哺乳动物红细胞膜的通透性检测
实验02 细胞膜的通透性观察

实验二细胞膜的通透性观察一、实验目的1. 了解溶血现象及其发生机制,了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞膜的速度;2. 了解并掌握细胞渗透实验的原理;3. 熟悉其操作方法。
二、实验原理将红细胞分别与各种等渗溶液混合,由于红细胞膜对不同溶质的通透性不同,使得不同溶质透入细胞的速度相差甚大,有些溶质甚至不能透入细胞。
当溶质分子进入红细胞后使其分子浓度增加,即引起胞内渗透压升高,水分子则从渗透压低的胞外侧向渗透压高的胞内侧透入,使细胞膨胀,当膨胀达到一定程度时,红细胞膜破裂,血红蛋白逸出,发生细胞溶血现象。
此时,光线较易通过溶液,原来不透明的红细胞悬液突然变成红色透明的血红蛋白溶液。
由于不同溶质进入细胞的速度不同,故它们诱过红细胞发生溶血的时间也不相同,因此,可通过测量溶血时间来估计细胞膜对各种物质通透性的大小。
三、实验用品1.试剂:1) 0.9%生理盐水;2) 2种低渗溶液:0.017mol/L 氯化钠和0.032mol/L 葡萄糖;10 种等渗溶液:0.17mol/L 氯化钠、0.32mol/L 葡萄糖、0.17mol/L 氯化铵、0.17mol/L 醋酸铵、0.17mol/L 硝酸钠、0.12mol/L 草酸铵、0.12mol/L 硫酸钠、0.32mol/L 甘油、0.32mol/L 乙醇、0.32mol/L 丙酮。
2.材料: 鸡血3.仪器设备:50ml 烧杯、10ml 移液管、小试管、橡皮吸耳球、试管架等。
四、方法与步骤1.鸡红细胞悬液的制备:取50ml 小烧杯一只,加1 份鸡血和10 份0.17mol/L 氯化钠溶液,形成一种不透明的红色液体,此即稀释鸡血;2.溶血现象的观察:取试管1支,加入10ml 蒸馏水,再加入1ml 制备好的鸡红细胞悬液,注意观察溶液颜色的变化,由不透明的红色悬液变成透明的血红蛋白溶液(红细胞发生破裂,造成100%红细胞溶血,使光线比较容易透过溶液);3.红细胞的渗透性取试管一支,加入0.17mol/L 氯化钠溶液10ml,再加入1ml 制备好的鸡红细胞悬液,轻轻摇动,混匀后静置于温室中,观察试管中发生溶血的时间及其变化。
细胞膜的通透性及胞间连丝的观察

实验材料
1. 材料:含适量肝素的鼠血。 2. 实验仪器
小烧杯,试管,试管架,刻度吸管,注射器,秒表等。
3. 试剂
乙二醇、丙三醇、葡萄糖;甲醇、乙醇、丙醇
实验方法
1 .相对分子质量大小对膜通透性的影响
在编号的三支试管中,分别加入2ml的1mol/L 等摩尔 浓度的乙二醇、丙三醇、葡萄糖高渗液,分别滴加两滴血 液,用手指按住管口,倒置一次,观察溶血时间,最长延 长至10分钟,记录溶血时间、实验结果。
未溶血
溶血
渗入红细胞的溶质能提高红细胞渗透压,使水进 入红细胞,引起溶血及细胞膜破裂。此时光线较 容易通过溶液,使溶液呈现透明即溶血。
实验原理
红细胞置于乙二醇、丙三醇、葡萄糖等摩尔浓度的高渗液中,他 们进入红细胞,使细胞内的渗透性活性分子的浓度大为增加,导 致水的摄入,使细胞破裂,发生溶血。相对分子质量大的进入细 胞慢,发生溶血所需时间也长。 非极性化合物易溶于脂溶剂,在水中溶解度小,化合物在脂溶剂 的溶解度与在水中的溶解度之比,成为分配系数 非电解质溶液,只要单位面积中所含的分子数相等,就具有相同 的渗透压;电解质溶液,如NaCI与葡萄糖分子数相等,NaCI 产 生的渗透压大得多;具有相同渗透压的非电解质与电解质浓度之 比,成为等渗系数,葡萄糖比NaCI,发生溶血的是低渗溶液, 把其前一管浓度近视为等渗浓度。
细胞膜的通透性及胞间连丝的 观察
实验目的
1. 掌握细胞膜通透性的实验方法。 2. 了解相对分子量、脂溶性大小、电解质 和非电解质对细胞膜通透性的影响。
实验原理
细胞膜具有选择通透性:
细胞膜允许一些物质通
透,又能降低甚至阻挡 另一些物质的通透,以 维持自己的稳定状态。
实验三.红细胞膜的通透性及细胞计数

一、实验目的
1、通过红细胞的溶血作用了解红细胞 膜对不同物质分子通透性的特点;
2、掌握使用血球计数板进行细胞计数 的方法。
二、实验内容
