产脂肪酶真菌的筛选
产脂肪酶的菌株筛选方法的研究
产脂肪酶的菌株筛选方法的研究近年来，随着植物油和动物油在食品、医药、农药以及其他行业的广泛使用，脂肪酶的需求量逐渐增加。
脂肪酶是一种具有多种功能的酶，它可以分解脂肪和油脂，用来制造食品添加剂、医药中间体以及其他有用的产品。
发酵技术是获得脂肪酶的重要方法之一，而发酵菌株的筛选是发酵技术的基础和关键步骤，其目的是从微生物资源中筛选出对脂肪酶产生量有明显提高的菌株（颜永涛，2018）。
一般而言，菌株的筛选标准主要有两个，一是筛选的菌株能有效的产出脂肪酶，二是筛选的菌株能兼顾发酵条件的优化。
因此，要求筛选出高产脂肪酶的菌株，必须考虑到发酵条件与产物形成之间的关系。
筛选高产脂肪酶的菌株一般包括多种筛选方法，其中比较常见的是两种：一种是培养基筛选方法，另一种是固定化筛选方法。
培养基筛选方法是在最佳培养基中，根据育种材料的不同（如不同的液体培养基或固体培养基），采用基础发酵条件对菌株进行培养，以获得高产脂肪酶的菌株。
优势在于，培养基筛选方法易于操作，能够及时获得结果，且价格低廉，但这种方法受发酵条件的限制，在某些情况下，成果不太满意。
固定化筛选方法是在发酵过程中，将发酵菌株通过固定化技术（如表面层析法、膜层流法、筛选电泳法）进行筛选，然后再根据筛选出来的菌株的表现和性状，以及细胞高分子量蛋白或细胞酶活性，来识别和分离出高产脂肪酶的菌株。
相比培养基筛选方法，固定化筛选方法更加精确，能够准确识别出高产脂肪酶的菌株，但操作复杂，费时费力，存在技术操作的难度。
另外，结合培养基筛选方法和固定化筛选方法也可以进行脂肪酶菌株的筛选。
例如，采用柔性发酵条件，针对不同的育种材料经过培养基的筛选，从中获得脂肪酶合成量提高明显的发酵菌株，再利用固定化筛选方法进一步筛选出脂肪酶合成量更高的菌株（张静，2019）。
综上所述，要筛选高产脂肪酶的菌株，可以采用培养基筛选方法、固定化筛选方法，也可以结合培养基筛选方法和固定化筛选方法进行操作，以达到所需的目标。
产脂肪酶真菌的筛选
脂肪酶产生细菌的筛选巩素绢（河北农业大学生命科学学院微生物与生化药学，河北保定071001）摘要：从富含油脂的土壤中寻找高产脂肪酶的真菌，以期为扩大脂肪酶的菌源提供材料。
本试验从保定市炼油厂附近土样中，经富集培养、平板筛选得到22株脂肪酶产生菌株，通过复筛得到1株脂肪酶活力较高真菌。
为脂肪酶产生菌以及脂肪酶的工业化生产与应用奠定了基础。
关键词：脂肪酶；筛选；真菌Abstract：The study aimed to seek for the fungi with high yield of lipase from the greasy soil，so as to provide the material for expanding the fungi source of lipase.22strains of fungi producing lipase were isolated by enrichment culture and flat screening methods in soil samples collected from the refinery of Baoding．A stain with higher activity of producing lipase was isolated by re-screening methods.The study laid a foundation for lipase producing bacteria and industrial production and application of lipase to some extent．Key words:Lipase;Screening;fungi前言脂肪酶(Lipase，E.C.3.1.1.3，甘油三酯水解酶)，可在油水界面催化甘油三酯形成甘油二酯、甘油单酯或甘油及游离脂肪酸［1］。
产脂肪酶乳酸菌的筛选及其对奶酪风味的影响
产脂肪酶乳酸菌的筛选及其对奶酪风味的影响产脂肪酶乳酸菌的筛选及其对奶酪风味的影响引言：奶酪作为一种受人们喜爱的乳制品，其独特的风味是由其中的乳酸菌发酵产生的。
然而，乳酸菌中只有少数能产生脂肪酶。
脂肪酶可将乳中的脂肪水解为脂肪酸，这些脂肪酸为奶酪提供了特殊的风味。
本文将探讨产脂肪酶乳酸菌的筛选方法以及其对奶酪风味的影响。
第一部分：产脂肪酶乳酸菌的筛选方法脂肪酶乳酸菌的筛选是探索奶酪风味的关键。
以下是一些常见的筛选方法：1. 纸片法：在培养基上涂布脂肪酶底物，如乳脂肪酸甘油酯，然后在此基础上观察细菌的产酶能力。
