尿蛋白电泳操作规程
尿微量白蛋白(U-ALB)免疫比浊定量QuikRead仪器法)作业指导书
尿微量白蛋白（U-ALB）免疫比浊定量QuikRead仪器法)作业指导书1.实验原理QuikRead U-ALB是一种以微粒子包被的抗人白蛋白血清为基础的免疫比浊试验。
存在于样本中的白蛋白和微粒子反应，溶液中浊度的最终变化通过QuikRead仪器被测定。
尿样本被加入缓冲液中在同一比浊杯中进行分析测定。
试剂被预先定标，特定批号的标准曲线被记录在试剂盒提供的磁卡当中。
QuikRead U-ALB和使用比浊法获得的结果相关性良好。
2. 标本采集2.1 标本采集前病人准备：无需特殊准备2.2 标本种类：夜尿或随机尿2.3 标本要求：QuikRead U-ALB试剂盒直接用尿样本（未稀释的样本）进行检测。
尿样本中不建议添加防腐剂。
夜尿样本的采集：采集的夜尿样本，要求至少采集6小时的夜尿。
记录采集尿样本的时间和尿量。
白蛋白的排泄率可根据以下公式计算：总尿量（ml）*QuikRead U-ALB浓度值（mg/l）/采集时间（min）=尿微量白蛋白的排泄率（ug/min）随机尿样本：在随机尿样本中，使用首次晨尿样本可获得十分可靠的结果。
贮存样本在测试以前要求尿样本达到室温。
3. 标本储存：尿样本2-8℃可贮存14天。
尿样本不应当被冰冻保存。
4. 标本运输：室温运输5. 标本拒收标准：细菌污染、乳糜尿6. 试剂6.1 试剂名称：QuikRead U-ALB 试剂6.2 试剂生产厂家：Orion coporation Orion Diagnostica6.3 包装规格：50Test/kit6.4 试剂盒组成：6.5试剂储存条件及有效期：试剂2-8℃贮存。
缓冲液可在室温下（2-25℃）贮存。
试剂的稳定性可达到试剂盒上印的有效期。
7. 仪器设备7.1仪器名称：QuikRead 分析仪7.2仪器厂家：基恩科技有限公司7.3仪器型号：QuikRead 型7.4仪器通道选择：采取两个发光二极管：654μm,950μm;吸收范围：0.0-2.57.5仪器校准程序：每个试剂盒有一个已知的校正数据，它记录在磁卡上，用以确定分析曲线，让磁卡通过仪器上读卡器，该数据信息就能送入QuikRead仪器之中，然后仪器就处于等待使用状态。
SDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程(非还原&还原)
GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICESDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程（还原&非还原）编号：SDS-PAGE蛋白电泳检测起草人：部门审核：QA审核：替代：□新订：□日期：日期：日期：修订号：0批准：年月日生效日期：年月日文件分发部门：GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICESDS-PAGE蛋白电泳检测编号：SDS-PAGE蛋白电泳检测一目的保证产品电泳电泳分子量和纯度检测按规范进行和检定结果的准确可靠。
二范围用于规范电泳电泳分子量和纯度的测定。
三责任质量控制部人员。
四内容1试剂与水：所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。
2 溶液的配制2.1A液：1.5MTris·HCl pH8.8称取90.75gTris碱(分析纯)加适量的超纯水（约400ml）溶解,用6M盐酸调pH值至8.8,加超纯水定容至500 ml。
贴上标贴，室温储存。
此溶液有效使用期限为三个月。
6M盐酸（调pH用）：浓盐酸50ml，加50ml纯化水，混匀。
2.2、B液: 0.5MTris·HCl pH6.8称取60.5gTris碱(分析纯)加适量的超纯水（约400ml）溶解,用6M盐酸调pH值至6.8,加超纯水定容至1000 ml。
贴上标贴，室温储存。
2.3C液: 30%丙烯酰胺-0.8%N,N-亚甲基双丙烯酰胺溶液称取300g丙烯酰胺(分析纯),8gN,N’-甲叉双丙烯酰胺(分析纯), 加适量的超纯水溶解(一般500ml，因为丙烯酰胺具有溶胀性的特点),再定容至1000 ml,用滤纸过滤。
贴上标贴，避光4℃保存。