(一)溶血作用与红细胞膜的通透性
[实验原理]
以红细胞是否发生溶血及发生溶血的快 慢判定等渗溶液中的溶质能否透过红细胞膜
及透过速度的快慢。
①0.17M 氯化钠 ②0.17M 硝酸钠 ③0.12M 硫酸钠 ④0.17M 氯化铵 ⑤0.17M 醋酸铵 ⑥0.12M 草酸铵 ⑦0.32M 葡萄糖 ⑧0.32M 甘 油 ⑨0.32M 乙 醇 ⑩0.32M 丙 醇
(2)用移液管向每支试管加入0.3ml红细胞 悬液,颠倒2次混匀,观察是否有溶血现象 发生,记下溶血时间并给予分析。
是否 溶血
时间
结果分析Βιβλιοθήκη (二)细胞计数1、用Ringer’s液稀释蛙血,制成蛙血细胞悬液;
2、取干净的血球计数板,将盖片盖在计数槽(光洁 透亮的区域)上,用吸管将制备好的蛙血细胞悬液 吹匀,吸管头紧挨盖片边缘,滴1滴悬液于血球计数 板的斜坡和盖片之间的缝隙中,使之自然渗入到计 数槽内;
3、在低倍镜下,调暗视野,观察计数槽上的格纹, 计数4个角上4大格内的细胞数。
★★膜对物质分子的通透性取决于
膜的结构属性及分子特性:
①脂溶性越强的分子越容易穿膜; ➢非极性物质脂溶性强,易穿膜, 如O2,CO2,N2; 但H2O例外。
②分子量越小越容易穿膜;
③不带电荷的分子容易穿膜,带 电荷的离子不能或很难穿膜。
➢离子脂溶性弱,且带有水化 膜,增大了它的有效体积。
[操作步骤]
按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时,则只计上线, 不计下线,只计左线,不计右线。 • 操作时,注意盖片下不能有气泡,也不能让悬液流入旁边 槽中,否则要重新计数。
鸡红细胞通透性实验报告

鸡红细胞通透性实验报告【实验目的】1. 了解溶血现象及其发生机制。
2. 了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。
【实验原理】细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障,是一种半透膜,可选择性地控制物质进出细胞。
将红细胞放在低渗溶液中,水分子大量渗透到细胞内,可使细胞胀破,血红蛋白释放到介质中,溶液由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液,这种现象称为溶血。
由于溶质渗透入细胞的速度不同,溶血时间也不同,因此,发生溶血现象所需的时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。
本实验选用红细胞作为细胞膜渗透性的实验材料,将其放入不同的介质溶液中,观察红细胞的变化。
溶血(Hemolysis)红细胞破裂,血红蛋白逸出称红细胞溶解,简称溶血。
可由多种理化因素和毒素引起。
在体外,如低渗溶液、机械性强力振荡、突然低温冷冻(-20℃~—25℃)或突然化冻、过酸或过碱,以及酒精、乙醚、皂碱、胆碱盐等均可引起溶血。
哺乳动物血浆的等渗溶液为0.9%NaCl溶液,红细胞在低于0.45%NaCl溶液中,因水渗入,红细胞膨胀而破裂,血红蛋白逸出。
在体内,溶血可为溶血性细菌或某些蛇毒侵入、抗原-抗体反应(如输入配血不合的血液)、各种机械性损伤、红细胞内在(膜、酶)缺陷、某些药物等引起。
溶血性细菌,如某些溶血性链球菌和产气荚膜杆菌可导致败血症。
疟原虫破坏红细胞和某些溶血性蛇毒含卵磷脂酶,使血浆或红细胞的卵磷脂转变为溶血卵磷脂,使红细胞膜分解。
【实验用品】1. 材料鸡血红细胞。
2. 试剂0.85%NaCl溶液、0.085%NaCl溶液、0.8mol/L甲醇溶液、0.8mol/L丙三醇溶液、6%葡萄糖溶液、2%TritonX-1003. 器材试管、试管架、滴管、显微镜、离心机。
【操作步骤】1. 取鸡血6ml,加0.85%NaCl溶液4ml,在1000r/min条件下离心5分钟;(RBC压积量不少于0.6mol)2. 将上述离心后的红细胞按沉淀量配成50%浓度;(总体积应不少于1.2ml)3. 每组取6支试管,分别加入如下溶液各3ml:(1)0.85%NaCl溶液(2)0.085%NaCl溶液(3)0.8mol/L(0.3mol/L 等渗)甲醇溶液(4)0.8mol/L(0.3mol/L等渗)丙三醇溶液(5)6%(5%等渗)葡萄糖溶液(6)2%(1.5%等渗)TritonX-1004. 向上述6支试管中分别加入50%红细胞悬液1滴,轻摇混匀,观察试管中是否有溶血现象发生(观察时间1小时),记录溶血时间,并于显微镜下观察各溶液的细胞。
