产淀粉酶的芽孢杆菌筛选ppt课件
从土壤中筛选产淀粉酶的细菌菌1
从土壤中筛选产淀粉酶的菌株(四川化工职业技术学院食品1131)总述：查资料可知在土壤中从在多种可产淀粉酶的菌种，并且芽孢杆菌是不错的菌种，因此，采集土样，对土壤中的芽孢杆菌进行分离纯化，就可得到理想菌株。
在菌株的初选过程中采用涂布平板法，把配好的培养基灭菌后倒成平板，再把稀释好的土样涂布到平板上，置于适宜的条件下进行培养。
24h后对其进行鉴定，鉴定的方法是在培养好的菌株上滴加淀粉溶液，周围出现透明圈的为产淀粉酶的菌株，并且透明圈与菌落直径的比值越大，说明菌种越纯或菌株的生产性能越高。
然后再进行复选，复选时采用平板划线法或斜面划线法，挑取的菌落为透明圈与菌落直径比值较大的，进行多步筛选就可得到较纯的菌株。
实验流程待测数据：透明圈直径菌落直径摘要：查资料可知枯草芽孢杆菌能产生淀粉酶，因此从四川化工职业技术学院的土壤中筛选产淀粉酶的细菌菌株，利用五点取样采集土样，再用涂布平板法对菌株进行初步培养，在培养出的菌落周围滴淀粉溶液，对周围出现透明圈的菌落在进行平板划线培养，在地如淀粉溶液鉴定，对周围出现透明圈的菌落进行斜面划线培养，就可得到较纯的产淀粉酶的菌株。
引言：芽孢杆菌是人类发现最早的细菌之一。
早在1835年，Ehrenberg所描述的“Vibriosubtilis”即是现在大家熟悉的“枯草芽孢杆菌”，它是由Cohn于1872年正式命名的，现作为芽孢杆菌属(Bacillaceae)的模式菌株[1]。
从生物学特性来讲，枯草芽孢杆菌具有典型的芽孢杆菌特征，其细胞呈直杆状，大小(0.8-1.2)μm×(1.5-4.0)μm，单个，革兰氏染色阳性，着色均匀，可产荚膜，运动(周生鞭毛)；芽孢中生或近中生，小于或等于细胞宽，呈椭圆至圆柱状；菌落粗糙，不透明，扩张，污白色或微带黄色；能液化明胶，胨化牛奶，还原硝酸盐，水解淀粉，为典型好氧菌[2]。
1997年，Kunst F.等人首先完成了枯草芽孢杆菌的完整基因组序列测定，并将结果发表在《Nature》杂志上[3]。
微生物综合实验土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及其淀粉酶活力的测定
微生物综合实验：土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及其淀粉酶活力的测定土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及其淀粉酶活力的测定姓名:李青嵘班级:生工102学号:1014200044同组组员:黄得凤同组组员:张旭霞摘要本实验通过90?水浴20min预处理，杀死无芽孢菌体，再以弱选择性淀粉培养基和稀释涂布平板法对土壤中产淀粉酶芽孢杆菌进行初步筛选，又通过分区划线法对初筛菌株进一步分离纯化，得到两株纯培养的芽孢杆菌。
并通过耐盐试验、明胶试验、糖发酵试验、VP试验、吲哚试验，等多项生理生化实验对筛选出来的菌种进行鉴定，鉴定结果均为蜂房芽孢杆菌。
进一步通过3，5-二硝基水杨酸显色法对菌种的淀粉酶活力进行鉴定，测定结果分别为10.68MMU，12.64MMU。
关键词:淀粉酶，芽孢杆菌，酶活测定1. 前言淀粉酶是催化淀粉水解的一类酶的总称，广泛存在于动物、植物和微生物中。
目前淀粉酶广泛应用多种领域，在发酵工业中淀粉酶可用于淀粉原料的液化及糖化工艺;在食品工业中淀粉酶可用于面包焙烤，使其体积更大，颜色更好，颗粒更柔软;在农业中淀粉酶可作为饲料添加剂，降解饲料中淀粉营养成分以利于动物吸收利用;此外，淀粉酶在医疗卫生、废料处理、纺织印染等领域都有广泛应用。
目前生产应用的淀粉酶主要来源于微生物，并集中在几种细菌和真菌中，尤其以芽孢杆菌所产的淀粉酶较多。
