有效、更安全和更稳定的疫苗。
一、动物疫苗的乳化及佐剂1.1动物疫苗的乳化油佐剂疫苗是指抗原液体或微粒（滴）（分散相或内相）借助乳化剂，在机械力的作用下，分散悬浮于不相溶的油佐剂液体（连续相或外相）中所形成相对稳定的分散体系。
1.2动物疫苗乳化剂两个不相混容的纯液体不能形成稳定的油乳剂，必须要加入第三组分（起稳定作用）—乳化剂，以降低体系的界面能。
乳化剂属于表面活性剂，其主要功能是起乳化作用，才能形成油乳剂。
例如，将注射用白油和抗原液放在试管里，无论怎样用力摇荡，静置后都会很快分离。
但是，如果往试管里加一点乳化剂，再摇荡时就会形成象牛奶一样的乳白色液体。
乳化剂指动物疫苗中分散相与连续相两相间的界面活性物质，可促进和稳定两种互不相溶物形成乳剂，如弗氏佐剂中的羊毛脂，油佐剂中的Span-80、Arlacel-80、Tween-80等。
动物疫苗的乳化见图1。
二、动物疫苗的剂型通常动物疫苗的乳化过程中一相是水相抗原和极性小的有机液体油相油佐剂，习惯上统称为“油”。
根据内外相的性质，油乳剂主要有三种类型，一类是油分散在水中，简称为水包油型油乳剂，用O/W表示；另一种是水分散在油中，简称为油包水型油乳剂，用W/O表示，还有一种复合油乳剂，它的分散相本身就是一种油乳剂，如将一个W/O的油乳剂分散到连续的水相中，而形成一种复合的双相W/O/W型油乳剂。
不同的动物疫苗剂型的特性见表1。
2.1动物疫苗剂型检测动物疫苗不同的剂型有不同的特点，根据不同的免疫要求、免疫动物、免疫途径和抗原类型综合选择理想的剂型。
禽流感油乳佐剂疫苗质量快速检测方法的建立
将含有 ＡＩＶ Ｈ９ 无菌胚液 （ 简称 Ｈ９ 胚液） 用 ＰＢＳ 稀释为 ＨＡ 效价等于 １∶６４０， 平分为 Ａ、Ｂ 两 份， Ａ 样品按 ０．３％比例加入甲醛溶液（ 浓度为 ３６％） ３７ ℃恒温机中灭活 ２４ ｈ， 置 ４ ℃保存。Ｂ 样品置－ ２０ ℃保存备用。将 Ａ、Ｂ 两样品作 ＨＡ 试验， 确认 ＨＡ 效价为 １∶６４０。将 Ａ 样品分为 ａ１、ａ２ 两样品， Ｂ 样品分为 ｂ１、ｂ２ 两样品。各样品以 ＰＢＳ 作倍比稀 释 依 次 得 ａ１ － ６４０， ａ１ － ３２０， ａ１ － １６０， ａ２ － ６４０， ａ２ － ３２０， ａ２－ １６０， ｂ１－ ６４０， ｂ１－ ３２０， ｂ１－ １６０， ｂ２－ ６４０， ｂ２－ ３２０， ｂ２－ １６０。将 ａ１ 各样品按常规加入 ２ 倍油佐剂 制备成油佐剂灭活疫苗， 将 ｂ１ 样品按常规加入 ２ 倍油佐剂制备成油佐剂灭活疫苗， 将 ａ２、ｂ２ 各样品 按油佐剂比例加入 ２ 倍 ＰＢＳ， 充分摇匀， 使所含疫 苗抗原量与相应的油苗相当， 所有样品处理后， ａ２ 放入－ ２０ ℃冻结保存， 其余样品于 ４ ℃保存， 待检。
２．２ 油乳剂苗的破乳方法筛选结果 ①低温冻融法： 油乳剂经长时间冷冻处理， 均
无法完全冻结华， 取出室温解冻后， 静置未见有效 液相析出。
②研磨法： 室温静置 ５ ｈ 以上， 未见液相析
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中国家禽 !２"００"#７ 年第 !２９$ 卷第 １４ 期
as01佐剂制备
as01佐剂制备
【原创版】
目录
1.佐剂的定义和作用
2.佐剂制备的方法
3.佐剂制备的注意事项
4.佐剂制备的实际应用
正文
一、佐剂的定义和作用
佐剂，又称为免疫增强剂，是一种可以增强或调节机体免疫应答的物质。
在疫苗制备过程中，佐剂被广泛应用，以提高疫苗的免疫效果。
通过引入佐剂，可以增强疫苗的免疫原性，使得疫苗能够更有效地诱导机体产生免疫应答。
二、佐剂制备的方法
1.油乳剂佐剂制备：油乳剂佐剂是一种常见的佐剂类型，其主要成分是矿物油和乳化剂。
制备过程中，首先需要将矿物油和乳化剂混合，然后通过高剪切力搅拌，使矿物油形成微小的油滴，被乳化剂包裹，形成油乳剂。
2.铝盐佐剂制备：铝盐佐剂是另一种常见的佐剂类型，其主要成分是氢氧化铝。