活体细胞线粒体膜通道孔(mptp)红色荧光(tmrm)检测

活体细胞线粒体膜通道孔(mptp)红色荧光(tmrm)检测...活体细胞线粒体膜通道孔(MPTP)红色荧光(TMRM)检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途活体细胞线粒体膜通道孔(MPTP)红色荧光(TMRM)检测试剂是一种旨在通过四甲基罗丹明甲酯染料,选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色,一旦释放到细胞浆,即刻发生荧光淬灭,来分析和观察线粒体膜通道孔活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种活体细胞线粒体(动物、人体、昆虫等)膜通道孔活性(开放状态)的检测。
产品严格无菌,即到即用,活体检测,分辨率高,操作简捷,性能稳定。
技术背景线粒体膜通道孔(mitochondrial permeability transition pore;MPTP)是由线粒体内外膜成分构成的非特异性且钙离子依赖性通道。
在细胞凋亡或坏死时,线粒体内容物通过膜通道孔释放到胞浆中。
线粒体膜电位的去极化(depolarization),导致膜通道孔的开放,显著改变线粒体的通透性,使之线粒体膨胀(swelling),内容物释放。
其中钙离子过度进入、线粒体谷胱苷肽的氧化和活性氧族水平的增加等导致膜通道孔的持续开放,而造成细胞色素C的释放和线粒体膜电位的消失。
四甲基罗丹明甲酯(tetramethylrhodamine methyl ester;TMRM),为罗丹明衍生物阳离子染料,作为电势测定(potentiometric)荧光探针:第一,具有亲脂性的; 第二,与线粒体内膜负电极结合而聚集;第三,容易进入细胞及其线粒体。
四甲基罗丹明甲酯进入细胞后,被细胞内酯酶切离,产生四甲基罗丹明。
四甲基罗丹明进入线粒体后,被线粒体俘获,呈现强烈荧光。
一旦线粒体膜通道孔开放,四甲基罗丹明释放出来而在胞浆重新分布,其荧光性显著降低。
线粒体内荧光的变化,表明膜通道孔的开放状态。
产品内容清理液(Reagent A) 毫升染色液(Reagent B) 微升稀释液(Reagent C) 毫升产品说明书 1份保存方式保存染色液(Reagent B)在,20?冰箱里,避免光照;其余的保存在4?冰箱里;有效保证6月用户自备24孔细胞培养板:用于贴壁细胞染色的容器1.5毫升离心管:用于染色工作液配制和细胞染色的容器微型台式离心机:用于沉淀细胞培养箱:用于染色孵育(共聚焦)荧光显微镜:用于细胞荧光分析荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于细胞荧光定量分析细胞流式仪:用于细胞荧光分析1实验步骤实验开始前,将,20?冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent B)置入冰槽里融化,稀释液(Reagent C)放进37?恒温水槽里预热。
细胞膜通透性的测定

02
实验用品
实验材料
• 10%羊红细胞悬液,兔红细胞悬液或小鼠红细胞悬液, • 蒸馏水, • 0.17mol/L NaCl溶液, 0.17mol/L 氯化铵溶液, 0.32mol/L 葡萄糖溶液, 0.32mol/L 甘油, • 0.8mol/L 甲醇溶液, 0.8mol/L 丙三醇溶液, 氯仿, 2%Triton X-100液,
• 3.M-缓冲液 • 咪唑, 3.404g; KCl,3.7g ;六水合氯化镁,101.65mg; ECTA,380.35mg; • EDTA,29.224mg; 巯基乙醇,0.07mL; 甘油297mL, 蒸馏水,加至 1000mL. • 用1mol/L HCl调pH至7.2, 室温保存.