其原因首先芽孢杆菌属(Bacillus)中能产生淀粉酶的菌种较多;其次，芽孢杆菌属产的淀粉酶有较好的应用价值，如凝结芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、嗜热芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌产的淀粉酶具有耐热性;再次，芽孢杆菌应用历史悠久，广泛用于饲料添加剂，其安全性有保证。
本文主要从土壤中筛选产淀粉酶的芽孢杆菌，分离纯化，并进行酶活测定，从而获得有经济价值比较高的菌株。
2. 材料与方法2.1. 实验材料2.1.1. 土样的采集从广州大学B-8门前采集土样,g，每天加入2 g淀粉和10 ml水进行培养5天。
实验 土壤中产淀粉酶菌株的筛选ppt课件
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背景知识
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实验1 土壤中产淀粉酶菌株的筛选（1）
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实验目的
掌握菌种分离与筛选的方法 从土壤中筛选出能够合成分泌淀粉酶的微生物
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实验原理
自然界微生物种类繁多，有些微生物能够以淀 粉作为碳源进行生长繁殖，这是因为它们能够 合成分泌淀粉酶。
当能合成淀粉酶的微生物在含有淀粉的固体培 养基中生长时，会将淀粉酶分泌到菌体周围， 使菌落周围的淀粉水解成为小分子量的糊精、 聚糖和单糖。这些水解产物不能与碘作用，从 而在菌体周围形成透明圈。
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分离
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实验步骤
5.各组做好标记，置于30 ℃恒温培养48 h （倒置培养？？）
6. 产淀粉酶菌株的鉴定（下次课）
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6. 产淀粉酶菌株的鉴定
瓶皿上（点植法：用接 种环在固体培养基表面接触几点），同时用签字笔 按对应顺序对各单菌落进行标号。
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实验步骤
1. 筛选培养基的配制（已完成） 可溶性淀粉2 g，NaCl 5 g，牛肉膏5 g，蛋白胨
10 g，琼脂20 g，水1000 mL。
2. 倒平板（每组6个，每个平板10mL左右）
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实验步骤
3. 土样的采集
各实验室分别取三种不同环境的土样并记录当 时取样环境情况（1-2、3-4、5-6每两小组在同 一个地方进行取样），通常取离地面5～15cm 处的土壤。
菌落被挑起而不致破碎 菌落颜色多样，菌落正反面颜色常不一致 带有泥腥味
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产淀粉酶芽孢杆菌的筛选
酶学特性分析
总结词
通过测定产淀粉酶活性、酶学性质等指 标，对产淀粉酶芽孢杆菌进行深入分析 。
VS
详细描述
通过淀粉平板透明圈法等方法测定产淀粉 酶活性，了解其在不同条件下的酶活性能 表现。同时，通过酶学性质分析，了解产 淀粉酶芽孢杆菌所产淀粉酶的酶学性质， 如最适温度、最适pH值、热稳定性等指 标，为后续的应用提供理论依据。