产脂肪酶菌株会在纸片上出现透明圈，表示底物被水解。
2. 红雪藻酪蛋白平板法：添加红雪藻酪蛋白的平板培养基，利用产酶细菌使平板发生透明区带来判断。
3. 紫外线灭菌法：在试管中加入产酶菌株和乳脂肪酸甘油酯，利用UV-C紫外线灭菌使菌株破裂释放的酶作用对乳脂肪酸甘油酯进行水解，并观察产酶能力。
第二部分：产脂肪酶乳酸菌对奶酪风味的影响脂肪酶的存在对奶酪的风味影响巨大。
乳脂肪酸通过脂肪酶的作用被水解，产生了多种风味物质，如酸乳、酯类和醛类。
这些物质不仅为奶酪增添了复杂的香味，同时也能够增强奶酪的口感和风味。
此外，酯类化合物还能够产生脂肪感，使奶酪口感更为丰富。
因此，产脂肪酶的乳酸菌对奶酪的风味有着明显的影响。
此外，不同菌株产生的脂肪酶种类和酶活性也有所不同，这将进一步影响奶酪的风味。
因此，在奶酪生产中，选择合适的产脂肪酶乳酸菌菌株是非常重要的。
结论：产脂肪酶的乳酸菌在奶酪生产中起着重要的作用。
通过合理的筛选方法，我们可以获得高效产酶的菌株。
这些乳酸菌通过水解乳脂肪酸产生不同风味物质，丰富了奶酪的风味和口感。
因此，我们应该重视产脂肪酶乳酸菌的筛选与利用，以提高奶酪的质量和口感。
注意：本文为人工智能生成内容，仅供学术参考和个人用途，请勿直接传播和抄袭通过紫外线灭菌法观察产酶能力，可以判断乳酸菌是否具有产脂肪酶的能力。
产脂肪酶菌株的筛选及紫外-光复活诱变
产脂肪酶菌株的筛选及紫外-光复活诱变王金主1，袁建国2，杨丹2，徐军庆2，谭少君2，刘建民2，王元秀1，李峰2*（1.济南大学化学化工学院，山东济南250022；2.山东食品发酵工业研究设计院，山东济南250013）摘要：目的从土壤中分离选育出脂肪酶高产菌株。
方法通过罗丹明B 指示平板法分离出产脂肪酶量高的菌株，通过紫外-光复活诱变选育提高产量。
结果从土壤中筛得脂肪酶产量为6.75U/mL 的菌株白地霉L-8，通过紫外-光复活诱变提高产量到12.08U/mL 。
结论获得了一株高产脂肪酶的白地霉菌株，结果表明从土壤中分离出产脂肪酶的菌株，再通过紫外-光复活诱变提高其产量的高产菌株的筛选方法是可行的。
关键词：脂肪酶；罗丹明B ；白地霉；紫外-光复活诱变中图分类号：Q814.1文献标识码：A文章编号：1672-979X （2011）05-0192-04收稿日期：2011-1-11作者简介：王金主()，男，山东临沂人，硕士研究生，研究方向发酵工程：x @*通讯作者：李峰，男，高级工程师，研究方向发酵工程和酶工程：j @Screening of Lipase Producing Strains and Its Breeding by UV -photoreactivation MutagenesisWANG Jin-zhu 1,YUAN Jian-guo 2,Y ANG Dan 2,XU Jun-qing 2,TAN Shao-jun 2,LIU Jian-min 2,W ANG Y uan-xiu 1,LI Feng 2(1.School of Chemistryand Chemical Engineering,University of Jinan,Jinan 250022,China;2.Shandong F ood &Fermentation Industry Research and Design Institute,Jinan 250013,China)Abstr act:Object ive To isolate and select a high-yield lipase producing strain from soil.Methods A high-yield strain was isolated by flat separation using Rhodamine B as indicator.Its production was improved by ultraviolet photoreactivation mutagenesis.R esult s We obtained Geotrichum candidum L-8from soil.Its lipase yield was improved from 6.75U/mL to 12.08U/mL through ultraviolet photoreactivation mutagenesis.Conclusion A high-yield lipase producing strain was obtained.The methods to isolate it from soil and to improve its production of lipase were feasible.Key Words:lipase;Rhodamine B;Geotrichum candidum;ultraviolet photoreactivation mutagenesis脂肪酶是一种特殊的酯键水解酶[1]，它能水解甘油三酯产生脂肪酸、甘油二脂、甘油单脂和甘油[2]。