04
实验方案
实验方案
• 1.轻轻振荡一下盛有制备好的羊血红细胞悬液的试管,观察悬 液的特点,为一种不透明的红色液体. • 2.观察红细胞在低渗溶液中的溶血现象 在1只试管中加入0.3mL红细胞悬浊液,再加入3mL蒸馏水, 轻轻摇匀,注意观察溶液颜色的变化. 可见溶液由不透明的红色 (隔着它不能看到试管后面纸上的字)变成红色澄清液(此时可以 看到纸上的字),即已发生溶血,记录好时间. • 3.测定红细胞对各种物质的选择通透性 取8只试管,分别加入0.17mol/L氯化钠溶液, 0.17mol/L 氯化铵溶液, 0.32mol/L 葡萄糖溶液, 0.32mol/L 甘油, 0.8mol/L 甲醇溶液, 0.8mol/L 丙三醇溶液, 氯仿, 2%Triton X-100液各3mL,作出标记后,各管均加入红细胞悬液2滴,混匀后 静置于室温中.
谢谢观看
实验结果及分析
按下表情况,记录各组溶血情况
实验结果与分析
• 1.管内液体分两层: 上层浅黄色透明, 下层红色 不透明, 为不溶血. 镜下观察时红细胞完好呈凹 盘状. • 2.如果试管内液体浑浊,上层带红色者, 即不完全 溶血, 镜下观察时有部分红细胞碎片状.
红细胞膜通透性实验及分析
红细胞膜通透性实验及分析一、本文概述Overview of this article本文旨在探讨红细胞膜通透性的实验方法及其分析。
红细胞作为血液中数量最多的细胞类型,其膜通透性的研究对于理解红细胞的功能、生理过程以及疾病机制具有重要意义。
通过深入研究红细胞膜的通透性,我们可以对血液疾病如溶血性贫血、红细胞增多症等有更深入的理解,从而为疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。
This article aims to explore the experimental methods and analysis of red blood cell membrane permeability. As the most abundant cell type in the blood, the study of red blood cell membrane permeability is of great significance for understanding the function, physiological processes, and disease mechanisms of red blood cells. By conducting in-depth research on the permeability of red blood cell membranes, we can gain a deeper understanding of blood diseases such as hemolytic anemia and polycythemia, providing new ideas and methods for disease prevention and treatment.在本文中,我们将首先介绍红细胞膜的基本结构和功能,然后详细描述红细胞膜通透性实验的设计和实施过程,包括实验原理、实验材料、实验步骤以及实验结果的分析方法。
红细胞膜通透性的实验及分析
红细胞膜通透性的实验及分析一、准备材料:1.新鲜的全血样本2.生理盐水3.透析袋4.恒温水浴5.离心机6.吸光度计二、实验步骤:1.取适量全血样本,加入相等体积的生理盐水,轻轻混匀,得到稀释后的全血样本。