生化特性分析
总结词
通过测定产淀粉酶芽孢杆菌对各类糖类的利用情况、酸碱指示剂的变色反应等指标，进一步鉴定其生 化特性。
详细描述
通过微量生化管实验，测定产淀粉酶芽孢杆菌对葡萄糖、蔗糖、乳糖等糖类的利用情况，观察其在不 同糖培养基上的生长情况。同时，通过酸碱指示剂的变色反应，观察产淀粉酶芽孢杆菌的代谢产物， 进一步鉴定其生化特性。
有机肥料
产淀粉酶芽孢杆菌可以与有机废弃物一起发酵，制成有机肥料，提供植物所需的营养元 素，同时改善土壤结构和肥力。
生物农药
产淀粉酶芽孢杆菌可以产生抗菌、抗病毒物质，抑制病原菌的生长和繁殖，减少植物病 害的发生和传播。
在环境保护中的应用
废水处理
产淀粉酶芽孢杆菌可以用于废水处理，通过 生物降解作用将废水中的有机物转化为无害 物质，降低废水对环境的污染。
菌种资源保护与利
用
加强产淀粉酶芽孢杆菌菌种资源 的保护和利用，建立菌种库和基 因库，为未来的研究和应用提供 丰富的资源保障。
感谢您的观看
THANKS
对初筛得到的菌株进行发酵条件优化和酶活检测，进一步筛选出具 有更高酶活力的菌株。
分子生物学方法
利用分子生物学方法对筛选出的菌株进行基因序列分析，了解其淀粉 酶基因的类型和结构，为后续的工业化应用提供理论依据。
土壤中产淀粉酶的芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定教案
土壤中产淀粉酶的芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定13级生技426摘要本实验从土壤中分离出能产淀粉酶的芽孢杆菌并对其进行鉴定、保存，实验中涉及菌株的分离纯化、菌株的形态学鉴定和生理生化鉴定，根据伯杰氏细菌学手册鉴定其种属。
实验中通过80℃水浴20min预处理，杀死无芽孢菌体，筛选出芽孢杆菌；再用稀释涂布平板法对芽孢杆菌进行初步筛选；又通过分区划线法对初筛菌株进一步分离纯化；最后用选择性淀粉培养基进行筛选，得到纯培养的产淀粉的芽孢杆菌。
最后并通过耐盐试验、明胶试验、糖发酵试验、VP试验、吲哚试验等多项生理生化实验对筛选出来的菌种进行鉴定。
关键词：淀粉酶芽孢杆菌生化鉴定一、引言芽孢杆菌属(Bacillus)是一类好氧或兼性厌氧，产生抗逆性内生孢子的杆状细菌。
多为腐生菌，主要分布于土壤、动植物体表及水体中。
由于芽孢杆菌属的细菌可以产生多种有用代谢产物，芽孢又是菌体度过不良环境的休眠体。
因此，在工、农业生产上有较高的应用价值。
菌体杆状，直或接近直，0.3 – 2.2X1.2 – 7.0微米。
多数运动，鞭毛典型侧生，形成抗热内生孢子。
在一个孢子囊细胞中，孢子不多于1个。
暴露与空气中时，不妨碍孢子的形成。
革兰氏反应为阳性，仅在生长早期为阳性、阴性。
有机体化能营养，利用多种底物进行严格呼吸代谢，严格发酵代谢或呼吸和发酵二者兼有的代谢。
在呼吸代谢中，最终的电子受体是分子氧，在一些种中可以用硝酸盐代替氧，大多数种产接触酶，严格好养或兼性厌氧。
淀粉酶是一种用途极为广泛的生物催化剂，可应用于面包制造业淀、粉的糖化和液化、纺织品脱浆、造纸、清洁剂工业、化学、临床医学的分析和制药业等。
淀粉酶家族包括α-淀粉酶，β-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶。