产脂肪酶菌株的筛选鉴定及响应面法
摘要本文开展了产脂肪酶菌株的筛选鉴定及响应面法优化发酵工艺试验,确定得到的高产脂肪酶菌株为Youzh-1,对其进行16S rRNA 测序分析,确定其为荧光假单胞菌,在单因素试验的基础上采用响应面法对Youzh-1的发酵工艺进行进一步优化设计,得到最佳发酵工艺为葡萄糖添加量18.825g/L 、牛肉膏添加量25.98g/L 、温度41℃、pH 值6。
在此条件下测得脂肪酶活力为79.87U/mL ,较理论值87.19U/mL 减少了8.39%,证明模型可靠。
关键词脂肪酶;菌株;筛选;鉴定;响应面法;发酵工艺;优化中图分类号TQ925.6文献标识码A 文章编号1007-5739(2022)12-0165-06DOI :10.3969/j.issn.1007-5739.2022.12.046开放科学(资源服务)标识码(OSID ):Screening and Identification of Lipase-producing Strain and Optimization of FermentationProcess by Response Surface MethodologyQIN Hao LIU Kai DENG Wenxi LI Shan YU Shuping WANG Mengyuan GUO Donghui *(College of Life Sciences,Shandong First Medical University,Tai ′an Shandong 271016)Abstract In this paper,the screening and identification of lipase -producing strain and the optimization of fermentation process by response surface methodology were researched.The obtained high lipase-producing strain was Youzh-1,which was determined to be Pseudomonas fluorescens by 16S rRNA sequencing analysis.On the basis of the single factor experiment,the response surface methodology was used to further optimize the fermentation process of Youzh-1.The optimum fermentation process was obtained as follows:the addition of glucose was 18.825g/L,the addition of beef extract was 25.98g/L,the temperature was 41℃,and the pH value was 6.Under these conditions,the lipase activity was measured to be 79.87U/mL,which was 8.39%lower than the theoretical value (87.19U/mL),which proved that the model was reliable.Keywords lipase;strain;screening;identification;response surface methodology;fermentation process;optimization产脂肪酶菌株的筛选鉴定及响应面法优化发酵工艺秦昊刘凯邓文玺李珊于淑萍王梦圆郭东会*(山东第一医科大学生命科学学院,山东泰安271016)脂肪酶在人们的生产生活中发挥着重要作用[1]。
产脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化
2.3.3 不同起始 pH 对产酶的影响 结果显示，起始 pH 对产酶的影响很大，该菌株产