2.4D液:1%SDS称取2gSDS(分析纯),用超纯水溶解至200 ml.贴上标贴，4℃保存。
2.5E液:10%过硫酸铵GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICESDS-PAGE蛋白电泳检测编号：称取10g过硫酸铵(分析纯)，用超纯水溶解至100 ml，以1ml/支分装，贴上标贴，－20℃保存。
SDS-PAGE电泳标准操作流程
SDS-PAG电泳标准操作规程（网上）3. 程序:端平齐。
放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。
3.1.2分离胶的配置3.122 灌胶混匀后用移液枪将凝胶溶液沿玻棒小心注入到长、短玻璃板间的狭缝内（胶高度距样品模板梳齿下缘约1cm）。
3.1 . 2.3液封在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空气，使胶面平整。
静置约30min观察胶面变化，当看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限时，表明胶已完全凝固，倒掉上层水，并用滤纸吸干残留的水液。
3.1.3浓缩胶的配置混匀后用移液枪将凝胶溶液注入到长、短玻璃板间的狭缝内（分离胶上方），轻轻加入样品模板梳，小心避免气泡的出现。
约30分钟，聚合完全。
3.2.1安装电泳槽将制备好的凝胶板取下，小心拔下梳子。
两块10%勺凝胶板分别插到U形橡胶框的两边凹形槽中，可往上提起使凝胶板紧贴橡胶。
将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上，其下缘与贮槽框下缘对齐，放入电泳槽内。
倒入1X tris-gly 电泳缓冲液。
3.2.2 样品处理对于蛋白样品直接取80 pl的样品，依次加上20Q 5x buffer （加了B-巯基乙醇），混匀。
对于菌体或组织等固体样品，取少量样品加100ul 2x buffer （加了B-巯基乙醇）煮沸10分钟。
3.2.3 加样用移液枪取处理过的样品溶液10 p l，小心地依次加入到各凝胶凹形样品槽内，marker加入到其中一个槽内，为区别两块板，marker可加在不同的孔槽中。
3.2.4电泳将电泳槽放置电泳仪上，接通电源，正负极对好。
电压调至约150v保持恒压。
待溴酚蓝标记移动到凝胶底部时，关电源，把电泳缓冲液倒回瓶中。
3.2.5剥离胶把电泳槽取出，两块板拿下来，用刮片从长短玻片中间翘起，再把浓缩胶刮掉，取下。
3.3. 染色放于加有R250染色液的染色皿中，染液漫过胶即可，置于摇床上，转速约为45r/min，时间约1小时,完成后染液倒掉并用水洗掉染液。
3.4. 脱色取出染色过的胶放于加有脱色液的染缸里，脱色液漫过胶即可，置于摇床上，转速约为45r/min，时间约1小时，本底色脱净，条带清晰可见即可，完成后倒掉脱色液。
尿液蛋白质测定(手工法)操作规程sop
尿液蛋白质测定（手工法）操作规程sop
一、项目名称：尿液蛋白质定性检查
二、方法：磺基水杨酸法
三、原理：磺基水杨酸为生物碱试剂，在酸性环境下，其阴离子可
与带正电荷的蛋白质结合成不溶性蛋白盐而沉淀。
四、试剂：10%磺基水杨酸乙醇溶液。
五、仪器：手工法
六、操作步骤：
1、取试管加尿液3ml。
2、滴加10%磺基水杨酸溶液3－4滴，形成界面。
3、如尿呈浑浊，表示有蛋白质存在，混浊深浅表示含量的多
少。
七、结果判断：
●阴性：尿液外观仍清晰透明，不呈浑浊。
●微量（+/-）：轻微浑浊，隐约可见。
●阳性（+）：明显的白色混浊，但无颗粒出现。
（++）：稀薄乳样浑浊，出现颗粒。
（+++）：混浊，有絮片状沉淀。
（++++）：絮状混浊，有大凝块下沉。
八、参考范围：正常人为阴性。
九、标本要求：
1、标本应新鲜，并及时送检。
2、尿液标本应避免经血、白带、精液、粪便等混入。
3、容器应清洁、干燥。
十、临床意义：分为功能性、体位性、病理性蛋白尿，后者见于肾
炎、肾病综合症等。
十一、注意事项：
1、此法比较敏感。
2、如尿液浑浊，应先离心或过滤。
3、强碱性尿可出现假阴性，应加5%醋酸溶液数滴酸化后再做试
验。
4、有机碘造影剂、超大剂量使用青霉素等均可致假阳性。
5、尿中含高浓度尿酸或尿酸盐时，可呈假阳性。
十二、参考文献：