制备过程中，需要将氢氧化铝与适量的盐酸混合，然后通过水解反应，生成磷酸铝。
三、佐剂制备的注意事项
1.佐剂的选择：不同的佐剂对免疫效果的影响不同，因此在制备过程中需要根据疫苗的特性选择合适的佐剂。
2.佐剂的用量：佐剂的用量对免疫效果有重要影响，过量或过少的佐剂都会影响疫苗的免疫效果。
因此，在制备过程中需要精确控制佐剂的用量。
3.佐剂的稳定性：佐剂的稳定性对疫苗的免疫效果有重要影响。
在制备过程中，需要保证佐剂的稳定性，防止佐剂分解或失去活性。
四、佐剂制备的实际应用
佐剂制备在疫苗制备中起着重要作用。
例如，新冠病毒疫苗的制备过程中，就需要引入佐剂，以提高疫苗的免疫效果。
禽流感抗原不同佐剂乳化制苗实验
禽流感抗原不同佐剂乳化制苗实验（一）一、二、实验内容及目的禽流感抗原离心灭活后，按制苗总量 500ml，抗原总量都相同，不同佐剂（分别为桑米特SummitP178、桑米特Summit101、进口复合佐剂、国产白油）按需求添加生理盐水配制水相，用 IKA 乳化机乳化制苗，送质检测 HI 及副反应。
通过此次实验结果能初步判断出不同佐剂对禽流感抗原免疫效果的影响。
实验过程禽流感抗原（批号 20180115rt）500ml，技术部离心（3000r/min，5min），离后 500ml 加 7.5ml 甲醛（10%）4℃灭活 48h。
1）样①禽流感抗原+桑米特SummitP178 乳化过程：3600r/min，乳化 5min2）样②禽流感抗原+乳化剂 10ml+ 桑米特Summit101 乳化过程：6600r/min 时水相慢慢倒入油相中，10000r/min 乳化 5min3）样③禽流感抗原：进口复合佐剂 (油包水型佐剂)乳化过程：10000r/min，乳化 5min4）样④禽流感抗原+吐温+国产包油司本+硬脂酸铝，乳化过程：10000r/min，乳化 5min 5）样⑤禽流感抗原+吐温+免疫增强剂+国产包油 +司本+ 硬脂酸铝乳化过程：10000r/min，乳化 5min三、实验结果1）过程结果离前离后灭后抗原浊度HA 浊度HA 浊度HA 备注（20180115rt）124 8 53 7 57．9 4注：1 抗原在成品 6 批生产取样，导致离前浊度小，效价低，入库效价为 10。
但实验样品均一，不影响横向对比。
2.实验时间：2018.02.05 化冻；2018.02.07 离心灭活；2018.02.09 配水相乳化送样。
2）免疫结果样品①2.5 ②5.2③2.2④1.5⑤3.8备注————————14 天 HI21 天 HI 28 天 HI 副反应3.8 7.0 3.8 2.3 6.3 ——4/248.7 ——11/24——10/24——8/24 7/24四、实验分析1. ①②③④的 HI 结果分析可得：佐剂桑米特summit101 制苗免疫效果最好；佐剂桑米特summitp178 与进口复合油佐剂免疫效果基本一样，但明显低于佐剂 summit101 约 3 个滴度；国产白油的免疫效果最差，低于佐剂桑米特summit101 约 4-5 个滴度。
疫苗研发中的新型佐剂技术研究
疫苗研发中的新型佐剂技术研究前言新冠病毒疫情的爆发让全球人类面临着前所未有的挑战。
除了大规模的医疗防控措施之外，科学技术在抗击病毒上也起着举足轻重的作用。
其中，疫苗的研发尤为重要，它不仅能够有效减少病毒的传播和感染，更能够为全球人类的健康安全保驾护航。
但是，在疫苗研发的过程中，有一项技术显得尤为关键，那就是佐剂技术。
佐剂是疫苗制备过程中不可或缺的一环，它可以改善疫苗的免疫原性能，提高免疫反应的产生率和效力。
本文将介绍一些新型佐剂技术的发展和应用。
一、佐剂技术的定义和作用佐剂（Adjuvant）指的是将疫苗中的抗原与化学物质混合在一起，以增强其免疫原性能的物质。
它是用来改善免疫原性，提高免疫反应产生率和效力的一种辅助剂。
简单来说，佐剂是帮助疫苗提高免疫效果的一种化学物质。