摘 要：从土壤样本中分离出一株具有较高活力的产脂肪酶菌株，初步确定为假单胞菌属。对该脂肪酶产酶条件进 行优化，最佳碳源为糊精、氮源为硫酸铵，最适发酵温度为 30 ℃，最适起始 pH 为 7.0。 关键词：脂肪酶；假单胞菌属；产酶条件
Screening of Lipase Producing Strains and Optimization of the Lipase Production LI Xin- ling1, SUN Xiao- fei1, MENG Nan1, BU Mei- ling1，LIU Jin2
Abstract: This thesis reports that a lipase- produing bacterial strain was isolated from the oilysoil samples and was identified as pseudomonas. The lipase fermentation condition for the strain was optimized by studying on effect of nitrogen sources, carbon sources and other influence factors. The optimum carbon and nitrogen source was dextrin and ammonium sulfate. The optimum pH was 7.0, and the optimum temperature for fermentation was 30 ℃. Key words: lipase; pseudomonas; optimal lipase- producing condition
产脂肪酶细菌的筛选及发酵培养条件的优化
[收稿日期] 2011-05-16;2011-08-12修回[基金项目] 贵州省科技攻关项目 生物酶法生产生物柴油 [黔科合NY(2006)3031];贵州省科技创新人才团队建设项目 贵州省特色动植物资源保护与可持续利用科技创新人才团队 [黔科合人才团队(2009)4007][作者简介] 洪 鲲(1973-),男,讲师,硕士,从事生物化学研究。
E -mail:ken _hong2004@yah *通讯作者:乙 引(1967-),男,教授,博士,硕士生导师,从事植物生理与生物化学研究。
E -mail:yiyin@gz [文章编号]1001-3601(2011)09-0561-0103-03产脂肪酶细菌的筛选及发酵培养条件的优化洪鲲,张豪,乙引*,张习敏(贵州师范大学生命科学学院,贵州贵阳550001)[摘 要]为给扩大脂肪酶的生产源提供基础资料,对富含油脂的67份土壤样品进行了产脂肪酶细菌的筛选及目标菌株发酵培养条件的优化试验。
结果表明:筛选分离出15株脂肪酶产生菌,经过对其发酵液脂肪酶活力的比较,菌株D9-1发酵液脂肪酶活力最高。
目标菌株D9-1产脂肪酶最佳培养条件:最适氮源为1%蛋白胨,最适碳源为1%橄榄油,表面活性剂为1%OP -10,最适发酵温度30 ,摇床转速为170r/m in,发酵培养时间为24h 。
[关键词]脂肪酶;细菌;筛选;发酵;培养条件[中图分类号]S182;S154[文献标识码]AScreening for Lipase -produ cin g Bacterial Strains andOptimization of the Fermentation Con ditionsH ONG Kun,ZH A NG H ao,YI Yin *,ZH ANG X-i min(School of Lif e Sciences ,Guizhou Normal U niversity ,Guiy ang,Guizhou 550001,China)Abstract:15lipase -pr oducing bacterial strains w ere isolated fr om 27soil samples rich in oil and D9-1w as selected as the mo st potential lipase -producing strain through comparing the lipase activity in fermentation broths o f these strains.T he results show ed that the o ptimum nitrog en source is peptone,optimum carbon source is 