全国临床检验操作规程（第3版）
十三、
编写者：
制定日期：
修改日期：
科主任对规程认可：。
SDS-PAGE蛋白电泳标准操作规程
SDS-PAGE蛋白电泳标准操作----(纯度检测)一.目的：检测蛋白质的纯度是否达到生产抗体的要求。
二.依据：《分子克隆手册》，Ab-mart公司内部标准。
三. 职责：质量控制部。
四.试剂与水：所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。
五. 器皿与耗品：所有玻璃器皿使用前用玻璃清洁剂清洗, 80℃烤干。
tube、tip一次性使用。
六. 仪器设备：电泳仪（电源1--300V）电泳槽灌胶模具染色具凝胶扫描仪七. 环境要求：相对洁净环境，室温。
八. 溶液的配置：1.A液：1.5MTris·HCl pH8.8称取18.15gTris碱(分析纯)加适量的超纯水溶解,用浓盐酸(分析纯)调pH值至8.8,加超纯水定容至100 ml。
贴上标贴，4℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）2.B液: 1MTris·HCl pH6.8称取12.1gTris碱(分析纯)加适量的超纯水溶解,用浓盐酸(分析纯)调pH值至6.8,加超纯水定容至100 ml。
贴上标贴，4℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）3.C液: 30%丙烯酰胺称取29.2g丙烯酰胺(分析纯),0.8gN,N’-甲叉双丙烯酰胺(分析纯), 加适量的超纯水溶解,再定容至100 ml,用滤纸过滤,。
贴上标贴，避光4℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）4.D液:10%SDS称取10gSDS(分析纯),用超纯水溶解至100 ml.贴上标贴，室温储存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）5.E液:10%过硫酸胺称取10g过硫酸胺(分析纯), 用超纯水溶解至100 ml。
贴上标贴，-20℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）6.F液:TEMED(amersco)7.电泳缓冲液(10X)称取60.57g Tris碱(分析纯),288.268g甘氨酸(分析纯),20gSDS(分析纯),加超纯水定容至2000ml，临用前加超纯水稀释10倍，贴上标贴，室温储存。
24小时尿蛋白定量操作规程
24小时尿蛋白定量操作规程
以下是24小时尿蛋白定量操作规程的一般步骤：
准备：
1. 确保实验室和试剂处于清洁有序的状态，并根据需要准备所需的试剂和设备。
2. 需要24小时尿样。
操作步骤：
1. 在清晨起床时，用清洁的容器收集全部排尿，并记录开始时间。
2. 将收集到的尿样倒入带有标记线的24小时尿收集容器中。
3. 在24小时内，将生成的所有尿液都收集到同一个容器中，确保不漏尿。
4. 在收集期间，将尿液保存在冰箱中或进行适当的冷藏，以避免蛋白质降解。
5. 在24小时后的同一时间结束尿液收集，并记录结束时间。
6. 将尿液进行充分混合。
7. 紧接着，取1-2mL的混合好的尿液样本，转移到干净的离心管或容器中，并进行标签。
8. 将尿液样本离心10-15分钟，以去除任何固体颗粒。
9. 将离心管中的尿液转移到分析用的小试管中，准备进行尿蛋白定量检测。
10. 根据所使用的具体检测方法，按照该方法的操作规程进行测量，并记录结果。
注意事项：
1. 24小时尿蛋白定量需要收集所有尿液，包括清晨第一次排尿。
2. 在尿液收集期间要保持卫生，以避免尿液受到污染。
3. 尿液样本需要及时冷藏或保存在冰箱中，以避免蛋白质降解。
4. 操作过程中要注意使用一次性手套和其他个人防护用具，以避免污染尿样。
5. 操作要规范，确保准确性，避免任何可能影响尿蛋白定量结果的因素。
SDS-PAGE电泳SOP
SDS-PAGE电泳标准操作规程1.目的：制定本规程以规范还原性SDS-PAGE和非还原性SDS-PAGE电泳方法分离蛋白的操作过程。
2.范围：抗原或是抗体的定性鉴定、纯度鉴定和相对定量比较。
3.责任：质量分析人员熟悉并遵守该标准操作规程。