二、实验目的1．了解微生物分离纯化的原理及微生物分离纯化常用方法和技术；2．掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理及方法；3．掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力测定的原理及方法；4．培养学生自行设计实验流程、综合分析解决问题及判断实验结果的能力；5．对所学习过的微生物实验方法进行综合技能训练；6．从不同环境土壤样品中筛选出能产淀粉酶的芽孢杆菌，并分析比较各产淀粉酶菌株的产淀粉酶活力及总结各芽孢杆菌在土壤中的分布情况。
淀粉酶的生产精品PPT课件
淀粉是什么？
淀粉是由许多葡萄糖分子以α-1， 4或α-1，6糖苷键连接而成的大分 子物质。淀粉有直链淀粉和支链淀 粉之分。
淀粉酶是什么？
淀粉酶属于水解酶类，是催化淀 粉、糖原、糊精中糖苷水解的一类酶 的统称。
根据水解淀粉的方式不同，主要 的淀粉酶有α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡 萄糖淀粉酶、脱支酶、环糊精葡萄糖 转移酶等。
1.2 α-淀粉酶的水解反应
淀粉在α-淀粉酶的作用下很快 被切割成分子较小的糊精、低聚糖、 麦芽糖、葡萄糖等，引起粘度下降， 对碘呈色反应为篮－紫－红－无色， 又叫液化酶。
水解直链淀粉，首先将淀粉降解为 寡糖、麦芽三糖和麦芽糖，然后将寡 糖、麦芽三糖进一步降解为麦芽糖和 葡萄糖。
水解支链淀粉，由于不能水解α1.6糖苷键，产物除麦芽糖、少量葡 萄糖外，还有带α-1.6键的小分子极 限糊精。
种子瓶培养（三角瓶） 麦麸玉米粉培养基，32-34℃，
70-72h，培养至长出大量菌丝及黄 绿色孢子。
种曲培养（曲盒） 培养基与种子瓶相同，接种量0.5-
1.0％，料层厚1cm，培养3天。
厚层通风培养 麦麸谷壳培养基接种量0.5％，34-
36℃，28h。
产品 培养好的麸曲直接烘干即为工业级
粗酶，水浸醇沉后粉碎加糖可作为助 消化药物。
（三）β-淀粉酶为外切酶 （四）作用淀粉时还原性增加，但粘度不易下降，糊
化缓慢 （五）β-淀粉酶较α-淀粉酶分子量大 （六）水解作用：
1、直链淀粉：可以完全水解成麦芽糖 2、Leabharlann 链淀粉：麦芽糖和大分子β-极限糊精
2.3 植物β-淀粉酶的提取
（一）麦麸提取 β-淀粉酶
（二）从甘薯淀 粉废液中提取 β-淀粉酶
产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定
孢杆 菌 ， 枯 草 芽孢 杆 菌 的产 淀粉 酶 能 力优 于蜡 样 芽孢杆 菌 。 关键词 ： 芽孢 杆 菌 ； 淀粉酶 ； 分 离； 鉴 定
Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ａｍ ｙ ｌ ａ ｓ ｅ －Ｐｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｉ ｎｇ Ｂａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ Ｗ ＡＮＧ Ｌｅ ｉ ．ＣＨＥＮ Ｙｕ － ｆ ｅ ｉ ．ＹＡＮＧ Ｌ ｉ ｕ
产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定
王磊 ， 陈字飞 ， 杨柳
（ 吉林 工商学 院 食 品工程学院 ， 吉林 长春 １ ３ ０ ５ ０ ７ ）
摘
一
要： 从土壤 中分 离筛选出产淀粉 酶的茵株 ， 经淀粉培养基初 筛后 ， 采用Ｄ Ｎ Ｓ法对发酵提取的粗酶液进行 总酶活和
淀粉酶活力的测定， 通过 形态观察和 生理生化反 应对筛出的菌株进行鉴定。 结果表 明： 分 离到 ４株产淀粉酶 芽孢杆
实验八土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定