1%o liv e oil,optimum surfactant is 1%OP -10,optimum temperature is 30 ,and w hen the rotating speed w as 170r/min,the lipase activity in ferm entation broth r eached the highest after 24h.Key words:lipase;bacter ium;screening;ferm entation;fermentation conditio ns 脂肪酶广泛存在于动植物、细菌、真菌和霉菌体内[1-2],具有催化三脂酰甘油及其他一些水不溶性脂类的转酯、水解、酯化、醇解及酯类逆向合成的特性。
高产脂肪酶菌株的筛选及酶学性质的研究的开题报告
高产脂肪酶菌株的筛选及酶学性质的研究的开题报告
一、选题背景及意义
脂肪酶作为一种广泛存在于细菌、真菌和动植物中的酶类，在脂肪水解、饮食营养、生物转化等方面具有重要的作用。
因此，筛选高产脂肪酶的菌株具有重要的研究意义。
目前，虽然已有许多脂肪酶菌株被发现，但其产酶能力参差不齐，产酶量较少，对于一些实际应用仍然存在着不足。
因此，筛选高产脂肪酶的菌株并进行酶学性质的研究，对于进一步了解脂肪酶的生产和应用具有重大意义。
二、研究内容
1.从自然界中筛选高产脂肪酶的菌株，利用液体发酵和固体发酵技术进行发酵，并对产酶量进行分析和比较；
2.对高产脂肪酶菌株的生长条件进行研究，包括温度、pH值、培养基成分等因素对其生长和产酶能力的影响；
3.从高产脂肪酶菌株的菌体中提取酶液，进行酶学性质的研究，包括酶的催化性质、热稳定性、抗离子等性质的分析和比较；
4.开展脂肪酶的应用研究，包括对脂肪水解和饮食营养的实际应用研究。
三、研究方法和步骤
1.从自然界中筛选高产脂肪酶的菌株，采用液体和固体发酵技术进行发酵，并对产酶量进行分析和比较；
2.对高产脂肪酶菌株的生长条件进行研究，包括温度、pH值、培养基成分等因素对其生长和产酶能力的影响；
3.从高产脂肪酶菌株的菌体中提取酶液，进行酶学性质的研究，包括酶的催化性质、热稳定性、抗离子等性质的分析和比较；
4.开展脂肪酶的应用研究，包括对脂肪水解和饮食营养的实际应用研究。
四、预期研究结果和意义
通过筛选高产脂肪酶的菌株，并研究其生长条件和酶学性质，有望发现一些具有高产酶量、高催化效率、热稳定性好等优良性状的脂肪酶菌株。
这些研究成果将有助于推进脂肪酶的生产和应用，为提高脂肪水解和饮食营养等方面做出贡献。
产脂肪酶菌株的筛选、鉴定及发酵培养基优化
was selected and identified as
. The fermentation medium formula was optimized by single factor and response surface methodology as
follows: tributyrin 2.0% ( / ), glucose 9 g/L and urea 8 g/L. Under the condition, the lipase activity was 4.3 U/ml, which was 16.22% higher than that of
将采集的样品分别依次进行富集培养、初筛和初始发 酵复筛。样品经过3次富集培养后，分别取50 滋L菌液上清 涂布于罗丹明B培养基平板，罗丹明B能与脂肪酶降解油脂 产生的脂肪酸特异性结合，产酶菌落周围会生成玫红色， 在波长365 nm紫外灯下呈现橙黄色。将罗丹明B平板放在 波长365 nm紫外灯下进行观察，选取橙黄色圈较大的菌株 进行分离培养，镜检至无杂菌后作为出发菌种，接种于初 始发酵培养基中进行复筛，选出脂肪酶高产菌株[15-17]。 1.3.2 菌种鉴定
富集培养基：酵母膏0.2 g/L，氯化钠0.5 g/L，磷酸氢二 钠3.5 g/L，磷酸二氢钾1.5 g/L，七水硫酸镁0.5 g/L，橄榄油 10 mL，用蒸馏水定容至1 000 mL，121 益灭菌20 min。
初筛罗丹明B培养基[14]：硫酸铵0.5 g，氯化钠4 g，磷酸 氢二钾1 g，七水硫酸镁0.5 g，琼脂粉15 g，三丁酸甘油脂乳 化液100 mL（4% PVA颐三丁酸甘油脂=3颐1，超声乳化），用 蒸馏水定容至1 000 mL，121 益灭菌20 min后，待温度降至 60 益时加入1 mL罗丹明B 溶液（质量浓度＜10 mg/mL），混 匀后倒平板。
产脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化