2.取一只透析袋,将稀释后的全血样本倒入袋中,确保袋子内不含气泡,并将袋口扎紧。
3.取一定量的生理盐水,使透析袋完全浸没在生理盐水中。
4.将装有透析袋和生理盐水的容器放入恒温水浴中,保持温度为37℃,并进行一段时间的孵育(一般为20分钟以上)。
5.取出透析袋,尽量沥干袋外的生理盐水,并将袋内的红细胞溶解,使溶液均匀。
6.将溶液转移到离心管中,进行离心,以除去残留的红细胞膜碎片并得到透析液。
7.取出透析液,利用吸光度计检测样本的光密度,记录吸光度值。
三、实验结果分析:通过测定透析液的吸光度,我们可以对红细胞膜的通透性进行分析。
吸光度值反映了透析袋中红细胞内部成分的渗透性。
在实验中,溶剂(生理盐水)中的水分子可以自由通过红细胞膜进入透析袋中的红细胞。
如果红细胞膜具有较好的渗透性,那么红细胞内的溶液成分也可以通过膜自由渗透至透析袋中,导致透析液的吸光度较高。
相反,如果红细胞膜渗透性差,那么溶液成分则不易透过膜,透析液的吸光度较低。
实验结果的具体分析可以根据吸光度值进行比较。
一般来说,吸光度值高的样本表明红细胞膜通透性较好,而吸光度值低的样本表明红细胞膜通透性较差。
除了比较吸光度值,还可以通过控制组进行进一步分析。
例如,可以将不同处理后的红细胞样本分为实验组和对照组,实验组为处理后的样本,对照组为未处理的样本。
通过比较两组样本的吸光度值,可以进一步确定红细胞膜通透性的变化。
此外,实验结果还可以与相关指标进行关联分析,如血液中溶质的浓度、渗透压等指标。
通过对相关指标的测量与实验结果进行对比分析,可以更加全面地了解红细胞膜通透性的情况。
总之,红细胞膜通透性实验是一种简单且常见的实验方法,通过测定透析液的吸光度可以初步判断红细胞膜的通透性,并可以与其他指标进行关联分析,更加全面地了解红细胞膜通透性的情况。
医学-实验二细胞膜的通透性观察
3mol/L甲醇
32.04
3mol/L乙醇
46.07
3mol/L丙醇
58.0
分配系数 0.0097 0.035 0.156
溶血时间
电解质和非电解质溶液对细胞膜透 性的影响
溶质
葡萄糖 NaCl
物质的浓度/(lmol/L)
1/8M
1/9M
1/12M
1/13M
五、注意事项
1.胶头滴管不可混用,以免造成溶液间的交叉污染。 2. 试管中有红细胞和测试溶液时,不应强力摇晃,以
三、试剂和器材
1.材料:血细胞 2.器材:普通显微镜、试管、试管架、滴管、载玻片、
盖玻片、擦镜纸、记号笔等。 3.试剂:0.128 mol/L NaCl 溶液、0.128 mol/L NH4Cl
溶液、0.128 mol/L 醋酸铵 溶液、0.128 mol/L草酸 铵溶液、 0.128 mol/L NaNO3溶液、0.32 mol/L 葡 萄糖、0.32 mol/L 甘油、 0.32 mol/L 乙醇、 0.32 mol/L 丙酮、蒸馏水。
四、操作方法
1.血细胞悬液的制备。 2. 低渗溶液。 3.红细胞的渗透性。 4.显微镜检查细胞的完整性。
结果与分析
相对分子质量大小对膜通透性的影响
溶液 lmol/L乙二醇
相对分子质量 62
溶血时间
lmol/L丙三醇 92
lm子质量
实验二 细胞膜的通透性观察
1.实验目的 2.实验原理 3.试剂与器材 4.操作方法 5.注意事项 6.作业与思考
一、实验目的
1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律。 2.了解溶血现象及其发生机制。 3.掌握普通光学显微镜下细胞及细胞碎片的
形态。
细胞膜的通透性观察小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察课件