佐剂的主要作用有以下几点：1.提高疫苗的免疫原性佐剂能够增强疫苗中的抗原在体内诱导免疫反应的能力。
疫苗中的抗原往往并不能够很好地诱导免疫反应，这时佐剂就起到了重要的作用。
2.促进免疫反应的发生和持续佐剂能够引起免疫细胞的活化，并促进抗原的处理和呈递，提高抗原的递呈效率。
而免疫细胞的活化也会促进免疫反应的发生和持续。
3.提高疫苗和抗原的稳定性佐剂可以使疫苗或者抗原在存储和运输过程中更加稳定，保证其免疫原性能不会受到损失。
二、常见的佐剂技术1.铝盐佐剂铝盐佐剂是目前应用最广泛的佐剂技术。
它由铝羟氧化物和磷酸盐等物质组成，具有成本低、温度稳定、对人体安全等优点。
但是，铝盐佐剂的主要缺点是其免疫原性并不是很强，需要使用大量的疫苗来达到理想的免疫效果。
2.油水乳化佐剂油水乳化佐剂是一种由油和水组成的乳液，在其中加入疫苗抗原，能够比铝盐佐剂提供更强的免疫原性和更好的长期保护作用。
油水乳化佐剂的主要缺点是在应用中比较复杂，需要考虑到疫苗和佐剂的相容性，否则会造成不良反应。
3.脂质体佐剂脂质体佐剂是将疫苗抗原包裹在脂质体中，以实现疫苗和免疫细胞的更好的相互作用。
鸡新城疫灭活疫苗三种佐剂乳化效果的比较
鸡新城疫灭活疫苗主要是 由甲醛灭活后与油佐 剂混合乳化制成 。所有 的乳化剂分子都是 由极性 的 亲水基 团和非极性 的亲油基团两部分组成 ，而且两 部分分处分子的两端 ， 形成不对称的结构。这样的分 子结构使得乳化剂分子一部分可溶于水 ，另一部分 易于和油相结合 。乳化剂的作用就在于使用机械作 用分散所得 的液滴不互聚集结 ，在成品质量方面要 通过 试验对不同乳化剂进行研究 ， 以便指导生产。
冷库 冻 胚 １ ２ 小时左右 ， 即１ ２ ０小时 收 获 。 收获 是 用 自动 收 获 机进 行 ， 调 整好 收 获 时 间 ， 保 证 收获 的病 毒
疫灭活疫苗 ， 至今 己在欧洲 、 亚洲等许多国家推广使
用。 １ ９ ８ ３年 ， 中 国兽 医监察 所 、 哈 尔滨兽 医研 究所 、 北
将 制备 好 的疫 苗 每组 分 别 进 行 观 感 、剂 型 、 粘
１ 材 料 和 方 法 １ ． １ 试 验 材 料 和 实验 动 物
磷 酸 氢 二钠 、 磷 酸 氢二 钾 、 氯 化 钠 等 试剂 均 购 自 国药集 团药 业 股份 有 限公 司 ，试 验 所 需试 剂 为 同批 次 。注射 用水 由本 单 位制备 ， 保存 时 间 ６小 时 。一支 ８道 移 液 器 ， ９ ６孔 “ Ｖ ”形 微 量 反 应 板 ， 自动 接 种 机 （ 需 灭 菌 部件 已经 灭 菌 ） ， 自动 收 获 机 （ 需 灭 菌部 件
液质量 ， 留样做半成品检验 ， 其余进行灭活。 配制浓度为 ０ ． ８ ５ ％的生理盐水 ， １ ２ １ ｏ Ｃ 高压灭菌 ３ Ｏ 分钟。Ｓ Ｐ Ｆ 鸡翅下静脉采血 ， 与等量阿氏液混合 ， 配制 １ ％鸡 红细胞 悬 液 。 对收获 的病 毒 液进行 红 细胞 凝集 试 验 ，选取 其 血凝 效 价 ≥１： ２ ５ ６的再 进 行病 毒
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几种乳化设备在油佐剂疫苗中的应用
一、胶体磨
立式胶体磨是制造油佐剂疫苗的工具之一, 可以作为油乳剂制造及抗原与油佐剂预混合的设备。
立式胶体磨是通过转齿和定齿作相对运动，使油佐剂与抗原通过其间隙时受到强大的剪切力、摩擦力、离心力和高频振动，从而使佐剂与抗原乳化，其乳化的液珠直径在1～5μm之间。
JIM-50型立式胶体磨（图5-15）为国内常用。
该机电机功率1kW；转速8000r/min；电源电压：220V；转齿最大直径50mm；流量20～100kg/h；粒度1～5μm；重量30kg；外形尺寸300mm×250mm×700mm。
图5-16 JIM-50型立式胶体磨
二、高压匀浆泵
高压匀浆泵是一种制备超细液-液乳化物或液-固分散物的通用设备，是胶体磨的替代产品。