霞品研究与开发
Ｆｏ ｄＲｅｅ ｒ ｈ Ａｎ ｖ ｐ ｎｔ ｏ ｓａ ｃ ｄＤｅ ｄｏ ｍｅ
２１ ０ １年 ６月
第３ 卷 期 １ ２ 第６ １ ９
产脂肪酶菌株的筛选及产酶条件优化
李 鑫玲 ’孙晓菲 ’孟楠 ’ 卜 ， ， ， 美玲 ’刘进 。
（． １河南科 技大学 食 品与生物 工程学 院 ， 河南 洛阳 ４ １０ ； ． 岛啤酒 （ ７０３ ２青 太原 ） 有限公司 ， 山西 太原 ０ ０ ３ ） ３０ ２
４ 结 语
Ｃ ｏｅｅ ［ ． ｕｒｉｎＲ ｓａｃ ， ０ ，６ ５ ６ ５ ０ ｒ ａ ｔｎｓＪ Ｎ ｔ ｔ ｅｅｒｈ ０ ６２ ： ５ — ６ １ ｉｏ ２ 【】 Ｊｎ ａ Ｍ． ｏｄ ＇－ ｕｉ＇ ｅ ｎ ｒ ｏｏｅ ｕ ｕ ｅＣ ｓ ｏ ３ ａｎｔ Ｒ ｌａ Ｇ ｔ ｒ ｚａｄＭａ ａＤ ｌｒｓＬ ｑ ｅｄ ａｔ ． ｎ ｅｒ ｉ ｒ
摘 要 ： 土壤样本 中分 离出一株具有较 高活力 的产脂肪酶 菌株 ， 步确定为假 单胞菌属。对该 脂肪 酶产 酶条件进 从 初
行 优 化 ， 佳 碳 源为 糊精 、 最 氮源 为 硫 酸铵 ， 适发 酵 温度 为 ３ ， 最 ０℃ 最适 起 始 ｐ 为 ７ 。 Ｈ ． ０
关键词 ： 脂肪酶 ； 假单胞菌属 ； 产酶条件
６・ Ｏ
芎。 ０ 墓４ 。 ０
赡 ３０ ．
速搅 拌均匀 ， 高压灭菌倒板前再用磁力搅拌器混匀 ； 种
子培养 基 （ ： 萄糖 ２ ，Ｎ ２ ．， Ｐ ４ ．， ％）葡 ． （ Ｈ ） ０ ０ ＫＨ Ｏ ０１ ０ ｓ ５ 橄榄油 １ ， Ｓ ７ ． ， 白胨 ２５ ｐ ．； 酵 ． ＭｇＯ ・Ｈ ００ ５ 蛋 ０ ０ ．，Ｈ ７ 发 Ｏ 培养基（ ： 白胨 ２ ， ％）蛋 ． 蔗糖 ０ ， ０ ． 橄榄油 １ ，Ｎ ４￣ ４ ５ ． （ Ｈ ） Ｏ ０ Ｓ
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脂肪酶产生细菌的筛选
巩素绢
（河北农业大学生命科学学院微生物与生化药学，河北保定071001）
摘要：从富含油脂的土壤中寻找高产脂肪酶的真菌，以期为扩大脂肪酶的菌源提供材料。
本试验从保定市炼油厂附近土样中，经富集培养、平板筛选得到22株脂肪酶产生菌株，通过复筛得到1株脂肪酶活力较高真菌。
为脂肪酶产生菌以及脂肪酶的工业化生产与应用奠定了基础。
关键词：脂肪酶；筛选；真菌
Abstract：The study aimed to seek for the fungi with high yield of lipase from the greasy soil，so as to provide the material for expanding the fungi source of lipase.22strains of fungi producing lipase were isolated by enrichment culture and flat screening methods in soil samples collected from the refinery of Baoding．A stain with higher activity of producing lipase was isolated by re-screening methods.The study laid a foundation for lipase producing bacteria and industrial production and application of lipase to some extent．
Key words:Lipase;Screening;fungi
前言
脂肪酶(Lipase，E.C.3.1.1.3，甘油三酯水解酶)，可在油水界面催化甘油三酯形成甘油二酯、甘油单酯或甘油及游离脂肪酸［1］。
微生物脂肪酶比动物脂肪酶酶解作用的pH和温度范围更宽，便于工业化生产获得高纯度酶制剂［2］。
脂肪酶在微生物界分布很广，据不完全统计，目前已有65个属的微生物能够产生脂肪酶［3］。
随着对微生物脂肪酶研究的深入，已发现多种具有不同的酶学性质和底物特异性的微生物脂肪酶，其在水解、酯化、转酯及酯类手性合成等反应中都表现出较好的应用前景［4］。
就微生物脂肪酶而言，虽然在产酶菌株选育、培养条件、酶的性质及工业应用上已进行了多年研究，但由于脂肪酶的结构及性质的多样性、酶的不稳定性、底物的水不溶性、酶的来源不足、提纯困难和应用范围不广泛等问题，脂肪酶的研究进展及工业应用与蛋白酶、淀粉酶相比要慢得多，窄得多［5］。