4.定义：N/A5.设备、材料和试剂：5.1设备、材料设备名生产商型号/货号设备编号备注电泳仪伯乐PowerpacHC TM HV JS026垂直电泳槽伯乐Miniprotean JS025干式恒温浴K30 JS045离心机eppendorf F-45-12-11 JS020单道移液器（10ul,100ul）Eppendorf Research plus JH07931,GH15898冰箱TCL BCD-211KD3 N/A摇床QILIM BEIER N/APH仪梅特勒5.2试剂试剂名称生产商货号批号APS国药集团化学试剂F20111213甲醇国药集团化学试剂20130407 冰醋酸国药集团化学试剂130420考马斯亮蓝R-250 国药集团化学试剂20130322 Tris-HCl 国药集团化学试剂201300422 甘油国药集团化学试剂F201000115 溴酚蓝国药集团化学试剂20120929 无水乙醇国药集团化学试剂甘氨酸国药集团化学试剂SDSDTTProtein Marker盐酸国药集团化学试剂2×PAGE 7.5%凝胶制备试剂盒Promoton PG111 分离胶缓分离胶溶液4%浓缩胶Promoton 浓缩胶预混液6.溶液配制6.1分离胶以1mm板，配两块为例：取7.5%的分离胶缓冲液和分离胶各5ml混匀，再向其加入10%的APS溶液100μl混匀。
6.2 浓缩胶以1mm板，配两块为例：取浓缩胶的预混液4ml，向其加入10%的APS溶液40μl混匀。
6.3 上样缓冲液（loading buffer）：6.4 10%过硫酸铵称取1g APS，加入10ml纯水搅拌溶解（现配现用）也可储存4~8℃冰箱中保存，保存期为1-2周。
尿蛋白 检测方法
尿蛋白检测方法
尿蛋白的检测主要有尿蛋白定性试验、尿蛋白定量测定、尿蛋白电泳分析和尿微量白蛋白检测。
1. 尿蛋白定性试验：通常指普通尿常规检查，一般留取一试管的晨尿，晨尿要保证空腹6-8个小时，晨起第一次排尿时取中段尿。
然后用加热醋酸法、磺柳酸法或试纸法检查，如果有尿蛋白即报告阳性，但不能测出尿蛋白的量。
2. 尿蛋白定量测定：需要将24小时的尿液完全留下后混合，记录尿量，选取部分标本通过化验检查尿蛋白的浓度，再计算出24小时尿蛋白的总量。
可以帮助诊断肾脏疾病的严重程度，如果尿蛋白量过大，可能需要做肾穿刺活检。
3. 尿蛋白电泳分析：也需要取晨尿，取样本尿液，使尿液中的蛋白做电泳，确定是大分子蛋白、中分子蛋白，还是小分子蛋白。
根据蛋白成分的不同，确定肾脏受累部位。
4. 尿微量白蛋白检测：比较建议在空腹6-8个小时以后，留取晨起第二次或第三次的尿液，可以早期发现是否存在尿蛋白的情况。
除上述检查外，还需要完善一些血液相关检查，确定有没有其他继发性因素参与，引起尿蛋白。
根据患者具体情况，有可能还需要做肾穿刺活检，加以明确诊断，给予相应的治疗。
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尿蛋白电泳操作规程
一．项目名称
尿蛋白电泳（HYDRAGEL PROTEINURIE）
二．检验方法名称
SDS－琼脂糖凝胶区带电泳
三．方法学原理
在含有多量的阴离子去垢剂十二烷基磺酸钠（SDS）液体中，蛋白质可与其连接，形成SDS —蛋白质复合物。
这种复合物蛋白本身的构造已经破坏，他们都表现出相同的构造和相同的负电荷。
当这种SDS—蛋白质复合物在具有适当筛选功能的介质中电泳时，如在含高浓度琼脂糖的HYDRAGEL 5 PROTEINURIE凝胶上电泳时，蛋白质按它们的分子量大小进行分离。
在HYDRAGEL 5 PROTEINURIE凝胶上能清楚分离来源于肾小管（分子量＜65-70Kda)还是来源于肾小球（分子量＞65-70KDa）的蛋白质，因此尿蛋白不仅能被检测到，而且能对蛋白来源进行分类（肾小球，肾小管性和混合性）。
四．方法学溯源
自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。
五．仪器
（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)
（二）分析和计算参数：
1．处理量：约14个样本/小时
2．所需样本量：5ul
3．检验时间：约50分钟
4．重复性：有良好的批内和批间重复性
5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）