本项目是在2006年已通过专家组论证的综合性 实验项目“土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的分离纯化、 初步鉴定及菌种保藏”的基础上再增添了“对所 分离到的各菌株进行摇瓶发酵检测其淀粉酶活力、 并结合生态环境对各菌株的淀粉酶活力进行比较
分析”等内容。
二、涉及的内容或知识点
①土样的无菌采集及土样的生态环境调查；②培养基的制备 及灭菌；③无菌操作、接种及微生物的培养技术；④采集的 各环境土壤样品中产淀粉酶芽孢杆菌的的分离（采用稀释倒 平板法结合选择培养基分离技术等多种方法分离微生物）； ⑤微生物的纯化技术（采用平板划线技术纯化菌株）；⑥微 生物的形态学检查（包括对已纯化的各菌株进行革兰氏染色 及形态观察、芽孢染色、菌落特征观察）；⑦通过多项生化 试验对分离到的各菌株进行初步鉴定（主要包括耐盐试验、 淀粉水解试验、V.P试验、吲哚试验 、糖发酵试验、柠檬酸 盐试验及明胶液化试验等）；⑧菌株的摇瓶培养技术；⑨发 酵液淀粉酶活力的测定；并结合生态环境对各菌株的淀粉酶 活力进行比较分析；通过数据统计分析不同环境土样的产淀 粉酶芽孢杆菌的分布情况 ⑩ 菌种的保藏
出研究中的不足、改进的地方及尚待进一步解决的问题、自己
的收获和体会等。
四、实验的基本框架
调查研究及查阅充分的文献资料 环境 采集不同环境土壤的土样 各环境的土壤样品悬液制备 的分离培养 ）及淀粉水解试验 验以初步鉴定该菌株 确定采集样品的生态 土壤的保存运送 土壤悬液的热处理 对分离到的单菌
采用稀释法并结合选择培养基分离法进行产淀粉酶芽孢杆菌 菌株的进一步纯化
2、实验方案要求
写出实验的目的要求、实验原理、材料与方法（包括所需药
品和仪器设备、具体的实验步骤、实验数据的处理方法等）、 注意事项及可能存在的问题、减少这些问题出现的措施和办 法、预期结果及参考文献。
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实验目的
学习掌握从环境中分离产淀粉酶菌株以及 菌株初步鉴定的方法
目的
获得产淀粉酶的菌株并对其进行初步的鉴 定
培养综合利用微生物学、生物化学等相关 知识，自行设计、实施并判断实验结果的 能力
巩固微生物分离纯化、细菌保藏等技能， 对所学习过的微生物学实验方法进行综合 技能训练
初筛
在单菌落处滴加碘液，挑取有透明圈 的单菌落划线分离，在37的培养箱中 培养2天。
鉴定
1、将单菌落点种落接到淀粉平板上纯培养，在37摄氏 度培养2天。
2、在培养后的平板上滴加碘液，用直尺测量透明圈 的大小。
实验材料 玻璃器 皿`
烧杯（500ml） 锥形瓶（250ml）
培养皿 涂布棒 移液枪
试管
其他设备及仪 器`
超净 工作台、生化培养箱、高压蒸 汽灭菌锅、水浴锅、培养接种器具，
等
实验原理
一
二
三
产淀粉酶的芽 孢杆菌含量在 不同土壤中含 量也不同，实 验前进行预埋 工作，能使土 壤中产淀粉酶 的细菌含量增 加。待实验前 取样即可
在只用淀粉 充当碳源的 选择培养基 中，只有能 产生淀粉酶 利用淀粉的 菌体能成为 优势菌种， 从而得到富 集
细菌富集一 段时间后， 生长环境不 利，会产生 芽孢，再在 80-90 温度 下杀死菌体 ，可使芽孢 得到富集
五
在已确定的芽 孢杆菌情况下 ，在菌落处滴 加碘夜来观察 透明圈情况。
配无菌水，并将其分装 到7个试管中,每只9ml 。（7个管）
实验材料
试验样 品处` 理
实验前选取淀粉密集的地方（面粉厂附近）取样品土壤， 用塑料袋将样品保存好，留做实验之用。
培养` 基
1、富集培养基： 10g的可溶性淀粉，蛋白胨10g， 酵母膏 3g/L、Nacl 2g、
蒸馏水1000ml (2倍浓缩100ml/500ml锥形瓶)
25g/L NaCl5g/L PH7.2—7.4