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与分析 • 结论 • 参考文献
01
实验目的
了解巨噬细胞吞噬活动的过程
巨噬细胞是免疫系统中的重要组成部分,能够吞噬并消化外来病原体和坏死细胞 。通过观察巨噬细胞吞噬活动的过程,可以深入了解其功能和作用机制。
06
参考文献
参考文献
作者:张三 刊物名称:《自然科学》
发表时间:2018年第5期
谢谢观看
通透性降低。
巨噬细胞吞噬活动的动态观察结果
动态观察
通过荧光显微镜对巨噬细胞吞噬 活动进行实时观察,记录吞噬过
程的变化。
吞噬速率
实验结果显示,巨噬细胞的吞噬速 率在不同阶段有所差异,吞噬开始 时速率较快,随着吞噬的进行速率 逐渐降低。
吞噬机制
实验结果表明,巨噬细胞的吞噬过 程涉及细胞膜的变形、内陷和囊泡 形成等机制,这些机制共同作用完 成吞噬过程。
05
结论
实验的主要发现
实验观察到小白鼠腹腔巨噬细胞在吞噬过程中,细胞膜通透性发生变化,表明细胞 膜通透性与其吞噬活动密切相关。
实验发现巨噬细胞在吞噬不同颗粒时,细胞膜通透性表现出不同的变化模式,这可 能与颗粒类型和巨噬细胞内部处理机制有关。
实验还观察到巨噬细胞在吞噬过程中,细胞膜的流动性也发生变化,这可能影响细 胞膜通透性的调节。
荧光染料标记的细胞膜通透性变化
荧光染料标记
采用荧光染料对细胞膜进行标记, 通过荧光显微镜观察染料在细胞 膜上的分布和变化,判断细胞膜
通透的变化。
通透性变化
实验结果显示,在巨噬细胞吞噬 过程中,细胞膜的通透性发生变 化,荧光染料在细胞膜上的分布 逐渐减少,表明细胞膜通透性降
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
哺乳动物红细胞膜的通透性检测
一、实验目的
通过观察红细胞在不同液体中的表现,加深对细胞膜选择通透理论的理解。
二、实验原理
a)红细胞膜为选择性通透性膜,容许某些分子进出细胞,若进入细胞的液
体多于出细胞的液体,就会造成红细胞胀大,体积增加67%时红细胞膜
破裂,溶血(胀破,血红蛋白释放到介质中);而当出细胞的液体多于进
入细胞的液体时则会引起红细胞皱缩。
b)根据红细胞在不同溶液中的表现可以判断溶液的穿膜速度。
c)另外,可以引起细胞膜破坏的试剂也可引起红细胞溶血。
d)细胞膜对于不同物质的通透性:
i.带电离子不能直接通过脂双层膜
等,能穿过脂类分子的极性头部区ii.小的极性分子,如水、尿素、CO
2
而得以穿过脂双层,穿膜速度取决于油/水分配系数及溶质(水)
产生的渗透压。
iii.不带电荷的有机小分子,如一些小分子醇类,可以通过简单扩散(靠浓度差)直接穿过脂质双层进出细胞。
(水分子从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散的现象称
之为渗透作用。
)
三、实验仪器及试剂
a)材料:绵羊抗凝全血
b)试剂
i.不同浓度的氯化钠:0.15、0.10 、0.065及0.5mol/L 。
ii.0.8 mol/L 甲醇、乙醇、正丁醇、乙二醇、丙二醇。
iii.氯仿。
iv.1%TritonX-100生理盐水液。
c) 用品
i.10mL低速离心机、普通光学显微镜
ii.10mL刻度试管、试管架、胶头吸管、载玻片及盖玻片等
四、实验步骤
a)洗涤血液。
3mL羊血,每次用5mL生理盐水洗2次。
b)配制50%羊红细胞悬液。
c)测红细胞在不同溶液中的溶血时间。