电流0－500mA
功率0－100W
六．试剂及配套品
（一）试剂
1．HYDRAGEL 5 PROTEINURIE试剂盒
（1）商标：SEBIA
（2）包装规格：50测试
（3）货号：PN4115
2．脱色液
（1）商标：SEBIA
（2）包装规格：Pack for 10×100ml
（3）货号：PN4540
（4）成分：柠檬酸
3．洗涤液
（1）商标：SEBIA
（2）包装规格：Pack for 10×80ml
（3）货号：PN4541
（4）成分：叠氮钠
（二）配套品
尿蛋白质控
（1）商标：SEBIA
（2）包装规格：Pack for 5×1ml
（3）货号：PN4781
七．操作步骤
㈠开机，启动电泳仪。
㈡打开密闭的凝胶片盒，取出凝胶片并放在关闭的凝胶片盒上，用滤纸条轻柔、迅速地吸去凝胶片槽孔中的多余水分，在每一槽孔内加入5ul已处理的尿样本，注意不能有气泡，在每次加样前应擦拭移液器尖端，在整个加样过程千万不可触及槽孔的底部。
㈢选择« PROTEINURIA 1*5 »程序进行一个凝胶片的电泳，或者« PROTEINURIA 2*5 »程序进行两个凝胶片的电泳。
㈣取出缓冲条固定在电极架上，当放一个凝胶片时将120ul蒸馏水或去离子水加在电泳舱的温控板上偏下中间处，或者在放两个凝胶片时，在偏下的左半侧和右半侧各加100ul的蒸馏水或去离子水；将凝胶片底边紧靠框架底边，边缘对齐边线，略弯曲凝胶片慢慢放平，注意凝胶片下面勿出现气泡。
㈤自然放下支架，关上电泳舱盖，按下键盘左侧的绿色箭头“START”键，电泳开始，确保仪器右侧的空气通道不被堵塞。
㈥电泳仪自动发出蜂鸣声,提示电泳结束，打开电泳盖，将加样梳和缓冲条丢弃，取出已烘干的胶片，用湿纸巾擦拭电极和温控板，将胶片固定于凝胶支架上放入染色空间中，在检查染色液瓶内是否有300ml染色液，脱色液瓶内是否有1000ml脱色液，保存液容器内是否有300ml保存液以及是否排空了废液瓶后，选择«Proteinuria»染色程序并按“start”键开始染色。
㈦在染色、脱色以及干燥步骤完成后，电泳仪自动发出蜂鸣声，取出凝胶支架并取下已干燥的凝胶片，可用湿软的纸擦干凝胶片背面的塑料支持膜。
㈧关机。
八．参考范围
本试验是定性结果。
九．临床意义
㈠生理性蛋白尿：尿蛋白含量是很低的，通常低于120mg/24h，男女之间无明显差异。
主要是白蛋白，有时可有极微量的转铁蛋白或免疫球蛋白，当尿蛋白＞120mg/24h时，应考虑为病理性蛋白。
对阳性的尿蛋白（＞120mg/24h）应注意随访。
㈡肾小球型蛋白尿：尿蛋白其特征为：分子量＞65-70KDa（如白蛋白、转铁蛋白和IgG），电泳条带显示位置在样本加样点与白蛋白部分之间，白蛋白是其主要组分。
㈢肾小管型蛋白尿：其蛋白特征为：分子量＜65-70KDa，电泳条带位于白蛋白和凝胶片阳极端之间。
如α1－微球蛋白，游离轻链单体，β2－微球蛋白，视黄醇结合蛋白(RBP)，溶菌酶，单纯性肾小管型蛋白尿中白蛋白只占少部分。
㈣混合型蛋白尿：其蛋白特征为肾小管及肾小球的蛋白同时并存。
通过此方法我们可以很容易地对肾脏疾病作早期诊断/鉴别诊断及分型、治疗效果的观察、肾活检（属创伤性诊断）前的筛查、甚至代替肾活检。
十．标本要求
㈠取24小时的新鲜尿液，必要时样品在2℃～8℃可保存一周。
冷冻的样本可保存一个月。
冷冻样品中加入HEPES 0.1 M (pH 6.75)和叠氮钠0.02g/dl，则可提高保存的稳定性。
勿用硼酸做为防腐剂。
解冻后样本可产生蛋白变性导致的细小点样痕迹。
㈡取20ul稀释液（这种液体很粘稠，吸管取时要保持垂直，慢慢吸，保证无气泡），放入小试管底部，保证粘稠液体不粘在管壁上，加80ul纯尿液，旋涡混匀5秒钟。
如果尿蛋白＞0.2g/dl，则尿液先用盐水稀释至0.2g/dl左右，然后再按下列标准程序操作。
注意：混浊的尿样本（未稀释的或浓缩的）点样后很难渗透到点样器的末端，建议使用离心法（例如：3000转数/分，10分钟）或者过滤法（例如：0.45um孔径滤过器）来除去杂质微粒。
十一. 操作注意事项
㈠为达到最佳检测效果，同一试剂盒内的所有组分必须一并使用。
㈡用滤纸吸去凝胶表面多余液体时，接触时间不能太长，应快速移去，以免凝胶脱水。
㈢注意先挂缓冲条再放凝胶片，缓冲条取出时应均匀挤捏使缓冲液能分布均匀。