国内，脂肪酶的研究与开发曾被连续列为3个“五年”攻关项目，但目前对脂肪酶制剂的需求仍主要依赖进口［6］。
因此，该研究拟通过初筛和复筛从富含油脂的土壤中寻找高产脂肪酶的真菌，以期为扩大脂肪酶的菌源提供材料。
1材料与方法
1.1样品
1.1.1供试土样
8个土样分别采自保定市周边植物油厂、餐厅、菜市场、屠宰场等周围富含油脂的土壤。
1.1.2试剂
聚乙烯醇（PV A，聚合度1750±50）购自天津市化学试剂三厂；橄榄油购自上海医药（集团）上海化学试剂公司；其他生化试剂或化学试剂均为进口或国产分析纯。
1.1.3培养基
富集培养基：每升含0.5g(NH4)2SO4，0.1g NH4NO3，0.1g NaCl，0.1g MgSO4·7H2O，0.5g K2HPO4，0.1g FeSO4·7H2O，10mL橄榄油，用0.1mol/L NaOH 调pH8.0。
初筛培养基：每升含0.5g(NH4)2SO4，0.1gNH4NO3，0.1gNaCl，0.1g MgSO4·7H2O，0.5gK2HPO4，0.1g FeSO4·7H2O，20g琼脂，121℃灭菌20min后，于60℃左右加含0.2%溴甲酚紫的聚乙烯醇橄榄油乳化液12mL。
用0.1mol/LNaOH调pH8.0。
PDA培养基：马铃薯200.0g/L，蔗糖20.0g/L，琼脂20.0g/L。
PDB培养基不添加琼脂。
发酵培养基：每升含1.0g(NH4)2SO4，1.0gMgSO4·7H2O，1.0g NaH2PO4，2.0g K2HPO4，10mL橄榄油，20g黄豆粉，10g蔗糖。
用0.1mol/LNaOH调pH8.0。
种子培养基：每升含5.0g(NH4)2SO4，1.0g K2HPO4，0.5g MgSO4·7H2O，20g 葡萄糖，25g蛋白胨，10mL橄榄油。
用0.1mol/L NaOH调pH8.0。
1.2试验方法
1.2.1产脂肪酶菌株的筛选
1.2.1.1富集培养
将采集的土样10g溶于90mL蒸馏水中，充分摇匀，取上清液2mL加入到含20mL富集培养基的l00mL三角瓶中，30℃、200r/min振荡培养2 d。
再次取1mL富集培养液转接到新的20mL富集培养基中，进行第2次富
集。
共富集3次。
1.2.1.2平板分离
将第3次富集培养液采用梯度稀释法稀释后涂布于筛选培养基上，30℃恒温培养72h，紫外灯下观察所长菌落周围有无荧光圈及荧光圈大小，荧光圈直径/菌落直径(HC值)愈大，表示该菌株产脂肪酶能力愈强。
每个梯度作3个平行。
将HC值较大的菌株用划线分离纯化，纯化后接种于PDA斜面4℃保藏。
1.2.1.3菌株复筛
无菌条件下将筛选菌株接种于发酵培养基上，30℃振荡培养48h。
发酵液6 000r/min离心，上清液即为粗酶液。
利用平板扩散法测定粗酶液酶活，比较酶活力的大小，最终获得产酶能力较高的菌株，并斜面保存。
1.2.1.4平板扩散法测定脂肪酶酶活
配制溴甲酚紫显色培养基并倒平板。
冷却凝固后，利用无菌打孔器在平板上打孔，孔径0．8cm。
取粗酶液0．1mL注入孔中。
每个显色平板作2个平行。
将平板置于30℃条件下反应12h后观察变色圈大小，判断粗酶液的酶活大小。
2结果与分析
2．1脂肪酶产生菌株的筛选
2．1．1选择平板初筛
用溴甲酚紫平板对土样进行初筛，获得22株产脂肪酶菌株(表1)，发现5、7、16和18号菌株HC值≥1．5，产酶能力较高，因此对这4株菌株进行复筛。
表1菌株初筛、复筛结果
Table1Screening and rescreening results of strains
序号No．
HC值HC value
初筛
Screening
复筛
Rescreening
1 1.2
2 1.3
3 1.3
4 1.2
5 1.7 1.6
6 1.4
7 1.6 1.5
8 1.3
9 1.2
10 1.3
11 1.4
12 1.3
13 1.1
14 1.4
15 1.4
16 1.5 1.4
17 1.3
18 1.5 1.2
19 1.4
20 1.3
21 1.2
22 1.4
2．1．2平板扩散法复筛
挑取初筛的4株菌株，接种于发酵培养基中，30℃振荡培养48h后，离心得粗酶液，利用平板扩散法测定酶活大小，结果见表1。
可以看出，初筛的4株菌株产脂肪酶能力依次为5号＞7号＞16号＞18号，因此确定5号菌株为目的菌株。
3结论
从富含油脂土壤中分离得到1株产脂肪酶能力较高的菌株，根据菌落及个体形态，查阅相关鉴定手册，初步确定该菌株为黑曲霉。
参考文献
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