1.5mL检测试剂,加1滴50%红细胞悬液,摇匀、肉眼观察,并记录观
察现象及溶血时间。
溶血现象判定:从刻度离心管刻度对面看见刻度线。
计时:从滴入血液到观察到溶血现象。
d)滴片显微观察各氯化钠组及氯仿组红细胞形态。
五、实验结果
溶血时间:0.15 mol/L的氯化钠不溶血;0.10 mol/L的氯化钠需要43秒;
0.065 mol/L的氯化钠需要17秒;0.5 mol/L的氯化钠不溶血在显微镜下观察细胞发生皱缩;0.8 mol/L 甲醇需要10秒;0.8 mol/L乙醇需要9秒;0.8 mol/L正丁醇需要3秒;0.8 mol/L乙二醇46秒;0.8 mol/L丙二醇需要22秒;1%TritonX-100生理盐水液需要1秒;氯仿与血不互溶故不发生溶血。
显微镜下观察图片:
a)0.15 mol/L的氯化钠溶液中
在0.15mol/L的氯化钠溶液中,因为此溶液的浓度与细胞内的浓度相同,为等渗溶液,所以此时显微镜中的细胞基本处于正常状态,不发生涨破也不发生皱缩。
b)0.10 mol/L的氯化钠溶液中
在0.10 mol/L的氯化钠溶液中,细胞处于低渗状态,导致细胞外的水内流,使很多细胞发生溶血。
所以,视野当中的红细胞数目与0.15 mol/L 的氯化钠溶液中的相比减少了许多。
另外,上图框中的应为细胞涨破以
后留下的阴影(比原细胞小,因为由于涨破许多细胞内的物质外流使细胞变小。
)。
c)0.065 mol/L的氯化钠溶液中
0.065 mol/L的氯化钠溶液中,细胞处于极低渗的状态下,由于外液中
的水迅速的进入细胞当中而会非常迅速的发生溶血。
故视野当中基本上没有红细胞存在。
d)0.5 mol/L的氯化钠溶液中
在0.5 mol/L的氯化钠溶液中,细胞处于高渗状态,细胞质当中的水分迅速外流。
所以,视野当中的细胞都处于皱缩状态。
e)氯仿溶液中
因为氯仿与羊血不相溶,所以血细胞在氯仿当中不会皱缩或涨破,而会
聚集在一起。
六、实验分析
a)在不同浓度的氯化钠溶液当中:当细胞外液的浓度比细胞内液浓度高时,
细胞外液的浓度越高,渗透压比内液高得越多,细胞内液中水分外流的
速度越快也越多,所以细胞皱缩的越快也越严重;当细胞外液的浓度比
细胞内液的浓度低时,细胞外液浓度越低,细胞外水向细胞内渗透的速
度越快,量也越多,所以细胞涨破的速度也越快,涨破的细胞数目也越
多。
b)醇类使细胞溶血的原因是:脂溶性的醇扩散进入细胞后,使胞内的渗透
压大于胞外,水向内扩散,使细胞涨破。
对于甲醇和乙醇,乙醇的脂溶
性比甲醇强,但是甲醇的分子量比较小比较容易穿膜,综上甲醇与乙醇
的溶血能力基本相当。
对于正丁醇,其脂溶性明显比前两者强,但分子
量也相对较大,实验证明正丁醇的溶血时间比前两者都短,可能是正丁
醇可以直接破坏细胞膜的结构。
乙二醇和丙二醇,比前三者多了一个-OH,所以脂溶性没有前三者好,所以溶血时间较长。
另外,乙二醇与丙二醇
相差一个CH3,此时分子量的差别与脂溶性的差别相比影响较小,所以
丙二醇溶血时间比乙二醇少。
c)非离子型去垢剂TritonX-100((聚乙二醇辛基苯基醚))可与脂双层形成
混合微团,主要与蛋白质疏水部位相互作用,不会引起蛋白质变性,从
而是红细胞内物质渗出,发生溶血现象。
而氯仿根本无法溶解红细胞。
七、注意事项
a)统一溶血现象判断标准。
b)准确计时。
八、思考题
a)用氯化钾代替氯化钠结果将会怎样?
细胞膜上的Na-K泵是“保钾排钠”的,所以在等渗的氯化钠溶液当中红细胞不发生溶血;而在等渗的氯化钾溶液当中,钾离子通过Na-K泵进入细胞当中,使细胞内渗透压大于细胞外,使得水分扩散进细胞,引起红细胞涨破。