其主要加工部位具有极高的耐腐蚀性和良好的耐磨性，对加工乳化的油佐剂、抗原均不会产生不良影响。
如我国生产的GYB30-6D型高压匀浆泵。
它由高压往复柱塞泵和匀质器组成，疫苗的乳化加工在匀质阀内进行。
油佐剂及抗原在高压下进入可调节的间隙，使油乳剂和抗原获得极高的流速（200～300m/s），从而在匀质阀里形成一个巨大的压力下跌，产生空穴效应；湍流和剪切力的作用，将原先粗糙的油佐剂和抗原加工成0.25～2μm极细微的颗粒。
该机匀质阀的压力可在0～60MPa范围内任意选择。
本型号属单级泵，每小时最大制苗量为30L，最高压力为60MPa。
三、罐内剪切机
罐内剪切头是目前油佐剂疫苗应用较多的工具之一，是可以作为油乳剂制造及抗原与油预混合的设备。
灌内剪切头是通过内转子和外带孔的定子作相对运动，使油佐剂与抗原通过其间隙时受到强大的剪切力、撞击力、离心力，从而使佐剂与抗原乳化，其乳化的液珠直径在1～5mm之间。
罐内剪切机（如图5-17）为国内常用，在乳液分散的过程中，分散机的线速度尤为重要，在一定的线速度下，如果想得到更合适的粒径，其他的影响因素与参数则会显得更重要，影响分散结果的因素：工作形式（批次式或连续式）、工作头的线速度、工作头的齿形结构。
除了标准搅拌形式外，还有不同的搅拌桨可供选择（如图5-18）。
根据不同的搅拌要求及工作条件还可选择不同的电机、密封及转速配置。
图5-17 罐内剪切机（福州福尔特机械设备有限公司提供）
图5-18 罐内搅拌桨（福州福尔特机械设备有限公司提供）
四、管线式高剪切分散机
目前，伴随着疫苗乳化工艺的不断改进，管线式高剪切分散机（见图5-19）在疫苗生产过程中得到广泛应用，多与罐内剪切机配套使用，其工作原理就是高效、快速、均匀地将不相溶的两种物料重组成为均一相。
管线式高剪切分散机由于转子高速旋转所产生的高切线速度和高频机械效应带来的强劲动能，使物料在定、转子狭窄的间隙中受到强烈的机械及液力剪切、离心挤压、液层摩擦、撞击撕裂和湍流等综合作用，形成乳液（液体/液体），从而使不相溶的固相、液相、气相在相应熟工艺和适量添加剂的共同作用下，瞬间均匀精细地分散乳化，经过高频管线式高剪切分散机的循环往复最终得到稳定的高品质产品。
在疫苗生产中多用罐内剪切机进行低速预混，采用管线式高剪切分散机实现油佐剂疫苗颗粒精细均匀，如图在线式三级高剪切分散机，由于工作腔体内三组分散头（定子+转子），乳液经过高剪切后，滴液更细腻，粒径分布更窄，因而生成的混合液稳定性更好，三组乳化头均易于更换，适合不同工艺应用，该系列中不同型号的机器都有相同转速和剪切率，非常易于扩大规模化生产，支持CIP/SIP。
管线式高剪切分散机优点：（1）处理量大，适合工业化，大批量在线连续生产；（2）物料往往更细，匀度高；（3）噪音低，低能耗；（4）无死角，物料100％通过分散剪切。
（5）操作使用简单，维修方便。
图5-19 管线式高剪切分散机（福州福尔特机械设备有限公司提供）
五、乳化罐
乳化罐的作用是将一种或多种物料（水溶性固相、液相或胶状物等）溶于另一种液相，并使其水合成为相对稳定的乳化液。
疫苗生产中，水相和油相被分别加入乳化罐中，混合剪切后得到初乳。
再经罐外管线式均质机高剪切乳化后进入混合罐等待分装。
规模化生产中，一般配多台乳化罐交替使用或同时使用。
用于生物疫苗生产的乳化罐必须具备以下特点：
1、罐体材料须采用316L不锈钢
2、罐体结构设计必须考虑人性化设计，使之便于工人操作，必须按无菌生
产要求进行设计，使之符合“cGMP”等规范要求
优点：
1.在线CIP清洗、SIP灭菌(121℃/0.1MPa)。
2.按照卫生级要求设计，结构设计极具人性化，操作方便。
传动平稳，噪音低。
3.适宜的径高比设计，节能，物料混合快，乳化、均质效率高。
4.内罐体表面镜面抛光处理(粗糙度Ra≤0.6μm)；各进出管口、视镜、人孔等工艺开孔与内罐体焊接处均采用拉伸翻边工艺圆弧过渡，光滑易清洗无死角，保证生产过程的可靠性、稳定性，符合“cGMP”等规范要求。